Perbandingan Uji Aktivitas Antibakteri Antara Ekstrak Etanol Dari Serbuk Dan Serbuk Nano Daun Sirih Merah (Piper Crocatum Ruiz & Pav.) Terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus Dan Escherichia Coli

  LAMPIRAN Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan

  Lampiran 2. Tumbuhan daun sirih merah

  Tumbuhan daun sirih merah Daun sirih merah

  Lampiran 3. Simplisia daun sirih merah

  Simplisia daun sirih merah

  Lampiran 4. Rendemen dan susut pengeringan.

  Berat keseluruhan sampel segar = 750 g Berat keseluruhan simplisia kering = 150 g Rendemen simplisia = X 100%

  = X 100% = 20%

  Susut pengeringan = x 100% = 80%

  Rendemen ekstrak nano Berat serbuk simplisia = 100 g Berat ekstrak = 14,54 g Rendemen = x 100% x 100% = 14,54%

  =

  Rendemen ekstrak serbuk Berat serbuk simplisia = 100 g Berat ekstrak = 10,84 g Rendemen = x 100%

  = x 100% = 10,84%

  Lampiran 5. Bagan kerja pengolahan serbuk simplisia daun sirih merah Daun Sirih Merah

  Dicuci dari pengotor sampai bersih Ditiriskan Ditimbang berat basahnya

  

Daun Sirih Merah

  Dikeringkan pada suhu ± 40 ᵒC

  Ditimbang berat keringnya Dihaluskan dengan blender

  

Serbuk Simplisia Daun Sirih Merah

  Dimasukkan ke dalam wadah Ditambahkan etanol 70% sebanyak 750 ml Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil sesekali diaduk Dienptuangkan

  Maserat Ampas

  Dicuci kembali dengan etanol 70% sebanyak 250 ml

  Maserat Ampas

  Digabungkan lalu dibiarkan selama 2 hari Dienaptuangkan Diuapkan hingga kental Disimpan di dalam lemari pendingin

  Ekstrak Etanol Nano Daun Sirih Merah

  Lampiran 6. Bagan kerja pengolahan nano simplisia daun sirih merah

  Nano Simplisia Daun Sirih Merah Dimasukkan ke dalam wadah Ditambahkan etanol 70% sebanyak 750 ml Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil sesekali diaduk Dienaptuangkan

  Ampas Maserat

  Dicuci kembali dengan etanol 70% sebanyak 250 ml

  Maserat Ampas

  Digabungkan lalu dibiarkan selama 2 hari Dienaptuangkan Diuapkan hingga kental Disimpan di dalam lemari pendingin

  Ekstrak Etanol Nano Daun Sirih Merah

  

Lampiran 7. Bagan pengujian aktivitas antibakteri terhadap bakteri

Staphylococcus aureus

  Stok kultur

  Diambil 1 ose stok kultur bakteri

  Staphylococcus aureus

  Disuspensikan ke dalam 10 ml NaCl 0,9 % dihomogenkan

  o

  Diinkubasi pada suhu 37 C selama 2 - 3 jam Diukur kekeruhan pada panjang gelombang 580 nm sampai diperoleh transmitan 25%

  Inokulum bakteri

  Dimasukkan 0,1 ml inokulum ke dalam cawan petri Ditambahkan 15 ml MHA steril cair ke dalam cawan petri Dihomogenkan dan dibiarkan hingga memadat

  Media padat

  Ditanamkan pencadang kertas yang telah direndam ekstrak etanol (nano maupun serbuk simplisia) dengan berbagai konsentasi

  o

  Diinkubasi pada suhu 37 C selama 18 - 24 jam Diukur diameter daerah hambat di sekitar pencadang kertas

  Hasil

  

Lampiran 8. Bagan pengujian aktivitas antibakteri terhadap bakteri

Escherichia coli

  Stok kultur

  Diambil 1 ose stok kultur bakteri

  

