PERBEDAAN KADAR KUERSETIN PADA PROPOLIS DI PASARAN WILAYAH SURAKARTA SKRIPSI UntukMemenuhiPersyaratan MemperolehGelarSarjanaKedokteran
PERBEDAAN KADAR KUERSETIN PADA PROPOLIS DI PASARAN WILAYAH SURAKARTA SKRIPSI UntukMemenuhiPersyaratan MemperolehGelarSarjanaKedokteran RizkyAmalia P G.0009191 FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET Surakarta 2012
PENGESAHAN SKRIPSI
Skripsidenganjudul :Perbedaan Kadar KuersetinpadaPropolis di Pasaran
Wilayah Surakarta
Rizky Amalia P, NIM: G.0009191, Tahun: 2012 Telah diuji dan sudah disahkan dihadapan Dewan Penguji Skripsi
Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta Pada hari Kamis, tanggal 26 Juli 2012
Pembimbing Utama
Nama :Diding Heri Prasetyo, dr., M.Si NIP : 19680429 199903 1 001 (.....................................)
Pembimbing Pendamping
Nama : Sri Hartati H, Dra., Apt., S.U NIP : 19490709 197903 2 001 (.....................................)
Penguji Utama
Nama : R.P. Andri Putranto, dr., M.Si NIP : 19630525 199603 1 001 (.....................................)
Penguji Pendamping
Nama : Sarsono, Drs., M.Si NIP : 19581127 198601 1 001 (.....................................)
Surakarta, Ketua Tim Skripsi Dekan FK UNS
Muthmainah,dr.,M.Kes Prof. Dr. Zainal Arifin Adnan,dr.,Sp.PD-KR-FINASIM
NIP. 19660702 199802 2 001 NIP. 19510601 197903 1 002 ii
PERNYATAAN
Dengan ini menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi dan sepanjang pengetahuan penulis juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 26Juli 2012
RizkyAmalia P
NIM. G.0009191 iii
ABSTRAK RizkyAmalia P, G.0009191,2012. Perbedaan Kadar KuersetinpadaPropolis di
Pasaran Wilayah Surakarta.Skripsi.FakultasKedokteran, UniversitasSebelasMaret, Surakarta.
LatarBelakang:
Kuersetinadalahsalahsatuzataktifpadapropolis yangmemilikibanyakmanfaatbagikesehatanmanusiasebagaiantioksidan, antikanker, antialergi, kardioprotektor, gastroprotektor, menurunkantekanandarah, sertameningkatkanimunitastubuh. Kandungankuersetinpadapropolisdipengaruhiolehfaktorletakgeografis, perbedaanmusim, iklim, jenistumbuhan, jenislebah, danjenispelarut.Penelitianinibertujuanuntukmengetahuiperbedaankadarkuersetinpa dapropolis di pasaranwilayah Surakarta.
MetodePenelitian:Penelitianinimenggunakanmetodeobservasionalanalitik.
Sampelberupapropolis yang dijual di pasaranwilayah Surakarta.Pengambilansampeldilakukandengancarapurposive samplingsebanyak 6 merekpropolis yang dibagimenjadi 6 kelompokyakni P1, P2, P3, P4, P5, dan P6.
Masing-masingkelompokdilakukanpengukuransebanyaklima kali.Penentuankadarkuersetinpadapropolisdenganmenggunakan UV-Vis spektrofotometermetodePrussian Blue . Data kadarkuersetin yang diperolehdianalisisdenganujistatistikone way ANOVAmenggunakan program komputer SPSS 17for windows.
Hasil Penelitian:Kadar kuersetin rata-rata sampelpropolisdiperolehhasilsampel
P1=9,4440±0,06465 µg/mL, P2=4,4760±0,08591 µg/mL, P3=10,2700±0,04000 µg/mL, P4=7,4120±0,06648 µg/mL, P5=8,6780±0,03347 µg/mL, P6=8,4960±0,10877 µg/mL dengan p<0,001.
SimpulanPenelitian:Terdapatperbedaankadarkuersetinpadapropolis di pasaranwilayah Surakarta. Kata Kunci: Propolis, kadarkuersetin, UV-Vis spektrofotometer, Prussian Blue
iv
ABSTRACT RizkyAmalia P, G.0009191,2012. The DifferencesofQuercetinLevels of
Propolisin the MarketArea ofSurakarta. Mini Thesis, Faculty of Medicine, SebelasMaret University, Surakarta.
Background:Quercetinis one ofthe activesubstancesinpropoliswhichhas
manybenefitsfor human healthas antioxidant, anticancer, antiallergy, cardioprotector, gastroprotector, loweringbloodpressure, andincreasethe bodyimmunity. Quercetincontentinpropolisis influencedbygeographicalfactors, differences inthe season, climate, plants,bees, and thetype ofsolvent. This studyaims to determinedifferences of quercetinlevels ofpropolisin the marketarea ofSurakarta.
Methods:This studyusesobservationalanalyticmethods. Samplesofpropoliswere
soldin the marketarea ofSurakarta. Sampling wasdone bypurposivesamplingas many assixbrands ofpropoliswhichis dividedinto 6groups:P1, P2, P3, P4, P5, andP6. Each groupwas measuredfive times.Determination ofquercetininpropolisby usingUV-Visspectrophotometer method ofPrussianBlue. Datawere analyzed forquercetinlevels withone-wayANOVAstatistical testusingthe computerprogramSPSS17forwindows.
Results:Averageofquercetin levels of
propolissamplesobtainedresultsP1=9,4440±0,06465 µg/mL, P2=4,4760±0,08591 µg/mL, P3=10,2700±0,04000 µg/mL, P4=7,4120±0,06648 µg/mL, P5=8,6780±0,03347 µg/mL, P6=8,4960±0,10877 µg/mL with p<0,001.
