Isolasi senyawa golongan flavonoid sebagai antioksidan dari daun dandang gendis (Clinacanthus nutans)
ISOLASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID
SEBAGAI ANTIOKSIDAN DARI DAUN DANDANG
GENDIS (Clinacanthus nutans)
SRI AGUSTINA
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
ABSTRAK
SRI AGUSTINA. Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid sebagai Antioksidan dari
Daun Dandang Gendis (Clinacanthus nutans). Dibimbing oleh DUDI TOHIR dan
GUSTINI SYAHBIRIN.
Daun dandang gendis (Clinacanthus nutans) memiliki kemampuan
antioksidan. Tujuan penelitian ini ialah memperoleh ekstrak flavonoid daun
dandang gendis yang memberikan aktivitas antioksidan yang tinggi. Aktivitas
antioksidan ditentukan menggunakan metode 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etilasetat memiliki aktivitas antioksidan
dengan nilai IC50 sebesar 178.40mg L-1. Ekstrak etilasetat kemudian difraksionasi
menggunakan kromatografi lapis tipis preparatif dengan eluen n-butanol:asam
asetat:air (4:1:5) dan menghasilkan 3 fraksi. Fraksi teraktif ialah fraksi 2 dengan
nilai IC50 sebesar 52.93 mg L-1, tetapi lebih rendah dari butil hidroksi toluena
(IC50 16.71 mg L-1). Uji golongan flavonoid menunjukkan bahwa senyawa pada
fraksi 2 adalah flavonol dan flavon. Spektrum ultraviolet-tampak fraksi 2 dalam
pelarut metanol menunjukkan serapan maksimum pita 1 pada 332 nm dan pita 2
pada 274 nm. Pergeseran batokromik pada pelarut MeOH+NaOMe dan
MeOH+AlCl3-HCl mengindikasikan adanya substituen 4'-OH dan 5-OH. Adanya
puncak baru dalam pita 2 pada 326.5 nm menunjukkan adanya substituen 7-OH.
ABSTRACT
SRI AGUSTINA. Isolation of Flavonoids as Antioxidant from Dandang Gendis
(Clinacanthus nutans) Leaves. Supervised by DUDI TOHIR and GUSTINI
SYAHBIRIN.
The leaves of dandang gendis (Clinacanthus nutans) exhibit antioxidant
activity. The objective of this study is to investigate the highest antioxidant
activity from flavonoid extract of the leaves. Antioxidant activities were
determined by radical scavenging assay using 1,1-diphenyl-1-pycryl-hydrazyl
radical. The result showed that ethyl acetate extract had antioxidant activity with
IC50 value of 178.40 mg L-1. The ethyl acetate extract was fractionated further
using preparative thin layer chromatography with eluent of n-buthanol:acetic acid:
water (4:1:5) and produced 3 fractions. The most active fraction was fraction 2
with IC50 value of 52.93 mg L-1, which was lower than that of butylated hydroxy
toluene (IC50 16.71 mg L-1). Flavonoid assay of fraction 2 showed that it
contained flavonol and flavon. The ultraviolet-visible spectrum of fraction 2 in
methanol solvent showed a maximum absorption at 332 in band 1 and 274 nm in
band 2. In MeOH+MeONa and MeOH+AlCl3-HCl solvents there was a
bathochromic shift, indicated the presence of 4'-OH and 5-OH. The new peak at
326.5 nm showed the presence of 7-OH substituent.
ISOLASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID
SEBAGAI ANTIOKSIDAN DARI DAUN DANDANG
GENDIS (Clinacanthus nutans)
SRI AGUSTINA
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
Judul : Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid sebagai Antioksidan dari Daun
Dandang Gendis (Clinacanthus nutans)
Nama : Sri Agustina
NIM : G44062261
Menyetujui
Pembimbing I,
Pembimbing II,
Drs. Dudi Tohir, MS
NIP 19571104 198903 1 001
Dr. Gustini Syahbirin, MS
NIP 19600819 198903 2 001
Mengetahui
Ketua Departemen,
Prof. Dr. Ir. Tun Tedja Irawadi, MS
NIP 195012271976032002
Tanggal lulus:
PRAKATA
Puji dan syukur ke hadirat Allah SWT atas segala rahmat dan karunia-Nya,
sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah yang berjudul “Isolasi
Senyawa Golongan Flavonoid Sebagai Antioksidan dari Daun Dadang Gendis
(Clinacanthus nutans)” yang dilaksanakan sejak bulan Juni 2010 di Laboratorium
Kimia Organik Departemen Kimia FMIPA IPB.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Drs. Dudi Tohir, MS dan Dr.
Gustini Syahbirin, MS selaku pembimbing yang telah memberikan pengarahan
dan bimbingannya kepada penulis. Penulis juga mengucapkan terima kasih
kepada orang tua, Bapak Ace Supriatin dan Ibu Suratmi atas didikan, doa, dan
kasih sayangnya yang tiada terkira, serta untuk seluruh keluarga besar di rumah,
terima kasih atas dukungan dan dorongannya.
Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Bapak Sabur, Mba Nia, Ibu
Yeni Karmila, dan Ibu Siti Robiah, atas bantuan yang diberikan. Tak lupa,
ungkapan terima kasih penulis kepada seluruh rekan peneliti di Laboratorium
Kimia Organik (Wulan, Ela, Arif, Saki, Farid, Tifah, Dinda, Risal, Muti, Lia, Teh
Dian, Kak Akbar), serta teman-teman Kimia 43 atas bantuan, motivasi, diskusi,
dan kebersamaan selama penulis menempuh studi dan menjalankan penelitian.
Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat.
Bogor, Februari 2011
Sri Agustina
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Bogor pada tanggal 17 Agustus 1988 dari Bapak Ace
Supriatin dan Ibu Suratmi. Penulis merupakan anak kedua dari dua bersaudara.
Penulis menyelesaikan studi di SMAN 3 Bogor pada tahun 2006. Pada tahun yang
sama penulis diterima di Institut Pertanian Bogor (IPB) melalui jalur Undangan
Seleksi Masuk IPB (USMI). Tahun 2007 penulis diterima pada Program Studi
Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Penulis pernah menjadi pengajar Kimia di bimbingan belajar Avogadro
pada tahun 2008/2009 dan bimbingan belajar ERC pada tahun 2010, dan pernah
menjadi asisten praktikum mata kuliah Kimia Dasar pada tahun 2008/2009, Kimia
Pangan D3 Analisis Kimia tahun 2010, Kimia Organik Layanan tahun 2008,
Kimia Organik D3 Analisis Kimia tahun 2010, Praktikum Kimia Organik
Berbasis Kompetensi tahun 2010, dan Kimia TPB Alih Tahun tahun 2010. Penulis
juga berkesempatan melaksanakan kegiatan praktik lapangan di PT Novell
Pharmaceutical Lab, Bogor pada tahun 2009.
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ................................................................................................ vi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... vi
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ vii
PENDAHULUAN ................................................................................................ 1
TINJAUAN PUSTAKA
Dandang Gendis .........................................................................................
