PENGESAHAN SKRIPSI Skripsi dengan judul : Perbedaan Kadar Kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air

  PERBEDAAN KADAR KUERSETIN PADA PROPOLIS EKSTRAK ETANOL DAN PROPOLIS EKSTRAK AIR SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Nurrini Susanti Y. G.0009160 FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET Surakarta 2012

  

PENGESAHAN SKRIPSI

Skripsi dengan judul : Perbedaan Kadar Kuersetin pada Propolis Ekstrak

Etanol dan Propolis Ekstrak Air

  Nurrini Susanti Y, NIM: G.0009160, Tahun: 2012 Telah diuji dan sudah disahkan di hadapan Dewan Penguji Skripsi

  Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta Pada hari Kamis, Tanggal 26 Juli 2012

  Pembimbing Utama

  Nama : Diding Prasetyo, dr., M. Si NIP : 19680429 199903 1 001 ………………………

  Pembimbing Pendamping

  Nama : Sri Hartati H., Dra, Apt., S. U NIP : 19490709 197903 2 001 .……………………...

  Penguji Utama

  Nama : R.P. Andri Putranto, dr., M. Si NIP : 19630525 1996 1 001 ………………………

  Anggota Penguji

  Nama : Sarsono, Drs., M. Si NIP : 19581127 198601 1 001 ……………………… Surakarta, ........................

  Ketua Tim Skripsi Dekan FK UNS

  

Muthmainah, dr., M.Kes Prof. Dr. Zainal Arifin Adnan, dr, Sp.PD-KR-FINASIM

NIP. 19660702 199802 2 001 NIP. 19510601 197903 1 002

  

PERNYATAAN

  Dengan ini menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi dan sepanjang pengetahuan penulis juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah dan disebutkan dalam daftar pustaka.

  Surakarta, Nurrini Susanti Y.

  NIM. G.0009160

  

ABSTRAK

Nurrini Susanti Y, G.0009160, 2012. Perbedaan Kadar Kuersetin pada Propolis

  Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air. Skripsi. Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret, Surakarta.

  

Latar Belakang: Propolis mengandung berbagai jenis flavonoid, salah satunya

  adalah kuersetin. Propolis memiliki banyak manfaat di bidang kesehatan. Jenis pelarut yang digunakan dalam ekstraksi propolis mempengaruhi kadar kuersetin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan kadar kuersetin pada propolis ekstrak etanol dan propolis ekstrak air.

  

Metode Penelitian: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni.

  Subjek penelitian adalah propolis yang berasal dari peternakan lebah di daerah Gejen RT 3 RW 2, Kerjo, Karanganyar. Pengambilan sampel dilakukan dengan cara purposive sampling. Penentuan kadar kuersetin pada propolis dengan menggunakan UV-Vis spektrofotometer metode Prussian-blue. Pada tiap ekstrak propolis masing-masing dibuat lima sampel. Data kadar kuersetin yang diperoleh dianalisis dengan uji statistik yaitu Uji t tidak berpasangan menggunakan program komputer SPSS 17 for windows.

  

Hasil Penelitian: Rata-rata kadar kuersetin yang diperoleh dalam penelitian ini

  adalah 10,0480±0,53798 µg/mL pada Propolis Ekstrak Etanol dan 1,0440±0,06804 µ g/mL pada Propolis Ekstrak Air dengan nilai p < 0,05.

  

Simpulan Penelitian: Terdapat perbedaan kadar kuersetin pada propolis ekstrak

  etanol dan propolis ekstrak air

  Kata Kunci: Propolis, kadar kuersetin, UV-Vis spektrofotometer, Prussian Blue

  

ABSTRACT

Nurrini Susanti yulianti, G.0009160, 2012. The Difference of Quercetin Level

  in Ethanol Extract Propolis and Water Extract Propolis. Mini Thesis, Faculty of Medicine, Sebelas Maret University, Surakarta.

  

Background: Propolis contains flavonoids. One of them is quersetin. Solvent

  used is propolis extraction influence quercetin level of the extract. This research aims to determine whether there is a difference of Quercetin Level in Ethanol Extract Propolis and Water Extract Propolis.

  

Methods: This research is an experimental research. Subject of this research is

  propolis from Gejen RT 3 RW 2, Kerjo, Karanganyar. The samples were carried out by purposive sampling. Concentration of quercetin is determined by using UV-Vis spectrophotometer by Prussian-blue methode. Five samples are made for each extract. The data then analized using unpaired t-test by SPSS 17 for windows.

  

Results: Averages of quercetin level in this research are 10,0480±0,53798

  µg/mL in Ethanol extract propolis and 1,0440±0,06804 µ g/mL in Water Extract propolis with p < 0,05.

  

Conclusion: There are differences in there is a difference of quercetin content in

Ethanol Extract Propolis and Water Extract Propolis.

  Keywords: Propolis, Quercetin level, UV-Vis spectrophotometer, Prussian-blue

  

PRAKATA

  Alhamdulillaah, segala puji syukur bagi Allah Subhanahu wa ta’ala yang telah memberikan taufik, hidayah, dan kekuatan serta kesabaran sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan laporan penelitian dengan judul “Perbedaan Kadar Kuersetin pada Propolis di Pasaran Wilayah Surakarta”.

  Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat kelulusan tingkat sarjana di Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. Kendala dalam penyusunan skripsi ini dapat teratasi atas pertolongan Allah SWT melalui bimbingan dan dukungan banyak pihak. Untuk itu, perkenankan penulis mengucapkan terima kasih kepada :

  1. Prof. Dr. Zainal Arifin Adnan, dr, Sp.PD-KR-FINASIM, selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.

  2. Muthmainah, dr., M.Kes, selaku Ketua Tim Skripsi beserta Tim Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.

  3. Diding Heri Prasetyo, dr., M.Si, selaku Pembimbing Utama yang telah banyak meluangkan waktu untuk memberikan bimbingan dan nasihat.

  4. Sri Hartati, Dra., Apt., S.U, selaku Pembimbing Pendamping yang telah banyak meluangkan waktu untuk memberikan bimbingan dan nasihat.

  5. R.P. Andri Putranto, dr., M.Si, selaku Penguji Utama yang telah memberikan bimbingan dan nasihat.

  6. Sarsono, Drs., M.Si, selaku Penguji Pendamping yang telah memberikan bimbingan dan nasihat.

  7. Bapak, Ibu, adik serta seluruh keluarga yang telah memberi dukungan moral, material, serta senantiasa mendoakan untuk terselesaikannya skripsi ini.

  8. Semua pihak yang telah membantu terselesainya skripsi ini, yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.

  Meskipun tulisan ini masih belum sempurna, penulis berharap skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca. Saran, pendapat, koreksi, dan tanggapan dari semua pihak sangat diharapkan.

  Surakarta, Mei 2012 Penulis

  

DAFTAR ISI

  PRAKATA ................................................................................................................. vi DAFTAR ISI.............................................................................................................. vii DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ x DAFTAR TABEL ..................................................................................................... x DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................. x GLOSARIUM...................................................................................................... . xi

  BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1 A. Latar Belakang Masalah ......................................................................... 1 B. Rumusan Masalah .................................................................................. 3 C. Tujuan Penelitian ................................................................................... 3 D. Manfaat Penelitian ................................................................................. 3

  1. Aspek teoritis .................................................................................... 3

  2. Aspek aplikatif .................................................................................. 4

  BAB II LANDASAN TEORI .................................................................................. 5 A. Tinjauan Pustaka ..................................................................................... 5

  1. Propolis ................................................................................................. 6

  2. Kuersetin ............................................................................................... 8

  3. Ekstrak .................................................................................................. 12

  B. Kerangka Pemikiran ................................................................................. 15

  C. Hipotesis .................................................................................................. 16

  BAB III METODE PENELITIAN ...........................................................................17

  A. Jenis Penelitian ...................................................................................... 17

  B. Lokasi Penelitian..................................................................................... 17

  C. Subjek Penelitian .................................................................................... 17

  D. Teknik Sampling.....................................................................................17

  E. Rancangan Penelitian ............................................................................. 18

  F. Identifikasi Variabel Penelitian ............................................................ 19

  G. Definisi Operasional Variabel Penelitian .............................................. 19

  H. Alat dan Bahan........................................................................................ 20

  I. Cara Kerja ............................................................................................... 20 J. Teknik Analisis Data .............................................................................. 22

  BAB IV HASIL PENELITIAN ................................................................................ 23 BAB V PEMBAHASAN ......................................................................................... 29 BAB VI SIMPULAN DAN SARAN ...................................................................... 32 A. Simpulan.................................................................................................. 32 B. Saran ........................................................................................................ 32 DAFTAR PUSTAKA........................................................................................... 33 LAMPIRAN......................................................................................................... .36

  

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Struktur Kimia Kuersetin .................................................................... 9Gambar 2.2 Skema Kerangka Pemikiran ............................................................... 15Gambar 3.1 Skema Rancangan Penelitian ............................................................. 17Gambar 4.1 Kurva Kalibrasi Kuersetin dengan Pelarut Etanol dalam Reagen

  Prussian-Blue pada Panjang Gelombang 700 nm ............................. 24

Gambar 4.2 Kurva Kalibrasi Kuersetin dengan Pelarut Air dalam Reagen

  Prussian-Blue pada Panjang Gelombang 700 nm ............................. 26

  

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Komposisi Kandungan Senyawa Kimia Rata-rata dari Propolis

  (Krel, 1996)...............................................................................................6

Tabel 4.1 Pengukuran Absorbansi Larutan Kuersetin yang Dilarutkan dalam

  Etanol 80% pada Panjang Gelombang 700 nm ...................................... 23

Tabel 4.2 Pengukuran Absorbansi Larutan Kuersetin yang Dilarutkan dalam Air

  pada Panjang Gelombang 700 nm ........................................................... 25

Tabel 4.3 Konsentrasi Kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol ............................26Tabel 4.4 Konsentrasi Kuersetin pada Propolis Ekstrak Air.................................. 26

  

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1.Uji Normalitas Distribusi Lampiran 2.Uji Homogenitas dan Independent t Test Lampiran 3.Foto-Foto Penelitian

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Masalah Propolis merupakan senyawa lengket seperti lem (resin) yang

  dikumpulkan lebah madu dari kuncup daun berbagai tumbuhan yang kemudian dicampur dengan lem lebah dan

  β-glucosidase yang

  disekresikan oleh kelenjar saliva selama pengumpulan propolis. Propolis digunakan lebah sebagai lem pada sarangnya untuk menanggulangi berbagai ganguan dari luar (Park dan Ikegaki, 1998).

  Propolis umumnya didapatkan dari lebah madu Apis spp., namun terdapat spesies lebah madu lain yang mengumpulkan lebih sedikit madu dan lebih banyak propolis misalnya lebah madu Trigona spp (Fatoni et al., 2008). Komposisi kandungan propolis bervariasi berdasarkan sumbernya, secara umum, propolis tersusun atas 50% resin, 30% lem lebah, 10% minyak esensial, 5% serbuk sari dan 5% bahan lain (Coneac et al., 2008).