Conclusion:There aredifferences of quercetin levels ofpropolisin the marketarea ofSurakarta. Keywords: Propolis, quercetinlevels, UV-Vis spectrophotometer, Prussian Blue
v
PRAKATA
Alhamdulillah, segala puji syukur bagi Allah Subhanahu wa ta’ala yang telah memberikan taufik, hidayah, dan kekuatan serta kesabaran sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan laporan penelitian dengan judul “Perbedaan Kadar KuersetinpadaPropolis di Pasaran Wilayah Surakarta”.
Skripsiinidisusunsebagai salah satu syarat kelulusan tingkat sarjana di Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. Kendala dalam penyusunan skripsi ini dapat teratasi atas pertolongan Allah SWT melalui bimbingan dan dukungan banyak pihak. Untuk itu, perkenankan penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Prof. Dr. Zainal Arifin Adnan, dr, Sp.PD-KR-FINASIM, selakuDekanFakultasKedokteranUniversitasSebelasMaret Surakarta.
2. Muthmainah, dr., M.Kes, selakuKetuatimskripsibeserta Tim SkripsiFakultasKedokteranUniversitasSebelasMaret Surakarta.
3. Diding Heri Prasetyo, dr., M.Si, selakuPembimbingUtama yang telahbanyakmeluangkanwaktuuntukmemberikanbimbingandannasihat.
4. Sri Hartati, Dra., Apt., S.U, selakuPembimbingPendamping yang telahbanyakmeluangkanwaktuuntukmemberikanbimbingandannasihat.
5. R.P. Andri Putranto, dr., M.Si, selakuPengujiUtama yang telahmemberikanbimbingandannasihat.
6. Sarsono, Drs., M.Si, selakuPengujiPendamping yang telahmemberikanbimbingandannasihat.
7. Bapak, Ibu, adik serta seluruh keluarga yang telah memberi dukungan moral, material, serta senantiasa mendoakan untuk terselesaikannya skripsi ini.
8. Semua pihak yang telah membantu terselesaikannya skripsi ini, yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.
Meskipun tulisan ini masih belum sempurna, penulis berharap skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca. Saran, pendapat, koreksi, dan tanggapan dari semua pihak sangat diharapkan.
Surakarta, 26 Juli 2012 Penulis vi
DAFTAR ISI
PRAKATA...................................................................................................... vi DAFTAR ISI ................................................................................................... vii DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... ix DAFTAR TABEL ........................................................................................... x DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xi
BAB I PENDAHULUAN .............................................................................. 1 A. Latar Belakang Masalah .................................................................. 1 B. Rumusan Masalah .......................................................................... 3 C. Tujuan Penelitian ........................................................................... 3 D. Manfaat Penelitian ......................................................................... 3 BAB II LANDASAN TEORI .......................................................................... 5 A. Tinjauan Pustaka ............................................................................. 5
1. Propolis ....................................................................................... 5
2. Flavonoid ..................................................................................... 12
3.Kuersetin ...................................................................................... 13
B. Kerangka Pemikiran ......................................................................... 18
C. Hipotesis ......................................................................................... 18
BAB III METODE PENELITIAN ................................................................... 19 A. Jenis Penelitian .............................................................................. 19 B. Lokasi Penelitian ............................................................................ 19 C. Subjek Penelitian ............................................................................ 19 vii
D. RancanganPenelitian ....................................................................... 20
E. IdentifikasiVariabel Penelitian ........................................................ 20
F. Definisi Operasional VariabelPenelitian .......................................... 21
G. AlatdanBahan ................................................................................. 21
H. Cara Kerja ...................................................................................... 22
I. Teknik Analisis Data....................................................................... 23
BAB IV HASIL PENELITIAN ........................................................................ 24 A. PenentuanStandarKuersetindanKurvaKalibrasiKuersetin Standar ........................................................................................... 24 B. Penentuan Kadar KuersetinpadaSampelPropolis di Pasaran Wilayah Surakarta .......................................................................... 26 C. HasilUjiNormalitas Data ................................................................. 27 D. HasilUjiVarians Data ...................................................................... 28 E. HasilANOVA ................................................................................ 28 BAB V PEMBAHASAN ................................................................................ 30 BAB VI SIMPULAN DAN SARAN ............................................................... 33 A. Simpulan ........................................................................................ 33 B. Saran .............................................................................................. 33 DAFTAR PUSTAKA........................................................................................... 34 LAMPIRAN viii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Struktur Kimia Kuersetin ............................................................. 14 Gambar 2.2SkemaKerangkaPemikiran ............................................................ 18Gambar 3.1SkemaRancanganPenelitian .......................................................... 20
Gambar 4.1 Kurva Kalibrasi Kuersetin Standar .............................................. 25ix
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1 Pengukuran Absorbansi Larutan Standar Kuersetin pada UV-VisSpektrofotometer.............................................................................. 25
Tabel 4.2 Kadar Kuersetin Rata-rata PadaSampelPropolis di Pasaran WilayahSurakarta ......................................................................................... 27
Tabel 4.3HasilUjiNormalitas Data ................................................................... 27 Tabel 4.4HasilUjiVarians Data (Homogeneity of Variance Test) ....................... 28 Tabel 4.4HasilANOVA ................................................................................... 28
x
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. HasilAnalisis Data Penelitian Lampiran 2. FotoKegiatanPenelitian
xi
BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Masalah Lebah merupakan serangga yang memiliki banyak manfaat di bidang
kesehatan. Produk alam yang dihasilkan oleh lebah seperti madu, bee pollen, dan royal jeli. Setiap produk lebah tersebut mempunyai fungsi dan manfaat yang berbeda bagi kesehatan manusia. Selain itu, lebah juga menghasilkan produk lain yaitu propolis (Wati, 2009).
