Aktivitas Hepatoprotektif Ekstrak Etanol Daun Afrika (Vernonia sp.) pada Tikus Putih yang Diinduksi Parasetamol
Lampiran 1. Hasil identifikasi sampel
Lampiran 2. Karakteristik tumbuhan daun Afrika
Tumbuhan Afrika Daun Afrika
Lampiran 2. (Lanjutan)
Simplisia daun Afrika
Serbuk simplisia daun Afrika
Lampiran 2. Lanjutan
Mikroskopik serbuk simplisia daun Afrika Keterangan: 1.
Berkas pembuluh xylem bentuk spiral 2. Rambut penutup multiseluler 3. Kristal kalsium oksalat bentuk prisma 4.
1
2
3
4
Stomata tipe anisositik
Lampiran 3. Bagan kerja penelitian
Daun Afrika 2630 g Dipisahkan dari pengotornya Dicuci, ditiriskan dan ditimbang Dikeringkan dalam lemari pengering
Simplisia Ditimbang Dihaluskan menggunakan blender
Serbuk simplisia Dimaserasi menggunakan etanol 96 %
Ekstrak etanol daun afrika
Diuji aktivitas hepatoprotekif Diskrining fitokimia
Hasil
Hasil (Flavonoida, tanin, saponin, glikosida, steroid/terpenoid)
Lampiran 4. Bagan pembuatan ekstrak etanol daun Afrika
Berat serbuk 500 gram
Dimasukkan ke dalam wadah
Ditambahkan etanol 96%, biarkan selama 5 hari Disaring
Maserat Ampas
Dicuci kembali dengan etanol
96%
Maserat Ampas
o
Diuapkan menggunakan rotavapor (suhu 40
C)
o
Di freeze dryer 40 C
Disaring
Ekstrak Kental (61,096 gram)
Lampiran 5. Bagan pengerjaan uji aktivitas hepatoprotektif pada tikus
30 Ekor mencit Dikelompokkan Perlakuan (18 ekor)
Kontrol CMC 6 Penginduksi 6
ekor (Kel. I) ekor (Kel. II) Dibagi 3 Kelompok @ 6 ekor
- Dosis 25 mg/kg BB (Kel III)
- Dosis 50 mg/kg BB (Kel IV) Diberi suspensi Diberi suspensi EEDA Diberi suspensi
CMC 1% selama 7 hari dengan dosis sesuai kel. CMC 1%
selama 7 hari selama 7 hari
Hari ke-9 dibunuh Hari ke-8 diberi parase- Hari ke-8 diberitamol 2000 mg/kgBB parasetamol
2000 mg/kgbb Diambil organ hati Dibunuh 24 jam setelah Dibunuh 24 jam tikus pemberian parasetamol setelah pembe- Diambil organ hati rian parase-
tikus tamol Dibuat organ hati tikus Hasil
Diamati di mikroskop Dilihat perubahan gambaran histopatologi hati tikus jantan Keterangan : EEDA (Ekstrak Etanol Daun Afrika).
Lampiran 6. Perhitungan penetapan kadar air simplisia daun Afrika Volume air
% Kadar air =
100 % Berat sampel
No Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml) 1 5,012 1,9 2,3 2 5,005 2,3 2,7 3 5,008 2,7 3,1
2 , 3 1 ,
9 1. % Kadar air I = 100 % 7 , 980 % 5 , 012
2 ,
7 2 ,
3
2. % Kadar air II = 100 % 7 , 992 % 5 , 005 3 ,
1 2 ,
7
3. % Kadar air III = 100 % 7 , 998 % 5 , 008 7 , 980 % 7 , 992 % 7 , 998 %
% Kadar air rata-rata = 7 , 986 %
3
Lampiran 7. Perhitungan penetapan kadar sari larut air simplisia daun Afrika
Berat cawan sari berat cawan kosong 100% Kadar sari larut air = 100 %
Berat sampel
20 No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g)
1 5,0007 43,0481 43,3020 2 5,0005 45,0780 45,3421 3 5,0006 43,0560 43,3151 43 , 3020
43 , 0481 100 1. % Kadar sari I = 25 , 386 %
5 , 0007 20 45 , 3421
45 , 0780 100 2. % Kadar sari II = 26 , 407 %
5 , 0005 20 43 , 3151
43 , 0560 100 3. % Kadar sari III = 25 , 906 %
5 , 0006 20 25 , 386 %
