Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang Gendis (Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang
UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETIL ASETAT TERAKTIF
DAUN DANDANG GENDIS (Clinacanthus nutans)
MENGGUNAKAN UJI LETALITAS LARVA UDANG
DWI CAHYA AGUSTINA
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2012
ABSTRAK
DWI CAHYA AGUSTINA. Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang
Gendis (Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang. Dibimbing oleh
DUDI TOHIR dan GUSTINI SYAHBIRIN.
Dandang gendis (Clinacanthus nutans) merupakan tumbuhan obat yang biasa
digunakan masyarakat sebagai obat tradisional untuk antimalaria dan antidiabetes.
Penelitian diawali dengan maserasi serbuk daun dandang gendis menggunakan etanol,
kemudian ekstrak kasar etanol dipartisi menggunakan n-heksana. Fraksi etanol bebas
senyawa nonpolar kemudian dipartisi menggunakan etil asetat. Uji toksisitas
menggunakan uji letalitas larva udang terhadap ekstrak kasar etanol, fraksi n-heksana,
dan fraksi etil asetat. Fraksi etil asetat memiliki aktivitas paling tinggi dengan konsentrasi
mematikan 50% sebesar 64.32 mg/L. Ekstraksi kembali fraksi etanol bebas senyawa
nonpolar menggunakan pelarut etil asetat dengan kondisi waktu ekstraksi 90 menit,
jumlah ekstraksi 3 kali, dan nisbah sampel:pelarut 1:2 menghasilkan nilai LC50 sebesar
29.02 mg/L. Hasil uji fitokimia positif saponin, alkaloid, steroid, dan flavonoid.
Kandungan flavonoid ekstrak etil asetat re-ekstraksi lebih besar dibandingkan kandungan
flavonoid ekstrak etil asetat pada ekstraksi awal.
ABSTRACT
DWI CAHYA AGUSTINA. Toxicity Assay of The Most Active Ethyl Acetate Extract
from Clinacanthus nutans Leaves by Using Brine Shrimp Lethality Test. Supervised by
DUDI TOHIR and GUSTINI SYAHBIRIN.
Dandang gendis (Clinacanthus nutans) is a medical herb commonly used as a traditional
medicine as antimalarial and antidiabetic. This study was started with maceration of the
dried leaves of dandang gendis with ethanol,and then partitioned using n-hexane. The
ethanol extract free of nonpolar compounds was then partitioned with ethyl acetate. The
ethanol crude extract, n-hexane fraction, and ethyl acetate fraction were tested by using
brine shrimp lethality test to determine the toxicity of each extract. The ethyl acetate
fraction showed the highest activity with 50% lethal concentration (LC50) of 32 mg/L.
Re-extraction of ethanol extract free of nonpolar compounds by using ethyl acetate in 90
minutes by three times extraction with material:solvent ratio of 1:2 resulted LC50 value of
29.02 mg/L. Phytochemical assay results showed that the ethyl acetate extract of dandang
gendis leaves contained saponins, alkaloids, steroids, and flavonoids. Re-extraction of
ethyl acetate extract contained higher flavonoids than ethyl acetate extract from the first
extraction.
UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETIL ASETAT TERAKTIF
DAUN DANDANG GENDIS (Clinacanthus nutans)
MENGGUNAKAN UJI LETALITAS LARVA UDANG
DWI CAHYA AGUSTINA
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2012
Judul Skripsi : Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang Gendis
(Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang
Nama
: Dwi Cahya Agustina
NIM
: G44052565
Disetujui,
Pembimbing I
Pembimbing II
Drs Dudi Tohir, MS
NIP 19571104 198903 1 001
Dr Gustini Syahbirin, MS
NIP 19600819 198903 2 002
Diketahui,
Ketua Departemen Kimia
Prof Dr Ir Tun Tedja Irawadi, MS
NIP 19501227 197603 2 002
Tanggal lulus:
PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT atas rahmat dan
karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini. Karya ilmiah
yang berjudul Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang Gendis
(Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang merupakan salah
satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana sains pada Departemen Kimia FMIPA
IPB.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Drs Dudi Tohir, MS dan
Ibu Dr Gustini Syahbirin, MS sebagai pembimbing yang telah memberikan
arahan, saran, dan dorongan selama pelaksanaan penelitian dan penulisan karya
ilmiah ini. Ungkapan terima kasih penulis sampaikan kepada keluarga tercinta,
Bapak, Ibu, Mba Eka, Mas Didi, Yoga, dan Rara yang selalu memberikan
semangat, doa, dan kasih sayang dalam berbagai bentuk yang tak pernah putus.
Penulis mengucapkan terima kasih juga kepada Kak Budi Arifin, SSi, MSi, Pak
Sabur, Ibu Yeni, Ibu Aah, Teh Nia dan seluruh staf Laboratorium Kimia Organik
atas fasilitas dan bantuan yang diberikan selama penelitian. Ucapan terima kasih
tak lupa penulis berikan kepada Mba Sherly, Vicky, Rita, Irma, Gae, Ayu, dan
Noe yang turut membantu, memberikan semangat dan dukungannya dalam
penyusunan karya ilmiah, serta semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan
satu per satu. Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat.
Bogor, September 2012
Dwi Cahya Agustina
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Cirebon pada tanggal 15 Agustus 1986 sebagai putri
kedua dari tiga bersaudara dari pasangan Agnan Lukito dan Kusriyati Tedas.
Tahun 2004 penulis lulus dari SMU Negeri 2 Brebes dan pada tahun 2005
lulus seleksi masuk Institut Pertanian Bogor (IPB) melalui jalur Seleksi
Penerimaan Mahasiswa Baru (SPMB). Penulis memilih Program Studi Kimia,
Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis pernah menjadi asisten praktikum
Kimia Organik (2008/2009), Kimia Lingkungan (2008/2009), Kimia Dasar
(2010/2011). Bulan Juli - Agustus 2008, penulis melaksanakan praktik lapangan
di di Unit Pelaksana Teknis Biomaterial Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ............................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... vii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ vii
PENDAHULUAN ................................................................................................ 1
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat ..............................................................................................
Penentuan Kadar Air .....................................................................................
Ekstraksi ........................................................................................................
Uji Fitokimia ................................................................................................
Uji Toksisitas ................................................................................................
2
2
2
2
2
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air ......................................................................................................
Ekstrak ..........................................................................................................
Hasil Uji Fitokimia .......................................................................................
Hasil Uji Toksisitas.......................................................................................
3
3
3
4
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan ....................................................................................................... 4
Saran ............................................................................................................. 5
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 5
LAMPIRAN .......................................................................................................... 7
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Hasil uji fitokimia ekstrak etanol ............................................................................ 3
2 Hasil uji fitokimia ekstrak etil asetat awal dan re-ekstraksi..................................... 4
3 Nilai LC50 hasil ekstraksi daun dandang gendis . ................................................... 4
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Daun dandang gendis. ............................................................................................. 1
2 Struktur 5 senyawa dandang gendis yang mengandung sulfur ...................................... 1
3 A. salina ................................................................................................................... 4
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1
Diagram alir penelitian ......................................................................................... 8
2
Uji fitokimia .......................................................................................................... 9
3
Pembuatan stok ekstrak 5000 ppm dan penetasan larva A. salina ........................ 9
4
Uji toksisitas terhadap A. salina............................................................................ 9
5
Penentuan kadar air ............................................................................................. 10
6
Rendemen ekstrak etanol .................................................................................... 10
7
Hasil uji fitokimia ............................................................................................... 11
8
Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A salina ........... 12
9
Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A salina
menggunakan parameter waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali, dan
nisbah sampel:pelarut 1:2 .................................................................................... 13
vii
viii
1
PENDAHULUAN
Dandang gendis (Gambar 1) merupakan
salah satu tumbuhan obat tradisional yang
lazim
digunakan
masyarakat
sebagai
antidiabetes dan antimalaria. Kemampuan
ekstrak daun dandang gendis sebagai obat
alami dikarenakan terdapat kandungan
senyawa bioaktif di dalamnya. Dandang
gendis yang termasuk ke dalam famili
Acanthaceae memiliki banyak kandungan
kimia seperti alkaloid, flavonoid, dan
terpenoid (Suharty 1984).
Gambar 1 Daun dandang gendis.
Berbagai penelitian yang telah dilakukan
menunjukkan khasiat ekstrak daun dandang
gendis. Ekstrak etanol dapat dijadikan sebagai
antimalaria
dan
antimikrob
karena
mengandung senyawa trans-3-metilsulfonil-2propenol dan trans-3-metilsulfinil-2-propenol
(Tuntiwachwuttikul et al. 2003). Ekstrak daun
dandang gendis berpotensi sebagai antikanker
(Sofyan 2008), larvasida Aedes aegypti
(Andriani 2008), antivirus Herpes simplex
(Yoosook et al. 1999; Thongchai et al. 2008),
dan antioksidan (Pannangpetch et al. 2007;
Akbar 2010; Agustina 2011). Ekstrak air dari
daun dandang gendis juga berpotensi sebagai
antidiabetes, dibuktikan setelah pemberian
glukosa 2 g/kg (b/b) terjadi penurunan kadar
glukosa darah pada mencit (Nurulita 2005).