Propolis merupakan resin lengket yang dikumpulkan oleh lebah pekerja dari kuncup, kulit kayu, dan dari bagian tumbuhan yang lain. Resin yang diperoleh dari bermacam-macam tumbuhan kemudian dicampur dan diproses dengan air liur dan enzim lebah (Riyanti et al., 2008). Propolis sering disebut dengan bee glue atau lem lebah (Osman dan Taha, 2008). Propolis digunakan sebagai pertahanan ataupun bahan pengisi retakan pada struktur sarang lebah (Suseno, 2009).
Propolis memiliki banyak manfaat terutama di bidang kesehatan yaitu: 1) bersifat antibakteri baik terhadap bakteri gram positif maupun gram negatif; 2) bersifat antiinflamasi dan analgesik; 3) memiliki aktivitas antijamur, terutama terhadap spesies dermatofita dan kandida; 4) meningkatkan imunitas tubuh; 5) bersifat antioksidan karena mampu menangkap radikal bebas (Farre et al., 2004; Lotfy, 2006).
1 Menurut Sabir (2005), komposisi dan kandungan kimia propolis sangat bervariasi dan erat hubungannya dengan jenis dan umur tumbuhan dimana propolis tersebut berasal. Propolis pada umumnya terdiri dari campuran resin, lilin, minyak esensial, pollen, serta senyawa organik dan mineral (Ramos dan Miranda, 2007). Kandungan aktif propolis dipengaruhi oleh letak geografis dan sumber tumbuhan (Kumazawa et al., 2004).
Menurut Bankova (2005) kandungan kimia pada propolis tergantung dari iklim daerahnya. Metode ekstraksi propolis juga dapat mempengaruhi aktivitas biologis dan kandungan kimia pada propolis (Coneac et al., 2008). Kandungan kimia yang penting pada propolis adalah flavonoid (Khismatullina, 2005). Fungsi kebanyakan flavonoid dalam tubuh manusia adalah sebagai antioksidan yang dapat menghilangkan efek perusakan oksigen dalam tubuh manusia (Sunarni et al., 2007). Salah satu senyawa flavonoid pada propolis yang telah banyak diteliti tentang manfaat dan kandungannya adalah kuersetin (Chang et al., 2002).
Kuersetin adalah salah satu zat aktif kelas flavonoid yang termasuk senyawa kelompok flavonol (Schor, 2010). Kuersetin memiliki banyak manfaat bagi kesehatan manusia. Kuersetin berfungsi sebagai antioksidan, antikanker, antialergi, kardioprotektor, gastroprotektor, menurunkan tekanan darah, serta dapat meningkatkan imunitas tubuh (Kelly, 2011).
Semakin banyak penelitian mengenai manfaat propolis, semakin banyak pula propolis yang dijual di pasaran dari berbagai wilayah dengan berbagai merek. Akan tetapi tidak semua merek propolis yang dijual memiliki komposisi dan kandungan kimia yang sama dikarenakan banyaknya faktor yang dapat mempengaruhi hal tersebut, termasuk propolis yang beredar di pasaran wilayah Surakarta. Propolis yang beredar di pasaran wilayah Surakarta berasal dari Indonesia dan luar negeri. Oleh sebab itu kandungan kimia antar propolis juga berbeda-beda termasuk kandungan kuersetinnya.
Berdasarkan uraian di atas perlu kiranya dilakukan pengamatan tentang kandungan kuersetin pada propolis yang dijual di pasaran khususnya wilayah Surakarta.
B. Rumusan Masalah
Dengan memperhatikan latar belakang di atas, dapat dirumuskan masalah penelitian sebagai berikut: Adakah perbedaan kadar kuersetin pada propolis di pasaran wilayah Surakarta? C.
Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui perbedaan kadar kuersetin pada propolis di pasaran wilayah Surakarta.
D. Manfaat Penelitian 1. Manfaat Teoritis
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah terhadap perkembangan ilmu pengetahuan, khususnya tentang kandungan kuersetin pada propolis di pasaran wilayah Surakarta.
2. Manfaat Aplikatif
Penelitian ini diharapkan dapat menjadi dasar penelitian lebih lanjut mengenai kandungan kuersetin pada propolis di pasaran wilayah Surakarta.
BAB II LANDASAN TEORI A. Tinjauan Pustaka 1. Propolis
a. Pengertian Propolis adalah produk lebah madu yang berupa campuran kompleks antara lilin lebah, gula, dan getah pepohonan. Getah ini kemudian dicampur dengan air liur dan lilin lebah sehingga menghasilkan zat yang kental yang disebut propolis atau disebut juga lem tawon (Susilo et al., 2009). Menurut Riyanti et al. (2008), propolis merupakan resin lengket yang berasal dari batang pohon atau kulit kayu, dikumpulkan dan diproses dengan dengan air liur dan enzim yang disekresikan dari kelenjar mandibula lebah.
Propolis berasal dari bahasa Yunani yaitu pro dan polis. Pro memiliki arti pertahanan dan polis memiliki arti kota. Secara umum arti kata propolis adalah pertahanan kota. Istilah ini menggambarkan propolis sebagai pelindung sarang lebah dari hal-hal di luar sarang, agar sarang dan isinya yang mengandung koloni larva lebah madu terlindungi dari bahaya (Riyanti et al., 2008). Propolis digunakan untuk melapisi sarang lebah, mengisi retakan dan celahnya, memperkuat dan menyambung sel-sel dalam sarang dan melindunginya dari rembesan air (Susilo et al., 2009). Selain itu,
5 propolis juga berfungsi membuat sarang tetap steril dengan tujuan agar telur dapat menetas dan berkembang dengan sempurna (Riyanti et al., 2008).
b. Komposisi dan Kandungan Kimia Komposisi dan kandungan kimia propolis sangat bervariasi dan erat hubungannya dengan jenis dan umur tumbuhan dimana propolis tersebut berasal (Sabir, 2005). Selain itu, variasi kandungan kimia propolis juga ditentukan oleh tempat dan waktu propolis tersebut dikumpulkan (Syamsudin et al., 2009). Menurut Bankova et al. (2000), komposisi dan kandungan kimia propolis sangat beragam sesuai dengan sumber pohon, jenis lebah, musim, dan daerah geografis propolis tersebut berasal. Umumnya propolis terdiri dari campuran resin dan balsem 50%, lilin 30%, minyak esensial 10%, pollen 5%, serta senyawa organik dan mineral 5% (Ramos dan Miranda, 2007). Penelitian terhadap propolis yang berasal dari 15 daerah yang berbeda di Rusia menunjukkan hasil yang hampir sama, yaitu resin 50-55%, lilin 30%, minyak esensial 8-10%, dan bahan padat 5% (Sabir, 2005).
