ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA STEROID DARI BUAH MAHKOTA DEWA (Phaleria macrocarpa) (ISOLATION AND IDENTIFICATION OF STEROID FROM THE FRUIT OF MAHKOTA DEWA (Phaleria macrocarpa))

ABSTRAK
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA STEROID DARI
BUAH MAHKOTA DEWA (Phaleria macrocarpa)

Oleh

Astri Rahayu

Pada penelitian ini telah dilakukan isolasi dan identifikasi senyawa steroid dari buah mahkota
dewa (Phaleria macrocarpa). Tahapan penelitian yang dilakukan meliputi pengumpulan,
persiapan sampel, dan ekstraksi. Identifikasi senyawa steroid dilakukan menggunakan KLT
dengan berbagai eluen, pereaksi Liebermann-Burchard, dan uji titik leleh. Penentuan struktur
senyawa yang dilakukan meliputi spektrofotometer ultraungu-tampak (UV-Vis),
spektrofotometer FT-IR, spektrofotometer NMR, dan spektrofotometer massa (MS). Hasil
penelitian menunjukkan bahwa berdasarkan identifikasi dengan KLT, pereaksi LiebermannBurchard, uji titik eleh, data spektrum FT-IR, ultraungu-tampak, NMR, dan massa senyawa
hasil isolasi tersebut merupakan senyawa steroid yang bernama stigmast-5-en-3 -ol ( sitosterol) sebanyak 10 mg yang berupa kristal murni berbentuk jarum berwarna putih dengan
titik leleh 135o-137oC.
Kata kunci : stigmast-5-en-3 -ol ( -sitosterol), Phaleria macrocarpa

ABSTRACT
ISOLATION AND IDENTIFICATION OF STEROID FROM

THE FRUIT OF MAHKOTA DEWA (Phaleria macrocarpa)

By

Astri Rahayu

This research had done the isolation and identification of steroid from the fruit of mahkota
dewa (Phaleria macrocarpa). Research phase conducted include the collection and
preparation samples, extraction, isolation. Identification of steroid compound is carried out
using TLC with various eluen, reagent Liebermann-Burchard, and melting point test.
Determining of structure using UV-Vis spectrophotometer, FT-IR spectrophotometer, NMR,
and mass spectrophotometer (MS). The result showed that based on identification by TLC,
reagent Liebermann-Burchard, melting point test, FT-IR spectrum data, UV-Vis spectra,
NMR and MS, indicate that had formed a steroid compound called stigmast-5-en-3 -ol ( sitosterol) as much as 10 mg as a pure crystal needle-shaped with the melting point ca 135o137 oC.
Key word : stigmast-5-en-3 -ol ( -sitosterol), Phaleria macrocarpa

i

DAFTAR ISI

Halaman
DAFTAR ISI ............................................................................................................. i
DAFTAR TABEL .................................................................................................... iv
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ v
I. PENDAHULUAN ................................................................................................ 1
A. Latar Belakang .......................................................................................... 1
B. Tujuan Penelitian ....................................................................................... 3
C. Manfaat Penelitian ..................................................................................... 3
II. TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................... 4
A. Tymelaceae .............................................................................................. 4
B. Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) .................................................. 4
1. Kandungan kimia mahkota dewa ........................................................ 6
2. Manfaat mahkota dewa ....................................................................... 7
C. Senyawa steroid ....................................................................................... 8
1. Manfaat steroid.................................................................................... 12
2. Ekstraksi dan isolasi steroid ................................................................ 13
D. Pemisahan Senyawa Secara Kromatografi .............................................. 16
1. Kromatografi lapis tipis (KLT) ........................................................... 17
2. Kromatografi kolom (KK) .................................................................. 18

ii

3. Kromatografi cair vakum (KCV) ....................................................... 19
4. Kromatotron ....................................................................................... 19
5. Analisis kemurnian ............................................................................. 21
E. Penentuan Struktur Senyawa Organik .................................................... 22
1. Identifikasi Senyawa Organik Secara Spektroskopi .......................... 22
1.1. Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) ...................... 22
1.2. Spektroskopi ultraungu-tampak (UV-VIS) ................................. 24
1.3. Spektroskopi resonansi magnetik nuklir (NMR) ........................ 25
1.4. Spektroskopi GC-massa (MS)..................................................... 26
1.5. Spektroskopi massa (MS) ........................................................... 26
III. METODOLOGI PENELITIAN .................................................................... 27
A. Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................. 27
B. Alat dan Bahan ....................................................................................... 27
1. Alat-alat yang digunakan .................................................................... 27
2. Bahan-bahan yang digunakan ............................................................. 28
C. Prosedur Penelitian ................................................................................. 28
1. Pengumpulan dan penyiapan sampel ................................................. 28
2. Ekstraksi dengan etil asetat ................................................................ 29

3. Kromatografi cair vakum (KCV) ....................................................... 29
4. Kromatografi lapis tipis (KLT) .......................................................... 30
5. Kromatotron ....................................................................................... 30
6. Kromatografi kolom (KK) ................................................................. 31
7. Analisis kemurnian ............................................................................ 31
8. Spektroskopi ultraungu-tampak (UV-VIS) ........................................ 32

iii

9. Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) ............................ 32
10. Spektroskopi resonansi magnetik nuklir (NMR) ............................. 33
11. Spektroskopi GC-massa (MS) ......................................................... 33
12. Spektroskopi massa .......................................................................... 34
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................................ 35
A. Isolasi senyawa steroid ........................................................................... 35
B. Penentuan titik leleh ............................................................................... 41
C. Penentuan struktur senyawa organik ...................................................... 42
1. Identifikasi senyawa organik secara spektroskopi ............................. 42
1.1. Spektroskopi ultraungu-tampak (UV-Vis) .................................. 42
2. Analisis fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) ................ 43

3. Spektroskopi magnetik nuklir (NMR) ............................................... 45
3.1. Spektroskopi NMR karbon ......................................................... 45
3.2. Spektroskopi DEPT..................................................................... 47
4. Spektroskopi GC-massa (MS) ........................................................... 49
5. Spektroskopi massa (MS) .................................................................. 49
V.

SIMPULAN ..................................................................................................... 51

A. Simpulan ............................................................................................................... 51
B. Saran ...................................................................................................................... 51
DAFTAR PUSTAKA

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Keragaman jenis tumbuhan menjadi salah satu sumber senyawa organik yang
dapat dimanfaatkan dalam kehidupan, salah satunya digunakan dalam kesehatan.
Dari adanya keragaman jenis tumbuhan dan keragaman jenis senyawa yang

dikandungnya ini, maka sangat diperlukan penelitian-penelitian dalam
pemanfaatannya. Senyawa kimiawi hasil isolasi dari tumbuhan banyak
dimanfaatkan sebagai obat. Di Indonesia spesies tumbuhan yang banyak
dimanfaatkan sebagai obat salah satunya berasal dari famili Tymelaceae yaitu
Phaleria macrocarpa. P. macrocarpa adalah tanaman perdu dari suku
Tymelaceae yang tumbuh subur pada dataran rendah hingga ketinggian 1200
meter di atas permukaan laut (Burkill, 1966).

