Identifikasi senyawa dalam fraksi IV ekstrak N-Heksana daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) - USD Repository

IDENTIFIKASI SENYAWA DALAM FRAKSI IV EKSTRAK

  N-HEKSANA DAUN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi

  Program Studi Farmasi Oleh:

  Margaretha Efa Putri NIM : 088114075

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA

IDENTIFIKASI SENYAWA DALAM FRAKSI IV EKSTRAK

  N-HEKSANA DAUN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi

  Program Studi Farmasi Oleh:

  Margaretha Efa Putri NIM : 088114075

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA

  Karya Kecil ini KupersembahKan untuK:

  

Guru sejatiku, Yesus, yang senantiasa mengajar, membimbing, dan

menyertai setiap langkahku.

  

Orang tuaku tercinta, Mama Kanthi dan Papa Tri yang senantiasa

mendoakan, mendukung, dan membimbingku dengan penuh

kesabaran, cinta, dan kasih sayang yang tak ada habisnya.

Serta adik-adikku tersayang, Satrio, Hiro, dan Agung yang terus

  

“Dalam hal inilah Bapa-Ku dipermuliakan,

yaitu jika kamu berbuah banyak dan dengan

demikian kamu adalah murid-murid-Ku.”

(Yoh. 15: 8)

  

PRAKATA

  Segala pujian dan syukur penulis haturkan kepada Tuhan karena hanya dengan berkat dan pertolongan-Nya, penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi yang berjudul ”Identifikasi Senyawa Fraksi IV Ekstrak n-

  

Heksana Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)”. Skripsi ini

  disusun guna memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

  Selama penelitian hingga penyusunan skripsi ini, penulis banyak mendapat bantuan dari berbagai pihak berupa bimbingan, pengarahan, saran, dukungan, maupun sarana. Oleh karena itu, penulis ingin menyampaikan penghargaan dan ucapan terima kasih kepada:

  1. Ibu Lucia Wiwid Wijayanti, M.Si. selaku Dosen Pembimbing yang telah memberikan petunjuk, saran, arahan, dan bimbingan kepada penulis dalam proses penyusunan skripsi ini,

  2. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. dan Pak Enade Perdana Istyastono, Ph.D, Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah memberikan saran dan masukan demi kesempurnaan skripsi ini,

  3. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan dan segenap dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta,

  4. Bapak-bapak Laboran dan staf laboratorium yang telah membantu dalam proses penyelesaian skripsi di laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta,

  5. Bapak Supoyo, selaku laboran di laboratorium Gas Chromatography-Mass

  Spectrometer (GC-MS) Fakultas MIPA Universitas Gadjah Mada, yang telah

  membantu proses pengerjaan kromatografi gas-spektrometri massa serta diskusi yang membantu dalam pengerjaan penelitian ini,

  6. Semua keluarga yang selalu mendukung dan menyemangati dalam suka dan duka selama proses pengerjaan skripsi,

  7. Wilfrida, teman sekelompok skripsi yang telah membantu dan menemani selama proses pengerjaan skripsi,

  8. Bu Yuli dan beberapa pihak lain yang telah bersedia menyumbangkan banyak sampel daun binahong,

  9. Seluruh teman-teman dari fakultas farmasi USD, khususnya kelas B angkatan 2008 dan FST 2008 yang telah banyak berbagi keceriaan dan kesedihan,

  10. Semua teman-teman, yang selalu mendukung, menemani dan menyemangati

  11. Serta semua pihak yang telah membantu penyusunan skripsi ini yang tidak dapat disebutkan satu per satu.

  Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih banyak kekurangan dan kelemahan karena keterbatasan kemampuan dan pengalaman penulis. Untuk itu penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun dari semua pihak. Akhir kata semoga skripsi ini dapat berguna dan bermanfaat bagi pembaca semua, serta turut member sumbangan pada perkembangan ilmu pengetahuan.

  

DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN JUDUL ........................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................... ii HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................... iii HALAMAN PENGESAHAN .............................................................. iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................... v PERNYATAAN PERSTUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ...... vi PRAKATA .......................................................................................... vii DAFTAR ISI ....................................................................................... ix DAFTAR TABEL ............................................................................... xiii DAFTAR GAMBAR ........................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................ xvii

  INTISARI ............................................................................................ xviii

  ABSTRACT .......................................................................................... xix BAB I PENGANTAR ..........................................................................

  1 A. Latar Belakang Masalah .................................................................

  1 B. Permasalahan .................................................................................

  4 C. Keaslian Penelitian .........................................................................

  5 D. Tujuan Penelitian ...........................................................................

  6 E. Manfaat Penelitian .........................................................................

  6 1. Manfaat praktis ........................................................................

  6

  2. Manfaat teoretis ........................................................................

  6 BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ...................................................

  8 A. Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) ................

  8 B. Ekstraksi ........................................................................................

  10 C. Metabolit Sekunder pada Tanaman.................................................

  11 1. Senyawa Fenolik ......................................................................

