OPTIMASI FASE GERAK, LAJU ALIR DAN SUHU KOLOM UNTUK ANALISIS METFORMIN HCl DENGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)

  

OPTIMASI FASE GERAK, LAJU ALIR DAN SUHU KOLOM UNTUK

ANALISIS METFORMIN HCl DENGAN METODE KROMATOGRAFI

CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)

  

SKRIPSI

  Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)

  

Disusun oleh :

ANISA MIRRAH HAFIZHAT

1308010127

  

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

PURWOKERTO

2017

  OPTIMASI FASE GERAK, LAJU ALIR DAN SUHU KOLOM UNTUK ANALISIS METFORMIN HCl DENGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT) SKRIPSI

  Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)

  Disusun oleh : ANISA MIRRAH HAFIZHAT 1308010127 PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO PURWOKERTO 2017

  PERSEMBAHAN

  Atas anugerah terindah dari Allah SWT yang tidak ternilai hingga terciptalah sebuah karya sederhana yang ingin penulis persembahkan kepada : Kedua orangtua ku, Ibu Iin dan Ayah Tirtayana, yang telah memberikan dukungan, kasih sayang, sema ngat serta do’a yang selalu dipanjatkan untukku

  Adikku Mughni Nurul Huda dan Fitry Rahmawaty yang telah memberikan semangat dan keceriaan canda tawa serta do’a yang selalu dipanjatkan untukku

  Partner Seperjuangan KCKT Agnes P yang telah memberikan bantuan, dukungan, semangat, bimbingan serta arahan dari mulai awal penelitian hingga selesai, semoga kita sukses selalu

  Tim Praktikum Terheboh (Dian, Nindya, Zitta, Lupi, Amel, Ridwan) yang telah memberikan semangat, dukungan dan keceriaan canda tawa, semoga kita sukses selalu

  Daffa SQUAD (Rianty, Witar, Neno, Ani, Yanah, Atika, Aisyah, Ummah) yang telah membantu, memberikan semangat, dukungan, do’a serta keceriaan canda tawa, semoga kita sukses selalu

  Teman-teman Farmasi 2013 Universitas Muhammadiyah Purwokerto yang telah memberikan banyak arti, kenangan, keceriaan canda tawa dan pelajaran selama menimba ilmu, semoga kita semua sukses selalu

  MOTTO

  “Barangsiapa bertawakal kepada Allah, niscaya Allah akan memberikan mencukupkan (keperluan)nya, sesungguhnya Allah melaksanakan urusan (yang dikehendaki)-Nya.” (QS. Ath-Thalaq: 3).

  “Waktu itu bagaikan pedang, jika kamu tidak memanfaatkannya menggunakan untuk memotong, ia akan memotongmu (menggilasmu)” (H.R. Muslim)

  “Jangan mundur karena masalah sepele, karena semua masalah pasti ada jalannya dan Allah selalu bersama di dalam hati kita” (Anisa)

KATA PENGANTAR

  Bismillahirohmanirohim Alhamdulillahirobbil’alamin, segala puji bagi Allah SWT. Karena dengan petunjuk dan pertolonganNya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul optimasi fase gerak, laju alir dan suhu kolom untuk analisis metformin HCl dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) sebagai salah satu syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

  Penulis menyadari dalam penyusunan skripsi ini masih banyak kekurangan, oleh sebab itu kritik dan saran yang membangun penulis harapkan untuk perbaikan di masa yang akan datang. Penulis mengucapkan banyak terima kasih atas segala bantuan, bimbingan, serta kerjasama dengan berbagai pihak yang terkait dalam penyusunan skripsi ini, karena terselesaikannya skripsi ini tidak terlepas dari bantuan berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terimakasih kepada:

  1) Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H.,M.H., selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto

  2) Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi yang telah memimpin keseluruhan proses mengajar ditempat penulis menuntut ilmu.