Antioksidan ...............................................................................................
Metode DPPH ...........................................................................................
Flavonoid ..................................................................................................
1
2
2
2
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat ..........................................................................................
Kadar Air ...................................................................................................
Isolasi Flavonoid .......................................................................................
Uji Aktivitas Antioksidan ..........................................................................
Analisis Flavonoid .....................................................................................
Uji Fitokimia ..............................................................................................
Uji Golongan Flavonoid .............................................................................
3
3
3
3
3
4
4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar air .....................................................................................................
Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid ........................................................
Uji Aktivitas Antioksidan ..........................................................................
Golongan Flavonoid Fraksi Aktif ..............................................................
Uji Fitokimia dan Golongan Flavonoid .....................................................
4
5
5
5
7
SIMPULAN DAN SARAN .................................................................................. 8
Simpulan .................................................................................................... 8
Saran ........................................................................................................... 8
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 8
LAMPIRAN ......................................................................................................... 10
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Uji kualitatif golongan flavonoid ..................................................................... 2
2 Rentang serapan spektrum UV-tampak senyawa flavonoid ............................. 3
3 Aktivitas antioksidan......................................................................................... 5
4 Uji fitokimia ekstrak etanol ............................................................................... 7
5 Uji golongan flavonoid ekstrak etanol, ekstrak etil asetat, dan F2 ................... 7
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Daun dandang gendis ........................................................................................ 1
2 Struktur DPPH: radikal bebas (a) bentuk tereduksi (b) .................................... 2
3 Struktur flavonoid ............................................................................................. 2
4 Noda pemisahan di bawah lampu UV 254 nm: KLT (a), KLT preparatif
dengan eluen BAA (b). ...................................................................................... 5
5 Spektrum F2 dalam pelarut metanol ................................................................ 6
6 Spektrum F2 dengan penambahan pereaksi geser NaOCH3 dan NaOCH3
setelah 5 menit ................................................................................................... 6
7 Spektrum F2 setelah penambahan pereaksi AlCl3 dan AlCl3/HCl ................. 6
8 Spektrum F2 setelah penambahan pereaksi NaOMe, NaOMe 5 menit, dan
H3BO3 ................................................................................................................ 7
9 Kromatogram 2 arah F2 dengan eluen BAA dan BEA ..................................... 7
10 Struktur senyawa flavonoid hipotesis F2 .......................................................... 8
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Diagram alir penelitian ..................................................................................... 11
2 Kadar air serbuk daun dandang gendis ............................................................ 12
3 Rendemen hasil ekstraksi ................................................................................. 12
4 Hasil uji aktivitas antioksidan ......................................................................... 13
5 Pergeseran panjang gelombang pada fraksi 2 setelah penambahan pereaksi
geser.................................................................................................................. 17
PENDAHULUAN
Negara
Indonesia
memiliki
keanekaragaman hayati yang kaya. Sekitar
40 000 spesies tumbuhan ditemukan di
Indonesia dan 180 di antaranya berpotensi
sebagai tanaman obat (Bermawi & Kristina
2003). Salah satu tanaman yang lazim
digunakan sebagai obat tradisional adalah
dandang gendis (Clinacanthus nutans).
Dandang gendis merupakan tanaman semak
belukar yang sering dijadikan tanaman pagar
dan dikenal oleh masyarakat sebagai obat
kencing manis, susah buang air kecil, dan
disenteri. Beberapa penelitian yang telah
dilakukan menunjukkan bahwa ekstrak
dandang gendis berpotensi sebagai antikanker
(Sofyan 2008), larvasida Aedes aegypti
(Andriani 2008), antivirus Herpes simplex
(Yoosook et al. 1999; Thongchai et al. 2008),
dan antioksidan (Pannangpetch et al. 2007;
Akbar 2010).
Ekstraksi pendahuluan daun dandang
gendis dengan berbagai pelarut menunjukkan
kandungan alkaloid, flavonoid, dan terpenoid
(Suharty 2004). Flavonoid yang terkandung
dalam ekstrak daun dandang gendis dapat
menghambat aktivitas radikal bebas. Radikal
bebas diketahui memiliki reaktivitas yang
tinggi sehingga dapat memicu reaksi berantai
dalam sel. Hal ini dapat merusak sel dan akan
menyebabkan munculnya berbagai penyakit
seperti inflamasi, penyakit kardiovaskular,
kanker, dan penuaan dini. Aktivitas radikal
tersebut dapat dihambat oleh kerja
antioksidan.
Potensi ekstrak daun dandang gendis
sebagai antioksidan telah diteliti oleh Akbar
(2010)
yang
menunjukkan
aktivitas
antioksidan dengan nilai konsentrasi hambat
50% (IC50) sebesar 48.42 mg L-1. Ekstrak
daun dandang gendis dapat berpotensi sebagai
antioksidan karena mengandung senyawa
flavonoid.
Penelitian
ini
bertujuan
mengisolasi senyawa flavonoid, uji aktivitas
antioksidan, dan analisis senyawa golongan
flavonoid yang terkandung dalam daun
dandang
gendis
menggunakan
spektrofotometer UV-tampak.
TINJAUAN PUSTAKA
Dandang Gendis
Dandang gendis (Gambar 1)
tumbuhan semak belukar berbentuk
yang memiliki ciri fisik antara lain
yang beruas, berwarna hijau, dan
adalah
perdu
batang
tegak
dengan tinggi kurang lebih 2.5 m. Daunnya
mempunyai bentuk tunggal dan berhadapan
satu sama lain dengan panjang daun berkisar
8–12 cm, sedangkan lebar 4–6 cm. Daun
tersebut berbentuk tulang menyirip dan
berwarna hijau. Tanaman ini memiliki bunga
yang tumbuh di ketiak daun dan di ujung
batang. Mahkota daun berbentuk tabung
dengan panjang 2–3 cm. Warnanya merah
muda. Buah yang dihasilkan tanaman yang
termasuk famili Acanthaceae ini berwarna
cokelat dengan bentuk bulat memanjang
(Kristio 2007).
Gambar 1 Daun dandang gendis.
Secara taksonomi dandang gendis
diklasifikasikan dalam kerajaan Plantae, divisi
Spermatophyta, sub divisi Angiospermae,
famili Acanthaceae, genus Clinacanthus, dan
spesies Clinacanthus nutans. Masyarakat
Indonesia mengenal dandang gendis sebagai
obat kencing manis (diabetes melitus), susah
buang air kecil, dan disenteri. Selain itu,
beberapa penelitian menunjukkan bahwa
ekstrak daun dandang gendis berpotensi
sebagai antioksidan (Pannangpetch et al.
2007; Akbar 2010), larvasida terhadap Aedes
aegypti (Andriani 2008), antikanker (Sofyan
2008), dan antiradang (Wanikiat et al. 2008).
