UJI SITOTOKSIK FRAKSI NONPOLAR EKSTRAK ETANOL KULIT KAYU SRIKAYA (Annona squamosa L.) Uji Sitotoksik Fraksi Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit Kayu Srikaya (Annona squamosa L.) Terhadap Sel T47D.
UJI SITOTOKSIK FRAKSI NONPOLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT KAYU SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
HEFI RACHMAYANTI
K100 080 117
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
2012
UJI SITOTOKSIK FRAKSI NONPOLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT KAYU SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh :
HEFI RACHMAYANTI
K100080117
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi dan sepanjang pengetahuaan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 06 Oktober 2012
Peneliti,
Hefi Rachmayanti
iii
KATA PENGANTAR
Assalamu`alaykum wr wb.
Alhamdulillahhirobbil`alamin. Segala puji bagi Allah SWT yang
senantiasa
memberikan
limpahan
rahmat
dan
anugerah-Nya
yang
tak
berkesudahan, sehingga akhirnya penulis mampu menyelesaikan penelitian dan
skripsi yang berjudul: “UJI SITOTOKSIK FRAKSI NONPOLAR EKSTRAK
ETANOL KULIT KAYU SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL
T47D” sebagai salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana Farmasi
(S. Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Penyusunan skripsi ini tak lepas dari bantuan berbagai pihak yang telah
berkontribusi baik secara moral, psikis, maupun melalui bimbingannya. Untuk itu,
penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Bapak Dr. Muhammad Da`i, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammdiyah Surakarta dan selaku penguji.
2. Bapak Haryoto, M.Sc. dan Bapak Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt selaku
dosen pembimbing.
3. Ibu Ratna Yuliani, M.Biotech.St selaku penguji.
4. Bapak Dr. Muhtadi, M.Si., Apt selaku pembimbing akademik
5. Kedua orang tua terkasih, ayahanda Rahman dan Ibunda Hanna Subiyarti
Dewi, serta adik-adik tersayang Andrian dan Putri.
6. Rekan-rekan penelitian, Woro, Cita, Umma, Indah, Wildan, Mustika, Adi,
Eva, Mas Iwan, Desilia, dan Yennie.
Akhir kata penulis menyadari penyusunan skripsi ini masih memiliki
kekurangan dan jauh dari kesempurnaan, untuk itu semoga skripsi ini dapat
memunculkan kritik, saran serta penelitian lanjutan bagi pembaca guna
memperkaya khasanah dalam dunia penelitian farmasi ke depannya.
Wassalamu`alaykum wr wb.
Surakarta, 06 Oktober 2012
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL............................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................ ii
DEKLARASI ........................................................................................................ iii
KATA PENGANTAR
................................................................................... iv
DAFTAR ISI ........................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... vii
DAFTAR TABEL ............................................................................................... viii
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... ix
DAFTAR SINGKATAN ........................................................................................ x
INTISARI.............................................................................................................. xi
BAB I. PENDAHULUAN .......................................................................................1
A. Latar Belakang ....................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah ................................................................................ 3
C. Tujuan Penelitian .................................................................................... 3
D. Tinjauan Pustaka .................................................................................... 3
1. Tinjauan tentang Tanaman Annona squamosa L ............................... 3
a. Klasifikasi ...................................................................................... 3
b. Nama Daerah dan Nama Asing ..................................................... 4
c. Kandungan Kimia .......................................................................... 4
d. Khasiat Tanaman ........................................................................... 5
2. Kanker ................................................................................................ 5
3. Kanker Payudara dan Sel T47D ......................................................... 6
4. Uji Sitotoksik ...................................................................................... 8
E. Landasan Teori ....................................................................................... 9
F. Hipotesis.................................................................................................. 9
BAB II. METODE PENELITIAN .........................................................................10
A. Kategori Penelitian ............................................................................... 10
B. Alat dan Bahan ..................................................................................... 10
C. Jalannya Penelitian ................................................................................11
v
D. Analisis Data ........................................................................................ 15
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .....................................16
A. Determinasi Tanaman............................................................................16
