Uji Efektivitas Nanopartikel Daun Sirih Merah (Piper Crocatum Ruiz & Pav.) Sebagai Penurun Kadar Kolesterol Pada Serum Darah Marmot (Cavia Cobaya)

  

Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan

  Lampiran 2. Gambar alat dan objek yang digunakan Microlab 300 (E-Merck)

  Reagensia Kolesterol (DIALAB)

  Lampiran 2. (Lanjutan) Hewan Uji (Marmot)

  Lampiran 3. Bagan alur pengujian efek penurunan kolesterol Marmot Dipuasakan selama 10-14 jam

  Dipangkas bulu kakinya Digunting kuku marmot hingga berdarah Darah marmot Diukur kadar kolesterol Kadar kolesterol darah awal

  Diberikan induksi hiperkolesterolemia setiap hari selama 14 hari. (kuning telur 1% BB dan otak kambing 15g/100g jumlah makanan) Diukur kadar kolesterol Marmot hi k l l i Diberikan perlakuan dengan pemberian suspensi nanopartikel daun sirih merah dan suspensi simvastatin selama 7 hari.

  Diukur kadar kolesterol pada hari ke-17 dan hari ke-21 Penurunan kadar kolesterol

Lampiran 4.Kadar kolesterol rata-rata darah marmot selama penelitian (mg/dl)

  45

  57

  33 34 101

  59

  25 25 108

  66

  70

  49

  35

  46

  89

  36

  28

  67

  74

  33

  53 Rata-rata 37,50 86,33 72,17 59,17 NDSM 100

  65

  80

  32

  74

  84

  70 47 102

  47

  87

  87

  40 37 100

  29 Rata-rata 37,00 89,83 53,50 39,83

  48

  77

  35

  40

  56

  90

  40

  61

  60

  58

  46

  85

  35

  32

  47

  91

  30

  37

  52

  96

  45

  37 Rata-rata 35,67 88,17 56,83 35,50 NDSM 200

  84

  Kelompok Kadar Kolesterol Hari 0 (sebelum induksi)

  Hari ke-14 Hiperkolesterolemia Pemberian obat Hari ke- 17 Hari ke-21

  93

  97

  36

  80 Rata-rata 40,50 91,17 90,83 90,17 Simvastatin

  80

  79

  39

  82 48 135 134 130

  80

  80

  38

  95

  50 47 108

  92

  43

  90

  90

  89

  45

  66

  66

  72

  30

  Na CMC

  77

  79

  57

  35

  70

  76

  28

  55

  77

  92

  40

  46

  53

  81

  36 Rata-rata 41,17 96,17 69,00 42,00 NDSM 50

  43 32 118

  67

  87

  45

  45

  73

  35 48 103

  55

  64

  39

  43

  63

  43

  Lampiran 5. Contoh perhitungan dosis

Konversi perhitungan dosis antar jenis hewan

  Mencit Tikus Marmot Kelinci Kucing Kera Anjing Manusia 20 g 200 g 400 g 1,5 kg 2 kg 4 kg 12 kg 70 kg Mencit 1,0 7,01 12,29 27,8 29,7 64,1 124,2 387,9 20 g Tikus 0,14 1,0 1,74 3,3 4,2 9,2 17,8 56,0 200 g Marmot 0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5 400 g Kelinci 0,04 0,25 0,44 1,0 1,06 2,4 4,5 14,2 1,5 kg Kucing 0,03 0,23 0,42 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0 2 kg Kera 0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1 4 kg Anjing 0,008 0,06 0,10 0,22 0,24 0,52 1,0 3,1 12 kg

  Manusia 0,0026 0,018 0,031 0,07 0,013 0,16 0,32 1,0 70 kg (Suhardjono, D., 1995)

  Contoh perhitungan dosis simvastatin 0,01% Dosis manusia (berat 70 kg) = 10 mg Dosis marmot (berat 400 g) = 0,031 x 10 mg = 0,31 mg

= 1000/400 x 0,31 mg

  = 0,775 mg/kg BB = 0,8mg/kg BB

Suspensi simvastatin sebanyak 0,8 mg/kg BB dibuat dalam sediaan 10 ml,

  50 mg x 10 ml mg dengan penimbangan 50 mg maka dibuat dalam sediaan = 625 ml.

