IHK APLIKASI DX.PA
IMMUNOHISTOKIMIA
SEBAGAI
PENYEMPURNA
DIAGNOSIS PA
PENDAHULUAN
Definisi Imunohistokimia ( IHK )
Sistem pengecatan jaringan yang didahului dengan reaksi
antigen antibodi
Pengecatan jaringan PA
Ada dua jenis pengecatan :
1. Rutine : HE
2. Khusus : - histokimia : PAS,Congo red, Trichroom
- imuno histokimia /sitokimia
• imunofluorescen
• imunoenzym / imunoperoksidase
Tujuan : untuk menunjukkan aplikasi klinik.
DASAR PEMIKIRAN
Didalam/pada sel terdapat berbagai macam
struktur protein yang spesifik baik tingkat selular
maupun tingkat molekuler.
Contoh protein spesifik selular :
pertanda sel : LCA , Vimentin , CK , CD 20 ,
CD 3 , Desmin,Imunoglob.dll
Contoh protein spesifik molekuler : RE, RP ,
Her 2 , p53,dll
protein spesifik sebagai A n t i g e n ( Ag )
DASAR PEMIKIRAN
Kalau dapat diperoleh antigen spesifik yang
murni maka akan didapat antibodi(Ab)
spesifik terhadap antigen tersebut (selanjutnya
Ab akan diproduk oleh pabrik)
Apabila Antibodi(Ab primer) tersebut dapat
dilabel atau sudah berlabel ..maka pengecatan
terhadap label tersebut dapat dilakukan.
Apabila pengecatan tersebut terjadi maka
antigen yang dicari dipastikan ada .
PRINSIP PENGECATAN
IMUNOHISTOKIMIA
Bila Ag.spesifik diikat oleh Ab spesifik yang berlabel
Label tsb kemudian di cat dg cat chromogren
Bila Ag spesifik diikat oleh Ab.spesifik yang tak berlabel
Ikatan tsb diikat oleh antibodi non spesifik yang dapat
dilabel
Label ada 2 macam : - fluorescent
- enzym / peroksidase
Label fluorescent tak perlu dicat lagi
Label enzim perlu dicat dg chromogen : DAB , AEC dll
PRINSIP PENGECATAN
IMUNOHISTOKIMIA
Ag. = segitiga biru , Ab.prim = canggah merah , Ab.sek.= canggah biru
Avidin = silang kuning , biotin = segitiga kuning , label = lingkaran coklat
BEDA Im.Fl dan Im.Enz
IMUNOFLORESENS
Proses : FS
Bahan hrs segar
Label : FITC
Mikroskop medan gelap
Slide tak tahan lama
Harus segera difoto
Jaringan tak jelas
Terutama utk kulit & ginjal
IMUNOENZIM
Proses : Embeding
Bahan tak harus segar
Label : peroksidase
alkalin fosfatase
Mikroskop cahaya
Slide tahan disimpan lama
Tak harus segera difoto
Jaringan tampak jelas
Untuk pemakaian yg luas
SYARAT BAHAN UTK IHK
Prosesing jaringan harus standard
Fiksasi buffer formalin / Bouin
Panas tak boleh lebih dari 65° C
Titik lebur ( TL ) parafin < 60° C
Objek glass yang dipakai tak boleh diberi
albumin
MANFAAT IHK
Sel marker mis.pada kasus tumor anaplastik
Penyempurnaan dx. mis. pada LMNH
Penentuan metastasis kecil
Tumor marker mis. PSA , Thyroglob.
Membedakan hiperplasi dg neoplasma…
mis. Hiperplasia folikular vs LMNH
Mencari reseptor ataupun onkogen
dll protein marker
KAPAN DAPAT MEMANFAATKAN IHK
Kalau tahu jenis protein yg mau dideteksi
Kalau tahu protein tersebut lokasinya dimana
Kalau pabrik sudah membuat Ab primernya
Kalau lab.PA punya kemampuan pem.IHK
SEL B ( CD 20 ) + & SEL T ( CD 3 ) +
PADA KELENJAR LIMFE NORMAL
LMNH DG Bcl 2 POSITIP
This is an example of bcl-2 positivity in a lymphoma. In this case, the overexpression of this oncogene
results in an inhibition of apoptosis, and increased numbers of lymphocytes. The immunoperoxidase stain
here highlights the lymphocytes in lymphoid follicles and interfollicular areas
CA.MAMMA DG ER POSITIP
CA.MAMMA DG PR POSITIP
CA.MAMMA DG HER 2 POSITIP 3
CONTOH APLIKASI
Didiagnosis tumor
ganas anaplastik /
undifferentited.