Pemanfaatan buah tumbuhan mahkota dewa sebagai obat tradisional secara
konvensional telah banyak dilakukan oleh masyarakat untuk mengobati asam urat,
diabetes melitus, hipertensi, dan penyakit ginjal (Wiryowidagdo, 2000).

Phaleria macrocarpa adalah sumber bagi senyawa-senyawa kimia yang berguna,
termasuk senyawa medisinal yang bersifat anti-hipertensi, anti-bakteri, dan
sitotoksik (Padua dkk., 1999). Mengingat tumbuhan mahkota dewa mengandung

senyawa steroid yang berpotensi sebagai senyawa obat, maka diperlukan
penelitian lebih lanjut dalam rangka untuk mengungkapkan dan menemukan
senyawa-senyawa kimia yang berguna dari tumbuhan mahkota dewa. Tumbuhan
Phaleria macrocarpa dikenal dengan nama mahkota dewa, sudah pernah diteliti

sebelumnya dan diperoleh beberapa senyawa derivat steroid hasil pemurnian
senyawa dari ekstrak etil asetat pada bagian buah memberikan tiga senyawa yaitu:
sikloargentenol, -sitosterol, dan stigmasterol (Simanjuntak et al., 2005).

Jumlah kandungan senyawa metabolit sekunder dalam tumbuhan terdistribusi
pada berbagai bagian tumbuhan, dan dalam masing-masing bagian itu mempunyai
jenis dan kuantitas senyawa yang relatif tidak sama. Keadaan geologis yang
berbeda dapat mempengaruhi kandungan senyawa dalam suatu tumbuhan
(Lisdawati, 2002). Lingkungan dengan kondisi yang berbeda suhu, ketersediaan
air, energi surya, mutu atmosfer, struktur dan komposisi udara tanah, reaksi tanah
dan organisme mempengaruhi kehidupan dan perkembangan organisme (Nyapka,
1988). Dengan memperhatikan faktor-faktor di atas, maka perbedaan tempat
pengambilan sampel memungkinkan diperolehnya senyawa hasil isolasi yang
akan berbeda pula. Oleh sebab itu, dilakukan penelitian terhadap tumbuhan
mahkota dewa yang tumbuh di daerah Way Halim Bandar Lampung.

Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah buah mahkota dewa. Bagian
buah dipilih karena bagian tumbuhan ini diperkirakan memiliki senyawa hasil
metabolit sekunder yang bervariasi. Hal ini disebabkan karena bagian buah
merupakan bagian yang digunakan oleh tumbuhan untuk berinteraksi dengan

lingkungan dalam memenuhi kelangsungan hidup tanaman. Adanya interaksi

tersebut mendorong tumbuhan untuk memproduksi senyawa metabolit sekunder
agar dapat mempertahankan diri terhadap perubahan lingkungan yang terjadi.

Metode isolasi senyawa steroid dilakukan dengan cara maserasi menggunakan etil
asetat. Pemisahan dilakukan dengan cara kromatografi cair vakum (KCV),
kromatotron, dan kromatografi kolom (KK). Identifikasi kemurnian dilakukan
menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dan uji titik leleh. Identifikasi
struktur molekul dilakukan dengan menggunakan spektroskopi ultraungu-tampak
(UV-VIS), Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR), spektroskopi
resonansi magnetik nuklir (NMR), spektroskopi GC-massa (MS), dan
spektroskopi massa (MS).

B. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah
1. Mengisolasi senyawa steroid dari buah mahkota dewa dari daerah Way Halim
Kecamatan Kedaton Kelurahan Labuhan Ratu Bandar Lampung.
2. Menentukan struktur molekul senyawa steroid hasil isolasi.

C. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai penemuan
senyawa baru hasil isolasi senyawa steroid dari buah mahkota dewa (Phaleria
macrocarpa), dalam rangka penggalian dan pengembangan potensi sumber daya
alam Provinsi Lampung sebagai penghasil senyawa-senyawa berkhasiat sebagai
obat.

II. TINJAUAN PUSTAKA

A. Tymelaceae

Tumbuhan yang masuk pada famili Tymelaceae merupakan tanaman perdu
bercabang banyak dengan tinggi 1,5 sampai dengan 2,5 m (Harmanto, 2003).
Famili ini dikenal sebagai sumber utama senyawa fenolat turunan flavonoid, arilbenzofuran, stilbenoid dan santon turunan flavonoid, terdiri dari 40 genus dan
tidak kurang dari 3000 spesies, dari sejumlah senyawa yang dihasilkan
mempunyai aktivitas biologi, sebagai promotor anti-tumor, anti-bakteri, antikanker dan lain-lain (Achmad et al., 1986).

B. Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa)

Tumbuhan mahkota dewa ini umumnya berupa pohon perdu. Tajuk pohon
bercabang-cabang, ketinggian pohonnya sekitar 1,5 – 2,5 m. Namun, jika
dibiarkan bisa mencapai 5 m. Mahkota dewa bisa sampai berumur puluhan tahun.
Tingkat produktivitasnya mampu dipertahankan sampai usia 10 hingga 20 tahun.
Pohon mahkota dewa terdiri dari akar, batang, daun, bunga dan buah. Akarnya
berupa akar tunggang, panjang akar bisa mencapai 100 cm. Akar ini belum
terbukti bisa digunakan untuk pengobatan (Lisdawati, 2002).

Kulit dan daging buah
Saat masih muda, kulitnya berwarna hijau. Namun, saat sudah tua warnanya
berubah menjadi merah marun. Ketebalan kulit sekitar 0,1 – 1 mm. Daging buah
berwarna putih. Ketebalan daging bervariasi tergantung pada ukuran buah.
Dalam pengobatan, kulit dan daging buah tidak dipisahkan. Jika dimakan
langsung akan menimbulkan bengkak di mulut, sariawan, mabuk bahkan
keracunan. Pemanfaatan kulit dan daging buah dianjurkan dengan cara
merebusnya terlebih dahulu.

Cangkang buah
Cangkang buah adalah batok pada biji. Jadi, cangkang ini bagian buah yang
paling dekat dengan biji. Cangkang buah berwarna putih, ketebalannya mencapai

2 mm. Rasa cangkang buah juga sepet-sepet pahit, tetapi lebih pahit daripada
kulit dan daging. Pemanfaatannya juga dianjurkan dengan cara merebusnya.
Cangkang ini lebih berkhasiat dibandingkan dengan kulit dan daging buah.

Biji
Seperti bentuk buah, biji juga bulat, warnanya putih dan diameternya mencapai 2
cm. Biji ini sangat beracun, jika tergigit akan menyebabkan lidah kaku, mati rasa
dan meriang. Oleh karena itu biji hanya digunakan untuk obat luar yaitu sebagai
obat oles. Pemanfaatan biji dilakukan dengan cara mengeringkan dan
menyangrainya sampai gosong (Harmanto, 2003).

Dalam taksonomi, tumbuhan ini diklasifikasikan sebagai berikut :
Divisi

: Spermathophyta

Sub divisi

: Angiospermae

Kelas

: Dicotyledoneae

Bangsa

: Thymelaeales

Suku

: Thymelaeaceae

Marga

: Phaleria

Spesies

: Phaleria macrocarpa

(Sumber : Winarto, 2003).

Gambar 1. Buah mahkota dewa (Harmanto, 2001).