Daun dandang gendis memiliki aktivitas
antivirus yang tidak terlalu kuat terhadap
HSV1 (Thongchai et al. 2008) dan HSV2
(Yoosook et al. 1999).
Senyawa yang terkandung dalam daun
dandang gendis di antaranya C-glikosilflavon,
viteksin,
isoviteksin,
shaftosida,
isomolupentin,
7-O-ß-glukopiranosida,
orientin, 5 senyawa yang mengandung sulfur
(Teshima et al. 1997), 132-hidroksi-(132-R)faeofitin b, 132-hidroksi-(132-S)-faeofitin a,
132-hidroksi-(132-R)-faeofitin a (Sakdarat et
al. 2009), serta campuran 9 serebrosida dan
monoasilmonogalaktosilgliserol(Tuntiwachutt
tikul et al. 2004).
Antioksidan
Antioksidan alami mampu melindungi
tubuh terhadap kerusakan yang disebabkan
oleh spesies oksigen reaktif, mampu
menghambat terjadinya penyakit degeneratif,
serta mampu menghambat peroksidase lipid
pada makanan (Sunarni 2005). Senyawa
flavonoid
diketahui
mampu
berperan
menangkap radikal bebas atau sebagai
antioksidan alami (Amic et al. 2003).
Aktivitas antioksidan dari suatu bahan
alam dapat diuji dengan berbagai metode di
antaranya kemampuan mereduksi ion feri
(FRAP), 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH),
dan kapasitas mereduksi kupri (CUPRAC).
Aktivitas antioksidan ekstrak daun dandang
gendis dengan metode DPPH cukup kuat,
yang ditunjukkan dengan nilai IC50 sebesar
110.40 µg mL-1 (Pannangpetch et al. 2007).
Berdasarkan Akbar (2010), ekstrak teraktif
daun dandang gendis berpotensi sebagai
antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 48.42
mg L-1. Nilai IC50 yang kurang dari 200 ppm
menunjukkan aktivitas antioksidan yang kuat
(Hanani et al. 2005).
akan ditangkap oleh senyawa flavonoid, dan
flavonoid akan teroksidasi menghasilkan
bentuk radikal yang lebih stabil, yaitu radikal
dengan kereaktifan rendah. Flavonoid
mendonorkan radikal hidrogen dari cincin
aromatiknya untuk mengurangi radikal bebas
yang bersifat toksik menghasilkan radikal
flavonoid yang terstabilkan resonans dan
membuatnya tidak toksik (Amic et al. 2003).
Flavonoid
Flavonoid
merupakan
salah
satu
metabolit sekunder. Keberadaannya dalam
daun kemungkinan dipengaruhi oleh adanya
proses fotosintesis sehingga daun muda belum
terlalu banyak mengandung flavonoid
(Markham 1988). Senyawa flavonoid
mempunyai struktur C6-C3-C6. Tiap bagian
C6 merupakan cincin benzena yang
dihubungkan oleh atom C3 yang merupakan
rantai alifatik, seperti ditunjukkan pada
Gambar 3. Penggolongan jenis flavonoid
didasarkan pada sifat kelarutan dan reaksi
warna (Tabel 1).
Metode DPPH
Salah satu metode
yang dapat
menunjukkan aktivitas antioksidan dari
senyawa alam adalah metode DPPH. 1,1difenil-2-pikrilhidrazil (Gambar 2a) tergolong
radikal bebas stabil. Delokalisasi elektron
pada molekul DPPH akan memberikan warna
ungu yang dicirikan dengan pita serapan pada
520 nm. Ketika DPPH ditambahkan ke dalam
senyawa yang dapat memberikan atom
hidrogen, DPPH akan berubah warna menjadi
kuning
muda,
yakni
warna
bentuk
tereduksinya, difenilpikrilhidrazin (Gambar
2b) (Molyneux 2004).
(a)
(b)
Gambar 2 Struktur DPPH: radikal bebas (a)
bentuk tereduksi (b).
Salah satu senyawa yang dapat
memberikan atom hidrogen kepada molekul
DPPH adalah flavonoid. Radikal bebas DPPH
Gambar 3 Struktur flavonoid.
Tabel 1
Uji kualitatif golongan flavonoid
(Harborne 1987)
Pereaksi
Golongan
Warna
flavonoid
hasil reaksi
CH3COONa Antosianidin
Merah
FeCl3
Antosianidin
Biru
Na2CO3
Antosianidin Ungu, biru,
hijau
CH3COOPb
Kalkon
Jingga
Auron
Merah
Flavon
Jingga–
krem
NaOH 0,1 N
Kalkon,
Merah–
auron
ungu
Flavonol,
Kuning
flavon
H2SO4 pekat
Flavon
Kuning
Flavonol
Kuning,
Jingga–
krem
Kalkon
Merah
2
Flavonoid mengandung sistem aromatik
terkonjugasi dan karena itu, menunjukkan pita
serapan kuat pada daerah spektrum UVtampak (Harborne 1987). Spektrum khas
flavonoid terdiri atas dua panjang gelombang
maksimum: 240–285 nm (pita 2) dan 300–550
nm (pita 1). Rentang serapan spektrum UVtampak senyawa flavonoid ditunjukkan pada
Tabel 2 (Markham 1988).
didinginkan dalam eksikator dan ditimbang
bobot keringnya. Serbuk dandang gendis
ditimbang teliti sebanyak 3 g dalam cawan
tersebut kemudian dipanaskan dalam oven
pada suhu 105 °C selama 3 jam. Setelah itu,
didinginkan dan ditimbang. Pemanasan dan
penimbangan dilakukan sampai bobotnya
konstan.
Isolasi Flavonoid (Markham 1988)
Tabel 2
Rentang serapan spektrum UVtampak
senyawa
flavonoid
(Markham 1988)
Pita 2 (nm) Pita 1 (nm) Jenis flavonoid
250–280
310–350
Flavon
250–280
330–360
Flavonol
(3-OH
tersubstitusi)
250–280
350–385
Isoflavon
245–275
310–330
Isoflavon
(bahu)
(5-deoksi-6,7320
dioksigenasi)
(puncak)
275–295
300–330
Flavanon dan
dihidroflavonol
230–270
340–390
Kalkon
230–270
380–430
Auron
270–280
465–560
Antosianidin
dan antosianin
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan adalah
serbuk daun dandang gendis dari daerah
Batuhulung Bogor, etanol 70%, NH4OH,
H2SO4 2 M, FeCl3 1%, metanol, etanol 98%,
anhidrida asetat, amil alkohol, serbuk Mg,
HCl pekat, HCl 2 N, CH3COONa, Na2CO3,
CH3COOPb, H2SO4 pekat, Butil Hidroksi
Toluena (BHT), n-heksana, etil asetat, DPPH,
n-butanol, asam asetat, NaOCH3, AlCl3,
H3BO3, pereaksi Mayer, Wagner, DragendoRf
, dan Lieberman-Buchard,.