  0,80 BB kg

  Dosis untuk marmot (Berat 415 g) = 415 g x 0,8 mg/1000 g = 0,332 mg

0,332 mg

  Jadi volume suspensi yang diberikan = 4,15 ml

0,008 mg /ml

Lampiran 5. (Lanjutan)

• - Dosis suspensi nanopartikel daun Sirih Merah yang akan dibuat adalah 50

  mg/kg bb, 100 mg/kg bb, dan 200 mg/kg bb.

  Masing – masing dilarutkan dalam 10 ml suspensi CMC.

  b. Berapa volume suspensi nanopartikel daun sirih merah yang akan diberikan pada marmot hiperkolesterol?

• – misal : BB marmot = 400 g Jumlah NDSM dosis 50 mg/kg bb =

  400 1000

  x 50 mg = 20 mg Volume larutan yang diberi =

  20

  50

  x 10 ml = 4 ml Jumlah NDSM dosis 100 mg/kg bb =

  x 100 mg = 40 mg Volume larutan yang diberi =

  40 100

  x 10 ml = 4 ml Jumlah NDA dosis 200 mg/kg bb =

  400 1000

  x 200 mg = 80 mg Volume larutan yang diberi =

  80 200

  x 10 ml = 4 ml

  400 1000

Lampiran 6. Tabel Hasil SPSS Oneway

  21 CMC Na 6 90,17 21,674 8,848 67,42 112,91 66 130 simvastatin 6 42,00 5,657 2,309 36,06 47,94

  79 NDSM 50 6 72,17 12,057 4,922 59,51 84,82

  53

  84 NDSM100 6 56,83 9,239 3,772 47,14 66,53

  46

  67 NDSM 200 6 53,50 5,357 2,187 47,88 59,12

  47

  60 Total 30 68,47 18,277 3,337 61,64 75,29 46 134 hari ke

  35

  CMC Na 6 90,83 23,379 9,544 66,30 115,37 66 134 simvastatin 6 69,00 9,121 3,724 59,43 78,57

  50 NDSM 50 6 59,17 10,685 4,362 47,95 70,38

  46

  74 NDSM100 6 35,50 7,092 2,895 28,06 42,94

  25

  47 NDSM 200 6 39,83 11,268 4,600 28,01 51,66

  29

  61 Total 30 53,33 23,549 4,300 44,54 62,13 25 130

  55

  Descriptives

  N Mean Std.

  32

  Deviation Std.

  Error 95% Confidence Interval for Mean

  Min Max Lower

  Bound Upper

  Bound hari 0 CMC Na 6 40,50 6,348 2,592 33,84 47,16

  30

  48 simvastatin 6 41,17 6,494 2,651 34,35 47,98

  48 NDSM 50 6 37,50 7,120 2,907 30,03 44,97

  49 hari ke

  28

  47 NDSM100 6 35,67 9,459 3,861 25,74 45,59

  25

  49 NDSM 200 6 37,00 5,099 2,082 31,65 42,35

  30

  45 Total 30 38,37 6,891 1,258 35,79 40,94

  25

  14 CMC Na 6 91,17 22,658 9,250 67,39 114,94 72 135 simvastatin 6 96,17 18,883 7,709 76,35 115,98 64 118 NDSM 50 6 86,33 9,522 3,887 76,34 96,33 76 102 NDSM100 6 88,17 14,770 6,030 72,67 103,67 70 108 NDSM 200 6 89,83 8,134 3,321 81,30 98,37 77 100 Total 30 90,33 15,039 2,746 84,72 95,95 64 135 hari ke17

Lampiran 6. (Lanjutan) Post Hoc Tests

  Tukey HSD Dependent Variable

  (I) jenis perlakuan (J) jenis perlakuan

  Mean Difference (I-

  J) Std.

  Error Sig.

  95% Confidence Interval

  Lower Bound

  Upper Bound hari 0 CMC Na simvastatin -,667 4,071 1,000 -12,62 11,29

  NDSM 50 3,000 4,071 ,946 -8,96 14,96 NDSM100 4,833 4,071 ,758 -7,12 16,79 NDSM 200 3,500 4,071 ,909 -8,46 15,46 simvastatin CMC Na ,667 4,071 1,000 -11,29 12,62 NDSM 50 3,667 4,071 ,894 -8,29 15,62 NDSM100 5,500 4,071 ,663 -6,46 17,46 NDSM 200 4,167 4,071 ,842 -7,79 16,12

  NDSM 50 CMC Na -3,000 4,071 ,946 -14,96 8,96 simvastatin -3,667 4,071 ,894 -15,62 8,29 NDSM100 1,833 4,071 ,991 -10,12 13,79 NDSM 200 ,500 4,071 1,000 -11,46 12,46