Penelitian Teshima et al. (1997)
menunjukkan 6 senyawa dalam ekstrak nbutanol daun dan batang dandang gendis,
yaitu senyawa C-glikosil flavon, viteksin,
isoviteksin, shaftosida, isomolupentin 7-Ο-βglukopiranosida, dan orientin. Penelitian
lanjutan Teshima et al. (1997) juga
menghasilkan 5 senyawa yang mengandung
sulfur dengan rumus molekul diantaranya
C10H18O8S (1), C10H18O7S (2), C12H21NO8S
(3), C10H18O8S (4), dan C10H18O8S (5).
(Gambar 2).
Gambar 2 Struktur 5 senyawa dandang gendis
yang mengandung sulfur (Teshima
et al. 1997)
Salah satu metode untuk menentukan
potensi bioaktif ekstrak tanaman adalah uji
kematian larva udang atau brine shrimp
lethality test (BSLT). Metode ini memiliki
beberapa kelebihan antara lain sederhana,
cepat, tidak memerlukan peralatan khusus,
dan hanya menggunakan sedikit ekstrak
contoh. Uji ini tidak spesifik untuk antitumor,
tetapi kemampuannya mendeteksi 14 dari 24
ekstrak Euphorbiaceae yang aktif terhadap uji
leukemia secara in vivo pada mencit dan
mendeteksi 2 dari 6 spesies yang aktif
terhadap
uji
karsinoma
nasofaring
menunjukkan bahwa uji ini dapat dipakai
untuk penapisan awal senyawa bioaktif
(Meyer et al. 1982).
Penelitian Setiawan (2009) meragamkan
parameter suhu, jumlah ekstraksi, dan nisbah
sampel:pelarut menghasilkan nilai konsentrasi
mematikan 50% (LC50) terendah sebesar
59.15 mg/L pada suhu 40 ºC, nisbah
sampel:pelarut 1:4, dan jumlah ekstraksi 3
kali. Penelitian ini melanjutkan penelitian
Setiawan (2009) dengan modifikasi parameter
yang digunakan meliputi waktu ekstraksi,
jumlah ekstraksi, dan nisbah sampel:pelarut.
Metode ekstraksi yang digunakan dalam
2
penelitian ini adalah ekstraksi padat-cair
secara maserasi, dilanjutkan dengan ekstraksi
cair-cair untuk memperoleh ekstrak paling
aktif. Ekstrak paling aktif berdasarkan uji
BSLT kemudian di re-ekstraksi dan ditentukan
kembali nilai LC50 dengan parameter waktu
ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali,
dan nisbah sampel:pelarut 1:2. Re-ekstraksi
dengan perlakuan 3 parameter tersebut
diharapkan meningkatkan bioaktivitas ekstrak
terhadap hewan uji. Penelitian ini bertujuan
menentukan nilai LC50 ekstrak teraktif daun
dandang gendis berdasarkan BSLT.
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan adalah daun
dandang gendis dari daerah Batuhulung
Bogor, A. salina, serbuk Mg, pereaksi Meyer,
Dragendorf, Wagner, Lieberman-Buchard,
FeCl3 1%, dan air laut.
Alat-alat yang digunakan adalah peralatan
kaca, mikropipet, pelat tetes, penguap putar,
sumur uji BSLT, dan peralatan penetasan telur
A. salina.
Ekstraksi
Sebanyak 400 g serbuk daun dandang
gendis dimaserasi beberapa kali hingga filtrat
tidak berwarna hijau lagi. Filtrat disaring
dengan kertas saring lalu dipekatkan pada
suhu 40 oC. Ekstrak etanol yang diperoleh
diuji BSLT dan fitokimia (Lampiran 1)
kemudian dipartisi menggunakan n-heksana.
Fraksi n-heksana dipekatkan lalu diuji BSLT
dan fitokimia. Fraksi etanol bebas senyawa
nonpolar ditambahkan air dan dipartisi
menggunakan etil asetat. Dihasilkan fraksi
etil asetat dan fraksi etanol-air. Kedua fraksi
tersebut juga dipekatkan dan diuji BSLT dan
fitokimia. Fraksi paling aktif dari hasil uji di
re-ekstraksi menggunakan 3 parameter yaitu
waktu
ekstraksi
90
menit,
nisbah
sampel:pelarut 1:2, dan jumlah ekstraksi 3
kali, lalu ditentukan kembali nilai LC50.
Uji Fitokimia
Uji fitokimia (flavonoid, alkaloid, saponin,
triterpenoid, steroid, dan tanin) dilakukan
berdasarkan prosedur Harborne (1987)
(Lampiran 2)
Uji Toksisitas
Penentuan Kadar Air
Pinggan porselen dikeringkan pada suhu
105 ºC selama 30 menit, didinginkan dalam
eksikator, dan ditimbang. Daun yang telah
dikeringudarakan kurang lebih sebanyak 3 g
dimasukkan ke dalam pinggan, dikeringkan
pada suhu 105 ºC selama 3 jam, didinginkan
dalam eksikator dan ditimbang. Pengeringan
diulangi lagi selama 3 jam pada suhu 105 ºC,
didinginkan, kemudian ditimbang kembali.
Prosedur ini diulangi hingga didapat bobot
yang tetap (stabil). Kadar air dihitung dengan
persamaan sebagai berikut:
Keterangan:
a = bobot contoh awal (g)
b = bobot contoh akhir (g)
Sepuluh ekor A. salina yang telah
ditetaskan dimasukkan ke dalam sumur uji
BSLT yang berisi air laut dan dibuat
konsentrasi ekstrak 0, 10, 100, 500, dan 1000
mg/L (Lampiran 3 dan 4). Pengamatan
dilakukan 24 jam setelah penetasan dengan
menghitung jumlah A. salina yang mati
dengan bantuan kaca pembesar. Data persen
mortalitas diolah menggunakan analisis probit
dengan tingkat kepercayaan 95%. Kurva
penentuan LC50 dibuat menghubungkan log
konsentrasi dengan nilai probit. Nilai LC50
diperoleh dengan menarik garis bantu pada
titik tengah sumbu probit dan sumbu log
konsentrasi pada kurva.
3
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Daun dandang gendis yang telah dikering
kan dan digiling menjadi serbuk ditentukan
kadar airnya menggunakan metode gravimetri
taklangsung pada suhu 105 ºC. Kadar air yang
ditentukan adalah yang terikat secara fisik dan
dapat dihilangkan pada suhu 100 - 105 ºC
(Harjadi 1993). Kadar air digunakan sebagai
parameter
ketahanan
bahan
dalam
penyimpanan dan sebagai faktor koreksi untuk
rendemen. Menurut Winarno (1997), apabila
kadar air suatu bahan kurang dari 10%,
pertumbuhan mikrob dapat dihindari sehingga
bahanl dapat disimpan dalam waktu relatif
lama.
Kadar air daun dandang gendis kering
diperoleh sebesar 9.69% (Lampiran 5). Hasil
ini masih di bawah 10% sehingga sampel
dapat disimpan dalam waktu relatif lama.
Ekstrak
Proses diawali dengan maserasi sampel
menggunakan etanol. Maserasi dilakukan
berulang kali sampai filtrat tidak berwarna
hijau lagi, sehingga dapat dianggap semua
senyawa yang berbobot molekul rendah telah
terekstraksi (Harborne 1987). Penggunaan
etanol yang bersifat polar didasarkan pada
sifat senyawa polar yang akan diekstraksi
yaitu flavonoid, alkaloid, tanin. Diharapkan
semua senyawa tersebut dapat terekstraksi
dengan baik oleh pelarut dengan sifat
kepolaran yang sama. Selain itu etanol
memiliki titik didih yang rendah sehingga
mudah diuapkan kembali, dan sifatnya tidak
setoksik pelarut polar lainnya seperti metanol.
Maserasi dengan etanol menghasilkan
rendemen sebesar 25.46% (Lampiran 6).
Ekstrak etanol selanjutnya dipartisi dengan
n-heksana untuk menarik senyawa nonpolar.
Fraksi etanol bebas senyawa nonpolar
ditambahkan akuades dan dipartisi kembali
dengan etil asetat. Akuades ditambahkan
untuk meningkatkan kepolaran, sebab etil
asetat memiliki kepolaran yang tidak jauh
berbeda dengan etanol. Hal ini dapat
memperjelas batas pemisahan pada proses
partisi etil asetat (Afif 2006).