Alat-alat yang digunakan adalah peralatan
kaca yang biasa digunakan di laboratorium,
kromatografi lapis tipis preparatif (KLT
preparatif), pelat KLT, penguap putar, dan
spektrofotometer UV-1700 PharmaSpec.
Kadar Air
Diagram alir penelitian ditunjukkan pada
Lampiran 1. Cawan porselen dikeringkan
pada suhu 105 °C selama 3 jam, kemudian
Serbuk daun dandang gendis direndam
dengan etanol 70% selama 24 jam pada suhu
kamar. Ekstrak yang diperoleh disaring dan
ampasnya direndam kembali dengan etanol
70%. Filtratnya dipekatkan dengan penguap
putar.
Ekstrak etanol daun dandang gendis
dipartisi dengan n-heksana, kemudian
dihidrolisis dengan HCl 2 N pada suhu 100 °C
selama 60 menit. Ekstrak daun dandang
gendis terhidrolisis dipartisi dengan etil asetat.
Fraksi etil asetat dikumpulkan dan dipekatkan
dengan penguap putar, lalu difraksionasi
dengan KLT preparatif. Eluen yang
digunakan adalah campuran n-butanol:
air:asam asetat (BAA) (4:5:1).
Noda
pemisahan dideteksi di bawah lampu UV 254
nm. Setiap fraksi dikerok, dilarutkan dengan
etanol 70%, kemudian dipekatkan dan diuji
aktivitas antioksidan. Fraksi teraktif dianalisis
dengan spektrofotometer UV-tampak dan
diuji kemurniannya menggunakan KLT dua
dimensi dengan eluen BAA dan n-butanol:
etanol:air (BEA) (4:1:2).
Uji Aktivitas Antioksidan (Blois 1958)
Larutan ekstrak dibuat dengan konsentrasi
10, 30, 50, dan 70 mg L-1. Sebanyak 4.5 mL
larutan ekstrak dimasukkan ke dalam tabung
reaksi dan ditambahkan 1.5 mL larutan DPPH
0.1 mM dalam etanol. Campuran diinkubasi
pada suhu 37 °C selama 30 menit, lalu diukur
serapannya pada panjang gelombang 515 nm.
BHT dengan konsentrasi 2, 4, 6, dan 8 mg L-1
digunakan sebagai kontrol positif. Kemudian
nilai IC50 dihitung menggunakan rumus
persamaan regresi.
Analisis Flavonoid (Markham 1988)
Sebanyak 0.1 mg fraksi teraktif ekstrak
daun dandang gendis dilarutkan dengan 10
mL metanol. Identifikasi flavonoid dengan
spektrum UV-tampak dilakukan dengan
menambahkan
pereaksi
geser
AlCl3,
campuran AlCl3 dengan HCl, CH3COONa,
3
campuran CH3COONa dengan H3BO3, dan
NaOCH3. Data pergeseran pita serapan
sebelum dan sesudah ditambahkan pereaksi
geser menentukan jenis senyawa golongan
flavonoid.
tabung reaksi lalu ditambahkan 0.5 g serbuk
Mg, 1 mL HCl pekat, dan 1 mL amil alkohol,
dan dikocok kuat. Uji positif flavonoid
menghasilkan warna kuning atau jingga pada
lapisan amilalkohol.
Uji Fitokimia (Harborne 1987)
Uji Golongan Flavonoid (Harborne 1987)
Alkaloid
Sebanyak 0.1 g ekstrak dilarutkan dalam
10 mL CHCl3 dan 4 tetes NH4OH. Larutan
disaring dan filtratnya dimasukkan ke dalam
tabung reaksi tertutup. Ekstrak CHCl3 dalam
tabung reaksi dikocok dengan 10 tetes H2SO4
2 M dan lapisan asamnya dipisahkan ke
dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam
ini diteteskan pada lempeng tetes dan
ditambahkan pereaksi Mayer, Wagner, dan
DragendoRf
yang akan menimbulkan
endapan berturut-turut berwarna putih,
cokelat, dan merah jingga jika terdapat
alkaloid.
Sebanyak 0.5 g ekstrak dilarutkan dengan
10 mL metanol-HCl 1 N (1:1) dan dipanaskan
pada suhu 95 °C selama 1 jam. Setelah itu,
didinginkan dan disaring, lalu filtratnya
diekstraksi dengan etil asetat.
Saponin
Sebanyak 0.1 g ekstrak ditambahkan 10
mL air panas dan dididihkan selama 5 menit.
Setelah itu, disaring dan filtratnya digunakan
untuk pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
tabung reaksi tertutup kemudian dikocok
selama 10 detik dan didiamkan selama 10
menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan
terbentuknya buih yang stabil.
Triterpenoid dan Steroid
Sebanyak 0,1 g ekstrak dilarutkan dengan
25 mL etanol panas (50 °C). Larutan disaring
dalam pinggan porselen dan diuapkan sampai
kering. Residu ditambahkan eter dan ekstrak
eter dipindahkan ke dalam lempeng tetes.
Kemudian ditambahkan 3 tetes anhidrida
asetat dan 1 tetes H2SO4 pekat (uji
Lieberman-Buchard). Warna merah atau ungu
menunjukkan
kandungan
triterpenoid,
sedangkan
warna
hijau
atau
biru
menunjukkan kandungan steroid.
Tanin
Sebanyak 0.1 g ekstrak ditambahkan 10
mL air panas, dididihkan selama 5 menit, dan
disaring. Sebagian filtrat yang diperoleh
ditambahkan larutan FeCl3 1%. Hasil positif
ditunjukkan oleh warna hijau kehitaman.
Flavonoid
Sebanyak 0.1 g ekstrak ditambahkan 10
mL air panas dan dididihkan selama 5 menit.
Setelah itu, disaring dan filtratnya digunakan
untuk pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
Antosianidin
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambahkan 3 tetes CH3COONa lalu diamati,
kemudian ditambahkan 3 tetes FeCl3 dan
diamati
lagi.
Antosianidin
dengan
CH3COONa memberikan warna merah atau
ungu dan bila ditambahkan FeCl3 menjadi
biru.
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambahkan
Na2CO3
lalu
diamati.
Antosianidin memberikan warna ungu, biru,
atau hijau.
Flavon, Kalkon, Auron, dan Flavonol
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambahkan 3 tetes CH3COOPb lalu diamati
warnanya. Flavon memberikan warna jingga
hingga krem, kalkon memberikan warna
jingga tua, dan auron memberikan warna
merah.
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambah 3 tetes NaOH 0,1 N lalu diamati
warnanya. Flavon memberikan warna kuning,
flavonol memberikan warna kuning, jingga
hingga krem, dan kalkon memberikan warna
krem hingga merah tua.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Penentuan kadar air dilakukan dengan
metode gravimetri evolusi tidak langsung.
Bobot air dihitung setelah proses pengeringan
dengan suhu 105 °C pada periode waktu
tertentu sampai diperoleh bobot yang konstan.
