Pengaruh Pemberian 2,4-D dan Frekuensi Subkultur Terhadap Perubahan Genetik Kalus dari Bunga Betina Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.)
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Komposisi Media MS (Murashige & Skoog) 1962,
Bahan Kimia
Makro Nutrien
NH4NO3
KNO3
CaCl2.H2O
MgSO4.7H2O
KH2PO4
Iron
Na2EDTA
FeSO4.7H2O
Mikro Nutrien
MnSO4.4H2O
ZnSO4.7H2O
H3BO3
KI
NaMoO4.2H2O
CuSO4.5H2O
CoCl.6H2O
Konsentrasi dalam Media (mg/L)
1650,000
1900,000
440,000
370,000
170,000
37,000
27,800
22,300
8,600
6,200
0,830
0,250
0,025
0,025
Universitas Sumatera Utara
35
Lampiran 2. Protokol Penggunaan iNtRON’s 2x PCR Master mix Solution (iTaq™, Korea).
Protokol 1x Reaksi PCR
Bahan Campuran
2x PCR Master mix Solution
Template DNA (1 µg/µL)
Primer (10 pmol/µL)
ddH2O
Total
Jumlah
10 µL
1 µL
1 µL
8 µL
20 µL
Siklus PCR
PCR Cycle
Initial Denaturation
Denaturation
30-40
Annealing
Cycle
Extension
Final Extension
Temp.
940C
940C
32-360C
65-720C
720C
PCR Product Size
100-500bp 500-1000bp 1 Kb-5Kb
2 min
2 min
2 min
20 sec
20 sec
20 sec
10 sec
10 sec
20 sec
20-30 sec
40-50 sec
1 min/kb
Optional, Normally 2-5 min
Universitas Sumatera Utara
36
Lampiran 3. Data Pengamatan Waktu Inisiasi Kalus (HST).
Perlakuan
0 µM
325 µM
400 µM
475 µM
1
114
106
98
2
124
114
92
Ulangan
3
120
111
89
4
119
109
95
RataRata
117
109
93
5
106
107
92
± STD
6,91
3,21
3,42
Uji Statistik Waktu Inisiasi Kalus
(Combined)
Between
Contrast
Groups Linear Term
Deviation
Within Groups
Total
Sum of
Mean
df
Squares
Square
1436,400
2 718,200
1368,900
1 1368,900
67,500
1
67,500
279,200 12
23,267
1715,600 14
F
Sig.
30,868 0,000
58,835 0,000
2,901 0,114
Uji Duncan 5%
Konsentrasi 2,4-D
475 uM
400 uM
325 uM
Sig.
Subset
N
1
5
5
5
2
93,2000
1,000
109,4000
116,6000
0,036
Universitas Sumatera Utara
37
Lampiran 4. Data Pengamatan Warna Kalus Bunga Betina Kelapa Sawit.
Perlakuan
0 µM
325 µM
400 µM
475 µM
Ulangan
1
2
3
4
5
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kecokelatan
Kecokelatan Kecokelatan Kecokelatan
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kecokelatan Kecokelatan
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kecokelatan
Jumlah Kalus Berwarna Kuning
Jumlah Botol Perlakuan
X 100%
Persentase kalus warna kuning = Jumlah Kalus Kuning Kecokelatan
kecokelatan
Jumlah Botol Perlakuan
X 100%
Persentase kalus warna kuning =
Universitas Sumatera Utara
38
Lampiran 5. Data Pengamatan Berat Basah Kultur (Gram).
Subkultur
Perlakuan
3 Kali
4 Kali
0,04
0,37
325 µM
0,03
0,3
0,04
0,25
0,04
-0,01
400 µM
0,22
-0,25
0,06
0,33
0,02
0,4
475 µM
0,07
0,36
0,05
0,51
Uji Statistik Berat Basah
Type III Sum of
Source
Squares
Corrected Model
0,899
Intercept
1,536
Auksin
0,132
Subkultur
0,516
Auksin * Subkultur
0,251
Error
0,255
Total
2,698
Corrected Total
1,153
5 Kali
0,22
0,3
0,25
0,47
0,42
0,33
0,66
0,55
0,41
Mean
F
Square
0,112
7,937
1,536 108,541
0,066
4,666
0,258 18,215
0,063
4,434
0,014
df
8
1
2
2
4
18
27
26
Sig.