Parameter waktu re-ekstraksi dipilih 90
menit karena pada saat itu ekstrak telah
menjadi lebih jernih dibandingkan dengan
waktu ekstraksi 30 dan 60 menit. Semakin
lama waktu ekstraksi semakin banyak
senyawa bioaktif akan terambil, ditandai
dengan perubahan warna ekstrak. Demikian
pula dengan jumlah ekstraksi, ekstraksi
beberapa kali dengan sedikit pelarut lebih
efektif dibandingkan dengan menggunakan
pelarut dalam jumlah banyak sekaligus.
Hasil Uji Fitokimia
Uji kualitatif fitokimia digunakan untuk
mengetahui jenis senyawa metabolit sekunder
yang terkandung dalam ekstrak. Golongan
senyawa dapat ditentukan dari perubahan
warna setelah penambahan pereaksi spesifik
untuk setiap uji kualitatif. Hasil uji fitokimia
ekstrak kasar daun dandang gendis (Tabel 1)
ialah terbentuknya warna putih, cokelat, dan
jingga dengan pereaksi Meyer, Wagner, dan
Dragendorf; terbentuk buih yang stabil setelah
pengocokan; terbentuk warna jingga pada
lapisan amil alkohol; terbentuk warna hijau
dengan pereaksi Lieberman-Buchard; dan
warna hitam dengan FeCl3 1%. Hasil ini
berturut-turut menunjukkan bahwa ekstrak
kasar
daun
dandang
gendis
positif
mengandung senyawa alkaloid, saponin,
flavonoid, steroid, dan tanin. Sementara
ekstrak etil asetat hasil re-ekstraksi
mengandung alkaloid, saponin, steroid, dan
flavonoid (Tabel 2). Kandungan flavonoid
ekstrak etil asetat re-ekstraksi lebih besar
daripada kandungan flavonoid ekstrak etil
asetat awal, terlihat dari lebih pekatnya warna
yang dihasilkan. Gambar hasil uji fitokimia
dapat dilihat pada Lampiran 7.
Tabel 1 Hasil uji fitokimia ekstrak etanol
Golongan Senyawa
Etanol
Alkaloid
Saponin
Flavonoid
Triterpenoid
Steroid
Tanin
+++
+++
+++
+++
+++
Keterangan : + menunjukkan kepekatan warna
4
Tabel 2 Hasil uji fitokimia ekstrak etil asetat
awal dan re-ekstraksi
*Etil Asetat
Golongan
Etil Asetat
ReSenyawa
Awal
ekstraksi
Alkaloid
++
++
Saponin
++
++
Flavonoid
++
+++
Triterpenoid
Steroid
Tanin
-
-
++
++
++
-
Keterangan : *re-ekstraksi dilakukan pada kondisi
waktu ekstraksi 90 menit, jumlah
ekstraksi 3 kali, dan nisbah
sampel:pelarut 1:2
Hasil Uji Toksisitas
Proses penetasan larva udang A. salina
(Gambar 3) menggunakan air laut dengan
bantuan aerator untuk menjaga kadar oksigen
yang terlarut. Gelembung udara dari aerator
juga berfungsi untuk mengaduk telur agar
tidak mengendap di dasar wadah. Telur akan
sulit menetas jika oksigen dalam air kurang.
Penyinaran selama proses penetasan berfungsi
menjaga kondisi air laut agar tetap hangat.
Umur larva udang yang digunakan adalah 24
jam setelah menetas. Kondisi membran sel
larva udang pada umur tersebut masih lunak
sehingga memudahkan senyawa asing dalam
air laut masuk dan menyebabkan kematian.
Kematian larva udang yang disebabkan
masuknya senyawa asing dijadikan dasar
untuk pengujian toksisitas ekstrak aktif daun
dandang gendis dalam penelitian ini.
Tabel 3 Nilai LC50 hasil ekstraksi daun
dandang gendis
LC50
Pelarut
(mg/L)
124.42
Etanol
668.95
n-heksana
276.94
Etanol-air
64.32
Etil asetat
29.02
Etil asetat re-ekstraksi
LC50 yang diperoleh menunjukkan bahwa
semua ekstrak memiliki potensi bioaktif.
Ekstrak etil asetat paling aktif dengan nilai
LC50 64.32 mg/L (Lampiran 8). Selanjutnya
dilakukan re-ekstraksi terhadap fraksi paling
aktif dengan menggunakan 3 parameter, yaitu
waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3
kali, dan nisbah sampel:pelarut 1:2 yang
kemudian ditentukan kembali nilai LC50 nya.
Ekstrak etil asetat hasil re-ekstraksi
menghasilkan nilai LC50 sebesar 29.02 mg/L
dengan R2 = 99.2% (Lampiran 9). LC50 yang
dihasilkan lebih rendah dari penelitian
Setiawan
(2009)
yang
menggunakan
parameter suhu 40 ºC, nisbah sampel:pelarut
1:4, dan jumlah ekstraksi 3 kali dan
menghasilkan nilai LC50 sebesar 59.15 mg/L.
Setelah dilakukan re-ekstraksi, nilai LC50
fraksi etil asetat turun menjadi 29.02 mg/L.
Semakin kecil nilai LC50, semakin tinggi
aktivitasnya. Hal ini menunjukkan bahwa
lamanya waktu, jumlah ekstraksi, dan nisbah
sampel:pelarut dapat meningkatkan keaktifan
ekstrak dalam penelitian ini. Turunnya nilai
LC50 dapat juga disebabkan karena kandungan
flavonoid ekstrak etil asetat hasil re-ekstraksi
lebih besar dibandingkan dengan kandungan
flavonoid pada ekstrak etil asetat awal.
Keaktifan etil asetat hasil re-ekstraksi ini
tergolong sangat aktif menurut National
Cancer Institute (NCI) Amerika yang
menyatakan bahwa standar efektivitas
komponen bioaktif untuk melawan sel kanker
adalah ≤ 30 mg/L (Albuntana et al. 2011).
Gambar 3 A. salina.
SIMPULAN DAN SARAN
Suatu senyawa memiliki potensi bioaktif
jika nilai LC50-nya di bawah 1000 mg/L. Hasil
pengujian toksisitas larva udang ekstrak kasar
(fraksi etanol), fraksi n-heksana, fraksi etanolair, fraksi etil asetat, dan fraksi etil asetat reekstraksi dapat dilihat pada Tabel 3.
Simpulan
Setelah dilakukan re-ekstraksi, nilai LC50
fraksi etil asetat turun dari 64.32 mg/L
menjadi 29.02 mg/L. Hasil uji fitokimia
5
menunjukkan
etil
asetat
re-ekstraksi
mengandung alkaloid, saponin, steroid, dan
flavonoid dengan kandungan flavonoid lebih
besar dibandingkan kandungan flavonoid
ekstrak etil asetat ekstraksi awal.
Saran
Perlu penelitian lanjutan ke arah potensi
daun dandang gendis sebagai antikanker
secara in vitro menggunakan sel kanker.
DAFTAR PUSTAKA
Afif KH. 2006. Peningkatan kadar kurkumin
ekstrak etanol temulawak dengan metode
ekstraksi cair-cair [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Agustina S. 2011. Isolasi golongan flavonoid
sebagai antioksidan dari daun dandang
gendis (Clinacanthus nutans) [skripsi].
Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Akbar HR. 2010. Isolasi dan identifikasi
golongan flavonoid daun dandang gendis
(Clinacanthus nutans) berpotensi sebagai
antioksidan [skripsi]. Bogor: Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Institut Pertanian Bogor.
Albuntana A, Yasman, Wardhana W. 2011.
Uji toksisitas ekstrak empat jenis teripang
suku Holothuriidae dari Pulau Penjaliran
Timur, Kep. Seribu, Jakarta menggunakan
BSLT. J Ilmu Teknol Kelautan Trop 3:6572.
Andriani A. 2008. Identifikasi senyawa
golongan aktif ekstrak daun Clinacanthus
nutans yang berpotensi sebagai larvasida
pada Aedes aegypti [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Padmawinata K, Sudiro I, penerjemah.
Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Terjemahan dari: Phytochemical Method.
Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar.
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Meyer BN et al. 1982. Brine shrimp: a
convenient general bioassay for active
plant constituent. Planta Med 45:31-34.
Nurulita Y. 2005. Penapisan aktivitas
antidiabetes isolat ekstrak air daun
dandang gendis (Clinacanthus nutans)
pada mencit Swiss Webster jantan
[skripsi]. Bandung: Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Teknologi Bandung.
Pannangpetch P et al. 2007. Antioxidant
activity and protective effect against
oxidative hemolysis of Clinacanthus
nutans (Burm.f) Lindau. J Sci Technol 1:
1-9.
