Pengaruh Pemberian Curcuminoid dalam Mencegah dan Memperbaiki Kerusakan Fibroblas Koklea Rattus Norvegicus Model Diabetes Mellitus Ditinjau dari Ekspresi Kolagen Tipe IV
62
LAMPIRAN
Sertifikat Kelaikan Etik
Universitas Sumatera Utara
63
Gambar Prosedur Penelitian
A
B
C
D
E
F
G
H
Keterangan:
A. Penimbangan berat badan dan pemilihan tikus sesuai kriteria
inklusi
B. Kandang tikus dan tikus yang dipilih secara acak
C. STZ yang akan diinjeksikan ke tikus intraperitoneal
Universitas Sumatera Utara
64
D. Curcuminoid diberikan ke tikus melalui NGT
E. Tulang temporal tikus
F. Tulang temporal tikus dalam buffer formalin 10%
G. Blok parafin masing-masing kelompok
H. Penghitungan hasil pewarnaan IHC
Gambar Prosedur Pemeriksaan Imunohistokimia Kolagen Tipe IV
1
2
4B
4A
6A
8A
3A
5A
7A
6B
8B
3B
5B
7B
9
Keterangan:
1. Persiapan dan memanaskan
sediaan pada inkubator
2. Rehidrasi
dengan
alkohol
berseri
3A dan B. Bloking protein non-spesifik dengan 5% FBS yangmengandung
0.25% Triton X-100
4A dan B. Inkubasi dengan antibodi primer polyclonal Anti-COL4A2
5A dan B. Inkubasi dengan antibodi sekunder (Biotinylated secondary Ab)
Universitas Sumatera Utara
65
6A dan B. Inkubasi dengan menggunakan HRP streptavidin
7A dan B. Inkubasi dengan DAB
8.
Counterstainingdengan Mayer Hematoxilin
9.
Mountingdengan menggunakan entelan dan tutup dengan
cover glass, lalu pengamatan pada mikroskop
Universitas Sumatera Utara
66
Data Sampel Penelitian
Jumlah ekspresi kolagen tipe IV
No
Kelompok
1
1
4
2
1
4
3
1
4
4
1
4
5
2
1
6
2
2
7
2
1
8
2
1
9
3
2
10
3
1
11
3
4
12
3
2
13
4
9
14
4
1
15
4
9
16
4
6
17
5
9
18
5
4
19
5
4
20
5
6
21
6
6
22
6
9
23
6
9
24
6
9
fibroblas koklea
Universitas Sumatera Utara
67
Hasil Analisis Statistik Kolagen Tipe IV
Data deskriptif kelompok 1:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
4
4
Mean
4.00
Std. Deviation
.000
Data deskriptif kelompok 2:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
1
2
Mean
1.25
Std. Deviation
.500
Data deskriptif kelompok 3:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
1
4
Mean
2.25
Std. Deviation
1.258
Data deskriptif kelompok 4:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
1
9
Mean
6.25
Std. Deviation
3.775
Data deskriptif kelompok 5:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
4
9
Mean
5.75
Std. Deviation
2.363
Universitas Sumatera Utara
68
Data deskriptif kelompok 6:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
6
Mean
9
Std. Deviation
8.25
1.500
Uji normalitas kelompok 1 dan 2:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
df
.319
a
Shapiro-Wilk
Sig.
8
.016
Statistic
df
.729
Sig.
8
.005
a. Lilliefors Significance Correction
Uji Mann-Whitney kelompok 1 dan 2:
Test Statistics
a
Ekspresi
Kolagen Tipe IV
Mann-Whitney U
.000
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
.011
b
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.029
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
Uji normalitas kelompok 2 dan 3:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
.280
df
a
Shapiro-Wilk
Sig.
8
.065
Statistic
.745
df
Sig.
8
.007
a. Lilliefors Significance Correction
Universitas Sumatera Utara
69
Uji Mann-Whitney kelompok 2 dan 3:
Test Statistics
a
Ekspresi
Kolagen Tipe IV
Mann-Whitney U
3.500
Wilcoxon W
13.500
Z
-1.423
Asymp. Sig. (2-tailed)
.155
b
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.200
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
Uji normalitas kelompok 2 dan 4:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
df
.309
a
Shapiro-Wilk
Sig.
8
.024
Statistic
.737
df
Sig.