Maka perlu dilakukan
pem.IHK dengan
antibodi CK , LCA dan
vimentin
Kesimpulan :
Tumor ganas epitelial
ANTI
BODI
CK
POS
NEG
+
LCA
-
VIM
-
CONTOH APLIKASI
Didiagnosis suatu kasus
dengan LMNH
Untuk klasifikasi
menurut WHO perlu
dibedakan LMNH dari
sel T atau sel B
Kesimpulan :
LMNH sel B
ANTI BODI
POS.
CD 20
+
CD 3
NEG.
-
CONTOH APLIKASI
Dalam mendiagnosis
limfadenopati sukar
dipastikan apakah itu
LMNH atau hiperplasia
folikuler .
Tentukan terlebih dulu sel T
atau sel B
Kalau itu sel T maka tidak
ditindak lanjuti
Kalau itu sel B maka
dilakukan pem.IHK dengan
antibodi Kappa dan antibodi
Lambda
ANTIBODI
Hiper- LMNH
plasia
Kappa
+
+/-
Lambda
+
- /+
Kesimpulan : hiperplasia folikel
CONTOH APLIKASI
Didiagnosis Karsinoma
mama dengan diferensiasi
jelek ; dilakukan pem.IHK
dengan antibodi ER , PR
dan Her 2
Kesimpulan :
Pdrt dapat diberikan
Tomoksifen sbg obat
anti hormon estrogen dan
progesteron
ANTIBODI
POS
ER
PR
HER 2
+
+
NEG
-
CONTOH APLIKASI
Anaplastic round cell tumor in adult
CK EMA VIM LCA S100 HMB45
Carcinoma
+
+
-
-
-/+
-
Melanoma
-
-
+
-
+
+
Lymfoma
-
-/+
+
+
-
-
CK=cytokeratin , EMA=epithelial membrane antigen , VIM= vimentin ,
LCA= Leucocyte common antigen , S100 = S100 protein
CONTOH APLIKASI
Round cell tumor in childhood
LCA VIM CK
DES MSA NF
S100 NSE Leu7
Limfoma/
Leukemia
+
+
-
-
-
-
-
Rhabdomyosa.
-
+
-
+
+
-
-
+/- -/+
Ewing’s sa.
-
+
-/+
-
-
-
-
-/+ -/+
Neuroblastoma
-
+
-
-
-
+
-/+
+
+
PNET
-
+
-/+
-
-
-/+
-
+
+/-
-
-
LCA=leucocyt common antigen,VIM=vimentin,CK=cytokeratin,DES=desmin,
MSA=muscle spesific actin,NF=neurofilaments,NSE=neuron spes.enolase,Leu7=CD57
GUIDE TO CHOICE OF ANTIBODY PANEL
FOR DIFFICULT CASES
Carcinoma vs Lymphoma
EMA,CK,CEA vs LCA
Carcinoma vs Melanoma
EMA,CK,CEA vs S100
Lymphoma vs Oat cell ca.
LCA vs NSE
Metastatic Ca. vs Astrocytoma EMA,Keratin,CEA vs GFAP
Prostat vs Bladder Ca.
PAP,PSA
Carcinoma vs Mesotelioma
CEA
Carcinoma vs Sarcoma
EMA,CK,CEA vs vimentin
TEMPAT DEPOSISI IMUN PD GINJAL
Mesangium
- early lupus,
Henoch-Schonlein disease,
Ig A disease,
postinfectious –
glumerulonephritis( GN)
Sub endothelium - severe lupus,
Type 1 mesangiocapillary GN
Subepithelium - 1° and 2° membranous GN
including membranous lupus,
post infectious GN
Tempat deposisi imun pd peny.kulit
Dlm epidermis
: Pemphigus
Pd dermo-epidermal : Bullous phempigoid ,
junction Herpes Gestationis
Epidermolysis Bullosa Acquisita
Linear IgA Dermatoses
Dermatitis Herpetiformis
Lichenoid rx , lupus eryth.