1. Kandungan Kimia Mahkota Dewa

Di dalam kulit buah mahkota dewa terkandung senyawa alkaloid, saponin,
flavonoid, dan ekstrak kloroformnya juga ditemukan senyawa terpenoid (Gotawa
dkk., 1999). Buah mahkota dewa dilaporkan mengandung anti-histamin
(Sumastuti, 2002).

Sedangkan daging buah dan cangkang biji mengandung zat-zat aktif seperti :
Alkaloid

: berfungsi sebagai detoksifikasi yang dapat menetralisir
racun-racun di dalam tubuh.

Saponin

: – Menjadi sumber anti-bakteri dan anti-virus
– Meningkatkan sistem kekebalan tubuh
– Meningkatkan vitalitas
– Mengurangi kadar gula dalam darah
– Mengurangi penggumpalan darah

Flavanoid : – Melancarkan peredaran darah ke seluruh tubuh dan mencegah
terjadinya penyumbatan pada pembuluh darah.
– Mengurangi kandungan kolesterol serta mengurangi
penimbunan lemak pada dinding pembuluh.
– Mengurangi kadar resiko penyakit jantung koroner.
– Mengandung anti-inflamasi (anti-radang)
• Steroid
Polifenol

: Meningkatkan metabolisme hormonal tubuh
: Berfungsi sebagai anti-histamin

(Sumber : Lisdawati, 2002).

2. Manfaat Mahkota Dewa

Batang tanaman mahkota dewa yang bergetah digunakan untuk mengobati
penyakit kanker tulang, sehingga mungkin hanya akar dan bunganya saja yang
jarang dipergunakan sebagai obat (Harmanto, 2001). Berdasarkan sejumlah
pengalaman eksperimen, terbukti bahwa sebagian besar tanaman yang memiliki
aktivitas anti-mikroba pada umumnya juga menunjukkan potensi sebagai suatu

anti-kanker karena toksisitas yang dimilikinya tersebut dapat bekerja terhadap fase
tertentu dari siklus sel tumor (Lisdawati, 2002). Zat penangkal alergi seperti
biduran, gatal-gatal, dan sesak nafas. Mahkota dewa juga dapat berperan sebagai
oksitoksin yang dapat memacu kerja otot rahim sehingga persalinan berlangsung
lancar (Sumastuti, 2002). Golongan senyawa dalam tanaman yang berkaitan
dengan aktivitas anti-kanker dan anti-oksidan antara lain adalah golongan
alkaloid, steroid, terpenoid, polifenol, dan flavonoid (Wiryowidagdo, 2000).

C. Senyawa Steroid

Steroid adalah sebuah kelas tanaman metabolit sekunder. Steroid merupakan
senyawa organik lemak sterol tidak terhidrolisis yang merupakan hasil reaksi dari
turunan terpena atau skualena (Hanani et al., 2005).

Steroid mempunyai kerangka dasar triterpena asiklik. Ciri umum steroid ialah
sistem empat cincin yang tergabung. Cincin A, B dan C beranggotakan enam
atom karbon, dan cincin D beranggotakan lima. Perhatikan Gambar 2.

Gambar 2. Kerangka dasar steroid dan penomorannya (Hanani et al., 2005).

L
Lemak
stero
rol (bahasa Yunani:
Yu
stereo
eos, padat) adalah
ad
steroid tak jenuh dengan
de
k
kerangka
kol
kolestana
yang
ng mengandun
ung gugus hid
idroksil-3 da
dan rantai sisi
isi alifatik
d
dengan
mini
inimal 8 atom karbon yang
ng terikat. Lemak
Le
steroll m
merupakan kkelompok
p
penting
di dalam
da
steroid
id. Lemak ste
sterol nabati disebut
di
fitoste
sterol dan yan
ang hewani
d
disebut
zoos
osterol. Jenis
is zoosterol ya
yang pentingg aantara lain aadalah kolest
sterol dan
h
hormon
stero
eroid. Sedang
ngkan pada fit
fitosterol diken
kenal kampest
sterol, sitoster
terol dan
s
stigmasterol
ol. Ergosterol
rol adalah lema
mak sterol yan
ang ditemuka
kan pada mem
mbran sel
f
fungi
yang berfungsi
b
lay
ayaknya koles
lesterol pada hewan
h
(Atun,
n, 2005).

Gambar
ar 3. Struktur
ur sterol

P
Pada
tanamaan terdapatt lebih
le
dari 400 senyawa sterol
ste yang did
idominasi ole
leh tiga
b
bentuk
utam
ma fitosterol,, yaitu: -sito
itosterol, kamp
mpesterol, dan
an stigmastero
rol. Selain
i terdapatt pula
itu
p sitoasta
tanol yang me
merupakan kom
omponen cam
ampuran kamp
mpesterol
d metil sterol.
dan
ste
Tingka
kat absorbsi fi
fitosterol dari
ari jumlah yan
ang dikonsum
msi
s
sangatlah
rendah,
ren
yaituu ssekitar 5-10%
0% untuk -si
sitosterol dan
an 15% untukk
k
kampesterol.
ol. Selain itu,
u, fitosterol ju
juga lebih cep
epat dielimina
nasi dari dalam
lam tubuh
d
dibandingka
kan kolesterol,
ol, sehingga ju
jumlah konsu
umsi fitostero
erol dianjurkan
kan berlebih
u
untuk
dapat
at memenuhii kkebutuhan tubuh
tu
(Yuk et al., 2007).

Perlu diketahui bahwa senyawa -sitosterol mampu menghambat kerja enzim
yang mengkonversi testosteron menjadi dehidrotestosteron (DHT) yang
merupakan penyebab terjadinya kanker prostat (Salempa et al., 2009).
-sitosterol merupakan senyawa yang efektif digunakan dalam penyembuhan
penyakit asma, sehingga memungkinkan senyawa ini untuk dikembangkan
sebagai obat terapi penyakit alergi (Yuk et al., 2007).

Senyawa yang termasuk turunan steroid, misalnya kolesterol, ergosterol,
progesteron, dan estrogen. Kolestrol memiliki struktur dasar inti steroid yang
mengandung gugus metil, gugus hidroksi yang terikat pada cincin pertama, dan
rantai alkil. Kolestrol merupakan steroid yang terbanyak di dalam tubuh manusia.
Kandungan kolestrol dalam darah berkisar 200-220 mg/dL, meningkatnya kadar
kolestrol dalam darah dapat menyempitkan pembuluh darah di jantung, sehingga
terjadi gangguan jantung koroner. Pengobatan yang sering dilakukan adalah
melebarkan pembuluh darah seperti, memasang ring atau melakukan operasi.

Kolestrol dalam tubuh dibentuk di dalam liver dari makanan. Struktur kolestrol
dapat dilihat pada Gambar 4.

Gambar 4. Struktur molekul kolestrol (Hanani et al., 2005).

Kolestrol dalam makanan yang perlu kita waspadai mengingat tren penyakit
jantung cukup tinggi di Indonesia. Beberapa makanan yang banyak mengandung
kolestrol disajikan dalam Tabel 1.