Menurut Harjadi (1993), air yang terikat
secara fisik dapat dihilangkan dengan
pemanasan pada suhu 100–105 °C. Salah satu
kegunaan penentuan kadar air adalah untuk
mengetahui ketahanan suatu bahan dalam
penyimpanan.
4
Sampel yang digunakan dalam penelitian
ini adalah serbuk daun dandang gendis. Kadar
airnya diperoleh sebesar 9.74% (Lampiran 2).
Menurut Winarno (1997), sampel dapat
disimpan dalam jangka waktu lama jika
memiliki kadar air di bawah 10%. Nilai kadar
air yang diperoleh kurang dari 10%. Hal ini
menunjukkan bahwa sampel memiliki masa
simpan yang relatif lama.
Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid
Tahap pertama dalam isolasi senyawa
golongan flavonoid adalah maserasi sampel
dengan pelarut etanol 70%. Etanol 70%
digunakan karena flavonoid bersifat polar,
dengan sejumlah gugus hidroksil, baik yang
terikat ataupun yang tidak terikat gula
(Markham 1988). Selain itu, berdasarkan
Macari et al. (2006), aktivitas antioksidan
tanaman obat dalam etanol 70% lebih tinggi
dibandingkan dengan beberapa pelarut
lainnya. Maserasi dilakukan berulang kali
sampai filtrat tidak berwarna hijau lagi,
sehingga dapat dianggap semua senyawa yang
berbobot molekul rendah telah terekstraksi
(Harborne 1987). Filtrat yang diperoleh
dipekatkan dengan penguap putar sehingga
diperoleh ekstrak kasar etanol. Rendemen
yang dihasilkan dari 200.04 g serbuk daun
dandang gendis yang dimaserasi adalah 31.24
% (Lampiran 3).
Ekstrak daun dandang gendis kemudian
dipartisi cair-cair menggunakan pelarut nheksana untuk menghilangkan kandungan
lemak. Tahapan selanjutnya adalah hidrolisisasam
terhadap
ekstrak
bebas-lemak.
Hidrolisis bertujuan memutus gula dari
aglikon flavonoid. Hasil hidrolisis kemudian
dipartisi dengan etil asetat untuk memisahkan
aglikon flavonoid dengan gulanya. Aglikon
flavonoid akan berada dalam fraksi etil asetat
dan gula dalam fraksi air (Markham 1988).
Pemisahan aglikon flavonoid dilakukan
dengan KLT preparatif menggunakan eluen
BAA dengan nisbah 4:1:5 (Markham 1988).
Noda pemisahan diamati di bawah lampu UV
254 nm, dan diperoleh 3 noda (Gambar 4).
Nilai Rf untuk fraksi 1, 2, dan 3 berturutturut adalah 0.25, 0.52, dan 0.85. Setiap fraksi
dikerok, kemudian dilarutkan dengan etanol
hingga jumlah setiap fraksi mencukupi untuk
analisis kualitatif, uji aktivitas antioksidan,
dan analisis senyawa golongan flavonoid.
F3
Rf 0.85
F2
Rf 0.52
F1
Rf 0.25
(a)
(b)
Gambar 4 Noda pemisahan di bawah lampu
UV 254 nm: KLT (a), KLT
preparatif dengan eluen BAA (b).
Uji Aktivitas Antioksidan
Uji aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat
dan ketiga fraksi hasil KLT preparatif
dilakukan dengan metode DPPH (Lampiran
4). Metode ini dipilih karena mudah
digunakan, cepat, dan cukup teliti (Prakash
2001). Aktivitas antioksidan metode DPPH
dinyatakan dengan nilai IC50, yakni
konsentrasi sampel yang mampu menghambat
aktivitas DPPH sebesar 50%.
Ekstrak etil asetat memiliki aktivitas
antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 178.40
mg L-1. Fraksi 2 (F2) hasil KLT preparatif
menunjukkan nilai IC50 yang paling kecil,
yakni 52.93 mg L-1. Semakin kecil nilai IC50,
semakin tinggi pula aktivitas antioksidan
(Molyneux 2004). Fraksi 1 (F1) dan fraksi 3
(F3) memiliki aktivitas antioksidan yang
kecil. Nilai IC50 cukup besar yakni 43932.07
mg L-1 dan 9226.48 mg L-1. Menurut Hanani
et al. (2005), suatu senyawa dikatakan
memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi
jika memiliki nilai IC50 kurang dari 200 mg L1
. Namun, jika dibandingkan dengan BHT
sebagai kontrol positif, aktivitas antioksidan
F2 masih lebih rendah. Nilai IC50 untuk BHT
sebesar 16.71 mg L-1 (Tabel 3).
Tabel 3 Aktivitas antioksidan
Larutan uji
IC50 (mg L-1)
BHT
16.71
Ekstrak etil asetat
178.40
F1
43932.07
F2
52.93
F3
9226.48
Golongan Flavonoid Fraksi Aktif
Analisis F2 sebagai fraksi teraktif dari
ekstrak daun dandang gendis dilakukan
5
dengan merekam spektrum UV-tampak.
Identifikasi senyawa golongan flavonoid
didasarkan
pada
perubahan
panjang
gelombang setelah ditambahkan pereaksi
geser (Lampiran 5). Spektrum UV-tampak F2
dalam pelarut metanol (Gambar 5)
menunjukkan serapan maksimum pita 1 pada
panjang gelombang 332 nm dan pita 2 pada
panjang gelombang 274 nm.
A
b
s
o
r
b
a
n
s
Panjang gelombang (nm)
NaOCH3
NaOCH3 setelah 5 menit
Gambar 6 Spektrum F2 dengan penambahan
pereaksi geser NaOCH3 dan
NaOCH3 setelah 5 menit.
Panjang gelombang (nm)
Gambar 5
A
b
s
o
r
b
a
n
s
Spektrum F2 dalam pelarut
metanol.
Berdasarkan puncak serapan pada pita 1
dan 2, F2 diduga merupakan senyawa
flavonoid golongan flavon atau flavonol.
Menurut Markham (1988), flavon dan
flavonol memiliki serapan maksimum pita 2
di 250–280 nm. Sementara untuk pita 1,
flavon memiliki serapan maksimum pada 310
–350 nm dan flavonol pada 330–360 nm. Pita
1 berasal dari cincin B dan C, dan pita 2
berasal dari konjugasi pada cincin A.
Penambahan pereaksi geser NaOCH3 pada
F2 menyebabkan pergeseran batokromik
sebesar 64 nm pada pita 1 (Gambar 6).
Markham
(1988)
melaporkan
bahwa
pergeseran serapan maksimum sebesar 45–65
nm dengan kekuatan serapan yang tidak
menurun menunjukkan adanya gugus
hidroksil di C-4'. Karena itu, dapat
disimpulkan bahwa senyawa flavonoid pada
F2 memiliki gugus hidroksil pada C-4'. Selain
itu, terbentuk pita baru pada 326.5 nm yang
menunjukkan adanya gugus hidroksil di posisi
C-7. Menurut Markham (1988), pita serapan
baru pada 320–335 nm muncul jika terdapat
gugus hidroksil pada C-7.