  11 2. Alkaloid ...................................................................................

  15 3. Terpenoid .................................................................................

  16 D. Kromatografi Kolom ......................................................................

  18 E. Kromatografi Lapis Tipis ...............................................................

  22 F. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif ...............................................

  24 G. Elusidasi Struktur ...........................................................................

  27 1. Kromatografi gas-spektrometri massa .......................................

  27 2. Spektrometri ultraviolet-sinar tampak (UV-Vis) .......................

  31 H. Kandungan Binahong .....................................................................

  37 I. Landasan Teori ..............................................................................

  39 J. Hipotesis ........................................................................................

  41 BAB III METODE PENELITIAN .......................................................

  42 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ......................................................

  42 B. Variabel dan Definisi Operasional ..................................................

  42 1. Klasifikasi Variabel ..................................................................

  42 2. Definisi Operasional .................................................................

  42 C. Bahan .............................................................................................

  43

  D. Alat ................................................................................................

  43 E. Tata Cara Penelitian .......................................................................

  44 1. Determinasi Tanaman Binahong ...............................................

  44 2. Preparasi Sampel ......................................................................

  44 3. Uji pendahuluan ekstrak ...........................................................

  45

  4. Fraksinasi ekstrak n-heksan daun binahong dengan kromatografi kolom (KK) .........................................................

  48 5. Isolasi dengan kromatografi lapis tipis preparatif (KLTP) .........

  50 6. Elusidasi Struktur .....................................................................

  52 F. Analisis Hasil ................................................................................

  52 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................

  54 A. Determinasi Tanaman ...................................................................

  54 B. Preparasi Serbuk Simplisia Daun Binahong ...................................

  54 C. Ekstraksi Serbuk Simplisia Daun Binahong ...................................

  57 D. Uji Pendahuluan Ekstrak ...............................................................

  58 1. Identifikasi flavonoid ...............................................................

  58 2. Identifikasi tanin ......................................................................

  60 3. Identifikasi alkaloida ...............................................................

  62 4. Identifikasi saponin .................................................................

  65 5. Identifikasi triterpenoid dan steroid .........................................

  66 E. Isolasi dengan Kromatografi Kolom ..............................................

  70 1. Optimasi fase gerak KK dengan metode pendekatan KLT ........

  71 2. Proses kromatografi kolom ......................................................

  75

  3. Uji kemurnian eluat hasil KK dengan metode KLT .................

  76 F. Isolasi dengan Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLTP) ..........

  80 G. Kromatografi Gas-Spektrometri Massa (KG-SM) ..........................

  83 H. Spektroskopi Ultraviolet-Visibel (UV-Vis) .................................... 100

  I. Analisis Hasil ................................................................................. 106

  BAB V PENUTUP .............................................................................. 109 A. Kesimpulan .................................................................................... 109 B. Saran .............................................................................................. 109 DAFTAR PUSTAKA .......................................................................... 110 LAMPIRAN ........................................................................................ 114 BIOGRAFI PENULIS ......................................................................... 147

  DAFTAR TABEL

  74 Tabel IX. Hasil KLT eluat dari kromatografi kolom ........................

  Tabel XV. Spektra UV-Vis beberapa karotenoid dalam pelarut kloroform ........................................................................ 102 Tabel XVI. Panjang gelombang maksimum isolat dalam spektra

  99 Tabel XIV. Panjang gelombang maksimum isolat dalam spektra UV-Vis dengan pelarut kloroform.................................... 102

  83 Tabel XIII. Hasil Kromatografi Gas-Spektrometri Massa ...................

  81 Tabel XII. Uji kemurnian isolat ........................................................

  79 Tabel XI. Hasil KLTP ....................................................................

  77 Tabel X. Hasil identifikasi fraksi IV dengan KLT ..........................

  72 Tabel VIII. Hasil KLT ekstrak dengan berbagai fase gerak ................

  Tabel I. Warna flavonoid dengan sinar tampak dan sinar ultraviolet .......................................................................

  69 Tabel VII. Kepolaran fase gerak yang digunakan ..............................

  68 Tabel VI. Hasil uji fitokimia ekstrak n-heksan daun binahong .........

  65 Tabel V. Hasil KLT identifikasi triterpenoid dan steroid ...............

  60 Tabel IV. Hasil identifikasi alkaloid dengan KLT ............................

  32 Tabel III. Hasil identifikasi flavonoid dengan KLT ........................

  14 Tabel II. Klasifikasi sinar tampak dengan warna komplementernya ............................................................

  UV-Vis dengan pelarut metanol ....................................... 104

  DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Tanaman binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) ..

  59 Gambar 12. Hasil KLT identifikasi flavonoid .....................................

  64 Gambar 19. Hasil uji identifikasi saponin ............................................

  63 Gambar 18. Hasil KLT identifikasi alkaloid dengan reagen Dragendorff .....................................................................