0,000
0,000
0,023
0,000
0,011
Uji Duncan 5% Perlakuan 2,4-D
Konsentrasi 2,4-D
Subset
N
325 uM
400 uM
475 uM
Sig.
1
9
9
9
2
0,1789
0,2000
0,3367
1,000
0,711
Uji Duncan 5% Perlakuan Subkultur
Subkultur
3 Kali
4 Kali
5 Kali
Sig.
N
9
9
9
1
0,0633
Subset
2
3
0,2511
1,000
1,000
0,4011
1,000
Universitas Sumatera Utara
39
Lampiran 6. Data Pertambahan Biomass Kalus Bunga Betina Kelapa Sawit Selama
8 Minggu Pada Beberapa Konsentrasi 2,4-D.
Data Biomass Kalus Pada Pemberian 2,4-D Sebesar 325 µM
Ulangan
Minggu Ke
Rata-Rata
2
1
3
0,015
0,016
0,014
0,016
0
0,015
0,015
0,014
0,015
1
0,016
0,019
0,018
0,019
2
0,016
0,024
0,024
0,024
3
0,018
0,025
0,026
0,025
4
0,02
0,025
0,025
0,025
5
0,022
0,033
0,035
0,033
6
0,023
0,043
0,042
0,043
7
0,029
0,045
0,045
0,045
8
Data Biomass Kalus Pada Pemberian 2,4-D Sebesar 400 µM
Ulangan
Minggu Ke
Rata-Rata
2
1
3
0,016
0,016
0,016
0,016
0
0,015
0,016
0,016
0,016
1
0,017
0,018
0,018
0,018
2
0,018
0,019
0,019
0,019
3
0,02
0,021
0,022
0,021
4
0,025
0,026
0,027
0,026
5
0,026
0,027
0,027
0,027
6
0,03
0,033
0,035
0,033
7
0,036
0,037
0,038
0,037
8
Data Biomass Kalus Pada Pemberian 2,4-D Sebesar 475 µM
Ulangan
Minggu Ke
Rata-Rata
2
1
3
0,018
0,016
0,016
0,016
0
0,016
0,016
0,016
0,016
1
0,02
0,017
0,018
0,017
2
0,023
0,017
0,017
0,017
3
0,024
0,017
0,016
0,017
4
0,026
0,021
0,021
0,021
5
0,032
0,024
0,025
0,024
6
0,043
0,027
0,03
0,027
7
0,044
0,030
0,031
0,030
8
± STD
0,002
0,001
0,001
0,001
0,001
0,001
0,002
0,001
0,001
± STD
0,000
0,001
0,000
0,001
0,001
0,001
0,001
0,003
0,001
± STD
0,001
0,001
0,001
0,001
0,001
0,001
0,002
0,004
0,001
Universitas Sumatera Utara
40
Lampiran 7. Data biner dan matriks kemirpan genetik pita DNA hasil amplifikasi
dengan primer OPC-08 dan OPC-09.
Data biner pita DNA hasil amplifikasi dengan primer OPC-08 dan OPC-09
No.
Perlakuan
Ciri
K
A1B0 A2B0 A3B0 A1B1 A2B1 A3B1 A1B2 A2B2 A3B2
1
1
1
1
1
1
0
0
0
0
0
2
1
1
1
1
0
0
0
0
0
0
3
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
4
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
5
0
0
0
0
1
1
1
0
0
0
6
1
1
1
1
0
0
0
0
0
0
7
1
1
1
1
0
0
0
0
0
0
8
1
1
1
1
1
1
1
0
0
0
9
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
10
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
11
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
12
1
1
1
1
1
1
1
0
0
0
13
1
1
1
1
0
0
0
0
0
0
Matriks kemiripan genetik berdasarkan pita hasil amplifikasi dengan primer OPC08 dan OPC-09
K
A1B0 A2B0 A3B0 A1B1 A2B1 A3B1 A1B2 A2B2 A3B2
K
1,00
A1B0 1,00 1,00
A2B0 1,00 1,00 1,00
A3B0 1,00 1,00 1,00 1,00
A1B1 6,15 6,15 6,15 6,15 1,00
A2B1 5,38 5,38 5,38 5,38 9,23 1,00
A3B1 5,38 5,38 5,38 5,38 9,23 1,00 1,00
A1B2 4,62 4,62 4,62 4,62 6,92 7,69 7,69 1,00
A2B2 4,62 4,62 4,62 4,62 6,92 7,69 7,69 1,00 1,00
A3B2 4,62 4,62 4,62 4,62 6,92 7,69 7,69 1,00 1,00 1,00
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 1. Komposisi Media MS (Murashige & Skoog) 1962,
Bahan Kimia
Makro Nutrien
NH4NO3
KNO3
CaCl2.H2O
MgSO4.7H2O
KH2PO4
Iron
Na2EDTA
FeSO4.7H2O
Mikro Nutrien
MnSO4.4H2O
ZnSO4.7H2O
H3BO3
KI
NaMoO4.2H2O
CuSO4.5H2O
CoCl.6H2O
Konsentrasi dalam Media (mg/L)
1650,000
1900,000
440,000
370,000
170,000
37,000
27,800
22,300
8,600
6,200
0,830
0,250
0,025
0,025
Universitas Sumatera Utara
35
Lampiran 2. Protokol Penggunaan iNtRON’s 2x PCR Master mix Solution (iTaq™, Korea).