  NDSM100 CMC Na -4,833 4,071 ,758 -16,79 7,12 simvastatin -5,500 4,071 ,663 -17,46 6,46 NDSM 50 -1,833 4,071 ,991 -13,79 10,12 NDSM 200 -1,333 4,071 ,997 -13,29 10,62

  NDSM 200 CMC Na -3,500 4,071 ,909 -15,46 8,46 simvastatin -4,167 4,071 ,842 -16,12 7,79 NDSM 50 -,500 4,071 1,000 -12,46 11,46 NDSM100 1,333 4,071 ,997 -10,62 13,29 hari ke 14 CMC Na simvastatin -5,000 9,110 ,981 -31,76 21,76 NDSM 50 4,833 9,110 ,983 -21,92 31,59 NDSM100 3,000 9,110 ,997 -23,76 29,76 NDSM 200 1,333 9,110 1,000 -25,42 28,09 simvastatin CMC Na 5,000 9,110 ,981 -21,76 31,76 NDSM 50 9,833 9,110 ,815 -16,92 36,59 NDSM100 8,000 9,110 ,902 -18,76 34,76 NDSM 200 6,333 9,110 ,956 -20,42 33,09

  NDSM 50 CMC Na -4,833 9,110 ,983 -31,59 21,92

  simvastatin -9,833 9,110 ,815 -36,59 16,92 NDSM100 -1,833 9,110 1,000 -28,59 24,92 NDSM 200 -3,500 9,110 ,995 -30,26 23,26

  NDSM100 CMC Na -3,000 9,110 ,997 -29,76 23,76 simvastatin -8,000 9,110 ,902 -34,76 18,76 NDSM 50 1,833 9,110 1,000 -24,92 28,59 NDSM 200 -1,667 9,110 1,000 -28,42 25,09

  NDSM 200 CMC Na -1,333 9,110 1,000 -28,09 25,42 simvastatin -6,333 9,110 ,956 -33,09 20,42 NDSM 50 3,500 9,110 ,995 -23,26 30,26 NDSM100 1,667 9,110 1,000 -25,09 28,42 hari ke17 CMC Na simvastatin 21,833 7,699 ,062 -,78 44,45 NDSM 50 18,667 7,699 ,142 -3,95 41,28 NDSM100 34,000

• 7,699 ,001 11,39 56,61
• 7,699 ,000 14,72 59,95 simvastatin CMC Na -21,833 7,699 ,062 -44,45 ,78
• 7,699 ,001 -56,61 -11,39 simvastatin -12,167 7,699 ,523 -34,78 10,45 NDSM 50 -15,333 7,699 ,299 -37,95 7,28 NDSM 200 3,333 7,699 ,992 -19,28 25,95
• 7,699 ,000 -59,95 -14,72 simvastatin -15,500 7,699 ,289 -38,11 7,11 NDSM 50 -18,667 7,699 ,142 -41,28 3,95 NDSM100 -3,333 7,699 ,992 -25,95 19,28 hari ke 21 CMC Na simvastatin 48,167
• 7,272 ,000 26,81 69,52
• 7,272 ,002 9,64 52,36
• 7,272 ,000 33,31 76,02
• 7,272 ,000 28,98 71,69 simvastatin CMC Na -48,167
• 7,272 ,000 -69,52 -26,81

NDSM 200 2,167 7,272 ,998 -19,19 23,52 NDSM 50 CMC Na -31,000

  NDSM 200 37,333

  NDSM 50 -3,167 7,699 ,994 -25,78 19,45 NDSM100 12,167 7,699 ,523 -10,45 34,78 NDSM 200 15,500 7,699 ,289 -7,11 38,11

  NDSM 50 CMC Na -18,667 7,699 ,142 -41,28 3,95 simvastatin 3,167 7,699 ,994 -19,45 25,78 NDSM100 15,333 7,699 ,299 -7,28 37,95 NDSM 200 18,667 7,699 ,142 -3,95 41,28

  NDSM100 CMC Na -34,000

  NDSM 200 CMC Na -37,333

  NDSM 50 31,000

  NDSM100 54,667

  NDSM 200 50,333

  NDSM 50 -17,167 7,272 ,160 -38,52 4,19 NDSM100 6,500 7,272 ,896 -14,86 27,86

• 7,272 ,002 -52,36 -9,64 simvastatin 17,167 7,272 ,160 -4,19 38,52 NDSM100 23,667
• 7,272 ,025 2,31 45,02