8
.006
a. Lilliefors Significance Correction
Uji Mann-Whitney kelompok 2 dan 4:
Test Statistics
a
Ekspresi
Kolagen Tipe IV
Mann-Whitney U
2.500
Wilcoxon W
12.500
Z
-1.703
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.089
b
.114
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
Universitas Sumatera Utara
70
Uji normalitas kelompok 2 dan 5:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
df
a
Shapiro-Wilk
Sig.
.199
Statistic
*
8
.200
df
.859
Sig.
8
.119
*. This is a lower bound of the true significance.
a. Lilliefors Significance Correction
Uji T kelompok 2 dan 5:
Independent Samples Test
Levene's
Test for
Equality of
Variances
t-test for Equality of Means
95% Confidence
Interval of the
Ekspresi Equal variances
Kolagen assumed
Tipe IV
Mean
Std. Error
tailed)
Difference
Difference
F
Sig.
t
4.840
.070
-3.726
6
.010
-4.500
-3.726
3.268
.029
-4.500
Equal variances
not assumed
df
Sig. (2-
Difference
Lower
Upper
1.208
-7.455
-1.545
1.208
-8.171
-.829
Uji normalitas kelompok 2 dan 6:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
.261
df
a
Shapiro-Wilk
Sig.
8
.117
Statistic
.767
df
Sig.
8
.013
a. Lilliefors Significance Correction
Universitas Sumatera Utara
71
Uji Mann-Whitney kelompok 2 dan 6:
a
Test Statistics
Ekspresi
Kolagen Tipe IV
Mann-Whitney U
.000
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.428
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.015
b
.029
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
Universitas Sumatera Utara
72
Personalia Penelitian
I. Peneliti Utama
Nama
: dr. Faathir Agung A.Taufika
NIP
: 19850821 201001 1 015
Pangkat/Golongan : Penata Muda Tk. I (III/b)
Jabatan
: PPDS T.H.T.K.L.
Fakultas
: Kedokteran
Perguruan Tinggi : Universitas Sumatera Utara
Bidang Keahlian
: T.H.T.K.L.
Waktu Disediakan : 12 Jam/Minggu
II. Komisi Pembimbing
A. Nama
NIP
: Dr. dr. Tengku Siti Hajar Haryuna, Sp.T.H.T.K.L.
: 197906202002122003
Pangkat/Golongan : Pembina (IV/a)
Jabatan
: Lektor Kepala (Ketua Departemen T.H.T.K.L. FK USU)
Fakultas
: Kedokteran
Perguruan Tinggi : Universitas Sumatera Utara
Bidang Keahlian
: T.H.T.K.L.
Waktu Disediakan : 6 Jam/Minggu
B. Nama
NIP
: Dr. dr. Farhat, M.Ked(ORL-HNS), Sp.T.H.T.K.L.(K), FICS
: 197003162002121002
Pangkat/Golongan : Pembina (IV/a)
Jabatan
: Lektor Kepala
Fakultas
: Kedokteran
Perguruan Tinggi : Universitas Sumatera Utara
Bidang Keahlian
: T.H.T.K.L.
Waktu Disediakan : 6 Jam/Minggu
Universitas Sumatera Utara
73
Daftar Riwayat Hidup
Data Pribadi
Nama
: dr. Faathir Agung A.Taufika
NIP
: 19850821 201001 1 015
Tempat/Tanggal lahir
: Medan/21 Agustus 1985
Pangkat/Golongan
: Penata Muda Tk. I (III/b)
Jabatan
: PPDS T.H.T.K.L.