  Propolis diketahui yang yang memiliki berbagai aktivitas biologis. Berbagai aktivitas ini disebabkan karena di dalam propolis terkandung flavonoid, aktivitas-aktivitas tersebut di antaranya adalah aktivitas antibakterial, antiviral, antifungal, antioksidan dan dapat menangkal radikal bebas (Bahdauria et al., 2006). Flavonoid propolis juga diketahui memiliki aktivitas antiinflamasi, menstimulasi sistem imun, hepatoprotektor, karsinostatik, dan membantu regenerasi jaringan (Farre et al., 2004).

  Kuersetin merupakan salah satu dari dua senyawa flavonoid terpenting yang terkandung di dalam propolis (Coneac et al., 2009).

  Kuersetin diketahui sebagai suatu senyawa yang tidak stabil terutama pada media basa. Selain itu, kuersetin juga diketahui memiliki bioavailabilitas yang rendah di dalam air sehinga meyebabkan absorbsi kuersetin secara oral terbatas (Zheng et al., 2005).

  Pietta dalam Susilo (2009) menyatakan bahwa propolis tidak dapat digunakan sebagai bahan baku dan harus dipurifikasi terlebih lagi melalui proses ekstraksi dengan zat pelarut. Hal ini disebabkan karena propolis mentah yang masih mengandung berbagai bahan-bahan kontaminan seperti kayu, serbuk sari, bahkan lebah yang sudah mati (Sforcin dan Bankova, 2011) Metode ekstraksi propolis dapat mempengaruhi aktivitas biologis flavonoid propolis, khususnya kuersetin (Coneac et al., 2008).

  Metode ekstraksi yang umumnya digunakan saat ini adalah ekstrak padat, yaitu ekstraksi dengan menggunakan etanol dengan konsentrasi yang berbeda-beda, metanol atau air (Nagai et al., 2002). Cunha dalam Sforcin (2011) menyatakan bahwa pelarut yang berbeda akan mengekstrak komponen yang berbeda serta mempengaruhi aktivitasnya. Meskipun propolis ekstrak etanol saat ini lebih umum digunakan, namun propolis ekstrak air diketahui memberikan efek imunologis pada hewan maupun manusia sehingga penelitian mengenai Propolis Ekstrak Air semakin banyak dilakukan (Nagai et al., 2002).

  Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai perbedaan kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air.

  B. Rumusan Masalah

  Berdasarkan uraian dalam latar belakang masalah tersebut di atas, dapat dirumuskan masalah pada penelitian ini adalah: adakah perbedaan kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air? C.

   Tujuan Penelitian

  Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air.

  D. Manfaat Penelitian 1. Aspek Teoritis

  Memberikan sumbangan pikiran bagi ilmu pengetahuan kesehatan terutama di bidang biokimia untuk mengetahui ekstrak yang memiliki kadar kuersetin lebih tinggi diantara Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air.

2. Aspek Aplikatif

  a. Memberikan informasi kepada klinisi tentang kadar kuersetin yang lebih tinggi di antara Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air sehingga dapat digunakan untuk penelitian selanjutnya. b. Memberikan informasi kepada masyarakat tentang kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air.

BAB II LANDASAN TEORI A. Tinjauan Pustaka 1. Propolis a. Definisi Propolis merupakan senyawa lengket seperti lem (resin)

  yang dikumpulkan lebah madu (Apis mallifera) dari kuncup daun berbagai tumbuhan yang kemudian dicampur dengan lilin lebah dan

  β-glucosidase yang disekresikan oleh kelenjar saliva selama

  pengumpulan propolis (Park dan Ikegaki, 1998). Propolis umumnya didapatkan dari lebah madu Apis spp., namun terdapat spesies lebah madu lain yang mengumpulkan lebih sedikit madu dan lebih banyak propolis misalnya lebah madu Trigona spp (Fatoni et al., 2008).

b. Kandungan senyawa kimia

  Propolis tersusun atas lebih dari 180 senyawa kimia yang komposisinya berbeda-beda sesuai dengan zona geografis dan sumber tanamannya (Osman dan Taha, 2008). Selain kedua hal tersebut, komposisi propolis juga dipengaruhi oleh musim (Saragih

  et al ., 2006). Komposisi propolis terutama tergantung pada tumbuh-

  tumbuhan dari daerah asal propolis, waktu dikumpulkan dan secara sekunder tergantung pada pelarut yang digunakan untuk ekstraksi (Mishima, 2005). Lem lebah yang menjadi bahan campuran propolis merupakan produk yang dihasilkan dari tumbuhan telah dibuktikan bahwa komposisinya tidak diubah oleh lebah (Bankova, 2005).

  Propolis mengandung senyawa kompleks vitamin, mineral, enzim, senyawa fenolik dan flavonoid (Osman dan Taha, 2008). Dalam tabel di bawah ini, Krell (1996) menjelaskan komposisi kimia propolis adalah sebagai berikut:

Tabel 2.1. Komposisi Kandungan Senyawa Kimia Rata-Rata dari

  Propolis (Krel, 1996) Komposisi (%) Kandungan Senyawa dan

  Karakteristik Resin 45-55 Flavonoid, asam fenolik dan ester Lilin 7,55- Lilin lebah, serat tumbuhan

  35 Oil esensial 5-10 Senyawa volatile Asam Lemak

  5 Kebanyakan dari lilin dan tergantung pada asal tumbuhan Tepung sari

  5 Protein tepung sari asam amino bebas dan prolin Senyawa organik lain 5 14 elemen sisa yang sebagian dan mineral besar terdiri atas Fe dan Zn, dan elemen lain yaitu Au, Ag, Cs, Hg, K, keton, lakton, quinon, steroid, asam benzoat dan ester, vitamin: B1, B2, B3, B6 c.