Escherichia coli

  Disuspensikan ke dalam 10 ml NaCl 0,9 % dihomogenkan

  o

  Diinkubasi pada suhu 37 C selama 2 - 3 jam Diukur kekeruhan pada panjang gelombang 580 nm sampai diperoleh transmitan 25%

  Inokulum bakteri

  Dimasukkan 0,1 ml inokulum ke dalam cawan petri Ditambahkan 15 ml MHA steril cair ke dalam cawan petri Dihomogenkan dan dibiarkan hingga memadat

  Media padat

  Ditanamkan pencadang kertas yang telah direndam ekstrak etanol (nano maupun serbuk simplisia) dengan berbagai konsentasi

  o

  Diinkubasi pada suhu 37 C selama 18 - 24 jam Diukur diameter daerah hambat di sekitar pencadang kertas

  Hasil

  

Lampiran 9. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol nano simplisia

  G =

  L =

  Ekstrak etanol nano 6 mg/ml

  K =

  Ekstrak etanol nano 10 mg/ml

  I = Ekstrak etanol nano 20 mg/ml J =

  Ekstrak etanol nano 30 mg/ml

  H =

  Ekstrak etanol nano 40 mg/ml

  Ekstrak etanol nano 50 mg/ml

  daun sirih merah terhadap bakteri Staphylococcus aureus Keterangan:

  F =

  Ekstrak etanol nano 100 mg/ml

  D = Ekstrak etanol nano 200 mg/ml E =

  Ekstrak etanol nano 300 mg/ml

  C =

  Ekstrak etanol nano 400 mg/ml

  B =

  Ekstrak etanol nano 500 mg/ml

  A =

  Ekstrak etanol nano 5 mg/ml

  

Lampiran 10. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol serbuk simplisia

  G =

  L =

  Ekstrak etanol serbuk 6 mg/ml

  K =

  Ekstrak etanol serbuk 10 mg/ml

  H = Ekstrak etanol serbuk 30 mg/ml I = Ekstrak etanol serbuk 20 mg/ml J =

  Ekstrak etanol serbuk 40 mg/ml

  Ekstrak etanol serbuk 50 mg/ml

  daun sirih merah terhadap bakteri Staphylococcus aureus Keterangan:

  F =

  Ekstrak etanol serbuk 100 mg/ml

  C = Ekstrak etanol serbuk 300 mg/ml D = Ekstrak etanol serbuk 200 mg/ml E =

  Ekstrak etanol serbuk 400 mg/ml

  B =

  Ekstrak etanol serbuk 500 mg/ml

  A =

  Ekstrak etanol serbuk 5 mg/ml

  

Lampiran 11. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol nano simplisia

  G =

  L =

  Ekstrak etanol nano 6 mg/ml

  K =

  Ekstrak etanol nano 10 mg/ml

  J =

  Ekstrak etanol nano 20 mg/ml

  H = Ekstrak etanol nano 30 mg/ml I =

  Ekstrak etanol nano 40 mg/ml

  Ekstrak etanol nano 50 mg/ml

  daun sirih merah terhadap bakteri Escherichia coli Keterangan:

  F =

  Ekstrak etanol nano 100 mg/ml

  E =

  Ekstrak etanol nano 200 mg/ml

  C = Ekstrak etanol nano 300 mg/ml D =

  Ekstrak etanol nano 400 mg/ml

  B =

  Ekstrak etanol nano 500 mg/ml

  A =

  Ekstrak etanol nano 5 mg/ml

  

Lampiran 12. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol serbuk simplisia

  Ekstrak etanol serbuk 40 mg/ml

  E. coli

  E. coli A B D C E

  Ekstrak etanol serbuk 5 mg/ml

  L =

  Ekstrak etanol serbuk 6 mg/ml

  J = Ekstrak etanol serbuk 10 mg/ml K =

  Ekstrak etanol serbuk 20 mg/ml

  I =

  Ekstrak etanol serbuk 30 mg/ml

  H =

  G =

  daun sirih merah terhadap bakteri Escherichia coli Keterangan:

  Ekstrak etanol serbuk 50 mg/ml

  E = Ekstrak etanol serbuk 100 mg/ml F =

  Ekstrak etanol serbuk 200 mg/ml

  D =

  Ekstrak etanol serbuk 300 mg/ml

  C =

  Ekstrak etanol serbuk 400 mg/ml

  B =

  Ekstrak etanol serbuk 500 mg/ml

  A =

  I F G H

  

Lampiran 13. Hasil uji aktivitas antibakteri kontrol positif dan negatif terhadap

  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

  A _B

C D

  Keterangan:

  A =

  KP (Amoksisilin 30 µg/ml) pada bakteri Staphylococcus aureus

  B =

  KN pada bakteri Staphylococcus aureus

  C = KP (Amoksisilin 30 µg/ml) pada bakteri Escherichia coli D = KN pada bakteri Escherichia coli

  Lampiran 14. Data analisis statistika normalitas Staphylococcus aureus - Ekstrak etanol nano simplisia

  

Tests of Normality

_a Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk _* Statistic Df Sig. Statistic df Sig.

  Diameter_Daya_Hambat .111 36 .200 .941 36 .053

  a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance.

  Staphylococcus aureus - Ekstrak etanol serbuk simplisia

Tests of Normality

_a

  Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk _* Statistic df Sig. Statistic df Sig. Diameter_Daya_Hambat .107 36 .200 .936 36 .039

  a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance.

  Escherichia coli - Ekstrak etanol nano simplisia

Tests of Normality

_a

  Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig. Diameter_Daya_Hambat .127

  36 .154 .936 36 .038

  a. Lilliefors Significance Correction Escherichia coli - Ekstrak etanol serbuk simplisia

  

Tests of Normality

_a Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig.

  Diameter_Daya_Hambat .137 36 .085 .909 36 .006

  a. Lilliefors Significance Correction

  Lampiran 15. Data analisis statistika uji T Staphylococcus aureus

  Paired Samples Statistics Mean N Std. Deviation Std. Error Mean Pair 1 Nano 14.2969

  13 5.12916 1.42257 Serbuk 12.2346 13 4.59713 1.27501

  Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

  Pair 1 Nano & Serbuk 13 .992 .000

Paired Samples Test

  Paired Differences 95% Confidence Interval of the Difference

  Std. Std. Error Sig. (2- Mean Deviation Mean Lower Upper t df tailed) Pair Nano - 2.06231 .81109 .22496 1.57217 2.55245 9.168

  12 .000

  Lampiran 15. (Lanjutan) Escherichia coli

  Paired Samples Statistics Mean N Std. Deviation Std. Error Mean Pair 1 Nano 13.5000

  12 4.80010 1.38567 Serbuk 11.5992 12 4.33929 1.25265

  Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

  Pair 1 Nano & Serbuk 12 .989 .000

Paired Samples Test

  Paired Differences t df Sig.

  (2- Mean tailed) Std.

  Deviation Std. Error Mean 95% Confidence

  Interval of the Difference Lower Upper Pair 1 Nano -

  Serbuk 1.90083 .82782 .23897 1.37486 2.42680 7.954 11 .000

  Lampiran 16. Data analisis statistika anava dua arah Staphylococcus aureus

  

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:DiameterDayaHambat Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig. _a Corrected Model 1453.978

  23 63.216 3.740E3 .000 Intercept 13828.677 1 13828.677 8.181E5 .000 Konsentrasi 1362.026

  11 123.821 7.325E3 .000 Simplisia 87.627 1 87.627 5.184E3 .000 Konsentrasi * Simplisia 4.325

  11 .393 23.259 .000 Error .811 48 .017 Total 15283.466

  72 Corrected Total 1454.789

  71

  a. R Squared = ,999 (Adjusted R Squared = ,999) Escherichia coli

  

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:DiameterDayaHambat Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig. _a Corrected Model