Agama
: Islam
AlamatRumah
: Jl. Sei Padang No. 46 Medan
No.HP
: 081362098086
Alamat e-mail
: fathir_aja@yahoo.com
Instansi
: Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera
Utara
Nama Orang Tua
: 1. Ayah : H. Taufik Hamidi
2. Ibu
: Alm. Hj. Ainul Mardhiah
Pendidikan Formal
1991 - 1997
SD Harapan 2 Medan
1997 - 2000
SLTP Harapan 1 Medan
2000 - 2003
SMU Negeri 2 Medan
2003 - 2009
S-1 Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sumatera
Utara
2012 - sekarang
1. Peserta S-2 Magister Kedokteran Klinik
2. Peserta PPDS T.H.T.K.L. FK USU
Universitas Sumatera Utara
LAMPIRAN
Sertifikat Kelaikan Etik
Universitas Sumatera Utara
63
Gambar Prosedur Penelitian
A
B
C
D
E
F
G
H
Keterangan:
A. Penimbangan berat badan dan pemilihan tikus sesuai kriteria
inklusi
B. Kandang tikus dan tikus yang dipilih secara acak
C. STZ yang akan diinjeksikan ke tikus intraperitoneal
Universitas Sumatera Utara
64
D. Curcuminoid diberikan ke tikus melalui NGT
E. Tulang temporal tikus
F. Tulang temporal tikus dalam buffer formalin 10%
G. Blok parafin masing-masing kelompok
H. Penghitungan hasil pewarnaan IHC
Gambar Prosedur Pemeriksaan Imunohistokimia Kolagen Tipe IV
1
2
4B
4A
6A
8A
3A
5A
7A
6B
8B
3B
5B
7B
9
Keterangan:
1. Persiapan dan memanaskan
sediaan pada inkubator
2. Rehidrasi
dengan
alkohol
berseri
3A dan B. Bloking protein non-spesifik dengan 5% FBS yangmengandung
0.25% Triton X-100
4A dan B. Inkubasi dengan antibodi primer polyclonal Anti-COL4A2
5A dan B. Inkubasi dengan antibodi sekunder (Biotinylated secondary Ab)
Universitas Sumatera Utara
65
6A dan B. Inkubasi dengan menggunakan HRP streptavidin
7A dan B. Inkubasi dengan DAB
8.
Counterstainingdengan Mayer Hematoxilin
9.
Mountingdengan menggunakan entelan dan tutup dengan
cover glass, lalu pengamatan pada mikroskop
Universitas Sumatera Utara
66
Data Sampel Penelitian
Jumlah ekspresi kolagen tipe IV
No
Kelompok
1
1
4
2
1
4
3
1
4
4
1
4
5
2
1
6
2
2
7
2
1
8
2
1
9
3
2
10
3
1
11
3
4
12
3
2
13
4
9
14
4
1
15
4
9
16
4
6
17
5
9
18
5
4
19
5
4
20
5
6
21
6
6
22
6
9
23
6
9
24
6
9
fibroblas koklea
Universitas Sumatera Utara
67
Hasil Analisis Statistik Kolagen Tipe IV
Data deskriptif kelompok 1:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
4
4
Mean
4.00
Std. Deviation
.000
Data deskriptif kelompok 2:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
1
2
Mean
1.25
Std. Deviation
.500
Data deskriptif kelompok 3:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
1
4
Mean
2.25
Std. Deviation
1.258
Data deskriptif kelompok 4:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
1
9
Mean
6.25
Std. Deviation
3.775
Data deskriptif kelompok 5:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
4
9
Mean
5.75
Std. Deviation
2.363
Universitas Sumatera Utara
68
Data deskriptif kelompok 6:
Descriptive Statistics
N
Minimum
KolagenTipeIV
4
Valid N (listwise)
4
Maximum
6
Mean
9
Std. Deviation
8.25
1.500
Uji normalitas kelompok 1 dan 2:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
df
.319
a
Shapiro-Wilk
Sig.
8
.016
Statistic
df
.729
Sig.
8
.005
a. Lilliefors Significance Correction
Uji Mann-Whitney kelompok 1 dan 2:
Test Statistics
a
Ekspresi
Kolagen Tipe IV
Mann-Whitney U
.000
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
.011
b
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.029
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
Uji normalitas kelompok 2 dan 3:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
.280
df
a
Shapiro-Wilk
Sig.
8
.065
Statistic
.745
df
Sig.
8
.007
a. Lilliefors Significance Correction
Universitas Sumatera Utara
69
Uji Mann-Whitney kelompok 2 dan 3:
Test Statistics
a
Ekspresi
Kolagen Tipe IV
Mann-Whitney U
3.500
Wilcoxon W
13.500
Z
-1.423
Asymp. Sig. (2-tailed)
.155
b
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.200
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
Uji normalitas kelompok 2 dan 4:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
df
.309
a
Shapiro-Wilk
Sig.
8
.024
Statistic
.737
df
Sig.