26 , 407 % 25 , 906 % 25 , 899 % % Kadar sari larut air rata-rata =
3
Lampiran 8. Perhitungan penetapan kadar sari larut etanol simplisia daun Afrika
45
14
, 388 14 % , 389 15 %
3 % 897 ,
14
% 891 ,
% Kadar sari larut etanol rata-rata =
45
5 1771 , , 45 3261
20 100 0008 ,
14
3. % Kadar sari III = % 897 ,
5 2813 , , 43 3552
% Kadar sari larut etanol =
20 100 0005 ,
15
2. % Kadar sari II = % 388 ,
45
5 0862 , , 45 2301
20 100 0001 ,
14
1. % Kadar sari I = % 389 ,
20 100 Berat sampel Berat kosong cawan berat sari cawan
% 100
No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g) 1 5,0001 45,0862 45,2301 2 5,0005 43,2813 43,3552 3 5,0008 45,1771 45,3261
Lampiran 9. Perhitungan penetapan kadar abu total simplisia daun Afrika Berat abu
% Kadar abu total =
100 % Berat sampel
No Berat sampel (g) Berat abu (g) 1 2,0150 0,1870 2 2,0412 0,2155 3 2,0211 0,1899
1. % Kadar abu , 1870 total I = 100 %
9 , 285 % 2 , 0150 , 2155
2. % Kadar abu total II = 100 % 10 , 557 % 2 , 0412 , 1899
3. % Kadar abu total III = 100 % 9 , 395 % 2 , 0211
% Kadar abu total rata-rata = % 745 ,
9
3 % 395 ,
, 557 29 % , 285 10 %
9
Lampiran 10. Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam simplisia daun
Afrika % Kadar abu tidak larut asam = % 100
Berat sampel Berat abu
No Berat sampel (g) Berat abu (g) 1 2,0150 0,0137 2 2,0412 0,0153
3 2,0211 0,0138 , 0137
1. % Kadar abu yang tidak larut asam I = 100 % , 679 % 2 , 0150 , 0153
2. % Kadar abu yang tidak larut asam II = 100 % , 749 % 2 , 0412 , 0139
3. % Kadar abu yang tidak larut asam III = 100 % , 687 % 2 , 0139 % Kadar abu yang tidak larut asam rata-rata
, 679 % , 749 % , 687 % = , 705 %
3
Lampiran 11. Perhitungan penetapan kadar air EEDA
2 1 , 2 2 ,
4
, 796 4 % , 803 4 %
3 % 800 ,
4
% 799 ,
% Kadar air rata-rata =
2
3. % Kadar air III = % 800 , 100 4 % 083 ,
% Kadar air = % 100
2
2 1 ,
2 ,
2. % Kadar air II = % 796 , 100 4 % 085 ,
2
1 ,
1. % Kadar air I = % 803 , 100 4 % 082 , 2 9 ,
Berat sampel Volume air
No Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml) 1 2,082 1,9 2,0 2 2,085 2,0 2,1 3 2,083 2,1 2,2
Lampiran 12. Perhitungan penetapan kadar sari larut air EEDA
47
36
, 596 37 % , 563 37 %
3 % 575 ,
37
% 244 ,
% Kadar sari larut air rata-rata =
45
2 0561 , , 45 2072
20 100 0106 ,
37
3. % Kadar sari III = % 575 ,
2 7312 , , 47 8824
% Kadar sari larut air =
20 100 0108 ,
37
2. % Kadar sari II = % 596 ,
44
2 2162 , , 44 3632
20 100 0102 ,
36
1. % Kadar sari I = % 563 ,
20 100
Berat sampel
Berat kosong cawan berat sari cawan
% 100
No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g) 1 2,0102 44,2162 43,3632 2 2,0108 47,7312 47,8824 3 2,0106 45,0561 45,2072
Lampiran 13. Perhitungan penetapan kadar sari larut etanol EEDA
48
48
, 384 47 % , 262 48 %
3 % 719 ,
48
% 121 ,
% Kadar sari larut etanol rata-rata =
45
2 , 5632 445 3682 ,
20 100 0432 ,
47
3. % Kadar sari III = % 719 ,
2 9252 , , 47 1202
% Kadar sari larut etanol =
20 100 0151 ,
48
2. % Kadar sari II = % 384 ,
45
2 0564 , , 45 2514
20 100 0202 ,
48
1. % Kadar sari I = % 262 ,
20 100 Berat sampel Berat kosong cawan berat sari cawan