Tabel 1. Sumber makanan dan ukuran sajian serta kandungan kolestrolnya.
Makanan

Ukuran Sajian

Kolestrol

Hati (sapi)

3 ons

370

Telur

1

250

Lobster

3 ons

175

Ayam goreng

3,5 ons

130

Ayam (tanpa kulit)

3 ons

75

Ikan

3 ons

40

Butter

1 sendok makanan

30

Susu full cream

1 cup

35

Susu stim

1 cup

5

Margarine

1 sendok makanan

0

Sumber : (Hanani et al., 2005).

Garam empedu merupakan hasil sintesis kolestrol dan disimpan dalam bladder,
peran senyawa ini adalah untuk mengemulsikan asam lemak dan minyak sehingga
memperluas permukaan lipida yang akan dibongkar secara enzimatik. Struktur
molekul garam empedu dapat dilihat pada Gambar 5.

Gambar 5. Struktur molekul garam empedu (Hanani et al., 2005).

1. Manfaat Steroid

Steroid terdistribusi secara luas dalam tanaman dan memiliki berbagai fungsi.
Pada umunya steroid berfungsi sebagai hormon (Hanani et al., 2005).

Secara rinci beberapa fungsi steroid adalah sebagai berikut :
- Meningkatkan laju perpanjangan sel tumbuhan
- Menghambat penuaan daun (senescence)
- Mengakibatkan lengkuk pada daun rumput-rumputan
- Menghambat proses gugurnya daun
- Menghambat pertumbuhan akar tumbuhan
- Meningkatkan resistensi pucuk tumbuhan kepada stress lingkungan
- Menstimulasi perpanjangan sel di pucuk tumbuhan
- Merangsang pertumbuhan pucuk tumbuhan
- Merangsang diferensiasi xylem tumbuhan

Contoh jenis hormon steroid pada manusia adalah hormon seks bagi kaum lakilaki dan perempuan seperti testosteron, estradiol dan progesteron. Struktur
molekul dan fungsinya dapat dilihat dalam Tabel 2.
Tabel 2. Jenis hormon dan fungsi fisiologisnya.
Hormon

Fungsi Fisiologis
Berperan dalam pengembangan
organ laki-laki, otot, rambut, dan
pembentuk sperma

Berperan dalam pengembangan
organ kewanitaan seperti ovulasi

Mempersiapkan uterus untuk
menyuburkan indung telur

Sumber : (Hanani et al., 2005).
2. Ekstraksi dan Isolasi Steroid
Ekstraksi dilakukan menggunakan metode maserasi. Maserasi merupakan proses
perendaman sampel dengan pelarut organik yang digunakan pada temperatur
ruangan. Proses ini sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam

karena dengan perendaman sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan dinding dan
membran sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel sehingga
senyawa metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam
pelarut organik dan ekstrasi senyawa akan sempurna karena dapat diatur lama
perendaman yang dilakukan (Lenny, 2006). Proses ini dilakukan beberapa kali
dan ekstrak kemudian disatukan lalu diuapkan dengan menggunakan penguapputar vakum (Markham, 1988). Setelah dilakukan proses ekstraksi, tahap isolasi
selanjutnya adalah analisis senyawa dengan menggunakan beberapa jenis
kromatografi.

Hasil isolasi dari buah mahkota dewa mengandung senyawa lignan C19H20O6: 5[4(4-metoksi-fenil)-tetrahidrofuro[3,4-c]furan-1-il]-benzena-1,2,3-triol. Struktur
molekulnya seperti ditunjukkan pada Gambar 6.

Gambar 6. Struktur molekul senyawa C19H20O6: 5-[4(4-metoksi-fenil)
tetrahidrofuro[3,4-c] furan-1-il]-benzena-1,2,3-triol
(Lisdawati, 2002).

Hasil isolasi dan pemurnian senyawa ekstrak etil asetat dari buah mahkota dewa
memberikan tiga senyawa yaitu: -sitosterol, stigmasterol, dan sikloargentenol.

Gambar 7. Struktur molekul senyawa -sitosterol, stigmasterol, dan
sikloargentenol (Soeksmanto et al., 2006).

Hasil isolasi dan identifikasi dari ekstrak n-butanol buah mahkota dewa yang
mempunyai daya aktivitas sebagai senyawa anti-oksidan yaitu senyawa 6,4’dihidroksi-4-metoksibenzofenon-2-O- -D-glukopiranosida.

Gambar 8. Struktur molekul senyawa 6,4’-dihidroksi-4-metoksibenzofenon-2-O-D-glukopiranosida (Hartati et al., 2005).

D. Pemisahan Senyawa secara Kromatografi

Kromatografi merupakan pemisahan suatu senyawa yang didasarkan atas
perbedaan laju perpindahan dari komponen-komponen dalam campuran.
Pemisahan dengan metode kromatografi dilakukan dengan cara memanfaatkan
sifat-sifat fisik dari sampel, seperti kelarutan, adsorbsi, keatsirian dan kepolaran.
Kelarutan merupakan kecenderungan molekul untuk melarut dalam cairan.
Adsorpsi penjerapan adalah kecenderungan molekul untuk melekat pada
permukaan serbuk halus (Johnson dan Stevenson, 1991).

Berdasarkan jenis fasa diam dan fasa gerak yang dipartisi, kromatografi dapat
digolongkan menjadi beberapa golongan yang ditabelkan pada Tabel 3.

Tabel 3. Penggolongan kromatografi berdasarkan fasa diam dan fasa gerak.
Fasa Diam

Fasa Gerak

Sistem kromatogafi

Padat

Cair

Cair- adsorbsi

Padat

Gas

Gas-adsorbsi

Cair

Cair

Cair-partisi

Cair

Gas

Gas-partisi

Sumber : Johnson dan Stevenson (1991).

1. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi Lapis Tipis ialah metode pemisahan fisikokimia yang terdiri atas
bahan berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa pelat gelas,
logam, atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah, berupa larutan,
ditotolkan berupa bercak atau pita. Setelah pelat atau lapisan diletakkan di dalam
bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak),
pemisahan terjadi selama perambatan kapiler (pengembangan). Selanjutnya,
senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan (dideteksi) (Stahl, 1985).

Kromatogarafi Lapis Tipis merupakan cara analisis cepat yang memerlukan bahan
yang sedikit. Untuk peneliti pendahuluan kandungan flavonoid suatu ekstrak,
sudah menjadi kebiasaan umum untuk menggunakan pengembang beralkohol
pada pengembangan pertama dengan kromatografi lapis tipis, misalnya butanolasam asetat-air (Markham, 1988).

Kromatografi Lapis Tipis digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa
yang sifatnya hidrofob seperti lipida-lipida dan hidrokarbon. Sebagai fase diam
digunakan senyawa yang tak bereaksi seperti silika gel atau alumina. Silika gel

biasa diberi pengikat yang dimaksudkan untuk memberikan kekuatan pada lapisan
dan menambah adesi pada gelas penyokong. Pengikat yang biasa digunakan
adalah kalsium sulfat (Sastrohamidjojo, 2002).

Metode dalam KLT dapat dihitung nilai Retention factor (Rf) dengan persamaan :

Tetapi pada gugus-gugus yang besar dari senyawa-senyawa yang susunannya
mirip, sering kali harga Rf berdekatan satu sama lainnya (Sastrohamidjojo, 2002).