Setiawan I. 2009. Optimalisasi ekstraksi caircair fraksi etanol ekstrak daun dandang
gendis (Clinacanthus nutans) pada uji
toksisitas Artemia salina [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Sofyan D. 2008. Inhibisi fraksi aktif daun
dandang gendis (Clinacanthus nutans)
pada pertumbuhan
Saccharomyces
cerevisiae sebagai uji potensi antikanker
[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Suharty NS. 1984. Isolasi terpenoid dari daun
Clinacanthus nutans [tesis]. Bandung:
Program Pascasarjana, Institut Teknologi
Bandung.
Teshima I et al. 1997. Sulfur-containing
glucosides from Clinacanthus nutans.
Phytochemistry 48:831-835.
Thongcai S et al. 2008. Anti-herpes simplex
virus type 1 activity of crude ethyl acetate
extract
derived
from
leaves
of
Clinacanthus nutans Lindau. J Sci Technol
27:318-326.
6
Tuntiwachwuttikul P, Yupa P, Pootchana P,
Thongchai S, Walter CT. 2003. Sulfurcontaining compounds from Clinacanthus
siamensis [abstrak]. Pharm Soc Japan
51:1423-1425.
Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi.
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Yoosook C, Panpisutchai Y, Chaichana S,
Santisuk T, Reutrakul V. 1999. Evaluation
of anti-HSV-2 activities of Barleria
lupulina and Clinacanthus nutans. J
Ethnopharmacol 67:179-187.
LAMPIRAN
7
Lampiran 1 Diagram alir penelitian
Daun Kering
Uji BSLT
Maserasi dengan etanol sampai filtrat
tak berwarna
Dipekatkan
Ekstrak Etanol
Uji Fitokimia
Partisi dengan n-heksana
Fraksi Etanol
+Akuades
Partisi dengan etil asetat
Fraksi n-Heksana
Fraksi Etanol-Air
*Re-ekstraksi
*Fraksi Etil Asetat
Dipekatkan
*fraksi paling aktif di re-ekstraksi
menggunakan parameter waktu 90 menit, 3
kali jumlah ekstraksi, dan nisbah
bahan:pelarut 1:2
Uji BSLT
Uji Fitokimia
8
9
Lampiran 2 Uji fitokimia
Uji alkaloid. Sebanyak 0.1 g sampel dilarutkan dalam 10 mL kloroform dan 4 tetes
NH4OH kemudian disaring dan filtratnya dimasukkan ke dalam tabung reaksi tertutup.
Ekstrak kloroform dalam tabung reaksi dikocok dengan 6 mL H2SO4 2 M dan lapisan
asamnya dipisahkan ke dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam ini diteteskan pada
lempeng tetes dan ditambahkan pereaksi Meyer, Wagner, dan Dragendorf yang akan
menimbulkan endapan dengan warna berturut-turut putih, cokelat, dan merah jingga.
Uji saponin dan flavonoid. Sebanyak 0.1 g sampel dimasukkan ke dalam gelas piala
kemudian ditambahkan 100 mL air panas dan didihkan selama 5 menit. Setelah itu,
disaring dan filtratnya digunakan untuk pengujian. Untuk uji saponin, 10 mL filtrat
dimasukkan ke dalam tabung reaksi tertutup kemudian dikocok selama 10 detik dan
dibiarkan selama 10 menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang
stabil. Sebanyak 10 mL filtrat yang lain ditambahkan 0.5 g serbuk Mg, 1 mL HCl pekat,
dan 1 mL amil alkohol kemudian dikocok dengan kuat. Terbentuknya warna merah,
kuning, dan jingga pada lapisan amil alkohol menunjukkan adanya flavonoid.
Uji triterpenoid dan steroid. Sebanyak 0.1 g sampel dilarutkan dengan 25 mL etanol
panas (50 oC) kemudian hasilnya disaring ke dalam pinggan porselen dan diuapkan
sampai kering. Residu ditambahkan eter dan ekstrak eter dipindahkan ke dalam lempeng
tetes kemudian ditambahkan 3 tetes anhidrida asetat dan 1 tetes H2SO4 pekat (uji
Lieberman-Buchard). Warna merah atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid dan
warna hijau atau biru menunjukkan adanya steroid.
Uji Tanin. Sebanyak 0.1 g sampel ditambahkan 100 mL air panas, dididihkan selama
5 menit, dan disaring. Sebagian filtrat yang diperoleh ditambah larutan FeCl3 1%.
Terbentuknya warna hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin (Harborne 1987).
Lampiran 3 Pembuatan stok ekstrak 5000 ppm dan penetasan larva A. salina
Pembuatan stok ekstrak 5000 ppm
Ekstrak ditimbang sebanyak 0.25 g lalu dimasukkan ke dalam gelas piala 25 mL yang
berisi air laut kemudian diaduk sampai larut sempurna. Bila tidak larut, ditambahkan
Tween 80 secukupnya. Larutan ekstrak dimasukkan ke dalam labu takar 50 mL lalu ditera
dengan air laut.
Penetasan larva A. salina.
Kista A. salina yang sudah siap ditetaskan ditimbang sebanyak 50 mg lalu dimasukkan
ke dalam wadah yang berisi air laut yang sudah disaring; setelah itu, diaerasi. Kista
dibiarkan selama 48 jam di bawah pencahayaan lampu agar menetas sempurna. Larva
yang sudah menetas diambil untuk digunakan dalam uji toksisitas.
Lampiran 4 Uji toksisitas terhadap A. salina
Sebanyak 10 ekor larva A. salina dimasukkan ke dalam vial yang berisi air laut
kemudian ditambahkan larutan ekstrak kasar dan ditepatkan volumenya dengan air laut
hingga konsentrasinya menjadi 0, 10, 100, 500, dan 1000 mg/L. Pengamatan dilakukan
setelah 24 jam dengan menghitung jumlah larva yang mati dari total larva yang
dimasukkan ke dalam vial. Pengamatan memakai bantuan lampu neon.
10
Lampiran 5 Penentuan kadar air
Ulangan
a (g)
b (g)
c (g)
1
2
3
3.0112
3.0055
3.0048
23.8117
24.8111
23.4497
23.5198
24.5091
23.1482
Rataan
Kadar air
(%b/b)
9.69
10.00
10.03
9.93
Keterangan:
a : bobot sampel (g)
b : bobot sampel dan cawan petri sebelum dikeringkan (g)
c : bobot sampel dan cawan petri setelah dikeringkan (g)
Contoh perhitungan:
Lampiran 6 Rendemen ekstrak etanol
Bobot sampel
Bobot labu bulat kosong
Bobot labu bulat + isi
Bobot isi
Contoh perhitungan:
= 400.00 g
= 244.25 g
= 335.95 g
= 91.70 g
11
Lampiran 7 Hasil uji fitokimia
Ekstrak kasar etanol
Meyer
Wagner
Dragendorf
(Alkaloid)
(Steroid)
(Flavonoid)
Ekstrak etil asetat ekstraksi awal
Meyer
Wagner
Dragendorf
( Alkaloid)
(Steroid)
(Flavonoid)
Ekstrak etil asetat re-ekstraksi
Meyer
Wagner
(Alkaloid)
Dragendorff
(Steroid)
( Flavonoid)
12
Lampiran 8 Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A. salina
Konsentrasi (mg/L)
0
10
100
500
1000
Jumlah Larva Artemia
Jumlah yang mati
%Mortalitas
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
0
0
0
2
2
1
4
5
7
8
8
9
9
10
10
20
20
10
40
50
70
80
80
90
90
100
100
Rerata
Probit
Log (mg/L)
16.67
4.05
1
53.33
5.08
2
83.33
5.95
2.6989
96.67
6.88
3
Contoh perhitungan:
Konsentrasi 10 ppm ulangan 1
Keterangan:
Nilai probit diperoleh dengan merefleksikan nilai % mortalitas ke dalam tabel probit,
kemudian dibuat kurva linear hubungan antara log konsentrasi dengan nilai probit.
Persamaan garis yang diperoleh:
13
Lampiran 9 Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A salina
menggunakan parameter waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali,
dan nisbah sampel:pelarut 1:2
Konsentrasi (mg/L)
0
10
100
500
1000
Jumlah Larva Artemia
Jumlah yang mati
%Mortalitas
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
0
0
0
3
4
3
7
6
7
9
9
8
10
10
10
30
40
30
70
60
70
90
90
80
100
100
100
Rerata
Probit
Log (mg/L)
33.33
4.56
1
70
5.52
2
86.67
6.13
2.6989
100
8
3
Nilai probit diperoleh dengan merefleksikan nilai % mortalitas ke dalam tabel probit,
kemudian dibuat kurva linear hubungan antara log konsentrasi dengan nilai probit.