   Manfaat Propolis

  Propolis berfungsi sebagai lem pada sarang lebah dalam mengatasi berbagai ganguan dari luar (Park dan Ikegaki, 1998).

  Selain itu, propolis juga berfungsi untuk mengkilatkan bagian dalam sarang dan menjaga suhu lingkungan bagi lebah. Propolis digunakan untuk mengisi retakan dan celah pada sarang lebah, mempersempit atau menutup sarang agar tidak terbuka, melindunginya dari kontaminasi yang berasal dari luar, untuk memperkuat dan menyambung sel-sel dalam sarang dan melindunginya dari rembesan air, serta melindungi larva yang tumbuh tidak terkontaminasi oleh mikroba (Susilo et al., 2009)

  Saat ini, manusia memanfaatkan propolis sebagai bahan kosmetik, teknologi pengolahan pangan dan obat-obatan. Propolis diketahui yang memiliki aktivitas antibakterial, antiviral, antifungal, antioksidan dan dapat radikal bebas (Bahdauria et al., 2006).

  Propolis juga diketahui memiliki aktivitas antiinflamasi, menstimulasi imun, hepatoprotektor, karsinostatik, dan membantu regenerasi jaringan. Efek lain dari propolis yang telah diketahui antara lain menurunkan tekanan darah, melindungi jaringan hepar dari tetraklorida, mencegah terjadinya ulkus lambung dan mempertahankan kadar glukosa darah, bersifat protektif terhadap jaringan ginjal (El-Khayat, 2009). Propolis menunjukkan aktivitas antimikroba, baik secara langsung pada berbagai mikroorganisme maupun secara tidak langsung dengan memacu sistem imun tubuh. Propolis memacu sistem imun dengan mengaktivasi makrofag dan meningkatkan aktivitas micobicidal dari makrofag dan meningkatkan pembentukan antibodi serta menunjukkan efek sinergis dengan obat-obatan antimikroba (Sforcin, 2007). Penelitian yang dilakukan oleh Syamsudin (2011) menunjukkan bahwa propolis memiliki efek antimalaria dengan tingkat efektifias yang berbeda-beda tergantung dari letak geografis asal propolis. Miyataka dalam Sforcin (2007) menyebutkan bahwa Propolis Ekstrak Air dan Propolis Ekstrak Etanol memberikan efek antialergi yaitu dengan menghambat pengeluaran histamin dari sel mast tikus.

2. Kuersetin

  a. Definisi Kuersetin merupakan suatu zat aktif yang termasuk dalam golongan flavonol. Flavonol merupakan salah satu dari enam subgolongan flavonoid. Kuersetin merupakan flavonoid yang secara luas tersebar pada tumbuhan (Kelly, 2010). Kuersetin juga merupakan salah satu dari dua senyawa flavonoid terpenting yang terkandung di dalam propolis (Coneac et al., 2009). Kuersetin dibedakan menjadi kuersetin aglikon dan kuersetin glikosid. Kuersetin aglikon merupakan kuersetin yang tidak berikatan dengan gula, sementara kuersetin glikosid merupakan kuersetin yang berikatan dengan gugus glikosil (glukosa, rhamnosa, rutinosa). Kuersetin aglikon ditemukan lebih sedikit daripada kuersetin glikosid di dalam diet (Kelly, 2010)

Gambar 2.1. Struktur Kimia Kuersetin (Mao et al., 2009)

  b. Manfaat Kuersetin diketahui sangat berperan dalam berbagai efek biologis yaitu sebagai antioksidan dengan menangkal radikal bebas, antikanker, antiviral, mencegah arterosklerosis dan mencegah inflamasi kronis (Coneac et al., 2009). Kuersetin juga dketahui dapat menghambat pengeluaran histamin sehingga dapat digunakan untuk mencegah terjadinya reaksi alergi (Kelly, 2010). Kelly (2010) juga menyatakan bahwa kuersetin juga memiliki aktivitas menghambat terjadinya agregasi trombosit dan dan pembentukan trombus sehingga dapat menurunkan risiko terjadinya penyakit kardiovaskuler. Gulcin (2010) juga menyatakan bahwa propolis dapat mencegah terjadinya penyakit jantung koroner. Kuersetin juga menunjukkan adanya efek antiansietas dan antidepresan pada hewan walaupun hingga saat ini belum ada penelitian mengenai aktivitas antiansietas dan antidepresan kuersetin pada manusia. Menurut secara signifikan dapat meningkatkan fase non-REM pada tidur dan mengurangi fase REM yang diduga disebabkan oleh aktivitas kuersetin yag menginduksi aktivitas reseptor GABA(A) walaupun sementara ini belum terdapat penelitian mengenai efek kuersetin terhadap fase tidur pada manusia.