2. Kromatogafi Kolom (KK)

Pada prinsipnya Kromatografi Kolom (KK) digunakan untuk pemisahan
campuran beberapa senyawa yang diperoleh dari isolasi tumbuhan. Dengan
menggunakan fase padat dan fasa cair maka fraksi-fraksi senyawa akan
menghasilkan kemurnian yang cukup tinggi.

Teknik KK pada dasarnya sama dengan KCV, yaitu merupakan kromatografi cairadsorpsi, hanya saja KK dilakukan pada sistem yang bekerja pada kondisi normal
tanpa vakum. Waktu yang dibutuhkan dalam pelaksanaannya lebih lama, namun
diharapkan akan mendapat hasil dengan pemisahan yang lebih baik dan lebih
murni.

3.Kromatografi Cair Vakum (KCV)

Teknik KCV dilakukan dengan suatu sistem yang bekerja pada kondisi vakum
secara terus-menerus sehingga diperoleh kerapatan kemasan yang maksimum atau
menggunakan tekanan rendah untuk meningkatkan laju alir fasa gerak. Urutan
eluen yang digunakan dalam kromatografi cair diawali dari eluen yang
mempunyai tingkat kepolaran rendah kemudian kepolarannya ditingkatkan secara
perlahan-lahan. Urutan eluen yang digunakan dalam kromatografi diawali dari
eluen yang mempunyai tingkat kepolaran rendah kemudian kepolarannya
ditingkatkan secara perlahan-lahan (Hosstetmann et al., 1995).

Berikut ini merupakan urutan eluen pada kromatografi berdasarkan kenaikan
tingkat kepolarannya :
n-heksana
Sikloheksana
Karbon tetraklorida
Benzena
Toluena
Metilen klorida
Kloroform
Etil asetat
Aseton
n-propanol
Etanol
Asetonitril
Metanol
Air

Non polar

Polar

(Sumber: Gritter dkk., 1991).

4. Kromatotron

Kromatografi digunakan pada beberapa teknik pemisahan berdasarkan pada
“migration medium” yang berbeda, yaitu distribusinya terhadap fase diam dan

fase gerak. Terdapat 3 hal yang wajib ada pada teknik ini, yang pertama yaitu
harus terdapat medium perpindahan tempat, yaitu tempat terjadinya pemisahan.
Kedua harus terdapat gaya dorong agar spesies dapat berpisah sepanjang
“migration medium“. Ketiga harus terdapat gaya tolakan selektif. Gaya yang
terakhir ini dapat menyebabkan pemisahan dari bahan kimia yang
dipertimbangkan (Sienko et al., 1984).

Kromatografi Lapis Tipis merupakan teknik pemisahan cara lama yang digunakan
secara luas, terutama dalam analisis campuran yang rumit dari sumber alam.
Tetapi dalam kuantisasi belakangan ini kromatografi lapis tipis digantikan oleh
“HPLC” (High Performance Thin-layer Chromatography) atau Kromatografi
Lapis Tipis Kinerja Tinggi (Munson, 1991).

Kromatotron memiliki prinsip sama seperti kromatografi klasik dengan aliran fase
gerak yang dipercepatoleh gaya sentrifugal. Kromatografi jenis ini menggunakan
rotor yang dimiringkan dan terdapat dalam ruang tertutup oleh plat kaca kuarsa,
sedangkan lapisan penyerapnya berupa plat kaca yang dilapisi oleh silika gel. Plat
tersebut dipasang pada motor listrik dan diputar dengan kecepatan 800 rpm.
Pelarut pengelusi dimasukkan kebagian tengah pelarut melalui pompa torak
sehingga dapat mengalir dan merambat melalui lapis tipis karena gaya sentrifugal.
Untuk mengetahui jalannya proses elusi dimonitor dengan lampu UV. Gas
nitrogen dialirkan kedalam ruang plat untuk mencegah pengembunan pelarut
pengelusi dan mencegah oksidasi sampel. Pemasukan sampel itu diikuti dengan
pengelusian menghasilkan pita-pita komponen berupa lingkaran sepusat. Pada

tepi plat, pita-pita akan terputar keluar dengan gaya sentrifugal dan di tampung
dalam botol fraksi, diidentifikasi dengan KLT (Hostettmann et al., 1995).

5. Analisis Kemurnian

Analisis kemurnian senyawa hasil isolasi dilakukan dengan kromatografi lapis
tipis (KLT) dan uji titik leleh. KLT dilakukan dengan mengelusi larutan sampel
yang ditotolkan pada lempeng silika gel 60 F254 dengan fase gerak berupa eluen
etil asetat-heksana (4 : 6). Bercak yang ada diamati dengan sinar tampak, UV 254
nm dan UV 366 nm kemurnian senyawa ditetapkan secara semi kuantitatif dengan
densitometer pada maks = 347 nm (Margono dan Zendrato, 2006). Senyawa
hasil analisis dikatakan murni apabila memberikan noda tunggal pada KLT
dengan berbagai fase gerak (Setyowati et al., 2007).

Sedangkan titik leleh merupakan ciri penting senyawa organik padat. Titik leleh
memiliki arti penting dalam identifikasi dan pengukuran kemurnian. Penggunaan
untuk identifikasi didasarkan pada fakta bahwa semua senyawa murni mempunyai
titik leleh yang tajam ketika berubah sempurna dari padat ke cair. Selain itu,
penggunaan titik leleh untuk identifikasi juga didasarkan pada fakta bahwa
senyawa yang tidak murni menunjukkan 2 fenomena, pertama yaitu suhu leleh
yang lebih rendah, dan kedua memiliki jarak leleh yang lebih lebar. Alat yang
digunakan untuk menguji titik leleh suatu senyawa adalah termopan. Untuk
identifikasi kualitatif, titik leleh merupakan tetapan fisika yang penting terutama
untuk suatu senyawa hasil sintesis, isolasi, maupun kristalisasi. Titik leleh suatu
kristal padat adalah suhu ketika padatan mulai berubah menjadi cairan pada

tekanan udara 1 atm. Jika suhu dinaikkan, molekul senyawa akan menyerap
energi. Semakin tinggi suhu maka akan semakin banyak energi yang diserap
sehingga akan menaikkan gerakkan vibrasi dan rotasi molekul (Hadiprabowo,
2009).

E. Penentuan Struktur Senyawa Organik

Suatu senyawa bahan alam hasil isolasi akan diidentifikasi berdasarkan sifat
fisika, sifat kimia dan identifikasi dengan spektroskopi (Achmad et al., 2006).

1. Identifikasi Senyawa Organik Secara Spektroskopi

Spektroskopi merupakan ilmu yang mempelajari tentang cara menganalisis
spektrum suatu senyawa dan interaksi antara radiasi elektromagnetik. Teknik
spektroskopi dapat digunakan untuk menentukan struktur dari senyawa organik
tersebut (Fessenden dan Fessenden, 1999). Metode spektroskopi yang dipakai
pada penelitian ini antara lain, Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR),
spektroskopi ultraungu-tampak (UV-VIS), spektroskopi resonansi magnetik nuklir
(NMR), spektroskopi GC-massa (MS), dan spektroskopi massa (MS).