Propolis berwarna kuning sampai coklat tua, bahkan ada yang transparan. Perbedaan warna tersebut dipengaruhi oleh kandungan flavonoidnya. Pada suhu di bawah 15°C, propolis keras dan rapuh, tetapi kembali lengket pada suhu 25-45°C. Propolis umumnya meleleh pada suhu 60-69°C dan beberapa sampel mempunyai titik leleh di atas 100°C (Woo, 2004).
Kandungan kimia propolis yang penting dalam bidang farmakologi adalah flavonoid, senyawa fenolat, serta senyawa aromatik. Senyawa flavonoid yang ada pada propolis di antaranya adalah flavonol (galangin, kaemferol, kuersetin), flavanon (naringin, naringenin, hesperetin), isoflavon (genistein), serta flavon (chrysin, apigenin, luteolin) (Chang et al., 2002). Beberapa senyawa fenolat yang ada di antaranya adalah hidroksisinamat, asam sinamat, dan asam ferulat. Berbeda dengan komposisi kimianya, nilai nutrisi yang dikandung propolis sangat sedikit, yaitu berasal dari protein, asam amino, mineral, gula, dan vitamin dalam jumlah kecil seperti vitamin A, B1, B2, B6, C, dan E (Khismatullina, 2005).
Menurut Bankova (2005), kandungan kimia pada propolis dari berbagai negara tergantung dari iklim daerah asalnya.
Komponen pada daerah beriklim sedang seperti di Eropa, Amerika Utara dan daerah non tropis di Asia, Amerika Selatan, dan di New Zealand, kandungan utamanya adalah flavonoid aglikon, asam aromatik dan esternya. Komponen pada daerah beriklim tropis dan subtropis seperti Amerika Selatan banyak mengandung flavonoid dan komponen terkait seperti flavon, flavonol, chalcone, isoflavonoid, dan neoflavonoid.
Kandungan aktif propolis juga dipengaruhi oleh letak geografis dan sumber tumbuhan (Kumazawa et al., 2004). Berdasarkan penelitian yang dilakukan Sulaiman et al. (2011), didapatkan hasil bahwa terdapat perbedaan sifat fisik dan kandungan kimia pada propolis yang diambil dari lima daerah yang berbeda secara geografis di Irak. Keragaman sifat tersebut diakibatkan oleh perbedaan perubahan musim, flora lokal, dan vegetasi tempat tumbuhnya tanaman.
Valencia et al. (2012) melakukan penelitian tentang pengaruh dari musim terhadap komposisi kimia dan aktivitas biologis propolis di Sonoran Meksiko. Bahan propolis mentah dikumpulkan pada setiap musim selama setahun yaitu pada musim semi, musim panas, musim gugur, dan musim dingin. Dari penelitian tersebut didapatkan hasil bahwa perubahan musim mengakibatkan perbedaan jumlah propolis yang dapat dipanen dan sifat antikanker pada propolis. Musim panas menghasilkan jumlah propolis terbanyak dan musim dingin menghasilkan jumlah propolis yang paling sedikit. Semua sampel propolis Sonoran memiliki sifat menghambat pertumbuhan sel kanker, namun sampel propolis pada musim semi memiliki aktivitas menghambat pertumbuhan sel kanker yang tertinggi. Hal tersebut dikarenakan sampel propolis musim semi memiliki sifat antiproliferatif tertinggi yang selanjutnya diikuti sampel musim dingin, musim panas, dan yang paling rendah adalah sampel propolis pada musim gugur.
Menurut Fatoni et al. (2008) perbedaan jenis lebah juga mempengaruhi jumlah propolis yang dihasilkan. Lebah madu Apis
mellifera menghasilkan propolis lebih sedikit daripada lebah madu Trigona sp .
c. Ekstraksi Propolis Menurut Apriyanti (2010), umumnya propolis diolah menjadi ekstrak propolis terlebih dahulu sebelum diolah lebih lanjut untuk dipasarkan. Pietta dalam Susilo (2009) menyatakan bahwa propolis mentah tidak dapat digunakan sebagai bahan baku dan harus dimurnikan terlebih dahulu melalui proses ekstraksi dengan zat pelarut. Hal ini disebabkan karena propolis mentah masih mengandung berbagai bahan kontaminan seperti kayu, serbuk sari, bahkan lebah yang sudah mati (Sforcin dan Bankova, 2011).
Metode ekstraksi propolis dapat mempengaruhi aktivitas biologis flavonoid propolis (Coneac et al., 2008). Metode ekstraksi yang umumnya digunakan saat ini adalah ekstrak padat, yaitu ekstraksi dengan menggunakan etanol, metanol, dan air (Nagai et al., 2002). Sforcin dan Bankova (2011) menyatakan bahwa pelarut yang berbeda akan melarutkan komponen yang berbeda serta mempengaruhi aktivitasnya. Meskipun propolis ekstrak etanol saat ini lebih umum digunakan, namun propolis ekstrak air diketahui memberikan efek imunologis pada hewan maupun manusia sehingga penelitian mengenai propolis ekstrak air semakin banyak dilakukan (Nagai et al., 2002).
d. Sediaan Sediaan propolis di pasaran dapat berupa propolis mentah berbentuk bongkahan, bubuk, kapsul, dan tablet. Propolis juga tersedia dalam bentuk cair dengan menambahkan pelarut seperti alkohol dan air (Apriyanti, 2010).