Tidak terdapatnya gugus hidroksil di C-3
ditunjukkan dengan tidak adanya pergeseran
batokromik pada pita 1 sejauh 50–60 nm
(Markham 1988) pada spektrum AlCl3/HCl
(Gambar 7). Tidak adanya gugus hidroksil
pada C-3 manunjukkan bahwa F2 merupakan
senyawa
flavonoid
golongan
flavon.
Pergeseran batokromik sejauh 17 nm pada
pita 1 menunjukkan adanya gugus hidroksil di
posisi C-5. Penambahan AlCl3 akan
membentuk kompleks dengan gugus hidroksil
di C-5 dan gugus karbonil sehingga terjadi
geseran batokromik. Tidak terbentuknya
kompleks antara AlCl3 dengan gugus odihidroksi pada cincin B menyebabkan tidak
teramati
geseran
hipsokromik
yang
diakibatkan penguraian kompleks tersebut
ketika ditambahkan HCl (Markham 1988).
A
b
s
o
r
b
a
n
s
Panjang gelombang (nm)
AlCl3
AlCl3/HCl
Gambar 7 Spektrum F2 setelah penambahan
pereaksi AlCl3 dan AlCl3/HCl.
6
Penambahan
pereaksi
CH3COONa
menyebabkan pergeseran batokromik sejauh
8.5 nm (Gambar 8) pada pita 2 yang
menunjukkan adanya gugus hidroksil di C-7.
Berdasarkan Markham (1988), intensitas yang
tidak menurun menunjukkan tidak adanya
gugus yang peka terhadap basa, seperti 6,7diOH; 7,8-diOH dan 3',4'-diOH. Pada
spektrum dengan penambahan H3BO3
(Gambar 8), tidak terjadi pergeseran
batokromik yang menunjukkan tidak adanya
gugus o-diOH pada cincin A dan B.
Pergeseran batokromik sejauh 12 sampai 36
nm pada pita 1 akan terjadi jika ada gugus
tersebut (Markham 1988).
(Gambar 9) lebih baik karena hanya
menunjukkan satu noda tunggal. Karena itu,
dapat ditarik simpulan bahwa F2 merupakan
senyawa flavonoid golongan flavon.
Eluen 1
BAA
Eluen 2 BEA
Gambar 9 Kromatogram 2 arah F2 dengan
eluen BAA dan BEA.
A
b
s
o
r
b
a
n
s
Uji Fitokimia dan Golongan Flavonoid
Uji fitokimia dilakukan terhadap ekstrak
etanol (Tabel 4), sedangkan uji golongan
flavonoid dilakukan terhadap ekstrak etanol,
ekstrak etil asetat, dan F2 (Tabel 5).
Panjang gelombang (nm)
Tabel 4 Uji fitokimia ekstrak etanol
CH3COONa
CH3COONa 5 menit
H3BO3
Gambar 8 Spektrum F2 setelah penambahan
pereaksi
NaOMe, NaOMe 5
menit, dan H3BO3.
KLT 2 arah dilakukan untuk menguji
tingkat kemurnian F2. Dibandingkan dengan
KLT 2 arah yang dilakukan Akbar (2010)
yang menunjukkan dua berkas noda, hasil
KLT 2 arah dengan eluen BAA dan BEA
Golongan senyawa
Hasil uji
Alkaloid
Saponin
Flavonoid
Steroid
Triterpenoid
Tanin
+++
+
+++
+
-
Keterangan:
(+) menunjukkan intensitas warna, (-) menunjukkan
tidak terdapat senyawa tersebut dalam ekstrak etanol.
Tabel 5 Uji golongan flavonoid ekstrak etanol, etil asetat dan F2
Pereaksi
Ekstrak
F2
Golongan flavonoid
Krem
Kuning
Krem
Kuning
Flavon
Flavon, flavonol
Jingga
-
Jingga
Cokelat
Kuning
kecokelatan
Kuning
Cokelat
Kuning
Cokelat
-
Jingga
Kuning
Kuning
-
Etanol
Etil asetat
CH3COOPb
NaOH 0,1 N
Krem
Kuning
H2SO4
Cokelat
CH3COONa
CH3COONa+FeCl3
Na2CO3
Keterangan : (-) Tidak terdeteksi adanya senyawa golongan flavonoid.
Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa
ekstrak etanol daun dandang gendis
mengandung
senyawa
tanin,
steroid,
flavonoid, dan saponin (Tabel 4). Uji
golongan flavonoid terhadap ekstrak etanol,
ekstrak etil asetat, dan F2 menunjukkan
senyawa flavon atau flavonol. Berdasarkan
hasil identifikasi dengan sinar UV-tampak,
dapat disimpulkan bahwa senyawa aktif
antioksidan yang terkandung dalam daun
7
dandang gendis adalah flavon dengan gugus
hidroksil yang terletak pada C-4', C-5, dan C7 (Gambar 10).
OH
HO
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Pertanian Bogor.
Bermawi N, Kristina NN. 2003. Penyimpanan
in vitro tanaman obat potensial.
Perkembangan Teknol TRO 15:51-60.
O
Blois MS. 1958. Antioxidant determinations
by the use of stable free radical. Nature
181: 1199-1200.
OH
Gambar 10
O
Struktur senyawa flavonoid
hipotesis F2.
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Ekstrak etil asetat daun dandang gendis
memiliki aktivitas antioksidan. Fraksi 2
menunjukkan aktivitas antioksidan tertinggi
dibandingkan dengan 2 fraksi lainnya dengan
nilai IC50 sebesar 52.93 mg L-1. Hasil uji
golongan flavonoid, dan spektrum UVtampak memperlihatkan bahwa fraksi 2
dihipotesiskan adalah senyawa flavonoid
golongan flavon dengan gugus hidroksil yang
terletak pada C-4', C-5, dan C-7.
Saran
Perlu diadakan analisis lebih lanjut dengan
spektrometer inframerah, resonans magnetik
inti 1H, 13C, dan spektrometer massa untuk
mengidentifikasi senyawa pasti dalam fraksi
2.
DAFTAR PUSTAKA
Akbar HR. 2010. Isolasi dan identifikasi
golongan flavonoid daun dandang
gendis
(Clinachantus
nutans)
berpotensi
sebagai
antioksidan
[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Pertanian Bogor.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Padmawinata
K,
Soediro
I,
penerjemah; Niksolihin S, editor.
Bandung: ITB. Terjemahan dari:
Phytochemical Methods.
Hanani E, Abdul M, Ryany S. 2005.
Identifikasi senyawa antioksidan dalam
Callyspongia sp dari Kepulauan
Seribu. Maj Ilmu Kefarmasian 2:127133.
Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar.
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Kristio 2007. Tanaman obat Indonesia. http://
toiusd. Multiply. com/ journal?
&page_start=160. [23 Mar 2010]
Macari PdAT, Portela CN, Polhit AM. 2006.