1.1 Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR)

Pada spektroskopi inframerah (IR), senyawa organik akan menyerap berbagai
frekuensi radiasi elektromagnetik inframerah. Molekul-molekul senyawa akan
menyerap sebagian atau seluruh radiasinya. Penyerapan ini berhubungan dengan
adanya sejumlah vibrasi yang terkuantisasi dari atom-atom yang berikatan secara

kovalen pada molekul-molekul itu. Penyerapan ini juga berhubungan dengan
adanya perubahan momen dipol dari ikatan kovalen pada waktu terjadinya vibrasi
(Supriyanto, 1999). Pada dasarnya spektrofotometer FT-IR (Fourier Trasform
Infra Red) adalah sama dengan spektrofotometer IR dispersi, yang
membedakannya adalah pengembangan pada sistim optiknya sebelum berkas
sinar infra merah melewati contoh. Pada sistem optik FT-IR digunakan radiasi
LASER (Light Amplification by Stimulated Emmission of Radiation) yang
berfungsi sebagai radiasi yang diinterferensikan dengan radiasi infra merah agar
sinyal radiasi infra merah yang diterima oleh detektor secara utuh dan lebih baik.
Karakteristik frekuensi uluran beberapa gugus molekul ditunjukkan pada Tabel 4.

Tabel 4. Karakteristik frekuensi uluran beberapa gugus fungsi.
Serapan (cm-1)

Gugus

Ar

OH

3600

NH 2

3400

CH

3300

H

3060

Serapan(cm-1)

Gugus

3030

2930
CH

2

2860
1470

C

O

1200-1000

C

1650

C N

1600

C

2870
CH

2

1460
1375
C

C

N

1200-1000

O

1750-1600

Sumber : Banwell dan Mc Cash (1994).

C

C

1200-1000

Daerah panjang gelombang yang digunakan pada alat spektroskopi inframerah
adalah pada daerah inframerah pertengahan, yaitu pada panjang gelombang 2,5 –
50 µm atau pada bilangan gelombang 4.000 – 200 cm-1 . Daerah tersebut adalah
cocok untuk perubahan energi vibrasi dalam molekul. Daerah inframerah yang
jauh (400-10 cm-1), berguna untuk molekul yang mengandung atom berat, seperti
senyawa anorganik tetapi lebih memerlukan teknik khusus percobaan (Silverstein,
1986).

Penggunaan spektrum inframerah dalam menentukan struktur senyawa organik
berada antara 650-4000 cm-1. Daerah di bawah frekuensi 650 cm -1 dinamakan
daerah infra merah jauh dan daerah di atas frekuensi 4000 cm -1 dinamakan infra
merah dekat (Sudjadi, 1983). Daerah antara 1400-4000 cm -1 merupakan daerah
khusus yang berguna untuk identifikasi gugus fungsional. Daerah ini
menunjukkan absorpsi yang disebabkan oleh vibrasi uluran. Daerah antara 1400700 cm -1 (daerah sidik jari) seringkali sangat rumit karena menunjukkan absorpsi
yang disebabkan oleh vibrasi uluran dan tekukan (Fessenden dan Fessenden,
1999).

1.2 Spektroskopi Ultraungu-Tampak (UV-VIS)

Dalam spektoskopi UV-VIS penyerapan sinar tampak dan ultraviolet oleh suatu
molekul akan menghasilkan transisi di antara tingkat energi elektronik molekul
tersebut. Transisi tersebut pada umumnya antara orbital ikatan, orbital non-ikatan
atau orbital anti-ikatan. Panjang gelombang serapan yang muncul merupakan
ukuran perbedaan tingkat-tingkat energi dari orbital suatu molekul (Sudjadi,
1983).

1.3 Spektroskopi Resonansi Magnetik Nuklir (NMR)

Analisis spektroskopi NMR akan memberikan informasi tentang posisi atom-atom
karbon yang memiliki proton atau yang tidak memiliki proton. Selain itu juga
untuk mengenali atom-atom lainnya yang berkaitan dengan proton. Spektroskopi
NMR juga dapat memberikan informasi tentang jumlah dan jenis atom karbon
yang ada pada struktur senyawa organik. Teknik spektroskopi ini didasarkan pada
penyerapan gelombang radio elektromagnetik oleh inti atom hidrogen atau karbon
(Silverstein et al., 1986). Letak pergeseran kimia untuk proton pada beberapa
molekul organik dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Letak pergeseran kimia untuk proton dalam molekul organik.
Jenis Senyawa

JenisProton

1

Alkana

C CH3

0,5 – 2

Alkuna

C C

Eter

H 3C O

3,5 - 3,8

Alkena

H 2C C

4,5 - 7,5

Fenol

Ar OH

4-8

Alkohol

R OH

5 - 5,5

Aromatik

Ar H

6-9

H

H ( ) ppm

2,5 - 3,5

O
Aldehid

C H

9,8 - 10,5

O
Karboksilat

Sumber : Sudjadi (1983).

C OH

11,5 - 12,5

1.4. Spektroskopi GC-Massa (MS)

GC-MS merupakan metode pemisahan senyawa organik yang menggunakan dua
metode analisis senyawa yaitu kromatografi gas (GC) untuk menganalisis jumlah
senyawa secara kuantitatif dan spektrometri massa (MS) untuk menganalisis
struktur molekul senyawa analit (Fowlis, 1998).

Gas kromatografi merupakan salah satu teknik spektroskopi yang menggunakan
prinsip

pemisahan

campuran

berdasarkan

perbedaan

kecepatan

migrasi

komponen-komponen penyusunnya. Gas kromatografi biasa digunakan untuk
mengidentifikasi suatu senyawa yang terdapat pada campuran gas dan juga
menentukan konsentrasi suatu senyawa dalam fase gas (Fowlis, 1998).

1.5. Spektroskopi Massa (MS)

Spektroskopi massa (MS) akan melengkapi pelacakan struktur untuk suatu
molekul yang belum diketahui berat molekulnya (g/mol) dan bagaimana pola
pemecahan (fragmentasi) dari suatu molekul organik. Rekonstruksi terhadap
pemecahan dan dipandu dengan interpretasi data spektra FT-IR dan H1-NMR
akan dapat mengelusidasi struktur molekul organik yang belum diketahui (Sitorus,
2009).

Analisis spektroskopi massa berfungsi untuk menghasilkan berkas sinar kation
dari zat, berkas kation menjadi bentuk spektrum massa (m/z), mendeteksi dan
mencatat nilai massa relatif (m/z) atau menentukan bobot molekul suatu senyawa
(Tim Penyusun, 2007).

III. METODOLOGI PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini akan dilakukan pada bulan Agustus 2012 -April 2013, bertempat di
Laboratorium Kimia Organik Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas
Lampung. Analisis spektroskopi yang digunakan adalah spektroskopi ultraungutampak (UV-Vis), Fourier Trasform Infra Red (FT-IR) dilakukan di Laboratorium
Biomassa, spektroskopi resonansi magnetik nuklir (NMR) di Laboratorium NMRLIPI Serpong, spektroskopi GC-massa (MS) dan spektroskopi massa (MS) di
Laboratorium Kimia Organik Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Gajah
Mada, Yogyakarta.