B. Pengumpulan dan Penyerbukan Tanaman ............................................ 16
C. Ekstraksi ............................................................................................... 17
D. Fraksinasi.............................................................................................. 18
E. Analisis Kualitatif Kandungan Kimia .................................................. 20
F. Uji Sitotoksik Fraksi Nonpolar Estrak Etanol Kulit Kayu Srikaya ...... 23
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................ 27
A. Kesimpulan ........................................................................................... 27
B. Saran ..................................................................................................... 27
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 28
LAMPIRAN .......................................................................................................... 33
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Hasil Maserasi Skala Kecil ......................................................................18
Tabel 2. Hasil Maserasi Skala Besar ......................................................................18
Tabel 3. Hasil Deteksi Berbagai Senyawa pada Fraksi Nonpolar Ekstrak
Etanol Kulit Kayu Srikaya .......................................................................21
Tabel 4. Persentase Sel T47D yang Hidup Setelah Perlakuan dengan Fraksi
Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit Kayu Srikaya (Annona squamosa L.) ....24
Tabel 5. Aktivitas Sitotoksik Bagian-bagian Tanaman Srikaya serta
Kandungan Kimianya ..............................................................................25
vii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Profil KLT Hasil Fraksinasi ............................................................... 20
Gambar 2. Profil KLT Hasil Gabungan Fraksinasi.............................................. 21
Gambar 3. Profil Kromatogram Fraksi Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit Kayu
Srikaya Sebelum Disemprot Pereaksi ................................................ 23
Gambar 4. Profil Kromatogram Setelah Disemprot oleh FeCl3 dan Sitroborat ... 23
Gambar 5. Profil Kromatogram Setelah Disemprot oleh Dragendorff ................ 24
Gambar 6. Grafik Hubungan antara Log Konsentrasi Fraksi versus Persentase Sel
Hidup .................................................................................................. 27
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman ................................ 33
Lampiran 2. Foto Tanaman Srikaya (Annona squamosa L.) ................................ 35
Lampiran 3. Perhitungan Seri Konsentrasi Fraksi Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit
Kayu Srikaya (Annona squamosa L.) .............................................. 36
Lampiran 4. Perhitungan Jumlah Sel untuk Uji Sitotoksik ................................... 38
Lampiran 5. Data Uji Sitotoksik dan Desain Plate Metode MTT ........................ 39
Lampiran 6. Data Uji Sitotoksik dengan Metode MTT setelah Perlakuan dengan
Fraksi Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit Kayu Srikaya (Annona
squamosa L.) .................................................................................... 40
Lampiran 7. Perhitungan Nilai IC50 Fraksi Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit Kayu
Srikaya (Annona squamosa L.) ........................................................ 41
Lampiran 8. Alat-alat yang Digunakan dalam Penelitian ..................................... 42
ix
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
Dimetil sulfoksida
ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbeht Assay
FBS
Fetal Bovine Serum
IC50
Inhibitory Concentration 50%
KCV
Kromatografi Cair Vakum
KLT
Kromatografi Lapis Tipis
LAF
Laminar Air Flow
RPMI
Rosewell Park Memorial Institute
MTT
3-(4,5 dimetilltiazol-2-il),2,5-difenil tetrazolium bromide)
nm
nanometer
PBS
Phosphate Buffered Saline
Penstrep
Penicilin Streptomycin
Rf
Retardation Factor
SDS
Sodium Dodecyl Sulphate
x
INTISARI
Tanaman srikaya adalah salah satu tanaman dengan khasiat sebagai
antikanker. Aktivitas antikanker ini telah dibuktikan pada bagian daun dan biji
kecuali bagian kulit kayu. Kandungan alkaloid pada biji dan batang telah
dibuktikan memiliki aktivitas kanker, terutama pada fraksi kloroform. Kandungan
alkaloid juga ditemukan pada bagian batang, namun penelitian terhadap aktivitas
kanker belum dilakukan. Sehingga penelitian ini bertujuan untuk melihat potensi
sitotoksik bagian kulit batang fraksi nonpolar berdasarkan nilai IC50.
Sampel uji didapatkan melalui proses ektraksi menggunakan metode
maserasi dan fraksinasi KCV (Kromatografi Cair Vakum). Selanjutnya, uji
sitotoksik dengan metode MTT (3-(4,5 dimetilltiazol-2-il),2,5-difenil tetrazolium
bromide) pada lima seri konsentrasi (250, 150, 100, 50 dan 25 µg/mL) fraksi
nonpolar ekstrak etanol kulit kayu srikaya terhadap sel T47D. Uji aktivitas
dilakukan dengan melihat persentase sel hidup setelah perlakuan, kemudian
dihitung nilai IC50nya. Fraksi yang digunakan melalui uji kualitatif menggunakan
KLT (Kromatografi Lapis Tipis) untuk melihat profil senyawa yang terkandung
dalam fraksi tersebut.
Hasil uji aktivitas menunjukkan nilai IC50 fraksi nonpolar ekstrak etanol
srikaya sebesar 74,665 µg/mL terhadap sel T47D. Berdasarkan hasil tersebut
fraksi dinyatakan poten sebagai agen antikanker. Profil kromatografi
menunjukkan fraksi mengandung senyawa alkaloid, flavonoid dan polifenol.