  NDSM 200 19,333 7,272 ,090 -2,02 40,69 NDSM100 CMC Na -54,667

• 7,272 ,000 -76,02 -33,31 simvastatin -6,500 7,272 ,896 -27,86 14,86 NDSM 50 -23,667
• 7,272 ,025 -45,02 -2,31

  NDSM 200 -4,333 7,272 ,974 -25,69 17,02 NDSM 200 CMC Na -50,333

• 7,272 ,000 -71,69 -28,98 simvastatin -2,167 7,272 ,998 -23,52 19,19 NDSM 50 -19,333 7,272 ,090 -40,69 2,02 NDSM100 4,333 7,272 ,974 -17,02 25,69 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.

  ANOVA Sum of Squares df Mean Square F Sig.

  hari 0 Between Groups 133,800 4 33,450 ,673 ,617 Within Groups 1243,167 25 49,727 Total 1376,967 29 hari ke 14 Between Groups 334,000

  4 83,500 ,335 ,852 Within Groups 6224,667 25 248,987 Total 6558,667 29 hari ke17 Between Groups 5241,467

  4 1310,367 7,368 ,000 Within Groups 4446,000 25 177,840 Total 9687,467 29 hari ke 21 Between Groups 12116,667

  4 3029,167 19,095 ,000 Within Groups 3966,000 25 158,640 Total 16082,667 29

Lampiran 6. (Lanjutan) Homogeneous Subsets

  

hari 0

a

  Tukey HSD Subset for alpha = 0.05 jenis perlakuan N

  1 NDSM100 6 35,67 NDSM 200 6 37,00 NDSM 50 6 37,50 CMC Na 6 40,50 simvastatin

  6 41,17 Sig. ,663

  Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

  a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6,000.

  

hari ke 14

a

  Tukey HSD Subset for alpha = 0.05 jenis perlakuan N

  1 NDSM 50 6 86,33 NDSM100 6 88,17 NDSM 200 6 89,83 CMC Na 6 91,17 simvastatin

  6 96,17 Sig. ,815

  Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

  a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6,000.

  Lampiran 6. (Lanjutan) hari ke17 a

  Tukey HSD Subset for alpha = 0.05 jenis perlakuan N

  1

  2 NDSM 200 6 53,50 NDSM100 6 56,83 simvastatin

  6 69,00 69,00 NDSM 50 6 72,17 72,17 CMC Na 6 90,83 Sig. ,142 ,062 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

  a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6,000.

  

hari ke 21

a

  Tukey HSD Subset for alpha = 0.05 jenis perlakuan N

  1

  2

  3 NDSM100 6 35,50 NDSM 200 6 39,83 39,83 simvastatin

  6 42,00 42,00 NDSM 50 6 59,17 CMC Na 6 90,17 Sig. ,896 ,090 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

  a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6,000.

  Lampiran 7. Pengoperasian Alat Microlab 300

PENGOPERASIAN ALAT MICROLAB 300

Pengoperasian alat microlab 300 sebagai berikut :

  2. Bila alat sudah terhubung/menyala, tunggu selama 15 menit _o

  3. Cari menu yang diinginkan _o Tekan skip _o Tekan measure _o Tekan tombol naik turun _o Tekan enter _o Tekan tombol penghisap untuk mencuci Masukkan reagensia yangn diminta ke dalam tombol penghisap, maka _o hasil akan terlihat pada layar monitor _o

Bila hasil sudah keluar, tekan skip, begitu seterusnya sampai selesai

Untuk menggantikan pada posisi semula tekan back Catatan :

• Bila layar tidak terang, tekan tanda (+)
• Bila layar terlalu terang, tekan tanda (-) Untuk memasukkan program baru ke dalam microlab 300 :

  1 Cari program dan tekan enter

  2 Buka PIN dengan kata kunci Labkes

  3 Tekan new

  4 Masukkakn program baru menurut penentuan masing – masing

  5 Tekan back untuk kembali ke semula

  Lampiran 8. Reagensia Kolesterol

  

Lampiran 9. Data Hasil Pengukuran Kolesterol

  Lampiran 9. (Lanjutan)

  Lampiran 9. (Lanjutan)

  Lampiran 9. (Lanjutan)

  Lampiran 9. (Lanjutan)

  Lampiran 9. (Lanjutan)

  Lampiran 9. (Lanjutan)