B. Alat dan Bahan
1. Alat-alat yang digunakan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat gelas, penguap
putar vakum, satu set alat kromatografi cair vakum (KCV), kromatotron, satu set
alat kromatografi kolom (KK), pengukur titik leleh, lampu UV, pipet kapiler,
penguap putar vakum, spektrofotometer FT-IR merk Scimitar 2000,
spektrofotometer ultraungu-tampak (UV-VIS) merk Cary 50, spektrofotometer

NMR, spektrofotometer GC-massa (MS) merk Shimadzu QP-2010, dan
spektofotometer massa (MS) merk Shimadzu QP-2010.

2. Bahan-bahan yang digunakan
Bahan yang digunakan adalah buah mahkota dewa yang telah dikeringkan dan
dihaluskan, diperoleh dari daerah Way Halim Kecamatan Kedaton Kelurahan
Labuhan Ratu Bandar Lampung. Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi dan
kromatografi berkualitas teknis yang telah didestilasi sedangkan untuk analisis
spektrofotometer berkualitas pro-analisis (p.a). Bahan kimia yang dipakai
meliputi etil asetat (EtOAc), metanol (MeOH), n-heksana (n-C6H14), aseton
(C3H6O2), akuades (H2O), serium sulfat 1,5% dalam asam sulfat (H2SO4) 2N,
benzena (C6H6), kloroform (CH3Cl), diklorometana (CH2Cl2), silika gel Merck G
60 untuk impregnasi, silika gel Merck 60 (35-70 Mesh) untuk KCV dan KK,
untuk KLT digunakan plat KLT silika gel Merck kiesegal 60 F254 0,25 mm, silika
gel 60 PF254 untuk plat kromatotron.

C. Prosedur Penelitian
1. Pengumpulan dan Persiapan Sampel
Sampel berupa buah mahkota dewa yang dipisahkan bijinya kemudian buah
dibersihkan dan di potong kecil-kecil. Sampel buah yang telah dipotong kemudian
dikeringkan lalu dihaluskan hingga menjadi serbuk halus.

2. Ekstraksi dengan Etil Asetat

Sebanyak 1500 gram buah mahkota dewa yang telah dihaluskan,dimaserasi 3 kali
dengan menggunakan etil asetat (EtOAc) masing-masing selama 1x24 jam.
Ekstrak etil asetat yang diperoleh disaring kemudian dipekatkan dengan
menggunakan penguap putar vakum pada suhu 45o-50oC dengan laju putaran 120150 rpm.

3.

Kromatografi Cair Vakum (KCV)

Ekstrak kasar kemudian difraksinasi dengan KCV. Terlebih dahulu fasa diam
silika gel halus sebanyak 3 kali berat sampel dimasukkan ke dalam kolom.
Kemudian kolom dikemas kering dalam keadaan vakum menggunakan alat
vakum. Eluen yang kepolarannya rendah, dimasukkan ke permukaan silikagel
halus terlebih dahulu kemudian divakum kembali. Kolom dihisap sampai kering
dengan alat vakum dan siap digunakan.
Ekstrak kasar yang telah dilarutkan dalam aseton dan diimpregnasikan kepada
silika gel kasar, kemudian dimasukkan pada bagian atas kolom yang telah berisi
fasa diam dan kemudian dihisap secara perlahan-lahan ke dalam kemasan dengan
cara memvakumkannya. Setelah itu kolom dielusi dengan etil asetat/n-heksan 0%
sampai dengan etil asetat 100%. Kolom dihisap dengan vakum sampai kering
pada setiap penambahan eluen (tiap kali elusi dilakukan). Kemudian fraksi-fraksi
yang terbentuk dikumpulkan berdasarkan pola fraksinasinya. Fraksinasi sampel
dengan teknik KCV dilakukan berulang kali dengan perlakuan yang sama seperti
tahapan KCV awal di atas.

4.

Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Sebelum difraksinasi, terlebih dahulu dilakukan uji KLT untuk melihat pola
pemisahan komponen-komponen senyawa yang terdapat dalam ekstrak kasar. Uji
KLT juga dilakukan terhadap fraksi-fraksi yang akan difraksinasi dan juga fraksifraksi yang didapat setelah perlakuan fraksinasi. Uji KLT dilakukan
menggunakan sistem campuran eluen menggunakan pelarut n-heksana, etilasetat,
kloroform, benzena, metanol, dan diklorometana. Hasil kromatogram tersebut
kemudian disemprot menggunakan larutan serium sulfat untuk menampakkan
bercak/noda dari komponen senyawa tersebut. Ketika diperoleh fraksi yang lebih
sedikit bercak/noda dilihat dibawah lampu UV setelah dilakukan elusi terhadap
plat KLT. Setiap fraksi yang menghasilkan pola pemisahan dengan Rf (Retention
factor) yang sama pada kromatogram, digabung dan dipekatkan sehingga
diperoleh beberapa fraksi gabungan yang akan difraksinasi lebih lanjut.

5. Kromatotron
Setelah sampel diidentifikasi dengan menggunakan Kromatografi Lapis Tipis
(KLT), kemudian difraksinasi menggunakan kromatotron dengan menggunakan
plat silika 2 mm dan menggunakan eluen diklorometana/n-heksana. Sebelum
digunakan plat silika diaktifkan terlebih dahulu dengan pemanasan lampu pijar
selama 20 jam. Plat silika yang sudah aktif kemudian dipasang pada kromatotron
dan dibasahi perlahan dengan pelarut n-heksana sampai menetes, kemudian
sampel diteteskan perlahan ke dalam plat silika selagi basah. Setelah sampel
diteteskan pada plat silika, kemudian sampel dibiarkan mengering ±10 menit.

Setelah sampel kering, kemudian dialirkan 100 mL n-heksana dilanjutkan dengan
mengalirkan eluen diklorometana/n-heksana 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, dan 100%
masing-masing sebanyak 100 mL. Hasil fraksinasi kemudian ditampung dalam
botol-botol kecil berukuran ±10 mL. Setelah selesai fraksinasi, plat silika
kemudian dicuci dengan mengalirkan aseton sebanyak 100 mL dilanjutkan
dengan mengalirkan air-metanol 5% sebanyak 100 mL.

6. Kromatografi Kolom (KK)

Setelah dihasilkan fraksi-fraksi dengan jumlah yang lebih sedikit, tahapan
fraksinasi selanjutnya dilakukan menggunakan teknik kromatografi kolom.
Adsorben silika gel Merck (35-70 Mesh) dilarutkan dalam pelarut yang akan
digunakan dalam proses pengelusian. Slurry dari silika gel dimasukkan terlebih
dahulu ke dalam kolom, atur fasa diam hingga rapat (tidak berongga) dan rata.
Selanjutnya masukkan sampel yang telah diimpregnasi pada silika gel ke dalam
kolom yang telah berisi fasa diam. Pada saat sampel dimasukkan, usahakan agar
kolom tidak kering/kehabisan pelarut karena akan mengganggu fasa diam yang
telah dikemas rapat, sehingga proses elusi tidak akan terganggu.