Kata kunci: uji sitotoksik, sel T47D, fraksi nonpolar, Annona squamosa L
xi
KULIT KAYU SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
HEFI RACHMAYANTI
K100 080 117
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
2012
UJI SITOTOKSIK FRAKSI NONPOLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT KAYU SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh :
HEFI RACHMAYANTI
K100080117
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi dan sepanjang pengetahuaan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 06 Oktober 2012
Peneliti,
Hefi Rachmayanti
iii
KATA PENGANTAR
Assalamu`alaykum wr wb.
Alhamdulillahhirobbil`alamin. Segala puji bagi Allah SWT yang
senantiasa
memberikan
limpahan
rahmat
dan
anugerah-Nya
yang
tak
berkesudahan, sehingga akhirnya penulis mampu menyelesaikan penelitian dan
skripsi yang berjudul: “UJI SITOTOKSIK FRAKSI NONPOLAR EKSTRAK
ETANOL KULIT KAYU SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL
T47D” sebagai salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana Farmasi
(S. Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Penyusunan skripsi ini tak lepas dari bantuan berbagai pihak yang telah
berkontribusi baik secara moral, psikis, maupun melalui bimbingannya. Untuk itu,
penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Bapak Dr. Muhammad Da`i, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammdiyah Surakarta dan selaku penguji.
2. Bapak Haryoto, M.Sc. dan Bapak Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt selaku
dosen pembimbing.
3. Ibu Ratna Yuliani, M.Biotech.St selaku penguji.
4. Bapak Dr. Muhtadi, M.Si., Apt selaku pembimbing akademik
5. Kedua orang tua terkasih, ayahanda Rahman dan Ibunda Hanna Subiyarti
Dewi, serta adik-adik tersayang Andrian dan Putri.
6. Rekan-rekan penelitian, Woro, Cita, Umma, Indah, Wildan, Mustika, Adi,
Eva, Mas Iwan, Desilia, dan Yennie.
Akhir kata penulis menyadari penyusunan skripsi ini masih memiliki
kekurangan dan jauh dari kesempurnaan, untuk itu semoga skripsi ini dapat
memunculkan kritik, saran serta penelitian lanjutan bagi pembaca guna
memperkaya khasanah dalam dunia penelitian farmasi ke depannya.
Wassalamu`alaykum wr wb.
Surakarta, 06 Oktober 2012
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL............................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................ ii
DEKLARASI ........................................................................................................ iii
KATA PENGANTAR
................................................................................... iv
DAFTAR ISI ........................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... vii
DAFTAR TABEL ............................................................................................... viii
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... ix
DAFTAR SINGKATAN ........................................................................................ x
INTISARI.............................................................................................................. xi
BAB I. PENDAHULUAN .......................................................................................1
A. Latar Belakang ....................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah ................................................................................ 3
C. Tujuan Penelitian .................................................................................... 3
D. Tinjauan Pustaka .................................................................................... 3
1. Tinjauan tentang Tanaman Annona squamosa L ............................... 3
a. Klasifikasi ...................................................................................... 3
b. Nama Daerah dan Nama Asing ..................................................... 4
c. Kandungan Kimia .......................................................................... 4
d. Khasiat Tanaman ........................................................................... 5
2. Kanker ................................................................................................ 5
3. Kanker Payudara dan Sel T47D ......................................................... 6
4. Uji Sitotoksik ...................................................................................... 8
E. Landasan Teori ....................................................................................... 9
F. Hipotesis.................................................................................................. 9
BAB II. METODE PENELITIAN .........................................................................10
A. Kategori Penelitian ............................................................................... 10
B. Alat dan Bahan ..................................................................................... 10
C. Jalannya Penelitian ................................................................................11
v
D. Analisis Data ........................................................................................ 15
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .....................................16
A. Determinasi Tanaman............................................................................16
B. Pengumpulan dan Penyerbukan Tanaman ............................................ 16
C. Ekstraksi ............................................................................................... 17