  63 Gambar 17. Hasil Uji Identifikasi Alkaloid dengan Dragendorff LP ...

  62 Gambar 16. Hasil Uji Identifikasi Alkaloid dengan Mayer LP ............

  61 Gambar 15. Hasil Uji Identifikasi Alkaloid dengan Wagner LP ..........

  60 Gambar 14. Hasil uji identifikasi tanin dengan larutan gelatin ............

  59 Gambar 13. Hasil reaksi uji identifikasi tanin dengan FeCl 3 ...............

  38 Gambar 11. Hasil uji flavonoid dengan serbuk seng dan magnesium ...

  8 Gambar 2. Struktur fenol ..................................................................

  36 Gambar 10. Beberapa senyawa boussingosida dalam daun binahong ..

  33 Gambar 9. Skema peralatan spektrofotometer UV-Vis .....................

  31 Gambar 8. Transisi elektronik oleh sinar UV-Vis .............................

  27 Gambar 7. Skema peralatan kromatografi gas-spektrofotometer massa ..............................................................................

  22 Gambar 6. Skema peralatan spektrofotometer massa ........................

  19 Gambar 5. Proses kromatografi lapis tipis ........................................

  12 Gambar 4. Proses kromatografi kolom .............................................

  12 Gambar 3. Kerangka umum senyawa golongan flavonoid ................

  66

  Gambar 20. Reaksi steroid dengan reagen Liebermann-Burchard ........

  84 Gambar 31. Spektra peak 1 KG-SM isolat...........................................

  91 Gambar 39. Fragmentasi 4-tetradekanol dengan pemutusan- α dan tata ulang hidrogen ..........................................................

  90 Gambar 38. Spektra peak 8 KG-SM isolat...........................................

  89 Gambar 37. Fragmentasi senyawa 1-oktadekena .................................

  88 Gambar 36. Spektra peak 4 KG-SM isolat...........................................

  87 Gambar 35. Fragmentasi senyawa 1-pentadekena ...............................

  87 Gambar 34. Fragmentasi 1-alkena .......................................................

  87 Gambar 33. Spektra peak 3 KG-SM isolat ..........................................

  86 Gambar 32. Struktur Naftalen .............................................................

  82 Gambar 30. Kromatogram KG-SM isolat ............................................

  66 Gambar 21. Hasil uji identifikasi triterpenoid dan steroid ....................

  82 Gambar 29. Uji kemurnian isolat ........................................................

  81 Gambar 28. Isolat pekat dari proses isolasi .........................................

  79 Gambar 27. Hasil KLTP .....................................................................

  76 Gambar 26. Hasil uji identifikasi fraksi IV ekstrak n-heksan daun binahong ..........................................................................

  76 Gambar 25. Hasil KLT masing-masing eluat dari kromatografi kolom ..............................................................................

  73 Gambar 24. Kromatografi Kolom Ekstrak n-Heksan Daun Binahong ..

  68 Gambar 23. Hasil KLT ekstrak dengan berbagai fase gerak ................

  67 Gambar 22. Identifikasi triterpenoid dan steroid dengan KLT .............

  92

  Gambar 40. Spektra peak 10 KG-SM isolat .........................................

  93 Gambar 41. Fragmentasi trikosanol dengan pemutusan- α dan tata ulang hidrogen .................................................................

  94 Gambar 42. Spektra peak 11 KG-SM isolat .........................................

  94 Gambar 43. Fragmentasi senyawa siklotetrakosana .............................

  95 Gambar 44. Spektra peak 14 KG-SM isolat ........................................

  96 Gambar 45. Fragmentasi bis-(2-etilheksil) ftalat..................................

  97 Gambar 46. Spektra peak 16 KG-SM isolat ........................................

  98 Gambar 47. Fragmentasi senyawa 1-oktadekana .................................

  99 Gambar 48. Spektra UV-Vis isolat dengan pelarut kloroform.............. 101 Gambar 49. Struktur lutein .................................................................. 103 Gambar 50. Spektra UV-Vis isolat dengan pelarut metanol ................. 104 Gambar 51. Struktur steroid dengan kerangka kolesta-2,4-diena ......... 105

  

DAFTAR LAMPIRAN

  Lampiran 1. Surat Determinasi Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) ............................. 114

  Lampiran 2. Perhitungan Rendemen Ekstrak .................................... 115 Lampiran 3. Perhitungan Kepolaran Kloroform:Methanol (1:1) ....... 115 Lampiran 4. Contoh Perhitungan Nilai Rf KLT ................................ 115 Lampiran 5. Hasil Kromatografi Gas-Spektrometri massa ................ 116 Lampiran 3. Spektrum UV/Vis ......................................................... 141 Lampiran 4. Perhitungan Panjang Gelombang Maksimum Teoretis

  Berdasarkan Teori Fieser-Kuhn .................................... 142

  

INTISARI

  Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui struktur salah satu senyawa metabolit sekunder dalam fraksi IV ekstrak n-heksana daun binahong (Anredera

  

cordifolia (Ten.) Steenis). Informasi mengenai struktur senyawa yang terkandung

  tanaman ini dapat digunakan untuk mengembangkan obat baru. Senyawa ini dapat juga berguna dalam proses standardisasi untuk mendapatkan bukti dalam pengembangan obat tradisional.