Persamaan garis yang diperoleh:
14
DAUN DANDANG GENDIS (Clinacanthus nutans)
MENGGUNAKAN UJI LETALITAS LARVA UDANG
DWI CAHYA AGUSTINA
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2012
ABSTRAK
DWI CAHYA AGUSTINA. Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang
Gendis (Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang. Dibimbing oleh
DUDI TOHIR dan GUSTINI SYAHBIRIN.
Dandang gendis (Clinacanthus nutans) merupakan tumbuhan obat yang biasa
digunakan masyarakat sebagai obat tradisional untuk antimalaria dan antidiabetes.
Penelitian diawali dengan maserasi serbuk daun dandang gendis menggunakan etanol,
kemudian ekstrak kasar etanol dipartisi menggunakan n-heksana. Fraksi etanol bebas
senyawa nonpolar kemudian dipartisi menggunakan etil asetat. Uji toksisitas
menggunakan uji letalitas larva udang terhadap ekstrak kasar etanol, fraksi n-heksana,
dan fraksi etil asetat. Fraksi etil asetat memiliki aktivitas paling tinggi dengan konsentrasi
mematikan 50% sebesar 64.32 mg/L. Ekstraksi kembali fraksi etanol bebas senyawa
nonpolar menggunakan pelarut etil asetat dengan kondisi waktu ekstraksi 90 menit,
jumlah ekstraksi 3 kali, dan nisbah sampel:pelarut 1:2 menghasilkan nilai LC50 sebesar
29.02 mg/L. Hasil uji fitokimia positif saponin, alkaloid, steroid, dan flavonoid.
Kandungan flavonoid ekstrak etil asetat re-ekstraksi lebih besar dibandingkan kandungan
flavonoid ekstrak etil asetat pada ekstraksi awal.
ABSTRACT
DWI CAHYA AGUSTINA. Toxicity Assay of The Most Active Ethyl Acetate Extract
from Clinacanthus nutans Leaves by Using Brine Shrimp Lethality Test. Supervised by
DUDI TOHIR and GUSTINI SYAHBIRIN.
Dandang gendis (Clinacanthus nutans) is a medical herb commonly used as a traditional
medicine as antimalarial and antidiabetic. This study was started with maceration of the
dried leaves of dandang gendis with ethanol,and then partitioned using n-hexane. The
ethanol extract free of nonpolar compounds was then partitioned with ethyl acetate. The
ethanol crude extract, n-hexane fraction, and ethyl acetate fraction were tested by using
brine shrimp lethality test to determine the toxicity of each extract. The ethyl acetate
fraction showed the highest activity with 50% lethal concentration (LC50) of 32 mg/L.
Re-extraction of ethanol extract free of nonpolar compounds by using ethyl acetate in 90
minutes by three times extraction with material:solvent ratio of 1:2 resulted LC50 value of
29.02 mg/L. Phytochemical assay results showed that the ethyl acetate extract of dandang
gendis leaves contained saponins, alkaloids, steroids, and flavonoids. Re-extraction of
ethyl acetate extract contained higher flavonoids than ethyl acetate extract from the first
extraction.
UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETIL ASETAT TERAKTIF
DAUN DANDANG GENDIS (Clinacanthus nutans)
MENGGUNAKAN UJI LETALITAS LARVA UDANG
DWI CAHYA AGUSTINA
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2012
Judul Skripsi : Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang Gendis
(Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang
Nama
: Dwi Cahya Agustina
NIM
: G44052565
Disetujui,
Pembimbing I
Pembimbing II
Drs Dudi Tohir, MS
NIP 19571104 198903 1 001
Dr Gustini Syahbirin, MS
NIP 19600819 198903 2 002
Diketahui,
Ketua Departemen Kimia
Prof Dr Ir Tun Tedja Irawadi, MS
NIP 19501227 197603 2 002
Tanggal lulus:
PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT atas rahmat dan
karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini. Karya ilmiah
yang berjudul Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Teraktif Daun Dandang Gendis
(Clinacanthus nutans) Menggunakan Uji Letalitas Larva Udang merupakan salah
satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana sains pada Departemen Kimia FMIPA
IPB.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Drs Dudi Tohir, MS dan
Ibu Dr Gustini Syahbirin, MS sebagai pembimbing yang telah memberikan
arahan, saran, dan dorongan selama pelaksanaan penelitian dan penulisan karya
ilmiah ini. Ungkapan terima kasih penulis sampaikan kepada keluarga tercinta,
Bapak, Ibu, Mba Eka, Mas Didi, Yoga, dan Rara yang selalu memberikan
semangat, doa, dan kasih sayang dalam berbagai bentuk yang tak pernah putus.
Penulis mengucapkan terima kasih juga kepada Kak Budi Arifin, SSi, MSi, Pak
Sabur, Ibu Yeni, Ibu Aah, Teh Nia dan seluruh staf Laboratorium Kimia Organik
atas fasilitas dan bantuan yang diberikan selama penelitian. Ucapan terima kasih
tak lupa penulis berikan kepada Mba Sherly, Vicky, Rita, Irma, Gae, Ayu, dan
Noe yang turut membantu, memberikan semangat dan dukungannya dalam
penyusunan karya ilmiah, serta semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan
satu per satu. Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat.
Bogor, September 2012
Dwi Cahya Agustina
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Cirebon pada tanggal 15 Agustus 1986 sebagai putri
kedua dari tiga bersaudara dari pasangan Agnan Lukito dan Kusriyati Tedas.
Tahun 2004 penulis lulus dari SMU Negeri 2 Brebes dan pada tahun 2005
lulus seleksi masuk Institut Pertanian Bogor (IPB) melalui jalur Seleksi
Penerimaan Mahasiswa Baru (SPMB). Penulis memilih Program Studi Kimia,
Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis pernah menjadi asisten praktikum
Kimia Organik (2008/2009), Kimia Lingkungan (2008/2009), Kimia Dasar
(2010/2011). Bulan Juli - Agustus 2008, penulis melaksanakan praktik lapangan
di di Unit Pelaksana Teknis Biomaterial Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ............................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... vii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ vii
PENDAHULUAN ................................................................................................ 1
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat ..............................................................................................
Penentuan Kadar Air .....................................................................................
Ekstraksi ........................................................................................................
Uji Fitokimia ................................................................................................
Uji Toksisitas ................................................................................................
2
2
2
2
2
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air ......................................................................................................
Ekstrak ..........................................................................................................
Hasil Uji Fitokimia .......................................................................................
Hasil Uji Toksisitas.......................................................................................
3
3
3
4
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan ....................................................................................................... 4
Saran ............................................................................................................. 5
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 5
LAMPIRAN .......................................................................................................... 7
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Hasil uji fitokimia ekstrak etanol ............................................................................ 3
2 Hasil uji fitokimia ekstrak etil asetat awal dan re-ekstraksi..................................... 4
3 Nilai LC50 hasil ekstraksi daun dandang gendis . ................................................... 4
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Daun dandang gendis. ............................................................................................. 1
2 Struktur 5 senyawa dandang gendis yang mengandung sulfur ...................................... 1
3 A. salina ................................................................................................................... 4
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1
Diagram alir penelitian ......................................................................................... 8
2
Uji fitokimia .......................................................................................................... 9
3
Pembuatan stok ekstrak 5000 ppm dan penetasan larva A. salina ........................ 9
4
Uji toksisitas terhadap A. salina............................................................................ 9
5
Penentuan kadar air ............................................................................................. 10
6
Rendemen ekstrak etanol .................................................................................... 10
7
Hasil uji fitokimia ............................................................................................... 11
8
Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A salina ........... 12
9
Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A salina
menggunakan parameter waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali, dan
nisbah sampel:pelarut 1:2 .................................................................................... 13
vii
viii
1
PENDAHULUAN
Dandang gendis (Gambar 1) merupakan
salah satu tumbuhan obat tradisional yang
lazim
digunakan
masyarakat
sebagai
antidiabetes dan antimalaria. Kemampuan
ekstrak daun dandang gendis sebagai obat
alami dikarenakan terdapat kandungan
senyawa bioaktif di dalamnya. Dandang
gendis yang termasuk ke dalam famili
Acanthaceae memiliki banyak kandungan
kimia seperti alkaloid, flavonoid, dan
terpenoid (Suharty 1984).
Gambar 1 Daun dandang gendis.
Berbagai penelitian yang telah dilakukan
menunjukkan khasiat ekstrak daun dandang
gendis. Ekstrak etanol dapat dijadikan sebagai
antimalaria
dan
antimikrob
karena
mengandung senyawa trans-3-metilsulfonil-2propenol dan trans-3-metilsulfinil-2-propenol
(Tuntiwachwuttikul et al. 2003). Ekstrak daun
dandang gendis berpotensi sebagai antikanker
(Sofyan 2008), larvasida Aedes aegypti
(Andriani 2008), antivirus Herpes simplex
(Yoosook et al. 1999; Thongchai et al. 2008),
dan antioksidan (Pannangpetch et al. 2007;
Akbar 2010; Agustina 2011). Ekstrak air dari
daun dandang gendis juga berpotensi sebagai
antidiabetes, dibuktikan setelah pemberian
glukosa 2 g/kg (b/b) terjadi penurunan kadar
glukosa darah pada mencit (Nurulita 2005).