Lichen phempigoid
Dlm pembuluh darah : Small vessel vasculitis
SEBAGAI
PENYEMPURNA
DIAGNOSIS PA
PENDAHULUAN
Definisi Imunohistokimia ( IHK )
Sistem pengecatan jaringan yang didahului dengan reaksi
antigen antibodi
Pengecatan jaringan PA
Ada dua jenis pengecatan :
1. Rutine : HE
2. Khusus : - histokimia : PAS,Congo red, Trichroom
- imuno histokimia /sitokimia
• imunofluorescen
• imunoenzym / imunoperoksidase
Tujuan : untuk menunjukkan aplikasi klinik.
DASAR PEMIKIRAN
Didalam/pada sel terdapat berbagai macam
struktur protein yang spesifik baik tingkat selular
maupun tingkat molekuler.
Contoh protein spesifik selular :
pertanda sel : LCA , Vimentin , CK , CD 20 ,
CD 3 , Desmin,Imunoglob.dll
Contoh protein spesifik molekuler : RE, RP ,
Her 2 , p53,dll
protein spesifik sebagai A n t i g e n ( Ag )
DASAR PEMIKIRAN
Kalau dapat diperoleh antigen spesifik yang
murni maka akan didapat antibodi(Ab)
spesifik terhadap antigen tersebut (selanjutnya
Ab akan diproduk oleh pabrik)
Apabila Antibodi(Ab primer) tersebut dapat
dilabel atau sudah berlabel ..maka pengecatan
terhadap label tersebut dapat dilakukan.
Apabila pengecatan tersebut terjadi maka
antigen yang dicari dipastikan ada .
PRINSIP PENGECATAN
IMUNOHISTOKIMIA
Bila Ag.spesifik diikat oleh Ab spesifik yang berlabel
Label tsb kemudian di cat dg cat chromogren
Bila Ag spesifik diikat oleh Ab.spesifik yang tak berlabel
Ikatan tsb diikat oleh antibodi non spesifik yang dapat
dilabel
Label ada 2 macam : - fluorescent
- enzym / peroksidase
Label fluorescent tak perlu dicat lagi
Label enzim perlu dicat dg chromogen : DAB , AEC dll
PRINSIP PENGECATAN
IMUNOHISTOKIMIA
Ag. = segitiga biru , Ab.prim = canggah merah , Ab.sek.= canggah biru
Avidin = silang kuning , biotin = segitiga kuning , label = lingkaran coklat
BEDA Im.Fl dan Im.Enz
IMUNOFLORESENS
Proses : FS
Bahan hrs segar
Label : FITC
Mikroskop medan gelap
Slide tak tahan lama
Harus segera difoto
Jaringan tak jelas
Terutama utk kulit & ginjal
IMUNOENZIM
Proses : Embeding
Bahan tak harus segar
Label : peroksidase
alkalin fosfatase
Mikroskop cahaya
Slide tahan disimpan lama
Tak harus segera difoto
Jaringan tampak jelas
Untuk pemakaian yg luas
SYARAT BAHAN UTK IHK
Prosesing jaringan harus standard
Fiksasi buffer formalin / Bouin
Panas tak boleh lebih dari 65° C
Titik lebur ( TL ) parafin < 60° C
Objek glass yang dipakai tak boleh diberi
albumin
MANFAAT IHK
Sel marker mis.pada kasus tumor anaplastik
Penyempurnaan dx. mis. pada LMNH
Penentuan metastasis kecil
Tumor marker mis. PSA , Thyroglob.
Membedakan hiperplasi dg neoplasma…
mis. Hiperplasia folikular vs LMNH
Mencari reseptor ataupun onkogen
dll protein marker
KAPAN DAPAT MEMANFAATKAN IHK
Kalau tahu jenis protein yg mau dideteksi
Kalau tahu protein tersebut lokasinya dimana
Kalau pabrik sudah membuat Ab primernya
Kalau lab.PA punya kemampuan pem.IHK
SEL B ( CD 20 ) + & SEL T ( CD 3 ) +
PADA KELENJAR LIMFE NORMAL
LMNH DG Bcl 2 POSITIP
This is an example of bcl-2 positivity in a lymphoma. In this case, the overexpression of this oncogene
results in an inhibition of apoptosis, and increased numbers of lymphocytes. The immunoperoxidase stain
here highlights the lymphocytes in lymphoid follicles and interfollicular areas
CA.MAMMA DG ER POSITIP
CA.MAMMA DG PR POSITIP
CA.MAMMA DG HER 2 POSITIP 3
CONTOH APLIKASI
Didiagnosis tumor
ganas anaplastik /
undifferentited.