  Fraksi IV ekstrak n-heksana daun binahong didapatkan melalui proses pemisahan pada proses kromatografi kolom dengan fase diam silika dan fase gerak kloroform. Identifikasi senyawa dalam fraksi IV dilakukan dengan uji fitokimia. Elusidasi struktur senyawa yang terkandung dalam isolat, dilakukan dengan KG-SM dan Spektrometri UV-Vis. Isolat didapatkan dari pemisahan fraksi IV dalam proses kromatografi lapis tipis preparatif dengan fase diam silika dan fase gerak kloroform.

  Dari hasil uji fitokimia, didapatkan bahwa fraksi IV mengandung steroid. Elusidasi struktur menunjukkan bahwa isolat mengandung lutein dan senyawa steroid dengan kerangka kolesta-2,4-diena, 1-pentadekena, 1-heptadekena, 1- oktadekena, 4-tetradekanol, trikosil alkohol, dan n-oktadekana.

  

Kata Kunci: Identifikasi Senyawa, Ekstrak n-Heksana, Daun Binahong,

Anredera cordifolia (Ten.) Steenis

  ABSTRACT

  This research was conducted to determine the structure of one of the secondary metabolites in fourth fraction of n-hexane’s extract of binahong leaf (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). The information about the structure of compounds discovered in this plant could be used as a lead in developing new medicines. The compounds could also be useful in the standardization process in order to gather evidences in the development of traditional medicine.

  The fourth fraction of n-hexane extract was obtained by separation at a column chromatography process with silica as the stationary phase and chloroform as the mobile phase. Identification of compounds in the fourth fraction was conducted by phytochemical screening. Structure elucidation of the compounds discovered in the isolate was conducted by GC-MS and UV-Vis spectrometry. Isolate was obtained by the fourth fraction separation in a preparative thin layer chromatography process with silica as the stationary phase and chloroform as the mobile phase.

  From the phytochemical screening, it was discovered that the fourth fraction contains steroid. Structure elucidation showed that the isolate contained lutein and compounds of a steroid with cholesta-2,4-diene skeleton, 1- pentadecene, 1-heptadecene, 1-octadecene, 4-tetradecanol, tricosyl alcohol, and n- octadecane.

  

Keywords: Compounds Identification, n-Hexane Extract, Binahong Leaves,

Anredera cordifolia (Ten.) Steenis

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Masalah Dewasa ini, penemuan obat baru tidak lagi dilakukan dengan coba-coba, melainkan dengan mengembangkan senyawa-senyawa aktif yang telah ada. Penemuan senyawa obat baru memiliki proses yang relatif lama dan rumit. Banyak usaha pengembangan obat dilakukan dengan mengeksplorasi senyawa

  aktif dari sumber daya alam yang banyak tersedia, misalnya tumbuhan. Senyawa aktif yang banyak dikembangkan ini merupakan hasil metabolisme sekunder tanaman. Metabolit sekunder inilah yang banyak bertanggung jawab pada efek farmakologis pada manusia. Metabolit sekunder tiap tanaman berbeda, sehingga khasiat tiap-tiap tanaman pun berbeda.

  Banyak analisis tumbuhan dipusatkan pada isolasi dan identifikasi kandungan metabolit sekunder dalam kelompok jenis tumbuhan. Analisis ini bertujuan untuk menemukan beberapa kandungan yang merupakan senyawa baru ataupun tidak biasa. Selain itu, tujuan dilakukannya analisis fitokimia adalah untuk menentukan senyawa aktif penyebab efek racun maupun bermanfaat (Harborne, 1984).

  Daun tanaman binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) atau

  

madeira vine dipercaya dapat mengobati kerusakan ginjal, diabetes,

  pembengkakan jantung, muntah darah, tifus, wasir, rematik, pemulihan pasca operasi, pemulihan pasca melahirkan, menyembuhkan segala luka dalam dan khitanan, radang usus, melancarkan dan menormalkan peredaran dan tekanan darah, sembelit, sesak napas, sariawan berat, pusing-pusing, sakit perut, menurunkan panas tinggi, menyuburkan kandungan, maag, asam urat, keputihan, pembengkakan hati, meningkatkan vitalitas dan daya tahan tubuh (Manoi, 2009).

  Khasiat yang dipercaya ini, harus dapat dibuktikan melalui suatu penelitian bahwa kandungan metabolit sekunder di dalam daun binahong dapat memenuhi khasiat tersebut. Daun binahong menurut hasil penelitian sebelumnya secara kultur in vitro mengandung flavonoid, alkaloid, terpenoid, dan saponin (Manoi, 2009).