Penelitian Teshima et al. (1997)
menunjukkan 6 senyawa dalam ekstrak nbutanol daun dan batang dandang gendis,
yaitu senyawa C-glikosil flavon, viteksin,
isoviteksin, shaftosida, isomolupentin 7-Ο-βglukopiranosida, dan orientin. Penelitian
lanjutan Teshima et al. (1997) juga
menghasilkan 5 senyawa yang mengandung
sulfur dengan rumus molekul diantaranya
C10H18O8S (1), C10H18O7S (2), C12H21NO8S
(3), C10H18O8S (4), dan C10H18O8S (5).
(Gambar 2).
Gambar 2 Struktur 5 senyawa dandang gendis
yang mengandung sulfur (Teshima
et al. 1997)
Salah satu metode untuk menentukan
potensi bioaktif ekstrak tanaman adalah uji
kematian larva udang atau brine shrimp
lethality test (BSLT). Metode ini memiliki
beberapa kelebihan antara lain sederhana,
cepat, tidak memerlukan peralatan khusus,
dan hanya menggunakan sedikit ekstrak
contoh. Uji ini tidak spesifik untuk antitumor,
tetapi kemampuannya mendeteksi 14 dari 24
ekstrak Euphorbiaceae yang aktif terhadap uji
leukemia secara in vivo pada mencit dan
mendeteksi 2 dari 6 spesies yang aktif
terhadap
uji
karsinoma
nasofaring
menunjukkan bahwa uji ini dapat dipakai
untuk penapisan awal senyawa bioaktif
(Meyer et al. 1982).
Penelitian Setiawan (2009) meragamkan
parameter suhu, jumlah ekstraksi, dan nisbah
sampel:pelarut menghasilkan nilai konsentrasi
mematikan 50% (LC50) terendah sebesar
59.15 mg/L pada suhu 40 ºC, nisbah
sampel:pelarut 1:4, dan jumlah ekstraksi 3
kali. Penelitian ini melanjutkan penelitian
Setiawan (2009) dengan modifikasi parameter
yang digunakan meliputi waktu ekstraksi,
jumlah ekstraksi, dan nisbah sampel:pelarut.
Metode ekstraksi yang digunakan dalam
2
penelitian ini adalah ekstraksi padat-cair
secara maserasi, dilanjutkan dengan ekstraksi
cair-cair untuk memperoleh ekstrak paling
aktif. Ekstrak paling aktif berdasarkan uji
BSLT kemudian di re-ekstraksi dan ditentukan
kembali nilai LC50 dengan parameter waktu
ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali,
dan nisbah sampel:pelarut 1:2. Re-ekstraksi
dengan perlakuan 3 parameter tersebut
diharapkan meningkatkan bioaktivitas ekstrak
terhadap hewan uji. Penelitian ini bertujuan
menentukan nilai LC50 ekstrak teraktif daun
dandang gendis berdasarkan BSLT.
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan adalah daun
dandang gendis dari daerah Batuhulung
Bogor, A. salina, serbuk Mg, pereaksi Meyer,
Dragendorf, Wagner, Lieberman-Buchard,
FeCl3 1%, dan air laut.
Alat-alat yang digunakan adalah peralatan
kaca, mikropipet, pelat tetes, penguap putar,
sumur uji BSLT, dan peralatan penetasan telur
A. salina.
Ekstraksi
Sebanyak 400 g serbuk daun dandang
gendis dimaserasi beberapa kali hingga filtrat
tidak berwarna hijau lagi. Filtrat disaring
dengan kertas saring lalu dipekatkan pada
suhu 40 oC. Ekstrak etanol yang diperoleh
diuji BSLT dan fitokimia (Lampiran 1)
kemudian dipartisi menggunakan n-heksana.
Fraksi n-heksana dipekatkan lalu diuji BSLT
dan fitokimia. Fraksi etanol bebas senyawa
nonpolar ditambahkan air dan dipartisi
menggunakan etil asetat. Dihasilkan fraksi
etil asetat dan fraksi etanol-air. Kedua fraksi
tersebut juga dipekatkan dan diuji BSLT dan
fitokimia. Fraksi paling aktif dari hasil uji di
re-ekstraksi menggunakan 3 parameter yaitu
waktu
ekstraksi
90
menit,
nisbah
sampel:pelarut 1:2, dan jumlah ekstraksi 3
kali, lalu ditentukan kembali nilai LC50.
Uji Fitokimia
Uji fitokimia (flavonoid, alkaloid, saponin,
triterpenoid, steroid, dan tanin) dilakukan
berdasarkan prosedur Harborne (1987)
(Lampiran 2)
Uji Toksisitas
Penentuan Kadar Air
Pinggan porselen dikeringkan pada suhu
105 ºC selama 30 menit, didinginkan dalam
eksikator, dan ditimbang. Daun yang telah
dikeringudarakan kurang lebih sebanyak 3 g
dimasukkan ke dalam pinggan, dikeringkan
pada suhu 105 ºC selama 3 jam, didinginkan
dalam eksikator dan ditimbang. Pengeringan
diulangi lagi selama 3 jam pada suhu 105 ºC,
didinginkan, kemudian ditimbang kembali.
Prosedur ini diulangi hingga didapat bobot
yang tetap (stabil). Kadar air dihitung dengan
persamaan sebagai berikut:
Keterangan:
a = bobot contoh awal (g)
b = bobot contoh akhir (g)
Sepuluh ekor A. salina yang telah
ditetaskan dimasukkan ke dalam sumur uji
BSLT yang berisi air laut dan dibuat
konsentrasi ekstrak 0, 10, 100, 500, dan 1000
mg/L (Lampiran 3 dan 4). Pengamatan
dilakukan 24 jam setelah penetasan dengan
menghitung jumlah A. salina yang mati
dengan bantuan kaca pembesar. Data persen
mortalitas diolah menggunakan analisis probit
dengan tingkat kepercayaan 95%. Kurva
penentuan LC50 dibuat menghubungkan log
konsentrasi dengan nilai probit. Nilai LC50
diperoleh dengan menarik garis bantu pada
titik tengah sumbu probit dan sumbu log
konsentrasi pada kurva.
3
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Daun dandang gendis yang telah dikering
kan dan digiling menjadi serbuk ditentukan
kadar airnya menggunakan metode gravimetri
taklangsung pada suhu 105 ºC. Kadar air yang
ditentukan adalah yang terikat secara fisik dan
dapat dihilangkan pada suhu 100 - 105 ºC
(Harjadi 1993). Kadar air digunakan sebagai
parameter
ketahanan
bahan
dalam
penyimpanan dan sebagai faktor koreksi untuk
rendemen. Menurut Winarno (1997), apabila
kadar air suatu bahan kurang dari 10%,
pertumbuhan mikrob dapat dihindari sehingga
bahanl dapat disimpan dalam waktu relatif
lama.
Kadar air daun dandang gendis kering
diperoleh sebesar 9.69% (Lampiran 5). Hasil
ini masih di bawah 10% sehingga sampel
dapat disimpan dalam waktu relatif lama.
Ekstrak
Proses diawali dengan maserasi sampel
menggunakan etanol. Maserasi dilakukan
berulang kali sampai filtrat tidak berwarna
hijau lagi, sehingga dapat dianggap semua
senyawa yang berbobot molekul rendah telah
terekstraksi (Harborne 1987). Penggunaan
etanol yang bersifat polar didasarkan pada
sifat senyawa polar yang akan diekstraksi
yaitu flavonoid, alkaloid, tanin. Diharapkan
semua senyawa tersebut dapat terekstraksi
dengan baik oleh pelarut dengan sifat
kepolaran yang sama. Selain itu etanol
memiliki titik didih yang rendah sehingga
mudah diuapkan kembali, dan sifatnya tidak
setoksik pelarut polar lainnya seperti metanol.
Maserasi dengan etanol menghasilkan
rendemen sebesar 25.46% (Lampiran 6).
Ekstrak etanol selanjutnya dipartisi dengan
n-heksana untuk menarik senyawa nonpolar.
Fraksi etanol bebas senyawa nonpolar
ditambahkan akuades dan dipartisi kembali
dengan etil asetat. Akuades ditambahkan
untuk meningkatkan kepolaran, sebab etil
asetat memiliki kepolaran yang tidak jauh
berbeda dengan etanol. Hal ini dapat
memperjelas batas pemisahan pada proses
partisi etil asetat (Afif 2006).