7. Analisis Kemurnian
Uji kemurnian dilakukan dengan metode KLT dan uji titik leleh. Uji kemurnian
secara KLT menggunakan beberapa campuran eluen. Kemurnian suatu senyawa
ditunjukkan dengan timbulnya satu noda dengan berbagai campuran eluen yang
digunakan, kemudian disemprot menggunakan larutan serium sulfat untuk

menampakkan bercak/noda dari komponen senyawa tersebut dan pereaksi
Liebermann-Burchard untuk identifikasi senyawa steroid.
Untuk kristal yang berukuran besar, kristal terlebih dahulu digerus hingga
berbentuk serbuk kemudian kristal yang akan ditentukan titik lelehnya diletakkan
pada lempeng kaca, diambil sedikit dengan menggunakan pipet kapiler, alat
dihidupkan dan titik leleh diamati dengan bantuan kaca pembesar. Suhu pada saat
kristal pertama kali mulai meleleh sampai semua zat meleleh, itulah titik leleh dari
senyawa tersebut.

8. Spektroskopi Ultraungu–tampak (UV-VIS)
Sampel berupa kristal murni sebanyak 0,001 gram dilarutkan dalam 10 mL etil
asetat. Larutan ini digunakan sebagai persediaan untuk beberapa kali pengukuran.
Pertama, sampel diukur serapan maksimumnya dalam etil asetat lalu sampel
kristal tersebut dilarutkan dalam 10 mL etil asetat kemudian larutan diukur
serapan maksimumnya.

9. Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR)
Sampel kristal hasil isolasi yang telah murni dianalisis menggunakan
spektrofotometer inframerah. Kristal yang telah murni dibebaskan dari air
kemudian digerus bersama-sama dengan halida anorganik, KBr. Gerusan kristal
murni dengan KBr dibentuk menjadi lempeng tipis atau pelet dengan bantuan alat
penekan berkekuatan 8-10 ton per satuan luas kemudian pelet tersebut diukur
puncak serapannya (Sudjadi, 1983).

10. Spektroskopi Resonansi Magnetik Nuklir (NMR)

Sampel berupa kristal murni yang akan diidentifikasi dilarutkan ke dalam pelarut
inert yang tidak mengandung proton seperti CCl4 dan CDCl3, kemudian
ditambahkan sedikit senyawa acuan. Larutan ini ditempatkan dalam tabung gelas
tipis dengan tebal 5 mm di tengah-tengah kumparan frekuensi radio (rf) di antara
dua kutub magnet yang sangat kuat kemudian energi dari kumparan rf ditambah
secara terus-menerus. Energi pada frekuensi terpasang dari kumparan rf yang
diserap cuplikan direkam dan memberikan spektrum NMR (Silverstein et
al.,1986).

11. Spektroskopi GC-Massa (MS)

Spektroskopi GC-MS merupakan jenis kromatografi yang digunakan dalam kimia
organik untuk pemisahan dan analisis. GC dapat digunakan untuk menguji
kemurnian dari bahan tertentu atau memisahkan berbagai komponen dari
campuran. Dalam beberapa situasi, GC dapat membantu dalam mengidentifikasi
sebuah senyawa kompleks. Dalam kromatografi gas, fase yang bergerak atau
mobile phase adalah sebuah operator gas yang biasanya gas murni seperti helium
atau yang tidak reactive seperti gas nitrogen.

Stationary atau fasa diam

merupakan tahap mikroskopis lapisan cair atau polimer yang mendukung gas
murni di dalam bagian dari sistem pipa-pipa kaca atau logam yang disebut kolom.
Instrumen yang digunakan untuk melakukan kromatografi gas disebut gas
chromatograph atau aerograph (gas pemisah) (Pavia et al., 2006).

12. Spektroskopi Massa (MS)
Sampel diuapkan di bawah vakum dan diionkan menggunakan berkas elektron.
Ion sampel dipercepat menggunakan medan listrik memasuki tabung penganalisis
dan dilalukan dalam medan magnet. Dalam kekuatan medan magnet yang
diberikan, hanya ion-ion positif dan radikal positif akan difokuskan ke detektor,
sedang ion-ion yang lain (radikal netral) akan dibelokkan ke dinding tabung. Ion
dengan m/z lebih besar akan mencapai detektor lebih dulu diikuti m/z yang lebih
kecil. Arus listrik yang diterima detektor akan diperkuat dan spektrum massa dari
sampel akan direkam (Tim Penyusun, 2007).

49

V. SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan

Berdasarkan pembahasan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka diperoleh
simpulan sebagai berikut:
1. Pada penelitian ini telah berhasil diisolasi dan diidentifikasi senyawa steroid
dari buah mahkota dewa (Phaleria macrocarpa).
2. Senyawa steroid yang didapatkan memiliki sifat fisik berupa padatan berwarna
putih dengan titik leleh 135o-137oC.
3. Senyawa steroid yang dikenal dengan nama stigmast-5-en-3 -ol ( -sitosterol)
sebanyak 10 mg.

B. Saran
1. Penelitian lebih lanjut terhadap sampel buah mahkota dewa perlu dilakukan
sehingga memperoleh informasi lebih tentang jenis senyawa steroid yang
terkandung.
2. Penggunaan pelarut yang berbeda pada saat maserasi atau partisi sehingga
diharapkan memperoleh senyawa steroid dari jenis yang berbeda.
3. Melakukan uji aktivitas biologi terhadap senyawa stigmast-5-en-3 -ol
( -sitosterol).

DAFTAR PUSTAKA

Achmad, S.A. 1986. Kimia Organik Bahan Alam, Materi 4: Ilmu Kimia
Flavonoid. Karunia Universitas Terbuka. Jakarta. Hlm 39.
Achmad, S.A., E.H. Hakim, L.J. Dewi, L. Makmur, dan Y.A. Maolana. 2006.
Hakekat Perkembangan kimia Organik Bahan Alam Dari Tradisional ke
Moderen dan Contoh terkait Dengan Tumbuhan Lauraceae, Moraceae,
dan Dipterocarpaceae Indonesia. Akta Kimindo. 1 (2). Hlm 55-66.
Atun, S. 2005. Pengembagan Potensi Bahan Alam sebagai Sumber Penemuan
Obat Baru, Makalah disajikan dalam Seminar Nasional Kimia.
Universitas Negeri Yogyakarta.
Banwell, C.N. and E.M. McCash. 1994. Fundamental of Molecular
Spectroscopy. Mc Graw-Hill Book Company. London.
Burkill, I.H. 1966. A Dictionary of the Economic Products of the Malay
Penninsula. Vol II. Ministry of Agriculture and Co-operatives. Kuala
Lumpur. Hlm 1732.
Ersam, T. 2004. Keunggulan Biodiversitas Hutan Tropika Indonesia Dalam
Merekayasa Model Molekul Alami. Prosiding Seminar Nasional Kimia
VI. ITS. Surabaya. Hlm 4-12.
Fessenden, R.J. dan J. S. Fessenden. 1999. Kimia Organik Jilid I. Alih Bahasa
Hadyana Pujaatmaka. Erlangga. Jakarta. Hlm 525.
Fowlis, Ian A.,1998. Gas Chromatography Analytical Chemistry by Open
Learning. John Wiley & Sons Ltd: Chichester.
Gotawa, I. B. I. , Sugiarto, S. , Nurhadi, M. , Widiyastuti, Y. Wahyono, S. , Prapti,
I.