  c. Bioavailabilitas Kuersetin diketahui sebagai suatu senyawa yang tidak stabil terutama pada media basa (Zheng et al., 2005). Kuersetin aglikon yang tidak berikatan dengan gugus glikosil seluruhnya tidak dapat larut dalam air dingin, namun dapat sangat sedikit terlarut dalam air panas dan sedikit terlarut dalam alkohol dan lemak (lipofilik) (Kelly, 2010). Ikatan kuersetin dengan gugus glikosil pada kuersetin glikosid diketahui meningkatkan kelarutannya di dalam air. Karena kuersetin memiliki kelarutan yang rendah di dalam air sehinga meyebabkan absorbsi kuersetin secara oral terbatas (Zheng et al., 2005). Terlebih lagi dalam proses pencernaan, enzim-enzim pencernaan dan bakteri menyebabkan terjadinya hidrolisis kuersetin sehingga kuersetin glikosil berubah menjadi kuersetin aglikon sehingga lebih mudah diserap oleh tubuh (Kelly, 2010). Rata-rata absorbsi oral kuersetin pada hewan maupun manusia rata-rata adalah 20% (Lamson dan Brignal, 2000). d. Analisis kadar kuersetin Analisis flavonoid dapat dilakukan dengan mengunakan metode UV-Vis spektrofotometer. Metode dengan UV-Vis spektrofotometer memiliki nilai penyimpangan yang cukup besar karena faktor yang digunakan untuk menghitung flavonoid total tidak konstan (Lin-chin et al., 2000). Terdapat beberapa metode UV- Vis spektrofotometer yang dapat digunakan yaitu metode Folin- Ciocalteau, metode Prussian-blue dan metode o-Phenanthroline (Gonzalez et al., 2003). Dalam penelitiannya, Gonzalez (2003) menemukan bahwa metode Folin-Ciocalteau merupakan metode yang efektif dan cepat untuk propois dengan konsentrasi komponen fenolik yang tinggi, Prussian-blue merupakan metode yang cepat dan sensitif untuk determinasi spektrofotometrik dari fenol total, sementara prosedur dari metode o-Phenanthroline membutuhkan waktu yang lebih lama supaya dapat memberikan hasil yang baik.

  Dalam penelitiannya, Lin Chin (2000) menggunakan UV-Vis spektrofotometer dalam mengukur kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air. Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Gonzalez (2003) pengukuran dengan metode

  

Prussian-blue dilakukan dengan cara mengunakan ekstrak air

  maupun ekstrak etanol propolis sebanyak 5-400 µm ditambah dengan raegen Prussian-blue. Larutan yang sudah jadi kemudian ditambahkan dengan akuades hingga volume akhirnya menjadi 10 ml. Setelah tujuh menit, nilai absorbansi diukur menggunakan UV- Vis spektrofotometer pada panjang gelombang 700 nm, pengukuran dinyatakan selesai apabila tes strip FeCl

  3 berubah warna menjadi biru kehijauan.

3. Ekstrak

  a. Ekstrak Ekstrak merupakan sediaan tumbuh-tumbuhan atau hewan yang dipekatkan dengan cara melepaskan zat aktif dari masing- masing bahan, dengan menggunakan pelarut yang sesuai kemudian sebagian besar atau seluruh pelarut diuapkan dan masa yang tersisa diatur untuk ditetapkan standarnya. Dengan demikian, ekstrak merupakan bentuk sediaan yang poten, potensi ekstrak biasanya dapat mencapai dua sampai enam kali berat bahan mentahnya. Fungsi ekstrak adalah untuk menyediakan sejumlah kecil dan dalam kesesuaian bagi bentuk fisik yang mantap serta menunjukkan aktivitas obat dan sifat dari bahan tersebut (Ansel, 1989).

  b. Ekstraksi Ekstraksi merupakan penarikan zat pokok yang diinginkan dari suatu bahan mentah dengan menggunakan pelarut. Pelarut dipilih berdasarkan pada daya larut zat aktif, zat yang tidak diinginkan, serta tipe preparat farmasi yang dibutuhkan (Ansel, 1989).

  Pelarut serbaguna yang paling luas penggunaannya mungkin adalah campuran hidroalkohol. Hidroalkohol merupakan gabungan antara pelarut air dan alkohol yang memungkinkan terbentuknya kombinasi fleksibel antara air dan alkohol yang paling sesuai untuk mengektraksi suatu bahan aktif dari obat khusus. Pelarut hidroalkohol biasanya memberikan perlindungan terpadu terhadap kontaminasi mikroba dan membantu mencegah pemisahan bahan yang diekstraksi bila didiamkan (Ansel, 1989).

  Metode dasar dari ekstraksi adalah maserasi dan perkolasi. Metode ekstraksi dipilih berdasarkan sifat bahan metah obat (faktor utama), daya penyesuaian bahan mentah obat dengan tiap macam metode ekstraksi, serta kepentingan dalam memperoleh ektrak yang mendekati sempurna dari obat. Proses perkolasi lebih rumit, mahal, dan lama dibandingkan dengan proses maserasi. Maserasi merupakan proses paling tepat, obat yang sudah halus, direndam dalam pelarut sampai meresap dan melunakkan susunan sel sehingga zat-zat yang mudah larut akan terlarut. Maserasi dilakukan pada

  o o

  temperatur 15 -20

  C, selama 3 hari sampai bahan-bahan yang dapat larut kemudian melarut. Pada kenyataannya sering digunakan kombinasi dari proses maserasi dan perkolasi dalam mengekstraksi bahan mentah obat. Bahan mentah obat mula-mula dimaserasi untuk melunakkan jaringan tanaman dengan melarutkan lebih banyak zat aktif di dalamnya, kemudian dilakukan proses perkolasi untuk memisahkan ekstrak dari ampasnya (Ansel, 1989).

  c. Propolis Ekstrak Etanol Ekstraksi dengan pelarut hidroalkohol dengan mengggunakan jenis etanol yang tidak menyebabkan pembengkakan membran sehingga dapat memperbaiki stabilitas bahan obat yang terlarut (Voigt, 1994). Jika bahan pengekstraknya dilarutkan seluruhnya atau sebagiannya saja, maka dapat diperoleh suatu ekstrak dengan berbagai konsentrasi sesuai dengan kebutuhan, yang berdasarkan sifat-sifatnya dibedakan menjadi:

  1) Ekstrak encer, yaitu sediaan dengan konsistensi seperti madu dan dapat dituang. Ekstrak encer sekarang sudah tidak digunakan lagi. 2) Ekstrak kental, yaitu sediaan dengan konsistensi liat pada kondisi dingin dan tidak dapat dituang. Kandungan airnya berjumlah sampai 30%. 3) Ekstrak kering, yaitu sediaan dengan konsistensi kering dan mudah digosokkan, kandungan airnya tidak lebih dari 5%.