  1453.978 23 63.216 3.740E3 .000 Intercept 13828.677 1 13828.677 8.181E5 .000 Konsentrasi 1362.026

  11 123.821 7.325E3 .000 Simplisia 87.627 1 87.627 5.184E3 .000 Konsentrasi * Simplisia 4.325

  11 .393 23.259 .000 Error .811 48 .017 Total 15283.466

  72 Corrected Total 1454.789

  71

  a. R Squared = ,999 (Adjusted R Squared = ,999)

  

Lampiran 17. Diameter daya hambat ekstrak etanol nano simplisia dan

  ekstrak etanol serbuk simplisia daun sirih merah terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus Konsentrasi

  (mg/ml) Diameter daya hambat (mm)

  Ekstrak etanol nano Ekstrak etanol serbuk D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D* 500 21,55 21,50 21,45 21,50 19,00 19,05 19,10 19,05

  400 20,38 20,40 20,30 20,36 18,15 18,10 18,00 18,08 300 19,72 19,75 19,70 19,72 17,25 17,20 17,28 17,24 200 18,47 18,50 18,49 18,48 16,00 16,02 15,90 15,97 100 17,00 16,85 16,80 16,88 14,55 14,50 14,45 14,50

  50 15,70 15,62 16,00 15,77 13,40 13,35 13,37 13,37 40 14,58 14,58 14,56 14,54 12,36 12,30 12,39 12,35 30 13,80 13,75 13,73 13,76 11,44 11,46 11,48 11,46 20 12,30 12,35 12,39 12,35 9,86 9,75 9,80 9,80 10 9,40 9,42 9,48 11,14 8,22 8,17 8,10 8,16 6 8,15 8,10 8,17 8,31 7,12 7,10 7,15 7,07

  5 7,00 7,00 7,10 7,05 - - - - 4 - - - - - - - - Keterangan: D1 = Diameter daya hambat pertumbuhan bakteri pada perlakuan pertama D2 = Diameter daya hambat pertumbuhan bakteri pada perlakuan kedua D3 = Diameter daya hambat pertumbuhan bakteri pada perlakuan ketiga D* = Rata-rata diameter daya hambat pertumbuhan bakteri

• = Tidak terdapat daya hambat pertumbuhan bakteri

  

Lampiran 18. Diameter daya hambat ekstrak etanol nano simplisia dan

  ekstrak etanol serbuk simplisia daun sirih merah terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli Konsentrasi

  (mg/ml) Diameter daya hambat (mm)

  Ekstrak etanol nano Ekstrak etanol serbuk D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D* 500 20,25 20,35 20,20 20,23 18,00 18,12 18,09 18,07

  400 19,00 18,98 19,02 19,00 16,80 17,05 17,87 16,89 300 18,00 17,80 18,00 17,93 16,00 15,70 15,86 15,85 200 17,10 17,23 16,76 17,14 15,05 15,10 15,05 15,07 100 16,27 16,15 16,20 16,21 13,85 14,02 14,07 13,98

  50 14,22 14,20 14,25 14,22 11,76 11,80 12,05 11,87 40 13,25 13,27 13,20 13,24 11,00 11,08 11,10 11,06 30 12,35 12,40 12,30 12,35 9,35 9,38 9,30 9,31 20 10,48 10,50 10,55 10,51 7,90 7,89 8,00 7,93 10 8,22 8,00 8,12 8,14 7,42 7,40 7,49 7,16 6 7,00 7,00 7,20 7,03 - - - -

  5 - - - - - - - - Keterangan: D1 = Diameter daya hambat pertumbuhan bakteri pada perlakuan pertama D2 = Diameter daya hambat pertumbuhan bakteri pada perlakuan kedua D3 = Diameter daya hambat pertumbuhan bakteri pada perlakuan ketiga D* = Rata-rata diameter daya hambat pertumbuhan bakteri

• = Tidak terdapat daya hambat pertumbuhan bakteri