e. Khasiat dan Penggunaan Propolis memiliki banyak manfaat terutama di bidang kesehatan yaitu: 1) bersifat antibakteri baik terhadap bakteri gram positif maupun gram negatif; 2) bersifat antiinflamasi dan analgesik; 3) memiliki aktivitas antijamur, terutama terhadap spesies dermatofita dan kandida; 4) meningkatkan imunitas tubuh; 5) bersifat antioksidan karena mampu menangkap radikal bebas (Farre et al., 2004; Lotfy, 2006). Propolis juga dapat menurunkan tekanan darah, melindungi jaringan hati dan ginjal, mencegah terjadinya ulkus lambung, dan mempertahankan kadar glukosa darah (Elkhayat et al., 2009). Penggunaan propolis di bidang kedokteran gigi baru dilaporkan beberapa tahun terakhir. Hasilnya menunjukkan bahwa propolis dapat digunakan sebagai salah satu bahan pengobatan alternatif yakni: 1) perawatan penyakit gingivitis oleh karena mampu mencegah pembentukan plak; 2) mengobati ulserasi pada rongga mulut; 3) mencegah terjadinya karies gigi (Sabir, 2005).
Propolis menunjukkan aktivitas antimikroba, baik secara langsung pada berbagai mikroorganisme maupun secara tidak langsung dengan memacu sistem imun tubuh. Propolis memacu sistem imun dengan mengaktivasi makrofag dan meningkatkan aktivitas micobicidal dari makrofag dan meningkatkan pembentukan antibodi serta menunjukkan efek sinergis dengan obat-obatan antimikroba (Sforcin, 2007).
Propolis disebut antibiotik alami karena kemampuannya dalam menekan proses infeksi oleh bakteri. Kelebihan propolis sebagai antibiotik alami dibandingkan dengan bahan sintetik adalah lebih aman dan mempunyai efek samping yang relatif kecil. Selain itu, propolis sebagai antibiotik mempunyai selektivitas yang tinggi. Propolis hanya membunuh bakteri penyebab penyakit, sedangkan bakteri yang berguna seperti flora usus tidak terganggu. Propolis juga mampu menghambat pertumbuhan beberapa bakteri seperti Bacillus
subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Pseudomonas aeroginosa (Anggraini, 2006).
2. Flavonoid
a. Pengertian Flavonoid adalah senyawa polifenol yang banyak terdapat di alam. Flavonoid merupakan golongan senyawa bahan alam dari senyawa fenolik yang merupakan pigmen tumbuhan. Flavonoid terdapat pada kebanyakan tumbuhan, biji, kulit buah atau kulit kayu, dan bunga. Sejumlah besar tanaman obat juga mengandung flavonoid. Flavonoid digolongkan berdasarkan struktur kimianya menjadi flavonol, flavon, flavanon, isoflavon, antosianidin, dan flavanol (Ross dan Kasum, 2002). Fungsi kebanyakan flavonoid dalam tubuh manusia adalah sebagai antioksidan yang dapat menghilangkan efek perusakan oksigen dalam tubuh manusia (Sunarni et al., 2007). Manfaat flavonoid lainnya adalah sebagai antikanker, antitumor, dan kardioprotektor (Atmani et al., 2009).
b. Bioavailabilitas Flavonoid Flavonoid yang berikatan dengan molekul gula dikenal sebagai flavonoid glikosida, sementara flavonoid yang tidak berikatan dengan molekul gula disebut flavonoid aglikon. Flavonoid pada tanaman dan makanan berada dalam bentuk glikosida. Bakteri usus biasanya memainkan peran penting dalam metabolisme dan penyerapan flavonoid. Kemampuan seseorang untuk memetabolisme flavonoid tertentu dapat bervariasi dan tergantung pada lingkungan dari mikroflora kolon (Ross dan Kasum, 2002). c. Analisis Kandungan Flavonoid Salah satu cara untuk menganalisis kandungan flavonoid adalah dengan menggunakan UV spektrofotometri (Lin et al., 2000).
Terdapat beberapa metode UV spektrofotometri yang dapat digunakan yaitu metode Folin-Ciocalteau, Prussian Blue, dan
o-Phenanthroline . Metode Folin-Ciocalteau merupakan metode yang
efektif dan cepat untuk propolis dengan konsentrasi komponen fenolik yang tinggi, Prussian Blue merupakan metode yang cepat dan sensitif untuk determinasi spektrofotometri dari total fenol, sementara metode o-Phenanthroline membutuhkan prosedur yang lebih lama supaya dapat memberikan hasil yang baik. Metode yang direkomendasikan untuk mengukur kadar kuersetin adalah metode
Prussian Blue dan o-Phenanthroline, keduanya memberikan hasil
yang hampir sama dan tidak terdapat perbedaan yang terlalu signifikan (Gonzalez et al., 2003).
3. Kuersetin
a. Pengertian Kuersetin adalah salah satu zat aktif kelas flavonoid yang termasuk senyawa kelompok flavonol (Schor, 2010). Flavonol banyak terdapat pada sayuran dan buah-buahan. Selain kuersetin, jenis flavonol lain yang terdapat pada propolis adalah kaemferol dan galangin. Variasi flavonol disebabkan oleh perbedaan lokasi dari gugus phenolic-OH dan ikatannya dengan gula. Semua flavonol termasuk kuersetin mempunyai ikatan 3-hydroxyflavone. Penentuan flavonol termasuk dalam jenis kuersetin, kaempferol atau galangin tergantung pada lokasi gugus phenolic-OH (Kelly, 2011).
Gambar 2.1 Struktur Kimia Kuersetin (Mao et al., 2009)
International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC)
menetapkan nomenklatur dari kuersetin adalah 3, 3’, 4’, 5, 7-
pentahydroxyflavone . Kuersetin mempunyai gugus OH yang terikat
pada posisi 3, 5, 7, 3’, dan 4’. Perbedaan kuersetin dan kaemferol adalah kaemferol tidak mempunyai gugus OH pada posisi 3’.