  Flavonoid, alkaloid, terpenoid, dan saponin merupakan suatu cara penggolongan senyawa, dimana masing-masing golongan memiliki banyak anggota senyawa. Oleh karena itu, dilakukan penelitian ini agar diketahui kandungan senyawa metabolit sekunder dalam tanaman binahong.

  Senyawa yang diteliti pada penelitian ini, dikhususkan pada senyawa- senyawa metabolit sekunder yang non-polar yang larut dalam pelarut n-heksana dalam ekstraksi daun tanaman binahong yang digunakan. Senyawa metabolit sekunder yang non-polar yang kemungkinan besar terekstraksi ke dalam ekstrak

  n-heksana daun binahong, terdiri dari golongan triterpenoid dan steroid.

  Terpenoid diketahui sangat berguna bagi penyembuhan beberapa penyakit seperti; 1. glikosida jantung sebagai peningkat kontraksi jantung, 2. saponin-spirostane, sitosterol, dan stigmasterol, untuk pengobatan steroidal seperti kontrasepsi, anabolik, dan agen antiinflamasi,

  3. berbagai macam anggota senyawa triterpenoid sebagai sitostatik, insektisida, agen antiinflamasi, analgesik, dan sebagainya (Bruneton, 1999).

  Aktivitas farmakologis dari triterpenoid dan steroid yaitu sebagai agen antiinflamasi berkaitan erat dengan aktivitas farmakologis daun binahong sebagai agen penyembuh luka. Sehingga muncul dugaan bahwa aktivitas daun binahong sebagai penyembuh luka disebabkan oleh kandungan senyawa golongan triterpenoid dan steroid. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui adanya triterpen dan steroid, dengan menganalisis struktur salah satu senyawanya.

  Analisis struktural dari salah satu senyawa yang terdapat dalam ekstrak

  

n-heksana daun binahong dilakukan dengan metode elusidasi. Hal ini untuk

  memastikan senyawa yang terkandung dalam daun binahong. Penelitian struktur senyawa ini bermanfaat dalam pengembangan obat dengan menggunakan senyawa dari tanaman sebagai senyawa penuntun (lead compound) yang bermanfaat dalam mensintesis senyawa baru yang memiliki efek farmakologis.

  Selain itu, informasi struktur senyawa dari tanaman ini berguna untuk mengembangkan obat tradisional yang semula berdasarkan pada keterangan empiris, yaitu pengalaman yang diajarkan secara turun-temurun, berubah menjadi obat tradisional yang memiliki khasiat berdasarkan bukti penelitian (evidence

  based), serta sebagai awal dari proses standardisasi obat tradisional.

  Bahan dari alam terutama tumbuhan, mengandung sangat banyak senyawa didalamnya. Oleh karena itu, dalam menganalisis struktur salah satu senyawa diperlukan proses penghilangan senyawa lain, sehingga jumlah senyawa dalam fraksi yang dianalisis dapat diminimalkan. Untuk itu, perlu dilakukan beberapa pemisahan yang dilakukan dengan proses kromatografi kolom yang dilanjutkan dengan kromatografi lapis tipis preparatif.

  Dari hasil kromatografi kolom eluat dikelompokkan menjadi 5 fraksi. Fraksi I telah dianalisis oleh Du’a (2012), yaitu gabungan eluat dengan profil KLT (kromatografi lapis tipis) dengan Rf 0,86-0,92 pada fase diam silika gel dan fase gerak kloroform. Fraksi II, III, dan V tidak dianalisis karena berwarna hijau, sehingga diperkirakan mengandung klorofil. Oleh karena itu, fraksi IV yang dianalisis dalam penelitian ini.

  Untuk menganalisis kandungan dalam fraksi IV, dilakukan isolasi lanjutan dengan kromatografi lapis tipis, sehingga dapat dihasilkan isolat yang murni secara KLT. Analisis struktur senyawa kimia dalam isolat tersebut dapat dilakukan dengan menggunakan spektrofotometri massa (MS) dan spektrofotometri Ultraviolet-Visibel (UV-VIS).

B. Permasalahan

  Dari latar belakang di atas, maka dapat disimpulkan bahwa permasalahan yang dijumpai adalah:

  1. Golongan senyawa metabolit sekunder apakah yang terkandung dalam fraksi

  IV ekstrak n-heksana daun binahong?

  2. Bagaimanakah struktur dari senyawa metabolit sekunder yang terkandung di dalam fraksi IV ekstrak n-heksana daun binahong?

C. Keaslian Penelitian

  Penelitian yang telah dilakukan terhadap daun binahong lebih banyak terkonsentrasi pada pengujian efek ekstraknya. Telah dilakukan penelitian penetapan kadar asam ursolat dalam ekstrak kloroform daun binahong dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik (Wibisono, 2010). Dalam penelitian tersebut dinyatakan bahwa dari kromatogram yang didapat, waktu retensi salat satu peak sama dengan waktu retensi baku asam ursolat. Maka, penelitian ini tidak sama dengan penelitian yang dilakukan Wibisono (2010).