  4) Ekstrak cair, yaitu ekstrak yang dibuat sedemikian hingga 1 bagian obat sesuai dengan 2 bagian ekstrak cair. Ekstrak cair dan ekstrak kering adalah komponen yang paling banyak tersedia (Voigt, 1994).

  Ekstrak etanol dibuat dengan cara propolis mentah dilarutkan dalam etanol dan diaduk setiap 5 menit selama 30 menit

  o

  pada suhu 70

  C, larutan kemudian dimaserasi/didiamkan selama 24 jam, kemudian disaring menggunakan kertas saring, selanjutnya larutan yang telah disaring diuapkan dengan menggunakan waterbath hingga menjadi kental (Saragih, 2006).

  d. Ekstrak Air Propolis Pembuatan ekstrak air propolis dilakukan dengan cara

  Gonzalez (2003) dengan modifikasi. Ekstrak air propolis, menurut Gonzalez, dibuat dengan mengambil 0,1g sampel propolis kering ditambah dengan 30 ml air. Kemudian dilakukan maserasi selama 12 jam, dilanjutkan dengan memasukkan sampel ke dalam shaker

  

o

  selama 30 menit pada suhu 30 C dan 50 rpm. Supernatan yang dihasilkan kemudian difiltrasi 5 jam kemudian. Prosedur yang sama kemudian dilakukan lagi sebanyak 5 kali.

B. Kerangka Pemikiran

  Propolis Zona waktu geografis

  Jenis pelarut Jenis tumbuhan

  Jenis lebah Perbedaan kandungan propolis

  Perbedaan kadar Kuersetin

Gambar 2.2. Skema Kerangka Pikir C.

   Hipotesis

  Terdapat perbedaan kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air.

BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni. B. Lokasi Penelitian Penelitian dilaksanakan di laboratorium biokimia UNS, Surakarta. C. Subjek Penelitian Subjek penelitian berupa propolis yang berasal dari peternakan lebah di daerah Gejen RT 3 RW 2, Kerjo, Karanganyar. D. Teknik Sampling Teknik sampling dilakukan adalah purpossive sampling

E. Rancangan Penelitian

  Rancangan penelitian yang digunakan adalah the post test only group design.

Gambar 3.1. Skema Rancangan Penelitian

  Keterangan: A : Propolis Ekstrak Etanol B : Propolis Ekstrak Air O

  1 : Pengukuran kadar kuersetin pada kelompok Propolis Ekstrak

  Etanol dengan menggunakan UV-Vis spektrofotometer metode Prussianiblue .

  O

  2 : Pengukuran kadar kuersetin pada kelompok Propolis Ekstrak

  Air dengan menggunakan UV-Vis spektrofotometer metode Prussian-blue . Propolis ss

  A B O ₁ O ₂ Dibandingkan dengan uji statistik

  B

¹

B

²

B

³

A

₁

A

²

A

₃

A

⁵

A

⁴

B

⁵

B

₄

F. Identifikasi Variabel Penelitian

  1. variabel bebas : Propolis Ekstrak Etanol Propolis Ekstrak Air

  2. variabel terikat: kadar kuersetin G.

   Definisi Operasional Variabel

  1. Propolis Ekstrak Etanol Propolis Ekstrak Etanol adalah ekstrak yang diperoleh dengan cara mengekstraksi propolis mentah dari peternakan lebah di Daerah

  Gejen RT 3 RW 2, Kerjo, Karanganyar dengan menggunakan etanol sebagai pelarutnya. Skala ukuran variabel ini adalah nominal.

  2. Propolis Ekstrak Air Propolis Ekstrak Air adalah ekstrak yang diperoleh dengan cara mengekstraksi propolis mentah dari peternakan lebah di Daerah Gejen

  RT 3 RW 2,Kerjo, Karanganyar dengan mengunakan air sebagai pelarutnya. Skala ukuran variabel ini adalah nominal.

  3. Kadar Kuersetin Kadar kuersetin adalah kadar yang ditentukan dengan menggunakan analisis spektofotometer dimana ekstrak propolis terlebih dahulu direaksikan dengan reagen Prussian-blue dan diencerkan. Skala ukuran variabel ini adalah rasio.

H. Alat dan Bahan

  1. Alat

  a) labu takar 10 mL, 100 mL, 250 mL; b) erlenmeyer tutup 100 mL, 250 mL; c) gelas beaker 250 mL; d) pipet tetes; e) pipet mikro 0-10, 10-100, 100-1000 µ L; f) botol timbang; g) satu set spektrofotometer; h) kertas saring; i) kain lap; j) sabun cuci; k) sikat tabung

  2. Bahan

• 3 -3

  a) kuersetin (1.10 s.d 2,98.10 M); b) asam asetat; c) etanol 80%; d) aquabidest; e) HCl 0,1 M; f) K Fe(CN) 0,0008M/0,1M HCl; g) FeCl

  

3

  6

  3

  0,1M/0,1M HCl; h) propolis mentah I.