Sedangkan perbedaan kuersetin dan galangin adalah galangin tidak mempunyai gugus OH pada posisi 3’ dan 4’ (Kelly, 2011).
Terdapat dua macam kuersetin yaitu kuersetin aglikon dan kuersetin glikosida. Kuersetin aglikon adalah kuersetin yang kurang berikatan dengan gula dan berwarna kuning limau. Kuersetin aglikon seluruhnya tidak larut dalam air dingin, dan kurang larut di air panas, tetapi larut dalam alkohol. Kuersetin glikosida terbentuk dengan berikatan dengan gugus glikosil (gula seperti glukosa, rhamnosa, rutinosa) sebagai pengganti salah satu gugus OH (umumnya pada posisi 3). Ikatan dengan gugus glikosil dapat mengubah kelarutan, penyerapan dan efek In Vivo dari kuersetin. Adanya gugus glikosil menyebabkan peningkatan kelarutan terhadap air dibandingkan dengan kuersetin aglikon (Hollman dalam Kelly, 2011).
Kuersetin selain ditemukan pada propolis juga banyak ditemukan pada berbagai macam buah-buahan dan sayuran seperti apel, beri, anggur, bawang, tomat, teh, dan kacang. Kebanyakan tipe kuersetin pada makanan adalah kuersetin glikosida (Kelly, 2011).
b. Bioavailabilitas Faktor yang paling berpengaruh terhadap absorpsi kuersetin adalah ikatan alami kuersetin dengan gula, kelarutan oleh etanol, lemak, dan emulsi. Kuersetin glikosida ditemukan lebih banyak pada makanan dibandingkan dengan kuersetin aglikon. Saat kuersetin glikosida dimakan, gugus glikosil dapat dilepaskan selama dikunyah, dicerna, dan diabsorpsi. Enzim di dalam mulut dan usus dapat menghidrolisis kuersetin glikosida menjadi kuersetin aglikon. Bukti lain juga mendukung kontribusi mulut dan bakteri usus dalam hidrolisis ini (Scholz dan Williamson, 2007). Menurut Meng (2004), bentuk aglikon kuersetin lebih mudah diabsorpsi daripada bentuk glikosida. Daya absorpsi kuersetin glikosida berbeda dikarenakan tipe ikatannya dengan gula. c. Kegunaan Kuersetin memiliki banyak manfaat bagi kesehatan manusia, antara lain:
1) Antioksidan Bukti penelitian pada hewan menunjukkan bahwa kuersetin berpotensi sebagai antioksidan (Wiczkowski et al.,
2003). Antioksidan berfungsi untuk melindungi otak, jantung dan berbagai jaringan dalam tubuh untuk mencegah iskemi, penumpukan toksin serta berbagai faktor yang dapat menginduksi stres oksidatif (Kelly, 2011; Abdelmoety et al., 2010). 2) Antialergi
Kuersetin dapat menghambat pelepasan histamin dari sel mast dan basofil sehingga berfungsi sebagai antialergi khususnya pada alergi lewat jalan udara (Joskova et al., 2011). 3) Antikanker
Kuersetin juga memiliki beberapa mekanisme antikanker seperti sebagai antioksidan, antiproliferatif, proapoptosis, efek signaling sel, dan menekan faktor pertumbuhan (Aalinkeel et al., 2008).
4) Kardioprotektor Penambahan kuersetin mengurangi peningkatan hipertrofi jantung pada tikus yang diinduksi peningkatan tekanan darah
(Han et al., 2009). Namun, suplementasi kuersetin pada makanan tidak menunda onset atau mengurangi besarnya komplikasi kardiovaskular yang berkembang pada tikus hipertensi (Carlstrom et al., 2007). Beberapa studi epidemiologi telah melaporkan hubungan antara asupan kuersetin dan penyakit jantung koroner. Menurut Kelly (2011), risiko kematian karena penyakit jantung dapat diturunkan secara signifikan dengan asupan makanan yang mengandung kuersetin dengan jumlah yang cukup tinggi. 5) Gastroprotektor
Hasil studi terhadap hewan didapatkan hasil efek protektif kuersetin dalam melawan etanol yang dapat menginduksi ulserasi lambung (Liu et al., 2008). Kuersetin juga dapat menghambat pertumbuhan Helicobacter pylori secara In Vitro (Shin et al., 2005). Pengobatan pada marmut yang terinfeksi H. pylori selama 15 hari dengan dosis 200 mg/kg kuersetin dapat menurunkan infeksi H. pylori pada mukosa lambung dan mengurangi respon inflamasi (Gonzales et al., 2008).
6) Antiinflamasi Secara In Vitro, kuersetin dapat menghambat produksi enzim cyclooxygenase (COX) yang merupakan enzim penyebab inflamasi (Kartasasmita et al., 2009).
7) Antivirus Penggunaan kuersetin bersama dengan acyclovir meningkatkan potensi dalam melawan Herpes Simplex Virus dan infeksi pseudorabies (Cushnie dan Lamb, 2005).
B. Kerangka Pemikiran
Propolis Jenis tumbuhan Jenis lebah Letak geografis Musim Pelarut propolis Iklim
Variasi kandungan propolis Variasi kandungan kimia
Variasi kandungan kuersetin Perbedaan kadar kuersetin
Gambar 2.2 Skema Kerangka PemikiranKeterangan : : mempengaruhi : menyebabkan C.
Hipotesis
Terdapat perbedaan kadar kuersetin pada propolis di pasaran wilayah Surakarta.
BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis Penelitian Penelitian ini menggunakan metode observasional analitik. B. Lokasi Penelitian Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. C. Subjek Penelitian
1. Populasi penelitian Propolis yang dijual di pasaran wilayah Surakarta.
2. Sampel penelitian Pengambilan sampel dilakukan dengan cara purposive sampling.
Purposive sampling merupakan metode pemilihan subjek atau sampel
berdasarkan atas ciri-ciri sifat tertentu yang berkaitan dengan karakteristik populasi (Taufiqurahman, 2008). Dalam penelitian ini didapatkan sampel sebanyak 6 merek propolis yang dijual di pasaran wilayah Surakarta yang berasal dari Indonesia dan luar negeri.
19
D. Rancangan Penelitian Rancangan penelitian yang digunakan adalah observasional analitik.
S1 Q1 S2 Q2 S3 Q3 N S A S4 Q4 S5 Q5 S6 Q6
Gambar 3.1 Skema Rancangan PenelitianKeterangan: N : Populasi propolis di Surakarta S: Sampel propolis sebanyak 6 sampel dibedakan menjadi S1, S2, S3, S4, S5, dan S6.
Q : Pengukuran kadar kuersetin pada masing-masing propolis menggunakan UV-Vis spektrofotometer dengan metode Prussian Blue, sehingga didapatkan hasil Q1, Q2, Q3, Q4, Q5, dan Q6. A : Analisis data.
E. Identifikasi Variabel Penelitian
1. Variabel bebas : propolis
2. Variabel terikat : kadar kuersetin
F. Definisi Operasional Variabel Penelitian
1. Propolis Propolis pada penelitian ini adalah propolis cair yang di jual di pasaran wilayah Surakarta dengan kemasan botol. Sampel propolis dipilih secara purposive sampling. Skala variabel adalah nominal.
2. Kadar Kuersetin Kadar kuersetin yang dimaksud dalam penelitian ini adalah kadar kuersetin yang terdapat dalam sampel propolis yang ditentukan dengan
UV-Vis spektrofotometer metode Prussian Blue. Kadar kuersetin ditentukan dari nilai absorbansi sampel propolis pada UV-Vis spektrofotometer kemudian dimasukkan ke dalam persamaan regresi linear yang diperoleh dari kurva kalibrasi kuersetin standar. Skala variabel adalah rasio.
G. Alat dan Bahan
1. Alat
a) labu takar 10 mL, 100 mL, 250 mL; b) erlenmeyer tutup 100 mL, 250 mL; c) gelas beker 250 mL; d) pipet tetes; e) pipet mikro 0-10, 10-100, 100-1000 µ L; f) botol timbang; g) satu set spektrofotometer; h) kertas saring; i) kain lap; j) sabun cuci; k) sikat tabung.
2. Bahan
- 3 -3
a) kuersetin (1.10 s.d 2,98.10 M); b) asam asetat; c) etanol 80%; d)
aquabidest ; e) HCl 0,1 M; f) K Fe(CN) 0,0008M/0,1M HCl; g) FeCl
3
6
3
0,1M/0,1M HCl; h) sampel propolis (propolis A, propolis B, propolis C, propolis D, propolis E).
H. Cara Kerja
1. Menentukan standar kuersetin (302,236) dengan membagi kuersetin standar menjadi enam kelompok ukuran yaitu: 0,00; 2,50; 5,00; 7,50; 10,00; 12,50 µg/mL.
2. Masing-masing kelompok ukuran kuersetin standar ditambahkan 400 µL K Fe(CN) 0,0008M/0,1M HCl dan 400 µL FeCl 0,1M/0,1M HCl lalu
3
6
3
diencerkan dengan etanol 80% menjadi 10 mL, setelah itu dikocok dan tunggu selama 7 menit kemudian diamati absorbansi warna pada UV- Vis spektrofotometer dengan panjang gelombang 700 nm.
3. Nilai absorbansi dicatat kemudian data yang didapat dibuat kurva kalibrasi kuersetin standar absorbansi dan konsentrasi, dimana sumbu x menunjukkan konsentrasi kuersetin standar dan sumbu y menunjukkan nilai absorbansi.
4. Membagi sampel propolis menjadi enam kelompok yaitu: propolis 1 (P1), propolis 2 (P2), propolis 3 (P3), propolis 4 (P4), propolis 5 (P5), dan propolis 6 (P6).
5. Masing-masing propolis diambil 10 µ L lalu diencerkan dengan etanol 80% menjadi 10 mL. Selanjutnya larutan diambil 100 µ L dan ditambahkan 400 µL K Fe(CN) 0,0008M/0,1M HCl dan 400 µL FeCl
3
6
3
0,1M/0,1M HCl setelah itu dikocok dan tunggu selama 7 menit kemudian diamati absorbansi warna pada UV-Vis spektrofotometer dengan panjang gelombang 700 nm.
6. Ulangi langkah ke 5 sebanyak lima kali untuk tiap sampel propolis.
7. Nilai rata-rata kadar kuersetin tiap sampel propolis kemudian dihitung dengan menggunakan persamaan regresi linear yang diperoleh dari kurva kalibrasi kuersetin standar.
8. Kadar kuersetin antara propolis 1 (P1), propolis 2 (P2), propolis 3 (P3), propolis 4 (P4), propolis 5 (P5), dan propolis 6 (P6) kemudian dibandingkan dengan menggunakan uji statistik.
I. Teknik Analisis Statistik
Untuk melakukan uji hipotesis, terlebih dahulu harus dilakukan uji normalitas data dengan menggunakan pengujian Shapiro-Wilk. Bila didapatkan distribusi dan varians data yang normal, maka data yang diperoleh dianalisis dengan uji statistik one way ANOVA. Uji ANOVA
(Analisis of Variant) digunakan untuk membandingkan mean lebih dari dua
kelompok. Jika data tidak terdistribusi secara normal dan varians tidak sama, maka dilakukan uji Kruskal-Wallis. Untuk memudahkan analisis data tersebut digunakan program komputer SPSS (Statistical Product and Service Solution ) 17.0 for windows.