  Penelitian yang telah dilakukan untuk mengidentifikasi senyawa kimia dilakukan secara in vitro yang mengidentifikasikan adanya flavonoid, alkaloid, terpenoid, dan saponin dalam daun Binahong (Manoi, 2009).

  Penelitian lain dilakukan untuk mengisolasi senyawa triterpenoid dari ekstrak metanol, dilakukan oleh Muhammad (2011) dan Saroh, Winarti, dan Djamil (2012), yang didapatkan senyawa yang mirip dengan boussingosida (Muhamad, 2011) serta diperkirakan terdapat senyawa adenin. Djamil, Wahyudi, Wahono, dan Hanafi (2012), berhasil mengisolasi dan mengidentifikasi 8-

glucopyranosyl-4’,5,7,-trihydroxyflavone dari ekstrak methanol daun binahong.

  Ketiga penelitian ini berbeda dengan penelitian yang dilakukan, dimana identifikasi akan dilakukan pada ekstrak n-heksana daun Binahong. Karena polaritas metanol dan n-heksana sangat berbeda, maka diperkirakan kandungan senyawa dalam kedua ekstrak tersebut berbeda.

  Penelitian terbaru dilakukan oleh Facrhiyah dan Kusrini (2012) yang melakukan isolasi, identifikasi, dan uji sitotoksik senyawa steroid dari daun binahong. Dalam penelitian ini, digunakan ekstrak n-heksana dengan isolasi dengan metode kromatografi kolom dan kromatografi lapis tipis preparatif. Isolat yang didapatkan dianalisis strukturnya dan didapatkan senyawa stigmasterol. Penelitian ini berbeda dengan penelitian ini mengingat bahwa di dalam ekstrak n- heksana masih terdapat banyak senyawa lain yang tidak teridentifikasi oleh Facrhiyah dan Kusrini (2012).

D. Tujuan Penelitian

  Tujuan dilakukan penelitian ini adalah untuk mengetahui golongan senyawa serta untuk mengetahui struktur dari salah satu senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam fraksi IV ekstrak n-heksana daun binahong.

E. Manfaat Penelitian

  1. Manfaat praktis

  Manfaat dilakukannya penelitian ini adalah untuk mendapatkan informasi mengenai salah satu kandungan senyawa dari daun tanaman binahong.

  2. Manfaat teoretis

  Manfaat teoretis dilakukannya penelitian ini adalah untuk mengembangkan senyawa obat baru dengan memodifikasi struktur (sebagai lead

  

compound). Selain itu, serta sebagai awal dalam proses standardisasi obat

  tradisional dan pengembangan obat tradisional yang berdasarkan pada bukti penelitian (evidence based). Obat tradisional yang berdasarkan penelitian maksudnya adalah dapat membuktikan khasiat, melalui kandungan kimia dalam daun binahong. Standardisasi obat tradisional meliputi profil farmakologis tanaman dan kadar zat berkhasiat dalam tanaman. Penelitian ini merupakan awal dari standarisasi dimana, sebelum menetapkan profil farmakologis dan kadar zat berkhasiat, diperlukan suatu analisis kandungan kimia tanaman itu sendiri.

  

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)

Gambar 1. Tanaman binahong

Tanaman binahong atau Anredera cordifolia (Ten.) Steenis, menurut

Wagner et al (cit. Starr, Starr, and Loope, 2003) masuk dalam family Basellaceae dan

genus Anredera yang terdiri dari 5-10 spesies dari Amerika bagian tropis. Anredera

cordifolia (Ten.) Steenis memiliki sinonim Bossingaultia cordifolia Ten.:

Boussingaultia gracilis Miers: serta Boussingaultia pseudobasselloides Haum. Nama

umum yang sering digunakan yaitu: Madeira vine, mignonette vine, lamb’s tail, serta

Anredera.

  9 Tanaman binahong merupakan tanaman sepanjang tahun, tanaman

merambat, menutup semak atau tanah. Batang ramping, melilit, dan tanpa bulu

hingga sekitar 30 meter panjangnya, awalnya berwarna hijau kemerahan dan berupa

herba (berbatang basah), kemudian menjadi coklat, mengelupas dan menjadi berkayu

dan mencapai diameter 2–3 cm. Madeira vine menghasilkan umbi berdaging pada

kedua akar (rimpang dengan diameter sekitar 20 cm) dan pada buku-buku batangnya.

Umbi pada batang ini seperti kutil kecil yang tidak teratur berwarna cokelat terang

atau hijau dan variasi ukuran dengan diameter 5 mm-25 cm, sering membawa

sejumlah tunas pada ketiak daun. Daun subsessile atau hampir duduk pada batang,

berbentuk jantung atau dengan tangkai daun hingga 1–12 cm (dan jarang di atas 15

cm) panjangnya, secara luas berbentuk bulat telur, kadang berbentuk lanset, maupun

berbentuk jantung, berdaging hingga berair tergantung pada paparan; ujung daun

tumpul. Helaian daun berwarna hijau terang, hijau gelap pada permukaan atas,

mengkilap, terasa basah ketika disentuh, 1–15 cm panjangnya dan 0.8–11 cm

lebarnya (Smith, Lawson, Turnbull, dan Downey, 2007).