Protokol 1x Reaksi PCR
Bahan Campuran
2x PCR Master mix Solution
Template DNA (1 µg/µL)
Primer (10 pmol/µL)
ddH2O
Total
Jumlah
10 µL
1 µL
1 µL
8 µL
20 µL
Siklus PCR
PCR Cycle
Initial Denaturation
Denaturation
30-40
Annealing
Cycle
Extension
Final Extension
Temp.
940C
940C
32-360C
65-720C
720C
PCR Product Size
100-500bp 500-1000bp 1 Kb-5Kb
2 min
2 min
2 min
20 sec
20 sec
20 sec
10 sec
10 sec
20 sec
20-30 sec
40-50 sec
1 min/kb
Optional, Normally 2-5 min
Universitas Sumatera Utara
36
Lampiran 3. Data Pengamatan Waktu Inisiasi Kalus (HST).
Perlakuan
0 µM
325 µM
400 µM
475 µM
1
114
106
98
2
124
114
92
Ulangan
3
120
111
89
4
119
109
95
RataRata
117
109
93
5
106
107
92
± STD
6,91
3,21
3,42
Uji Statistik Waktu Inisiasi Kalus
(Combined)
Between
Contrast
Groups Linear Term
Deviation
Within Groups
Total
Sum of
Mean
df
Squares
Square
1436,400
2 718,200
1368,900
1 1368,900
67,500
1
67,500
279,200 12
23,267
1715,600 14
F
Sig.
30,868 0,000
58,835 0,000
2,901 0,114
Uji Duncan 5%
Konsentrasi 2,4-D
475 uM
400 uM
325 uM
Sig.
Subset
N
1
5
5
5
2
93,2000
1,000
109,4000
116,6000
0,036
Universitas Sumatera Utara
37
Lampiran 4. Data Pengamatan Warna Kalus Bunga Betina Kelapa Sawit.
Perlakuan
0 µM
325 µM
400 µM
475 µM
Ulangan
1
2
3
4
5
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kecokelatan
Kecokelatan Kecokelatan Kecokelatan
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kecokelatan Kecokelatan
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kuning
Kecokelatan
Jumlah Kalus Berwarna Kuning
Jumlah Botol Perlakuan
X 100%
Persentase kalus warna kuning = Jumlah Kalus Kuning Kecokelatan
kecokelatan
Jumlah Botol Perlakuan
X 100%
Persentase kalus warna kuning =
Universitas Sumatera Utara
38
Lampiran 5. Data Pengamatan Berat Basah Kultur (Gram).
Subkultur
Perlakuan
3 Kali
4 Kali
0,04
0,37
325 µM
0,03
0,3
0,04
0,25
0,04
-0,01
400 µM
0,22
-0,25
0,06
0,33
0,02
0,4
475 µM
0,07
0,36
0,05
0,51
Uji Statistik Berat Basah
Type III Sum of
Source
Squares
Corrected Model
0,899
Intercept
1,536
Auksin
0,132
Subkultur
0,516
Auksin * Subkultur
0,251
Error
0,255
Total
2,698
Corrected Total
1,153
5 Kali
0,22
0,3
0,25
0,47
0,42
0,33
0,66
0,55
0,41
Mean
F
Square
0,112
7,937
1,536 108,541
0,066
4,666
0,258 18,215
0,063
4,434
0,014
df
8
1
2
2
4
18
27
26
Sig.
0,000
0,000
0,023
0,000
0,011
Uji Duncan 5% Perlakuan 2,4-D
Konsentrasi 2,4-D
Subset
N
325 uM
400 uM
475 uM
Sig.