   Cara Kerja

  1. Persiapan percobaan Pembuatan Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air dilakukan di Laboratorium Biokimia-UNS Surakarta. Pembuatan ekstrak propolis dilakukan dengan cara Gonzalez (2003) dengan modifikasi. Menurut Gonzalez, ekstrak dibuat dengan mengambil 0,1g sampel propolis kering ditambah dengan 30 ml air. Kemudian dilakukan maserasi selama 12 jam, dilanjutkan dengan memasukkan sampel ke dalam shaker selama

  o

  30 menit pada suhu 30 C dan 50 rpm. Supernatan yang dihasilkan kemudian difiltrasi 5 jam kemudian. Prosedur yang sama kemudian dilakukan lagi sebanyak 5 kali. Modifikasi yang dilakukan adalah dengan memperpanjang lama perendaman menjadi 24 jam dan tidak digunakannya

  shaker untuk proses pengadukan.

  2. Pelaksanaan dan Pengukuran Hasil Percobaan Pengukuran kadar kuersetin Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air dilakukan di Laboratorium Biokimia-UNS Surakarta.

  Pengkuran kadar kuersetin menggunakan spektrofotometer dengan metode

  Prussian-blue dilakukan dengan langkah-langkah sebagai berikut:

  1. Standar kuersetin (302,236) ditentukan dengan cara membagi kuersetin standar menjadi enam kelompok ukuran yaitu 0; 2,5; 5; 7,5; 10; 12,5 µL untuk ekstrak etanol dan 0; 0,31; 0,63; 1,25; 2,5; 5 µL untuk ekstrak air.

  2. 400 µL K

  3 Fe (CN) 6 0,0008M/0,1M HCl dan 400 µ L FeCl

  3

  0,1M/0,1M HCl ditambahkan pada masing-masing kelompok ukuran kuersetin standar kemudian diencerkan dengan dengaan masing- masing pelarut hingga menjadi 10 ml kemudian dikocok.

  3. Absorbansi warna diamati pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 700 nm setelah 7 menit.

  4. Nilai absorbansi dicatat dan data yang didapat kemudian dibuat kurva kalibrasi standar dimana sumbu x menunjukkan besarnya ukuran nilai kuersetin standar dan sumbu y menunjukkan besarnya nilai absorbansi.

  5. Sampel propolis dibagi menjadi dua kelompok yaitu: Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air.

  6. Masing-masing propolis diambil 10 µL kemudian diencerkan menjadi 10 ml dengan etanol 80% maupun dengan air, kemudian ditambahkan 400 µ L K

  3 Fe (CN) 6 0,0008M/0,1M HCl dan 400 µ L

  FeCl

  3 0,1M/0,1M HCl /10 ml lalu dikocok. Absorbansi diamati pada

  spektrofotometer dengan panjang gelombang 700 nm setelah 7 menit. Nilai absorbansi kemudian dicatat dan digunakan untuk menentukan besar nilai kuersetin yang terdapat dalam sampel propolis berdasarkan persamaan regresi yang diperoleh dari kurva standar.

  7. Ulangi langkah ke 6 sebanyak lima kali untuk tiap sampel propolis.

  8. Nilai rata-rata kadar kuersetin tiap sampel propolis kemudian dihitung.

  9. Kadar kuesetin pada propolis ekstrak etanol dan propolis ekstrak air kemudian dibandingkan dengan menggunakan uji statistik.

  J. Teknik Analisis Data Statistik

  Data yang diperoleh dari penelitian dianalisis dengan uji t tidak berpasangan menggunakan program SPSS 17 for windows untuk mengetahui adanya perbedaan kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air.

BAB IV HASIL PENELITIAN Kuersetin standar yang dilarutkan dalam etanol 80% direaksikan

  dengan reagen Prussian-blue dan menghasilkan larutan berwarna biru kehijauan. Warna yang dihasilkan terlalu pekat sehingga perlu dilakukan pengenceran agar dapat dibaca absorbansinya dengan spektrofotometer UV- Vis. Berikut ini merupakan hasil pengukuran absorbansi larutan kuersetin standar yang menggunakan pelarut etanol 80%:

Tabel 4.1. Pengukuran Absorbansi Larutan Kuersetin yang Dilarutkan dalam Etanol 80% pada Panjang Gelombang 700 nm.

  Konsentrasi (µ g/mL) Absorbansi 12,5 0,294 10 0,237

  7,5 0,155 5 0,107 2,5 0,049

  0,000 Berdasarkan hasil pengukuran di atas, dapat dibuat kurva kalibrasi antara Absorbansi dengan Konsentrasi. Kurva kalibrasi dibuat untuk membantu menentukan kadar kuersetin dalam sampel melalui persamaan regresi dari kurva kalibrasi (Gambar 4.1). Dari gambar tersebut dapat dilihat bahwa absorbansi berbanding lurus dengan konsentrasi yang mengikuti kuersetin standar ke dalam larutan etanol 80% adalah persamaan regresi liner dengan persamaan regresi Y=0,0238x-0,0084 dan harga koefisien korelasi (r) adalah 0,993. Nilai (r) yang mendekati 1 tersebut membuktikan bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier. Persamaan tersebut digunakan sebagai standar pada pengukuran kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol.