  Bracteola atas rata dengan bunga, bulat hingga elips, bunga tandan tidak

bercabang atau bercabang 2-4 dengan malai tipis, panjang 4-25 cm; bractea lebih

rendah dari tangkai bunga, gigih; tangkai bunga 1,5-2 mm; bracteola terendah

berwarna putih kehijauan, sedikit lebih pendek dari perianth (kelopak dan mahkota

bunga), perianth berwarna putih, tingginya 5,5-8 mm, cuping bulat telur-lonjong,

tumpul; tangkai sari dan tangkai putik berwarna putih. Berasal dari daerah tropis di

  10 Amerika Selatan, di Jawa dibudidayakan pada ketinggian rendah (Backer dan Van den Brink, 1965).

  Daun tanaman binahong atau madeira vine dipercaya dapat mengobati

kerusakan ginjal, diabetes, pembengkakan jantung, muntah darah, tifus, wasir,

rematik, pemulihan pasca operasi, pemulihan pasca melahirkan, menyembuhkan

segala luka dalam dan khitanan, radang usus, melancarkan dan menormalkan

peredaran dan tekanan darah, sembelit, sesak napas, sariawan berat, pusing-pusing,

sakit perut, menurunkan panas tinggi, menyuburkan kandungan, maag, asam urat,

keputihan, pembengkakan hati, meningkatkan vitalitas dan daya tahan tubuh (Manoi,

2009).

B. Ekstraksi

  Ekstraksi merupakan penarikan zat utama yang diinginkan dari bahan

mentah obat dengan menggunakan pelarut yang dapat melarutkan zat yang diinginkan

tersebut (Ansel, 2005). Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI (1995)

dalam farmakope IV menyatakan bahwa : “Ekstrak adalah sediaan pekat yang

diperoleh dengan mengekstrasi zat aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani

menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut

diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga

memenuhi baku yang ditetapkan”.

  Pemilihan pelarut penting untuk menentukan senyawa metabolit eksoseluler

atau endoseluler yang dapat terekstraksi. Pada sampel kering, pelarut dengan polaritas

  11

rendah sebagian besar hanya mengekstraksi metabolit eksoseluler saja. Tetapi pada

pelarut alkoholik dapat memecah membran sel dan mengekstraksi sebagian besar

material endoseluler (Colegate dan Molyneux, 1993).

  Telah diketahui sebelumnya bahwa senyawa organik hanya dapat cenderung

larut dalam pelarut organik daripada larut dalam air, serta garam anorganik hanya

dapat larut dalam air. Hanya senyawa organik yang memiliki gugus polar seperti

hidroksil, sulfonat, nitrat dan gugus hidrofilik lainnya yang memiliki kemungkinan

yang cukup tinggi untuk larut dalam air (Basset, Denney, Jeffery, Mendham, 1994).

C. Metabolit Sekunder pada Tanaman

1. Senyawa fenolik

  Senyawa fenolik merupakan suatu senyawa yang setidaknya memiliki satu

gugus aromatis yang terikat setidaknya satu gugus hidroksil, bebas, ataupun terikat

dengan gugus yang lain. Beberapa fenol dapat dilihat secara kasat mata, atau dapat

dilihat dibawah sinar UV ataupun dengan reaksi warna. Senyawa fenolik biasanya

berada dalam ekstrak etanolik suatu tumbuhan (Bruneton, 1999). Cara klasik untuk

mendeteksi senyawa fenol sederhana ialah dengan menambahkan larutan besi (III)

klorida 1 % dalam air atau etanol kepada larutan cuplikan, yang menimbulkan warna

hijau, merah, ungu, biru, atau hitam yang kuat (Harborne, 1984).

  12 O H Gambar 2. Struktur fenol

  Secara umum, fenol larut dalam pelarut organik polar, larut di natrium

hidroksida, dan larutan karbonat. Asam fenolat larut dengan bikarbonat dan dapat

diekstraksi dengan pelarut organik dengan kondisi sedikit asam. Glikosida dari

komponen fenolik, umumnya larut di air. Semua senyawa fenolik tidak stabil. Semua

fenol dapat dengan segera teroksidasi khususnya pada kondisi basa (Bruneton, 1999).

a. Flavonoid. Flavonoid hampir selalu larut dalam air. Flavonoid adalah senyawa yang bertanggung jawab pada pembentukkan warna pada tanaman.

  

Flavonoid yang tidak berwarna berkontribusi pada warna tanaman sebagai

kopigment: sebagai contoh kopigmen flavon dan flavonol yang tidak berwarna

melindungi antosianin. Dalam beberapa kasus, molekul menyerap daerah spektrum

dekat UV, yang berfungsi sebagai atraktan pada beberapa jenis serangga (Bruneton,

1999). .