BAB IV HASIL PENELITIAN A. Penentuan Standar Kuersetin dan Kurva Kalibrasi Kuersetin Standar Penentuan standar kuersetin dilakukan dengan menggunakan UV- Vis
spektrofotometer metode Prussian Blue. Metode Prussian Blue merupakan metode yang cepat dan sensitif untuk determinasi spektrofotometri dari total fenol, dan merupakan metode yang direkomendasikan untuk mengukur kadar kuersetin (Gonzalez et al., 2003). Pada penelitian ini, kuersetin standar dibagi menjadi enam kelompok ukuran yaitu: 0,00; 2,50; 5,00; 7,50; 10,00; 12,50 µg/mL. Selanjutnya masing-masing kelompok ukuran kuersetin standar ditambahkan reagen Prussian Blue yaitu 400 µL K Fe(CN)
3
6
0,0008M/0,1M HCl dan 400 µL FeCl 0,1M/0,1M HCl. Pada saat kuersetin
3
direaksikan dengan reagen Prussian Blue akan dihasilkan larutan berwarna biru. Semakin tinggi konsentrasi kuersetin yang digunakan, maka warna biru yang dihasilkan akan semakin pekat. Setelah itu campuran kuersetin dengan reagen Prussian Blue diamati absorbansinya dengan UV-Vis spektrofometer dengan menggunakan panjang gelombang 700 nm.
24
Tabel 4.1 Pengukuran Absorbansi Larutan Standar Kuersetin pada UV-VisSpektrofotometer Konsentrasi (µg/mL) Absorbansi (A)
0,00 0,000 2,50 0,049 5,00 0,107 7,50 0,155
10,00 0,237 12,50 0,294
Berdasarkan hasil pengukuran di atas, dapat dibuat kurva kalibrasi antara absorbansi dengan konsentrasi. Pembuatan kurva kalibrasi ini berguna untuk membantu menentukan kadar kuersetin pada sampel propolis melalui persamaan regresi dari kurva kalibrasi (Gambar 4.1). Dari gambar 4.1 dapat dilihat bahwa absorbansi berbanding lurus dengan konsentrasi yang mengikuti persamaan regresi linier. Dari pemeriksaan larutan standar kuersetin didapatkan kurva kalibrasi dengan persamaan regresi y = 0,023x - 0,008 dan harga koefisien korelasi (r) sebesar 0,993. Nilai r yang mendekati 1 membuktikan bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier. 0.35 0.3 y=0,023x-0,008
) 0.25 R²=0,993 (A
I S 0.2 N A 0.15 B R 0.1 O S 0.05 B A
- -0.05 2 4 6 8 10 12 14 KONSENTRASI (µg/mL)Gambar 4.1 Kurva Kalibrasi Kuersetin Standar
B. Penentuan Kadar Kuersetin pada Sampel Propolis di Pasaran Wilayah Surakarta
Konsentrasi kuersetin pada sampel propolis dapat ditentukan dengan mengukur nilai absorbansi masing-masing sampel propolis dengan menggunakan UV-Vis spektrofotometer, kemudian nilai absorbansi tersebut dimasukkan ke dalam persamaan regresi linear y = 0,023x - 0,008 yang diperoleh dari kurva kalibrasi kuersetin standar.
Penelitian ini menggunakan sampel propolis dari pasaran wilayah Surakarta sebanyak 6 macam sampel yakni propolis 1, propolis 2, propolis 3, propolis 4, propolis 5, dan propolis 6. Dari masing-masing sampel akan dilakukan percobaan sebanyak lima kali dengan tiap percobaan diambil sampel sebanyak 10 µL. Selanjutnya masing-masing sampel propolis ditambahkan reagen Prussian Blue yaitu 400 µL K Fe(CN) 0,0008M/0,1M
3
6 HCl dan 400 µL FeCl 0,1M/0,1M HCl. Pada saat sampel propolis
3
direaksikan dengan reagen Prussian Blue akan dihasilkan larutan berwarna biru. Semakin tinggi konsentrasi kuersetin pada propolis yang digunakan, maka warna biru yang dihasilkan akan semakin pekat. Setelah itu, campuran larutan diamati absorbansinya dengan UV-Vis spektrofometer dengan menggunakan panjang gelombang 700 nm. Langkah selanjutnya adalah menentukan kadar kuersetin yang terdapat pada sampel propolis dengan menggunakan persamaan regresi linier dari kurva kalibrasi kuersetin standar. Hasil perhitungan kadar kuersetin rata-rata disajikan dalam tabel 4.2. Setelah didapatkan kadar kuersetin pada masing-masing sampel propolis kemudian dilakukan uji statistik untuk menguji hipotesis.
Tabel 4.2 Kadar Kuersetin Rata-rata pada Sampel Propolis di PasaranWilayah Surakarta Sampel propolis Kadar kuersetin
Mean ± Sd (µg/mL) P1 P2 P3 P4 P5 P6
9,4440 ± 0,06465 4,4760 ± 0,08591
10,2700 ± 0,04000 7,4120 ± 0,06648 8,6780 ± 0,03347 8,4960 ± 0,10877
Sebelum melakukan uji hipotesis terlebih dahulu harus dilakukan uji normalitas data dengan menggunakan pengujian Shapiro-Wilk. Apabila didapatkan distribusi dan varians data yang normal, maka data yang diperoleh dianalisis dengan uji statistik one way ANOVA. Uji ANOVA
(Analisis of Variant) digunakan untuk membandingkan mean lebih dari dua
kelompok. Apabila data tidak terdistribusi secara normal dan varians tidak sama, maka dilakukan uji Kruskal-Wallis.
C. Hasil Uji Normalitas Data
Tabel 4.3 Hasil Uji Normalitas Data0.900 0.855 0.821 0.990 0.881 0.907
5 0.408 0.211 0.119 0.980 0.314 0.451
5
5
5
5
5
5 0.200 0.200 0.200 0.200 0.200 0.200