Antioxidant, cytotoxic, and UVBabsorbing activity of Maynetus
guyanensis Klotzch (Celastraceae) bark
extract. Acta Amazonica 36:513-518.
Markham KR. 1988. Cara Mengidentifikasi
Flavonoid.
Padmawinata
K,
penerjemah.
Bandung:
ITB.
Terjemahan dari: Techniques of
Flavonoid of Identification.
Molyneux P. 2004. The use of stable free
radical
diphenylpicryl-hydrazyl
(DPPH) for estimazing antioxidant
activity. Songklanakarin J Sci Technol
26:211-219.
Amic D, Beslo D, Trinajstic N, Davidovic.
2003. Structure-radical scavenging
activity relationship of flavonoids.
Croatia Chem Acta 76:55-61.
Pannangpetch et al. 2007. Antioxidant
activity and protective effect against
oxidative hemolysis of Clinachantus
nutans
(Burm.f)
Lindau.
Songklanakarin J Sci Technol 29:1-9.
Andriani A. 2008. Uji potensi larvasida fraksi
ekstrak daun dandang gendis terhadap
larva instar III nyamuk Aedes aegypti
[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika
Prakash A. 2001. Antioxidant activity.
Medallion Laboratories Analytical
Progress 19(2).
8
Sakdarat S, Shuyprom A, Pientong C,
Ekalaksananan T, Thongcai S. 2009.
Bioactive constituent from the leaves
of Clinachantus nutans Lindau.
Bioanorg Med Chem 17:1857-1860.
Thongcai S et al. 2008. Anti-herpes simplex
virus type 1 activity of crude ethyl
acetate extract derived from leaves of
Clinacanthus nutans Lindau. J Sci
Technol 27:318-326.
Sofyan D. 2008 Inhibisi fraksi aktif daun
dandang gendis (Clinachantus nutans)
pada
pertumbuhan
Saccharomyes
cerevisiae
sebagai
uji
potensi
antikanker [skripsi]. Bogor: Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Institut Pertanian Bogor.
Tuntiwachwuttikul P, Pootaeng-on Y, Phansa
P, Taylor WS. 2004. Cerebrosides and
a
monoacylmonogalactosylglycerol
from Clinachanthus nutans. Chem
Pharm Bull 52: 27-32.
Suharty NS. 2004. Isolasi terpenoid dari daun
Clinachantus nutans. http: //digilib.
itb.ac.id/go.php?id= jbptitbpp-gdl-s22004-nengsrisuh-1734 & width=300.
[23 Mar 2010]
Sunarni T. 2005. Aktivitas antioksidan
penangkap radikal bebas beberapa
kecambah dari biji tanaman familia
Papilionaceae. J Farm Indones 2:5361.
Wanikiat et al. 2008. The anti-inflammatory
effects and the inhibition of neutrophil
responsiveness by Barleria lupulina
and Clinachantus nutans extract. J
Ethnopharmacology 116: 234-244.
Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi.
Jakarta: Gramedia.
Yoosook C, Panpisutchai Y, Chaichana S,
Santisuk T, Reutrakul V. 1999.
Evaluation of anti-HSV-2 activities of
Barleria lupulina and Clinacanthus
nutans. J Ethnopharmacol 67:179-187.
Teshima I et al. 1997. Sulfur-containing
glucosides from Clinacanthus nutans.
Phytochemistry 48:831-835.
9
LAMPIRAN
11
Lampiran 1 Diagram alir penelitian
Serbuk daun dandang gendis
Penetapan kadar air
Ekstraksi dengan etanol 70%
Residu
Ekstrak etanol
Partisi dengan n-heksana
Fraksi n-heksana
Fraksi etanol
Hidrolisis HCl
Fraksi etanol terhidrolisis
Partisi dengan
etil asetat
Uji golongan flavonoid
dan antioksidan
Fraksi etil asetat
Fraksi etanol
Fraksionasi (KLTp)
Fraksi 1
Fraksi 2
Fraksi 3
Uji antioksidan
Fraksi teraktif
Analisis flavonoid dengan
Spektrofotometer UV-tampak
Senyawa golongan flavonoid
11
Lampiran 2 Kadar air serbuk daun dandang gendis
Bobot (g)
Ulangan
Pinggan
kosong
Contoh
Contoh kering
+ pinggan
Contoh
kering
Kadar
air
(%)
1
2
3
21.0364
18.5684
18.7146
3.0000
3.0000
3.0000
23.7457
21.2764
21.4204
2.7093
2.7080
2.7058
9.69
9.73
9.81
Kadar
air
rerata
(%)
9.74
Contoh perhitungan:
= 9.69 %
Lampiran 3 Rendemen hasil ekstraksi
Bobot serbuk daun dandang gendis (W contoh) = 200.04 g
Bobot ekstrak (W ekstrak)
= 56.40 g
Kadar air
= 9.74 %
Contoh perhitungan :
= 31.24%
13
12
Lampiran 4 Hasil uji aktivitas antioksidan
a) Ekstrak etil asetat
Konsentrasi (mg L-1)
10
30
50
70
ln Konsentrasi
2.3026
3.4012
3.9120
4.2485
Inhibisi (%)
9.69
23.00
29.96
38.94
y = 14.3209x – 24.2399
50 = 14.3209x – 24.2399
x = 5.1840
IC50 = antiln (5.1840)
IC50 = 178.40 mg L-1
Kurva uji aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat
b) Fraksi 1
Konsentrasi (mg L-1)
10
30
50
70
ln Konsentrasi
2.3026
3.4012
3.9120
4.2485
Inhibisi (%)
1.15
6.38
10.60
12.45
y = 5.8628x – 12.6759
50 = 5.8628x – 12.6759
62.6759 = 5.8628x
x = 10.6904
IC50 = antiln (10.6904)
IC50 = 43932.07 mg L-1
13
Lanjutan Lampiran 4 Hasil uji aktivitas antioksidan
Kurva uji aktivitas antioksidan fraksi 1
c) Fraksi 2
Konsentrasi (mg L-1)
10
30
50
70
ln Konsentrasi
2.3026
3.4012
3.9120
4.2485
Inhibisi (%)
24.87
44.62
47.80
53.58
y = 14.4806x – 7.4732
50 = 14.4806x– 7.4732
x = 3.9690
IC50 = antiln (3.9690)
IC50 = 52.93 mg L-1
Kurva uji antioksidan fraksi 2
13
14
Lanjutan Lampiran 4 Hasil uji aktivitas antioksidan
d) Fraksi 3
Konsentrasi (mg L-1)
10
30
50
70
ln Konsentrasi
2.3026
3.4012
3.9120
4.2485
Inhibisi (%)
1.23
10.35
11.05
16.12
y = 7.1176x – 14.9825
50 = 7.1176x – 14.9825
x = 9.1298
IC50 = antiln (9.1298)
IC50 = 9226.48 ppm
Kurva uji aktivitas antioksidan fraksi 3
e) BHT
Konsentrasi (mg L-1)
2
4
6
8
ln Konsentrasi
0.6931
1.3863
1.7918
2.0794
Inhibisi (%)
24.15
30.41
39.21
40.24
y = 12.4208x + 15.0247
50 = 12.4208x + 15.0247
x = 2.8158
IC50 = antiln (2.8158)
IC50 = 16.71 mg L-1
13
15
Lanjutan Lampiran 4 Hasil uji aktivitas antioksidan
Kurva uji aktivitas antioksidan BHT
13
16
Lampiran 5 Pergeseran panjang gelombang pada fraksi 2 setelah penambahan
pereaksi geser
Pereaksi geser
Fraksi 2
NaOCH3
NaOCH3
(5 menit)
AlCl3
AlCl3+HCl
CH3COONa
CH3COONa
(5 menit)
CH3COONa
+H3BO3
Pita 1
Pita 2
Pita 1
Pita 2
332
396
397.5
274
281.5
280.5
+ 64
+ 65.5
+7.5
+6.5
Dugaan
substitusi
gugus
hidroksil
C-4'
-
349
349
384.5
383.5
280
281
282.5
282.5
+17
+17
+52.5
+51.5
+6
+7
+8.5
+8.5
C-5
C-7
-
321
278
-11
+278
-
Panjang gelombang
serapan (nm)
Pergeseran serapan
(nm)
13
17
SEBAGAI ANTIOKSIDAN DARI DAUN DANDANG
GENDIS (Clinacanthus nutans)
SRI AGUSTINA
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
ABSTRAK
SRI AGUSTINA. Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid sebagai Antioksidan dari
Daun Dandang Gendis (Clinacanthus nutans). Dibimbing oleh DUDI TOHIR dan
GUSTINI SYAHBIRIN.