  Selaku pembimbing satu yang dengan sabar dan perhatian membimbing penulis serta memberikan koreksi dan masukkan yang sangat berguna bagi kesempurnaan skripsi ini. 3) Dr. Pri Iswati Utami, M.Si., Apt selaku pembimbing dua yang dengan sabar dan perhatian membimbing penulis serta memberikan koreksi dan masukkan yang sangat berguna bagi kesempurnaan skripsi ini. 4) Dr. Asmiyenti Djaliasrin Djalil, M. Si dan Arif Budiman, MPH., Apt selaku penguji yang telah memberikan saran dan masukan yang sangat berguna bagi kesempurnaan skripsi ini. 5) Rochmadi Budi S, A.Md selaku laboran Biologi Farmasi yang telah berbagi ilmu, memberikan motivasi dan arahan dalam menyelesaikan penelitian ini.

  6) Segenap staf pengajar Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto yang memberikan ilmu dan pengarahan dari awal perkuliahan sampai selesainya skripsi.

RIWAYAT HIDUP

  Nama : Anisa Mirrah Hafizhat Tepat, Tanggal Lahir : Bandung, 31 Agustus 1995 Nama Orang Tua : Tirtayana (Ayah)

  Iin (Ibu)

  Pendidikan

  2001-2006 SD N 3 Banjar 2007-2009 SMP N 1 Banjar 2010-2012 SMA N 1 Banjar 2013-2017 Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Purwokerto

  Pengalaman

  2014 Asisten praktikum Kimia Farmasi Dasar 2014 Asisten praktikum Kimia Organik II 2014 Asisten praktikum Kimia Analisis 2015 Asisten praktikum Farmasi Fisika II

  2015 Experience and Cultural Exchange at Faculty of Pharmaceutical

  Sciences, Khon Kaen University , Thailand

  2016 Asisten praktikum Fitokimia 2016 Asisten praktikum Analisis Farmasi 2017 Asisten Biofarmasetika 2017 Asisten Farmakoterapi II 2017 Asisten Analisis Makanan dan Kosmetik

  Penghargaan

  2015 Penerima Beasiswa PPA DIKTI 2016 Penerima dana hibah PKM-P DIKTI (Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Pegagan Terhadap Bakteri Escherichia coli,

   Organisasi

  2014-2015 BEM Fakultas Farmasi Kabinet Matahari (Sekretaris) 2015-2016 DEMA Fakultas Farmasi (Sekretaris)

  DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN JUDUL ...................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN ....................................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................ iii HALAMAN PERNYATAAN ...................................................................... iv PERSEMBAHAN .......................................................................................... v MOTTO.......................................................................................................... vi KATA PENGANTAR ................................................................................... vii RIWAYAT HIDUP ........................................................................................ ix DAFTAR ISI .................................................................................................. x DAFTAR TABEL .......................................................................................... xii DAFTAR GAMBAR ..................................................................................... xiii DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. xiv ABSTRAK ..................................................................................................... xvi xvii

  ABSTRACT .....................................................................................................

  BAB I. PENDAHULUAN ............................................................................ 1 A. Latar Belakang ................................................................................... 1 B. Perumusan Masalah ............................................................................ 2 C. Tujuan Penelitian ................................................................................ 3 D. Manfaat Penelitian .............................................................................. 3 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................. 4 A. Penelitian Terdahulu .......................................................................... 4 B. Landasan Teori ................................................................................... 4

  1. Metformin HCl ............................................................................. 4

  2. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ............................................... 5

  a. Teori Dasar Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ..................... 5

  b. Kegunaan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ........................ 6

  c. Komponen Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ....................... 7

  d. Fase Diam pada Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ............... 11

  e. Fase Gerak pada Kromatografi Cair Kinerja Tinggi .............. 11

  f. Elusi Gradien dan Isokratik .................................................... 11

  g. Jenis Pemisahan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi .............. 11

  h. Proses Kromatografi Cair Kinerja Tinggi .............................. 12 i. Kelebihan dan Keterbatasan KCKT ....................................... 12 j. Parameter Kromatografi ......................................................... 13 k. Metode Kuantifikasi ............................................................... 16