  0.35 y = 0.0238x - 0.0084

  0.3 R² = 0.9937

  0.25

  0.2 si an rb

  0.15 so b

  0.1 A

  0.05

  2

  4

  

6

  8

  10

  12

  14

• 0.05

  Kadar kuersetin

Gambar 4.1. Kurva Kalibrasi Kuersetin dengan Pelarut Etanol dalam

  Reagen Prussian-blue pada Panjang Gelombang 700 nm Kuersetin standar yang dilarutkan dalam etanol 80% direaksikan dengan reagen Prussian-blue dan menghasilkan larutan berwarna biru kehijauan. Warna yang dihasilkan oleh seluruh sampel terlalu pekat sehingga perlu dilakukan pengenceran agar dapat nilai absorbansinya dapat dibaca dengan UV-Vis spektrofotometer. Berikut ini merupakan hasil pengukuran absorbansi larutan kuersetin standar yang menggunakan pelarut air:

Tabel 4.2. Pengukuran Absorbansi Larutan Kuersetin yang Dilarutkan dalam Air pada Panjang Gelombang 700 nm.

  Konsentrasi (µ g/mL) Absorbansi 5 0,329 2,5 0,178

  1,25 0,084 0,63 0,042 0,31 0,026

  Berdasarkan hasil pengukuran di atas, dapat dibuat kurva kalibrasi antara absorbansi dengan Konsentrasi. Kurva kalibrasi dibuat untuk membantu menentukan kadar kursetin dalam sampel melalui persamaan regresi dari kurva kalibrasi (Gambar 4.2). Dari gambar tersebut dapat dilihat bahwa absorbansi berbanding lurus dengan konsentrasi yang mengikuti persamaan linier. Kurva kalibrasi yang diperoleh dengan melarutkan kuersetin standar ke dalam air adalah persamaan regresi liner dengan persamaan regresi y = 0,066x + 0,003 dan harga koefisien korelasi

  2

  2

  (R ) adalah 0,998. Nilai (R ) yang mendekati 1 tersebut membuktikan bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier. Persamaan tersebut digunakan untuk melakukan pengukuran kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Air.

Gambar 4.2. Kurva Kalibrasi Kuersetin dengan Pelarut Air dalam Reagen

  0.3

  6 A b so rb an si

  5

  4

  3

  2

  1

  0.35

  0.25

  

Prussian -blue pada Panjang Gelombang 700 nm

  0.2

  0.15

  0.1

  0.05

  y = 0.066x + 0.0032 R² = 0.9982

  Absorbansi Konsentrasi (µ g/mL) 0,214 9,35 0,223 9,71 0,230 10,03 0,244 10,59 0,243 10,56

Tabel 4.3. Konsentrasi Kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol

  Kadar kuersetin pada masing-masing sampel dapat ditentukan dari kurva kalibrasi larutan standar dengan persamaan regresinya dan pengukuran absorbansi dari masing-masing sampel dengan menggunakan UV-Vis spektrofotometer. Berikut ini merupakan hasil penghitungan kadar kuersetin pada masing-masing sampel:

  Kadar kuersetin Sedangkan konsentrasi kuersetin pada propolis ekstrak air didapatkan hasil sebagai berikut:

Tabel 4.4. Konsentrasi Kuersetin pada Propolis Ekstrak Air

  Absorbansi Konsentrasi (µ g/mL) 0,072 1,03 0,080 1,16 0,068 0,98 0,071 1,02 0,071 1,03

  Data-data tersebut dianalisis dengan uji t tidak berpasangan menggunakan program SPSS 17.0 for windows untuk mengetahui apakah perbedaan kadar kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air bermakna atau tidak.

  Syarat-syarat uji t tidak berpasangan harus dipenuhi terlebih dahulu sebelum menggunakan uji t tidak berpasangan. Syarat yang pertama adalah data harus terdistribusi normal. Uji normalitas yang digunakan pada penelitian ini adalah uji Saphiro-wilk karena jumlah sampel kurang dari 50.

  Hasil uji normalitas Saphiro-wilk didapatkan konsentrasi kuersetin pada Propolis Ekstrak Etanol mempunyai nilai p=0.499 dan pada Propolis Ekstrak Air p=0,88. Dari hasil tersebut, karena masing-masing nilai p>0.05, maka dapat disimpulkan bahwa data terdistribusi normal. Syarat kedua adalah varian data, namun varian data bukan merupakan syarat mutlak sehingga varian data boleh sama dan boleh tidak sama. Kedua syarat uji t tidak berpasangan telah terpenuhi sehingga uji t tidak berpasangan dapat dilakukan.

  Angka signifikansi yang diperoleh dari analisis dengan uji t tidak berpasangan adalah <0,05 dengan perbedaan rerata sebesar 9,004. Nilai IK 95% adalah antara 8,339 sampai 9,669. Karena nilai p<5%, maka hasil penelitian ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan antara Propolis Ekstrak Etanol dan Propolis Ekstrak Air.

BAB V PEMBAHASAN Prosedur ekstraksi perlu dilakukan pada propolis mentah yang

  masih mengandung resin tanaman, lem lebah, dan marterial yang tidak larut untuk mendapatkan komponen bioaktif di dalamnya (Alexandra et al., 2011). Kualitas ekstrak dipengaruhi oleh berbagai hal di antaranya bahan yang diekstrak, pelarut yang digunakan dan prosedur ekstraksi.

  Kuantitas ekstraksi dipengaruhi oleh tipe ektraksi, waktu ektraksi, temperatur, pelarut alami, konsentrasi pelarut, serta polaritas. Selama proses ekstraksi, pelarut akan berdifusi ke dalam material padat dan melarutkan komponen yang sama polaritasnya (Parshant et al., 2011).