D. Fraksinasi.............................................................................................. 18
E. Analisis Kualitatif Kandungan Kimia .................................................. 20
F. Uji Sitotoksik Fraksi Nonpolar Estrak Etanol Kulit Kayu Srikaya ...... 23
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................ 27
A. Kesimpulan ........................................................................................... 27
B. Saran ..................................................................................................... 27
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 28
LAMPIRAN .......................................................................................................... 33
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Hasil Maserasi Skala Kecil ......................................................................18
Tabel 2. Hasil Maserasi Skala Besar ......................................................................18
Tabel 3. Hasil Deteksi Berbagai Senyawa pada Fraksi Nonpolar Ekstrak
Etanol Kulit Kayu Srikaya .......................................................................21
Tabel 4. Persentase Sel T47D yang Hidup Setelah Perlakuan dengan Fraksi
Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit Kayu Srikaya (Annona squamosa L.) ....24
Tabel 5. Aktivitas Sitotoksik Bagian-bagian Tanaman Srikaya serta
Kandungan Kimianya ..............................................................................25
vii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Profil KLT Hasil Fraksinasi ............................................................... 20
Gambar 2. Profil KLT Hasil Gabungan Fraksinasi.............................................. 21
Gambar 3. Profil Kromatogram Fraksi Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit Kayu
Srikaya Sebelum Disemprot Pereaksi ................................................ 23
Gambar 4. Profil Kromatogram Setelah Disemprot oleh FeCl3 dan Sitroborat ... 23
Gambar 5. Profil Kromatogram Setelah Disemprot oleh Dragendorff ................ 24
Gambar 6. Grafik Hubungan antara Log Konsentrasi Fraksi versus Persentase Sel
Hidup .................................................................................................. 27
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman ................................ 33
Lampiran 2. Foto Tanaman Srikaya (Annona squamosa L.) ................................ 35
Lampiran 3. Perhitungan Seri Konsentrasi Fraksi Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit
Kayu Srikaya (Annona squamosa L.) .............................................. 36
Lampiran 4. Perhitungan Jumlah Sel untuk Uji Sitotoksik ................................... 38
Lampiran 5. Data Uji Sitotoksik dan Desain Plate Metode MTT ........................ 39
Lampiran 6. Data Uji Sitotoksik dengan Metode MTT setelah Perlakuan dengan
Fraksi Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit Kayu Srikaya (Annona
squamosa L.) .................................................................................... 40
Lampiran 7. Perhitungan Nilai IC50 Fraksi Nonpolar Ekstrak Etanol Kulit Kayu
Srikaya (Annona squamosa L.) ........................................................ 41
Lampiran 8. Alat-alat yang Digunakan dalam Penelitian ..................................... 42
ix
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
Dimetil sulfoksida
ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbeht Assay
FBS
Fetal Bovine Serum
IC50
Inhibitory Concentration 50%
KCV
Kromatografi Cair Vakum
KLT
Kromatografi Lapis Tipis
LAF
Laminar Air Flow
RPMI
Rosewell Park Memorial Institute
MTT
3-(4,5 dimetilltiazol-2-il),2,5-difenil tetrazolium bromide)
nm
nanometer
PBS
Phosphate Buffered Saline
Penstrep
Penicilin Streptomycin
Rf
Retardation Factor
SDS
Sodium Dodecyl Sulphate
x
INTISARI
Tanaman srikaya adalah salah satu tanaman dengan khasiat sebagai
antikanker. Aktivitas antikanker ini telah dibuktikan pada bagian daun dan biji
kecuali bagian kulit kayu. Kandungan alkaloid pada biji dan batang telah
dibuktikan memiliki aktivitas kanker, terutama pada fraksi kloroform. Kandungan
alkaloid juga ditemukan pada bagian batang, namun penelitian terhadap aktivitas
kanker belum dilakukan. Sehingga penelitian ini bertujuan untuk melihat potensi
sitotoksik bagian kulit batang fraksi nonpolar berdasarkan nilai IC50.
Sampel uji didapatkan melalui proses ektraksi menggunakan metode
maserasi dan fraksinasi KCV (Kromatografi Cair Vakum). Selanjutnya, uji
sitotoksik dengan metode MTT (3-(4,5 dimetilltiazol-2-il),2,5-difenil tetrazolium
bromide) pada lima seri konsentrasi (250, 150, 100, 50 dan 25 µg/mL) fraksi
nonpolar ekstrak etanol kulit kayu srikaya terhadap sel T47D. Uji aktivitas
dilakukan dengan melihat persentase sel hidup setelah perlakuan, kemudian
dihitung nilai IC50nya. Fraksi yang digunakan melalui uji kualitatif menggunakan
KLT (Kromatografi Lapis Tipis) untuk melihat profil senyawa yang terkandung
dalam fraksi tersebut.
Hasil uji aktivitas menunjukkan nilai IC50 fraksi nonpolar ekstrak etanol
srikaya sebesar 74,665 µg/mL terhadap sel T47D. Berdasarkan hasil tersebut
fraksi dinyatakan poten sebagai agen antikanker. Profil kromatografi
menunjukkan fraksi mengandung senyawa alkaloid, flavonoid dan polifenol.
Kata kunci: uji sitotoksik, sel T47D, fraksi nonpolar, Annona squamosa L
xi