1
9
9
9
2
0,1789
0,2000
0,3367
1,000
0,711
Uji Duncan 5% Perlakuan Subkultur
Subkultur
3 Kali
4 Kali
5 Kali
Sig.
N
9
9
9
1
0,0633
Subset
2
3
0,2511
1,000
1,000
0,4011
1,000
Universitas Sumatera Utara
39
Lampiran 6. Data Pertambahan Biomass Kalus Bunga Betina Kelapa Sawit Selama
8 Minggu Pada Beberapa Konsentrasi 2,4-D.
Data Biomass Kalus Pada Pemberian 2,4-D Sebesar 325 µM
Ulangan
Minggu Ke
Rata-Rata
2
1
3
0,015
0,016
0,014
0,016
0
0,015
0,015
0,014
0,015
1
0,016
0,019
0,018
0,019
2
0,016
0,024
0,024
0,024
3
0,018
0,025
0,026
0,025
4
0,02
0,025
0,025
0,025
5
0,022
0,033
0,035
0,033
6
0,023
0,043
0,042
0,043
7
0,029
0,045
0,045
0,045
8
Data Biomass Kalus Pada Pemberian 2,4-D Sebesar 400 µM
Ulangan
Minggu Ke
Rata-Rata
2
1
3
0,016
0,016
0,016
0,016
0
0,015
0,016
0,016
0,016
1
0,017
0,018
0,018
0,018
2
0,018
0,019
0,019
0,019
3
0,02
0,021
0,022
0,021
4
0,025
0,026
0,027
0,026
5
0,026
0,027
0,027
0,027
6
0,03
0,033
0,035
0,033
7
0,036
0,037
0,038
0,037
8
Data Biomass Kalus Pada Pemberian 2,4-D Sebesar 475 µM
Ulangan
Minggu Ke
Rata-Rata
2
1
3
0,018
0,016
0,016
0,016
0
0,016
0,016
0,016
0,016
1
0,02
0,017
0,018
0,017
2
0,023
0,017
0,017
0,017
3
0,024
0,017
0,016
0,017
4
0,026
0,021
0,021
0,021
5
0,032
0,024
0,025
0,024
6
0,043
0,027
0,03
0,027
7
0,044
0,030
0,031
0,030
8
± STD
0,002
0,001
0,001
0,001
0,001
0,001
0,002
0,001
0,001
± STD
0,000
0,001
0,000
0,001
0,001
0,001
0,001
0,003
0,001
± STD
0,001
0,001
0,001
0,001
0,001
0,001
0,002
0,004
0,001
Universitas Sumatera Utara
40
Lampiran 7. Data biner dan matriks kemirpan genetik pita DNA hasil amplifikasi
dengan primer OPC-08 dan OPC-09.
Data biner pita DNA hasil amplifikasi dengan primer OPC-08 dan OPC-09
No.
Perlakuan
Ciri
K
A1B0 A2B0 A3B0 A1B1 A2B1 A3B1 A1B2 A2B2 A3B2
1
1
1
1
1
1
0
0
0
0
0
2
1
1
1
1
0
0
0
0
0
0
3
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
4
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
5
0
0
0
0
1
1
1
0
0
0
6
1
1
1
1
0
0
0
0
0
0
7
1
1
1
1
0
0
0
0
0
0
8
1
1
1
1
1
1
1
0
0
0
9
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
10
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
11
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
12
1
1
1
1
1
1
1
0
0
0
13
1
1
1
1
0
0
0
0
0
0
Matriks kemiripan genetik berdasarkan pita hasil amplifikasi dengan primer OPC08 dan OPC-09
K
A1B0 A2B0 A3B0 A1B1 A2B1 A3B1 A1B2 A2B2 A3B2
K
1,00
A1B0 1,00 1,00
A2B0 1,00 1,00 1,00
A3B0 1,00 1,00 1,00 1,00
A1B1 6,15 6,15 6,15 6,15 1,00
A2B1 5,38 5,38 5,38 5,38 9,23 1,00
A3B1 5,38 5,38 5,38 5,38 9,23 1,00 1,00
A1B2 4,62 4,62 4,62 4,62 6,92 7,69 7,69 1,00
A2B2 4,62 4,62 4,62 4,62 6,92 7,69 7,69 1,00 1,00
A3B2 4,62 4,62 4,62 4,62 6,92 7,69 7,69 1,00 1,00 1,00
Universitas Sumatera Utara