Parameter waktu re-ekstraksi dipilih 90
menit karena pada saat itu ekstrak telah
menjadi lebih jernih dibandingkan dengan
waktu ekstraksi 30 dan 60 menit. Semakin
lama waktu ekstraksi semakin banyak
senyawa bioaktif akan terambil, ditandai
dengan perubahan warna ekstrak. Demikian
pula dengan jumlah ekstraksi, ekstraksi
beberapa kali dengan sedikit pelarut lebih
efektif dibandingkan dengan menggunakan
pelarut dalam jumlah banyak sekaligus.
Hasil Uji Fitokimia
Uji kualitatif fitokimia digunakan untuk
mengetahui jenis senyawa metabolit sekunder
yang terkandung dalam ekstrak. Golongan
senyawa dapat ditentukan dari perubahan
warna setelah penambahan pereaksi spesifik
untuk setiap uji kualitatif. Hasil uji fitokimia
ekstrak kasar daun dandang gendis (Tabel 1)
ialah terbentuknya warna putih, cokelat, dan
jingga dengan pereaksi Meyer, Wagner, dan
Dragendorf; terbentuk buih yang stabil setelah
pengocokan; terbentuk warna jingga pada
lapisan amil alkohol; terbentuk warna hijau
dengan pereaksi Lieberman-Buchard; dan
warna hitam dengan FeCl3 1%. Hasil ini
berturut-turut menunjukkan bahwa ekstrak
kasar
daun
dandang
gendis
positif
mengandung senyawa alkaloid, saponin,
flavonoid, steroid, dan tanin. Sementara
ekstrak etil asetat hasil re-ekstraksi
mengandung alkaloid, saponin, steroid, dan
flavonoid (Tabel 2). Kandungan flavonoid
ekstrak etil asetat re-ekstraksi lebih besar
daripada kandungan flavonoid ekstrak etil
asetat awal, terlihat dari lebih pekatnya warna
yang dihasilkan. Gambar hasil uji fitokimia
dapat dilihat pada Lampiran 7.
Tabel 1 Hasil uji fitokimia ekstrak etanol
Golongan Senyawa
Etanol
Alkaloid
Saponin
Flavonoid
Triterpenoid
Steroid
Tanin
+++
+++
+++
+++
+++
Keterangan : + menunjukkan kepekatan warna
4
Tabel 2 Hasil uji fitokimia ekstrak etil asetat
awal dan re-ekstraksi
*Etil Asetat
Golongan
Etil Asetat
ReSenyawa
Awal
ekstraksi
Alkaloid
++
++
Saponin
++
++
Flavonoid
++
+++
Triterpenoid
Steroid
Tanin
-
-
++
++
++
-
Keterangan : *re-ekstraksi dilakukan pada kondisi
waktu ekstraksi 90 menit, jumlah
ekstraksi 3 kali, dan nisbah
sampel:pelarut 1:2
Hasil Uji Toksisitas
Proses penetasan larva udang A. salina
(Gambar 3) menggunakan air laut dengan
bantuan aerator untuk menjaga kadar oksigen
yang terlarut. Gelembung udara dari aerator
juga berfungsi untuk mengaduk telur agar
tidak mengendap di dasar wadah. Telur akan
sulit menetas jika oksigen dalam air kurang.
Penyinaran selama proses penetasan berfungsi
menjaga kondisi air laut agar tetap hangat.
Umur larva udang yang digunakan adalah 24
jam setelah menetas. Kondisi membran sel
larva udang pada umur tersebut masih lunak
sehingga memudahkan senyawa asing dalam
air laut masuk dan menyebabkan kematian.
Kematian larva udang yang disebabkan
masuknya senyawa asing dijadikan dasar
untuk pengujian toksisitas ekstrak aktif daun
dandang gendis dalam penelitian ini.
Tabel 3 Nilai LC50 hasil ekstraksi daun
dandang gendis
LC50
Pelarut
(mg/L)
124.42
Etanol
668.95
n-heksana
276.94
Etanol-air
64.32
Etil asetat
29.02
Etil asetat re-ekstraksi
LC50 yang diperoleh menunjukkan bahwa
semua ekstrak memiliki potensi bioaktif.
Ekstrak etil asetat paling aktif dengan nilai
LC50 64.32 mg/L (Lampiran 8). Selanjutnya
dilakukan re-ekstraksi terhadap fraksi paling
aktif dengan menggunakan 3 parameter, yaitu
waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3
kali, dan nisbah sampel:pelarut 1:2 yang
kemudian ditentukan kembali nilai LC50 nya.
Ekstrak etil asetat hasil re-ekstraksi
menghasilkan nilai LC50 sebesar 29.02 mg/L
dengan R2 = 99.2% (Lampiran 9). LC50 yang
dihasilkan lebih rendah dari penelitian
Setiawan
(2009)
yang
menggunakan
parameter suhu 40 ºC, nisbah sampel:pelarut
1:4, dan jumlah ekstraksi 3 kali dan
menghasilkan nilai LC50 sebesar 59.15 mg/L.
Setelah dilakukan re-ekstraksi, nilai LC50
fraksi etil asetat turun menjadi 29.02 mg/L.
Semakin kecil nilai LC50, semakin tinggi
aktivitasnya. Hal ini menunjukkan bahwa
lamanya waktu, jumlah ekstraksi, dan nisbah
sampel:pelarut dapat meningkatkan keaktifan
ekstrak dalam penelitian ini. Turunnya nilai
LC50 dapat juga disebabkan karena kandungan
flavonoid ekstrak etil asetat hasil re-ekstraksi
lebih besar dibandingkan dengan kandungan
flavonoid pada ekstrak etil asetat awal.
Keaktifan etil asetat hasil re-ekstraksi ini
tergolong sangat aktif menurut National
Cancer Institute (NCI) Amerika yang
menyatakan bahwa standar efektivitas
komponen bioaktif untuk melawan sel kanker
adalah ≤ 30 mg/L (Albuntana et al. 2011).
Gambar 3 A. salina.
SIMPULAN DAN SARAN
Suatu senyawa memiliki potensi bioaktif
jika nilai LC50-nya di bawah 1000 mg/L. Hasil
pengujian toksisitas larva udang ekstrak kasar
(fraksi etanol), fraksi n-heksana, fraksi etanolair, fraksi etil asetat, dan fraksi etil asetat reekstraksi dapat dilihat pada Tabel 3.
Simpulan
Setelah dilakukan re-ekstraksi, nilai LC50
fraksi etil asetat turun dari 64.32 mg/L
menjadi 29.02 mg/L. Hasil uji fitokimia
5
menunjukkan
etil
asetat
re-ekstraksi
mengandung alkaloid, saponin, steroid, dan
flavonoid dengan kandungan flavonoid lebih
besar dibandingkan kandungan flavonoid
ekstrak etil asetat ekstraksi awal.
Saran
Perlu penelitian lanjutan ke arah potensi
daun dandang gendis sebagai antikanker
secara in vitro menggunakan sel kanker.
DAFTAR PUSTAKA
Afif KH. 2006. Peningkatan kadar kurkumin
ekstrak etanol temulawak dengan metode
ekstraksi cair-cair [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Agustina S. 2011. Isolasi golongan flavonoid
sebagai antioksidan dari daun dandang
gendis (Clinacanthus nutans) [skripsi].
Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Akbar HR. 2010. Isolasi dan identifikasi
golongan flavonoid daun dandang gendis
(Clinacanthus nutans) berpotensi sebagai
antioksidan [skripsi]. Bogor: Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Institut Pertanian Bogor.
Albuntana A, Yasman, Wardhana W. 2011.
Uji toksisitas ekstrak empat jenis teripang
suku Holothuriidae dari Pulau Penjaliran
Timur, Kep. Seribu, Jakarta menggunakan
BSLT. J Ilmu Teknol Kelautan Trop 3:6572.
Andriani A. 2008. Identifikasi senyawa
golongan aktif ekstrak daun Clinacanthus
nutans yang berpotensi sebagai larvasida
pada Aedes aegypti [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Padmawinata K, Sudiro I, penerjemah.
Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Terjemahan dari: Phytochemical Method.
Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar.
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Meyer BN et al. 1982. Brine shrimp: a
convenient general bioassay for active
plant constituent. Planta Med 45:31-34.
Nurulita Y. 2005. Penapisan aktivitas
antidiabetes isolat ekstrak air daun
dandang gendis (Clinacanthus nutans)
pada mencit Swiss Webster jantan
[skripsi]. Bandung: Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Teknologi Bandung.
Pannangpetch P et al. 2007. Antioxidant
activity and protective effect against
oxidative hemolysis of Clinacanthus
nutans (Burm.f) Lindau. J Sci Technol 1:
1-9.