  C. Kerangka Konsep ............................................................................... 18

  BAB III. METODE PENELITIAN ............................................................ 19 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ......................................................... 19 B. Variabel Penelitian ............................................................................. 19 C. Waktu dan Tempat Penelitian ............................................................ 19 D. Bahan dan Alat ................................................................................... 19 E. Tahap Penelitian ................................................................................. 20 F. Analisis Data ...................................................................................... 23 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN..................................................... 24 A. Kondisi Kromatografi ........................................................................ 24

  1. Penentuan Waktu Retensi Analit ................................................. 27

  2. Optimasi Fase Gerak .................................................................... 28 a.

  Optimasi Fase Gerak Dapar fosfat pH 7 dan Asetonitril ....... 29 b. Optimasi Fase Gerak Dapar fosfat pH 4,5 dan Asetonitril .... 30

  3. Optimasi Laju Alir ....................................................................... 32

  4. Optimasi Suhu Kolom .................................................................. 34

  BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................... 38 A. Kesimpulan ........................................................................................ 38 B. Saran ................................................................................................... 38 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 39 LAMPIRAN .................................................................................................. 41

  

DAFTAR TABEL

  Halaman

Tabel 3.1 Tabel Optimasi Perbandingan Komposisi dan pH Fase Gerak ...... 22Tabel 3.1 Kondisi Pengukuran KCKT ........................................................... 22Tabel 4.1 Hasil Konsentrasi Metformin HCl

  10, 50 dan 100 μg/ml ............. 28

Tabel 4.2 Hasil Optimasi Perbandingan Komposisi Dapar Fosfat pH 7 dengan asetonitril..................................................................... 29Tabel 4.3 Hasil Optimasi Fase Gerak pH 4,5, Laju Alir dan Suhu Kolom ... 35Tabel 4.4 Nilai N dan HETP dari Berbagai Optimasi Laju Alir .................... 35

  

DAFTAR GAMBAR

  C. .......................................................................... 29

  o

  dengan laju alir 0,5 mL/menit dan suhu 25C, 35, 40

Gambar 4.8. Kromatogram metformin HCl dengan perbandingan fase gerak dapar fosfat pH 4,5 dan asetonitril (85:15) v/v

  C. ... 33

  o

  dengan laju alir 0,5; 1; dan 1,5 mL/menit dan suhu 40

Gambar 4.7. Kromatogram metformin HCl dengan perbandingan fase gerak dapar fosfat pH 4,5 dan asetonitril (85:15) v/v

  C.................................................................................... 31

  o

  40

  dan (85:15) v/v dengan laju alir 1 mL/menit dan suhu

Gambar 4.6. Kromatogram metformin HCl dengan perbandingan fase gerak dapar fosfat pH 4,5 dan asetonitril (95:5); (90:10);

  o

  Halaman

  (60:40); dan (50:50) v/v dengan laju alir 1 mL/menit dan suhu 40

Gambar 4.5. Kromatogram metformin HCl dengan perbandingan fase gerak dapar fosfat pH 7 dan asetonitril (80:20); (70:30);

  100 μg/ml dengan fase gerak dapar fosfat dan asetonitril ........ 27

Gambar 4.4. Kromatogram metformin HCl konsentrasi 10, 50, danGambar 4.3. Kromatogram fase gerak ......................................................... 27Gambar 4.2. Spektrum Metformin HCl ........................................................ 26Gambar 4.1. Gugus Kromofor dan Auksokrom Metformin HCl ................... 26Gambar 2.5. Kerangka Konsep ...................................................................... 18Gambar 2.4. Menghitung besarnya TF pada kromatogram ........................... 15

  σt, Wh/2, Wb ............................................. 14

Gambar 2.3. Cara mengukur tR,Gambar 2.2 Diagram Blok KCKT ................................................................. 7Gambar 2.1 Struktur Metformin HCl ............................................................. 5

  C. ..... 34