% 100
No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g) 1 2,0202 45,0564 45,2514 2 2,0151 47,9252 48,1202 3 2,0432 45,3682 45,5632
Lampiran 14. Perhitungan penetapan kadar abu total EEDA Berat abu
% Kadar abu total = 100 %
Berat sampel
No Berat sampel (g) Berat abu (g) 1 1,0121 0,0549 2 1,0543 0,0570 3 1,0385 0,0619
1. % Kadar abu
, 0549 total I = 100 % 5 , 434 %
1 , 0121 , 0570
2. % Kadar abu total II = 100 % 5 , 406 % 1 , 0543 , 0619
3. % Kadar abu total III = 100 % 5 , 970 % 1 , 0385 5 , 434 % 5 , 406 % 5 , 970 % 5 , 603 %
% Kadar abu total rata-rata =
3
Lampiran 15. Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam EEDA Berat abu
% Kadar abu tidak larut asam = 100 %
Berat sampel
No Berat sampel (g) Berat abu (g) 1 1,0121 0,0018 2 1,0543 0,0024 3 1,0385 0,0020
1. % Kadar abu
, 0081 yang tidak larut asam I = 100 % , 187 % 1 , 0121
, 0024 2. % Kadar abu yang tidak larut asam II = 100 % , 227 %
1 , 0543 , 0020
3. % Kadar abu yang tidak larut asam III = 100 % , 202 % 1 , 0385
% Kadar abu yang tidak larut asam rata-rata , 187 % , 227 % , 202 %
= , 205 %
3 Lampiran 16. Gambar alat, bahan, dan objek yang digunakan
Velocity 18R refrigerated centrifuge
Oral Sonde + Spuit
Lampiran 16. (lanjutan)
Peralatan Bedah
Mikroskop
Lampiran 16. (lanjutan)
Tikus sebelum dibedah
Tikus setelah dibedah
Lampiran 17. Contoh Perhitungan Dosis
Contoh perhitungan dosis ekstrak etanol daun Afrika yang akan diberikan
pada tikus secara per oral (p.o.)- Dosis suspensi ekstrak etanol daun Afrika yang akan dibuat adalah 25 mg/kg bb, 50 mg/kg bb, dan 125 mg/kg bb
a. Cara pembuatan suspensi ekstrak etanol daun Afrika :
1
gram= Konsentrasi ekstrak
= 0,04 g/ml
b. Pembuatan ekstrak etanol daun afrika 25 mg/kg bb, 50 mg/kg bb, dan 125 mg/kg bb misal : berat tikus 180 g maka : untuk ekstrak etanol daun afrika 25 mg/kg bb adalah :
= 25 mg/kg bb x 180 g = 25 mg/kg bb x 0,180 kg bb = 4,5 mg
Dan volume ekstrak yang diberikan = (4,5 mg : 25 ml) x 1 ml = 0,18 ml
Lampiran 17. (Lanjutan)
Contoh perhitungan dosis Parasetamol yang akan diberikan pada tikus secara per oral (p.o.)
- Dosis toksik Parasetamol untuk manusia dewasa = 2000 mg
- Konversi dosis manusia (70 kg) ke dosis untuk hewan uji ‘Tikus’ dikali 0,018.
- Syarat volume maksimum larutan sediaan uji yang diberikan pada hewan uji tikus (200 g) secara per oral (p.o.) adalah 5,0 ml.
a. Berapa dosis Parasetamol (dalam mg/kg bb) untuk tikus ?
- Dosis Parasetamol untuk tikus (200 g) = 2000mg x 0,018 = 36mg
- Dosis Parasetamol untuk tikus (200 g) = 36 mg , maka dosis Parasetamol untuk tikus 200 g.
- Jadi, dosis (mg/kg bb) 36 mg = X 200g 1kg
X = 36 mg x 1kg = 180 mg 0,2 kg
- Maka dosis Parasetamol adalah 0,18 mg/kg bb
b. Berapa jumlah dan volume suspensi Parasetamol yang diberikan untuk tikus ?
- Pembuatan Suspensi Parasetamol : Ambil 2 g serbuk Parasetamol dilarutkan dalam 25 ml suspensi CMC
- Mis : BB Tikus = 200 g Jumlah serbuk Parasetamol yang diberikan= 180 mg/kg bb x 0,2 kg bb
= 36 mg Volume larutan yang diberi = 36 mg x 25 ml 2000 mg
= 0,45 ml