  

O

O

Gambar 3. Kerangka umum senyawa golongan flavonoid (Bruneton, 1999).

  13 Secara umum glikosida larut di air dan alkohol, hanya beberapa senyawa

yang sukar larut dalam air (rutin dan hesperidin). Aglikonnya kebanyakan larut di

pelarut nonpolar, ketika terdapat setidaknya satu gugus fenolik bebas, yang larut

dalam larutan alkali hidroksida (Bruneton, 1999).

  Flavonoid lipofil dari jaringan “superficial leaf” secara langsung terekstrasi

dengan pelarut dengan polaritas medium (seperti diklormetan); kemudian harus

dipisahkan dari lilin dan lemak yang diekstraksi secara berkelanjutan (dapat dicuci

heksana) (Bruneton, 1999). .

  Glikosida dapat terekstraksi, sering pada suhu tinggi dengan aseton atau

alkohol (etanol, metanol) yang dicampur dengan air (20 – 50 %). Petroleum eter

dengan ekstraksi cair-cair dapat menghilangkan klorofil dan lipid. Dietil eter akan

mengekstrak aglikon bebas, dan etil asetat dapat melarutkan sebagian besar glikosida.

  

Sakarida bebas tertinggal dalam fase air dengan glikosida yang sangat polar sedikit

terikut didalamnya (Bruneton, 1999).

  Ada beberapa reaksi warna untuk mengidentifikasi flavonoid dalam bentuk glikosida maupun aglikonnya.

i. Reaksi Cyanidin, dengan serbuk magnesium (untuk flavanon dan dihidroflavanol) atau dengan zink, dengan adanya asam hidroklorida.

  

ii. Dengan dilihat dibawah sinar UV sebelumnya dan disemprot dengan ammonium

klorida dan setelah diuapi ammonia (perubahan warna maupun fluorosent yang

terjadi menunjukan tipe flavonoid) (Bruneton, 1999).

  14 Tabel I. Warna flavonoid dengan sinar tampak dan sinar ultraviolet (Harborne,

1984)

  Warna dengan UV Warna Petunjuk

Sendiri Dengan amonia

  Jingga Jingga redup, merah Antosianidin-3- Merah Biru atau merah muda glikosida Merah muda Jingga Fluoresensi merah, Kebanyakan Merah kuning, atau merah Biru Antosianidin-3- Merah muda jambu glikosida

  6-hidroksi flavonol Coklat tua atau dan flavon; beberapa Coklat tua atau hitam khalkon glikosida hitam

  Kuning redup Merah tua atau Kebanyakan kalkon jingga redup Kuning redup atau Jingga redup atau

  Auron hijau kuning merah Kuning redup atau Kebanyakan Kuning pucat Coklat tua coklat kuning glikosida flavonol Kuning cerah-hijau,

  Kebanyakan coklat tua glikosida flavon, biflavonil.

  Kebanyakan Tak berwarna Merah tua Coklat pudar isoflavon dan flavanonol 5-deoksiisoflavon

  Biru lemah Biru kuat dan 7,8-dihidrokdi flavanon Flavanon dan Kuning pucat atau

  Merah tua flavanonol 7- hijau kuning glikosida

  b. Tanin. Tanin merupakan bahan polimer dari tumbuhan yang merupakan

senyawa polifenol. Secara kimia terdapat 2 jenis tanin, yaitu tanin terkondensasi

(seperti protosianidin) dan tanin yang terhidrolisiskan (seperti asam galat dan asam

elagat). Penentuan struktur kimia tanin sukar dilakukan karena tingkat kerumitan

yang cukup tinggi (Harborne, 1984).

  15 Dalam pengujiannya, tanin direaksikan dengan FeCl 3 dan larutan gelatin.

  Perubahan warna menjadi hijau kehitaman pada reaksi dengan FeCl 3 menunjukkan

adanya tanin terhidrolisa, jika menjadi hijau kecoklatan menunjukkan adanya tanin

terkondensasi. Jika terbentuk endapan dengan larutan gelatin maka larutan uji positif

mengandung tanin (Levita, Musfiroh, Mustarichie, 2011).

2. Alkaloid

  Penemu alkaloid, W. Meisner memperkenalkan senyawa alam yang bereaksi

seperti basa. Pada awalnya alkaloid didefinisikan sebagai senyawa yang mengandung

nitrogen. Karena berasal dari alam dan distribusinya yang terbatas, alkaloid memiliki

struktur yang kompleks (Bruneton, 1999).

  Alkaloid memiliki range berat molekul dari 100 hingga 900. Dimana

kebanyakan basa tidak mengandung atom oksigen dalam bentuk cair, sedangkan yang

mengandung atom oksigen terdapat dalam bentuk kristal padat. Hampir semua kristal

basa memiliki rotasi optis, dan memiliki titik leleh yang tajam, tanpa terdekomposisi,