Maka perlu dilakukan
pem.IHK dengan
antibodi CK , LCA dan
vimentin
Kesimpulan :
Tumor ganas epitelial
ANTI
BODI
CK
POS
NEG
+
LCA
-
VIM
-
CONTOH APLIKASI
Didiagnosis suatu kasus
dengan LMNH
Untuk klasifikasi
menurut WHO perlu
dibedakan LMNH dari
sel T atau sel B
Kesimpulan :
LMNH sel B
ANTI BODI
POS.
CD 20
+
CD 3
NEG.
-
CONTOH APLIKASI
Dalam mendiagnosis
limfadenopati sukar
dipastikan apakah itu
LMNH atau hiperplasia
folikuler .
Tentukan terlebih dulu sel T
atau sel B
Kalau itu sel T maka tidak
ditindak lanjuti
Kalau itu sel B maka
dilakukan pem.IHK dengan
antibodi Kappa dan antibodi
Lambda
ANTIBODI
Hiper- LMNH
plasia
Kappa
+
+/-
Lambda
+
- /+
Kesimpulan : hiperplasia folikel
CONTOH APLIKASI
Didiagnosis Karsinoma
mama dengan diferensiasi
jelek ; dilakukan pem.IHK
dengan antibodi ER , PR
dan Her 2
Kesimpulan :
Pdrt dapat diberikan
Tomoksifen sbg obat
anti hormon estrogen dan
progesteron
ANTIBODI
POS
ER
PR
HER 2
+
+
NEG
-
CONTOH APLIKASI
Anaplastic round cell tumor in adult
CK EMA VIM LCA S100 HMB45
Carcinoma
+
+
-
-
-/+
-
Melanoma
-
-
+
-
+
+
Lymfoma
-
-/+
+
+
-
-
CK=cytokeratin , EMA=epithelial membrane antigen , VIM= vimentin ,
LCA= Leucocyte common antigen , S100 = S100 protein
CONTOH APLIKASI
Round cell tumor in childhood
LCA VIM CK
DES MSA NF
S100 NSE Leu7
Limfoma/
Leukemia
+
+
-
-
-
-
-
Rhabdomyosa.
-
+
-
+
+
-
-
+/- -/+
Ewing’s sa.
-
+
-/+
-
-
-
-
-/+ -/+
Neuroblastoma
-
+
-
-
-
+
-/+
+
+
PNET
-
+
-/+
-
-
-/+
-
+
+/-
-
-
LCA=leucocyt common antigen,VIM=vimentin,CK=cytokeratin,DES=desmin,
MSA=muscle spesific actin,NF=neurofilaments,NSE=neuron spes.enolase,Leu7=CD57
GUIDE TO CHOICE OF ANTIBODY PANEL
FOR DIFFICULT CASES
Carcinoma vs Lymphoma
EMA,CK,CEA vs LCA
Carcinoma vs Melanoma
EMA,CK,CEA vs S100
Lymphoma vs Oat cell ca.
LCA vs NSE
Metastatic Ca. vs Astrocytoma EMA,Keratin,CEA vs GFAP
Prostat vs Bladder Ca.
PAP,PSA
Carcinoma vs Mesotelioma
CEA
Carcinoma vs Sarcoma
EMA,CK,CEA vs vimentin
TEMPAT DEPOSISI IMUN PD GINJAL
Mesangium
- early lupus,
Henoch-Schonlein disease,
Ig A disease,
postinfectious –
glumerulonephritis( GN)
Sub endothelium - severe lupus,
Type 1 mesangiocapillary GN
Subepithelium - 1° and 2° membranous GN
including membranous lupus,
post infectious GN
Tempat deposisi imun pd peny.kulit
Dlm epidermis
: Pemphigus
Pd dermo-epidermal : Bullous phempigoid ,
junction Herpes Gestationis
Epidermolysis Bullosa Acquisita
Linear IgA Dermatoses
Dermatitis Herpetiformis
Lichenoid rx , lupus eryth.
Lichen phempigoid
Dlm pembuluh darah : Small vessel vasculitis