8
.006
a. Lilliefors Significance Correction
Uji Mann-Whitney kelompok 2 dan 4:
Test Statistics
a
Ekspresi
Kolagen Tipe IV
Mann-Whitney U
2.500
Wilcoxon W
12.500
Z
-1.703
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.089
b
.114
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
Universitas Sumatera Utara
70
Uji normalitas kelompok 2 dan 5:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
df
a
Shapiro-Wilk
Sig.
.199
Statistic
*
8
.200
df
.859
Sig.
8
.119
*. This is a lower bound of the true significance.
a. Lilliefors Significance Correction
Uji T kelompok 2 dan 5:
Independent Samples Test
Levene's
Test for
Equality of
Variances
t-test for Equality of Means
95% Confidence
Interval of the
Ekspresi Equal variances
Kolagen assumed
Tipe IV
Mean
Std. Error
tailed)
Difference
Difference
F
Sig.
t
4.840
.070
-3.726
6
.010
-4.500
-3.726
3.268
.029
-4.500
Equal variances
not assumed
df
Sig. (2-
Difference
Lower
Upper
1.208
-7.455
-1.545
1.208
-8.171
-.829
Uji normalitas kelompok 2 dan 6:
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Ekspresi Kolagen Tipe IV
.261
df
a
Shapiro-Wilk
Sig.
8
.117
Statistic
.767
df
Sig.
8
.013
a. Lilliefors Significance Correction
Universitas Sumatera Utara
71
Uji Mann-Whitney kelompok 2 dan 6:
a
Test Statistics
Ekspresi
Kolagen Tipe IV
Mann-Whitney U
.000
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.428
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.015
b
.029
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
Universitas Sumatera Utara
72
Personalia Penelitian
I. Peneliti Utama
Nama
: dr. Faathir Agung A.Taufika
NIP
: 19850821 201001 1 015
Pangkat/Golongan : Penata Muda Tk. I (III/b)
Jabatan
: PPDS T.H.T.K.L.
Fakultas
: Kedokteran
Perguruan Tinggi : Universitas Sumatera Utara
Bidang Keahlian
: T.H.T.K.L.
Waktu Disediakan : 12 Jam/Minggu
II. Komisi Pembimbing
A. Nama
NIP
: Dr. dr. Tengku Siti Hajar Haryuna, Sp.T.H.T.K.L.
: 197906202002122003
Pangkat/Golongan : Pembina (IV/a)
Jabatan
: Lektor Kepala (Ketua Departemen T.H.T.K.L. FK USU)
Fakultas
: Kedokteran
Perguruan Tinggi : Universitas Sumatera Utara
Bidang Keahlian
: T.H.T.K.L.
Waktu Disediakan : 6 Jam/Minggu
B. Nama
NIP
: Dr. dr. Farhat, M.Ked(ORL-HNS), Sp.T.H.T.K.L.(K), FICS
: 197003162002121002
Pangkat/Golongan : Pembina (IV/a)
Jabatan
: Lektor Kepala
Fakultas
: Kedokteran
Perguruan Tinggi : Universitas Sumatera Utara
Bidang Keahlian
: T.H.T.K.L.
Waktu Disediakan : 6 Jam/Minggu
Universitas Sumatera Utara
73
Daftar Riwayat Hidup
Data Pribadi
Nama
: dr. Faathir Agung A.Taufika
NIP
: 19850821 201001 1 015
Tempat/Tanggal lahir
: Medan/21 Agustus 1985
Pangkat/Golongan
: Penata Muda Tk. I (III/b)
Jabatan
: PPDS T.H.T.K.L.
Agama
: Islam
AlamatRumah
: Jl. Sei Padang No. 46 Medan
No.HP
: 081362098086
Alamat e-mail
: fathir_aja@yahoo.com
Instansi
: Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera
Utara
Nama Orang Tua
: 1. Ayah : H. Taufik Hamidi
2. Ibu
: Alm. Hj. Ainul Mardhiah
Pendidikan Formal
1991 - 1997
SD Harapan 2 Medan
1997 - 2000
SLTP Harapan 1 Medan
2000 - 2003
SMU Negeri 2 Medan
2003 - 2009
S-1 Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sumatera
Utara
2012 - sekarang
1. Peserta S-2 Magister Kedokteran Klinik
2. Peserta PPDS T.H.T.K.L. FK USU
Universitas Sumatera Utara