Setiawan I. 2009. Optimalisasi ekstraksi caircair fraksi etanol ekstrak daun dandang
gendis (Clinacanthus nutans) pada uji
toksisitas Artemia salina [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Sofyan D. 2008. Inhibisi fraksi aktif daun
dandang gendis (Clinacanthus nutans)
pada pertumbuhan
Saccharomyces
cerevisiae sebagai uji potensi antikanker
[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Suharty NS. 1984. Isolasi terpenoid dari daun
Clinacanthus nutans [tesis]. Bandung:
Program Pascasarjana, Institut Teknologi
Bandung.
Teshima I et al. 1997. Sulfur-containing
glucosides from Clinacanthus nutans.
Phytochemistry 48:831-835.
Thongcai S et al. 2008. Anti-herpes simplex
virus type 1 activity of crude ethyl acetate
extract
derived
from
leaves
of
Clinacanthus nutans Lindau. J Sci Technol
27:318-326.
6
Tuntiwachwuttikul P, Yupa P, Pootchana P,
Thongchai S, Walter CT. 2003. Sulfurcontaining compounds from Clinacanthus
siamensis [abstrak]. Pharm Soc Japan
51:1423-1425.
Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi.
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Yoosook C, Panpisutchai Y, Chaichana S,
Santisuk T, Reutrakul V. 1999. Evaluation
of anti-HSV-2 activities of Barleria
lupulina and Clinacanthus nutans. J
Ethnopharmacol 67:179-187.
LAMPIRAN
7
Lampiran 1 Diagram alir penelitian
Daun Kering
Uji BSLT
Maserasi dengan etanol sampai filtrat
tak berwarna
Dipekatkan
Ekstrak Etanol
Uji Fitokimia
Partisi dengan n-heksana
Fraksi Etanol
+Akuades
Partisi dengan etil asetat
Fraksi n-Heksana
Fraksi Etanol-Air
*Re-ekstraksi
*Fraksi Etil Asetat
Dipekatkan
*fraksi paling aktif di re-ekstraksi
menggunakan parameter waktu 90 menit, 3
kali jumlah ekstraksi, dan nisbah
bahan:pelarut 1:2
Uji BSLT
Uji Fitokimia
8
9
Lampiran 2 Uji fitokimia
Uji alkaloid. Sebanyak 0.1 g sampel dilarutkan dalam 10 mL kloroform dan 4 tetes
NH4OH kemudian disaring dan filtratnya dimasukkan ke dalam tabung reaksi tertutup.
Ekstrak kloroform dalam tabung reaksi dikocok dengan 6 mL H2SO4 2 M dan lapisan
asamnya dipisahkan ke dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam ini diteteskan pada
lempeng tetes dan ditambahkan pereaksi Meyer, Wagner, dan Dragendorf yang akan
menimbulkan endapan dengan warna berturut-turut putih, cokelat, dan merah jingga.
Uji saponin dan flavonoid. Sebanyak 0.1 g sampel dimasukkan ke dalam gelas piala
kemudian ditambahkan 100 mL air panas dan didihkan selama 5 menit. Setelah itu,
disaring dan filtratnya digunakan untuk pengujian. Untuk uji saponin, 10 mL filtrat
dimasukkan ke dalam tabung reaksi tertutup kemudian dikocok selama 10 detik dan
dibiarkan selama 10 menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang
stabil. Sebanyak 10 mL filtrat yang lain ditambahkan 0.5 g serbuk Mg, 1 mL HCl pekat,
dan 1 mL amil alkohol kemudian dikocok dengan kuat. Terbentuknya warna merah,
kuning, dan jingga pada lapisan amil alkohol menunjukkan adanya flavonoid.
Uji triterpenoid dan steroid. Sebanyak 0.1 g sampel dilarutkan dengan 25 mL etanol
panas (50 oC) kemudian hasilnya disaring ke dalam pinggan porselen dan diuapkan
sampai kering. Residu ditambahkan eter dan ekstrak eter dipindahkan ke dalam lempeng
tetes kemudian ditambahkan 3 tetes anhidrida asetat dan 1 tetes H2SO4 pekat (uji
Lieberman-Buchard). Warna merah atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid dan
warna hijau atau biru menunjukkan adanya steroid.
Uji Tanin. Sebanyak 0.1 g sampel ditambahkan 100 mL air panas, dididihkan selama
5 menit, dan disaring. Sebagian filtrat yang diperoleh ditambah larutan FeCl3 1%.
Terbentuknya warna hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin (Harborne 1987).
Lampiran 3 Pembuatan stok ekstrak 5000 ppm dan penetasan larva A. salina
Pembuatan stok ekstrak 5000 ppm
Ekstrak ditimbang sebanyak 0.25 g lalu dimasukkan ke dalam gelas piala 25 mL yang
berisi air laut kemudian diaduk sampai larut sempurna. Bila tidak larut, ditambahkan
Tween 80 secukupnya. Larutan ekstrak dimasukkan ke dalam labu takar 50 mL lalu ditera
dengan air laut.
Penetasan larva A. salina.
Kista A. salina yang sudah siap ditetaskan ditimbang sebanyak 50 mg lalu dimasukkan
ke dalam wadah yang berisi air laut yang sudah disaring; setelah itu, diaerasi. Kista
dibiarkan selama 48 jam di bawah pencahayaan lampu agar menetas sempurna. Larva
yang sudah menetas diambil untuk digunakan dalam uji toksisitas.
Lampiran 4 Uji toksisitas terhadap A. salina
Sebanyak 10 ekor larva A. salina dimasukkan ke dalam vial yang berisi air laut
kemudian ditambahkan larutan ekstrak kasar dan ditepatkan volumenya dengan air laut
hingga konsentrasinya menjadi 0, 10, 100, 500, dan 1000 mg/L. Pengamatan dilakukan
setelah 24 jam dengan menghitung jumlah larva yang mati dari total larva yang
dimasukkan ke dalam vial. Pengamatan memakai bantuan lampu neon.
10
Lampiran 5 Penentuan kadar air
Ulangan
a (g)
b (g)
c (g)
1
2
3
3.0112
3.0055
3.0048
23.8117
24.8111
23.4497
23.5198
24.5091
23.1482
Rataan
Kadar air
(%b/b)
9.69
10.00
10.03
9.93
Keterangan:
a : bobot sampel (g)
b : bobot sampel dan cawan petri sebelum dikeringkan (g)
c : bobot sampel dan cawan petri setelah dikeringkan (g)
Contoh perhitungan:
Lampiran 6 Rendemen ekstrak etanol
Bobot sampel
Bobot labu bulat kosong
Bobot labu bulat + isi
Bobot isi
Contoh perhitungan:
= 400.00 g
= 244.25 g
= 335.95 g
= 91.70 g
11
Lampiran 7 Hasil uji fitokimia
Ekstrak kasar etanol
Meyer
Wagner
Dragendorf
(Alkaloid)
(Steroid)
(Flavonoid)
Ekstrak etil asetat ekstraksi awal
Meyer
Wagner
Dragendorf
( Alkaloid)
(Steroid)
(Flavonoid)
Ekstrak etil asetat re-ekstraksi
Meyer
Wagner
(Alkaloid)
Dragendorff
(Steroid)
( Flavonoid)
12
Lampiran 8 Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A. salina
Konsentrasi (mg/L)
0
10
100
500
1000
Jumlah Larva Artemia
Jumlah yang mati
%Mortalitas
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
0
0
0
2
2
1
4
5
7
8
8
9
9
10
10
20
20
10
40
50
70
80
80
90
90
100
100
Rerata
Probit
Log (mg/L)
16.67
4.05
1
53.33
5.08
2
83.33
5.95
2.6989
96.67
6.88
3
Contoh perhitungan:
Konsentrasi 10 ppm ulangan 1
Keterangan:
Nilai probit diperoleh dengan merefleksikan nilai % mortalitas ke dalam tabel probit,
kemudian dibuat kurva linear hubungan antara log konsentrasi dengan nilai probit.
Persamaan garis yang diperoleh:
13
Lampiran 9 Data uji toksisitas ekstrak etil asetat daun dandang gendis pada A salina
menggunakan parameter waktu ekstraksi 90 menit, jumlah ekstraksi 3 kali,
dan nisbah sampel:pelarut 1:2
Konsentrasi (mg/L)
0
10
100
500
1000
Jumlah Larva Artemia
Jumlah yang mati
%Mortalitas
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
0
0
0
3
4
3
7
6
7
9
9
8
10
10
10
30
40
30
70
60
70
90
90
80
100
100
100
Rerata
Probit
Log (mg/L)
33.33
4.56
1
70
5.52
2
86.67
6.13
2.6989
100
8
3
Nilai probit diperoleh dengan merefleksikan nilai % mortalitas ke dalam tabel probit,
kemudian dibuat kurva linear hubungan antara log konsentrasi dengan nilai probit.
Persamaan garis yang diperoleh:
14