Daun dandang gendis (Clinacanthus nutans) memiliki kemampuan
antioksidan. Tujuan penelitian ini ialah memperoleh ekstrak flavonoid daun
dandang gendis yang memberikan aktivitas antioksidan yang tinggi. Aktivitas
antioksidan ditentukan menggunakan metode 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etilasetat memiliki aktivitas antioksidan
dengan nilai IC50 sebesar 178.40mg L-1. Ekstrak etilasetat kemudian difraksionasi
menggunakan kromatografi lapis tipis preparatif dengan eluen n-butanol:asam
asetat:air (4:1:5) dan menghasilkan 3 fraksi. Fraksi teraktif ialah fraksi 2 dengan
nilai IC50 sebesar 52.93 mg L-1, tetapi lebih rendah dari butil hidroksi toluena
(IC50 16.71 mg L-1). Uji golongan flavonoid menunjukkan bahwa senyawa pada
fraksi 2 adalah flavonol dan flavon. Spektrum ultraviolet-tampak fraksi 2 dalam
pelarut metanol menunjukkan serapan maksimum pita 1 pada 332 nm dan pita 2
pada 274 nm. Pergeseran batokromik pada pelarut MeOH+NaOMe dan
MeOH+AlCl3-HCl mengindikasikan adanya substituen 4'-OH dan 5-OH. Adanya
puncak baru dalam pita 2 pada 326.5 nm menunjukkan adanya substituen 7-OH.
ABSTRACT
SRI AGUSTINA. Isolation of Flavonoids as Antioxidant from Dandang Gendis
(Clinacanthus nutans) Leaves. Supervised by DUDI TOHIR and GUSTINI
SYAHBIRIN.
The leaves of dandang gendis (Clinacanthus nutans) exhibit antioxidant
activity. The objective of this study is to investigate the highest antioxidant
activity from flavonoid extract of the leaves. Antioxidant activities were
determined by radical scavenging assay using 1,1-diphenyl-1-pycryl-hydrazyl
radical. The result showed that ethyl acetate extract had antioxidant activity with
IC50 value of 178.40 mg L-1. The ethyl acetate extract was fractionated further
using preparative thin layer chromatography with eluent of n-buthanol:acetic acid:
water (4:1:5) and produced 3 fractions. The most active fraction was fraction 2
with IC50 value of 52.93 mg L-1, which was lower than that of butylated hydroxy
toluene (IC50 16.71 mg L-1). Flavonoid assay of fraction 2 showed that it
contained flavonol and flavon. The ultraviolet-visible spectrum of fraction 2 in
methanol solvent showed a maximum absorption at 332 in band 1 and 274 nm in
band 2. In MeOH+MeONa and MeOH+AlCl3-HCl solvents there was a
bathochromic shift, indicated the presence of 4'-OH and 5-OH. The new peak at
326.5 nm showed the presence of 7-OH substituent.
ISOLASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID
SEBAGAI ANTIOKSIDAN DARI DAUN DANDANG
GENDIS (Clinacanthus nutans)
SRI AGUSTINA
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
Judul : Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid sebagai Antioksidan dari Daun
Dandang Gendis (Clinacanthus nutans)
Nama : Sri Agustina
NIM : G44062261
Menyetujui
Pembimbing I,
Pembimbing II,
Drs. Dudi Tohir, MS
NIP 19571104 198903 1 001
Dr. Gustini Syahbirin, MS
NIP 19600819 198903 2 001
Mengetahui
Ketua Departemen,
Prof. Dr. Ir. Tun Tedja Irawadi, MS
NIP 195012271976032002
Tanggal lulus:
PRAKATA
Puji dan syukur ke hadirat Allah SWT atas segala rahmat dan karunia-Nya,
sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah yang berjudul “Isolasi
Senyawa Golongan Flavonoid Sebagai Antioksidan dari Daun Dadang Gendis
(Clinacanthus nutans)” yang dilaksanakan sejak bulan Juni 2010 di Laboratorium
Kimia Organik Departemen Kimia FMIPA IPB.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Drs. Dudi Tohir, MS dan Dr.
Gustini Syahbirin, MS selaku pembimbing yang telah memberikan pengarahan
dan bimbingannya kepada penulis. Penulis juga mengucapkan terima kasih
kepada orang tua, Bapak Ace Supriatin dan Ibu Suratmi atas didikan, doa, dan
kasih sayangnya yang tiada terkira, serta untuk seluruh keluarga besar di rumah,
terima kasih atas dukungan dan dorongannya.
Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Bapak Sabur, Mba Nia, Ibu
Yeni Karmila, dan Ibu Siti Robiah, atas bantuan yang diberikan. Tak lupa,
ungkapan terima kasih penulis kepada seluruh rekan peneliti di Laboratorium
Kimia Organik (Wulan, Ela, Arif, Saki, Farid, Tifah, Dinda, Risal, Muti, Lia, Teh
Dian, Kak Akbar), serta teman-teman Kimia 43 atas bantuan, motivasi, diskusi,
dan kebersamaan selama penulis menempuh studi dan menjalankan penelitian.
Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat.
Bogor, Februari 2011
Sri Agustina
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Bogor pada tanggal 17 Agustus 1988 dari Bapak Ace
Supriatin dan Ibu Suratmi. Penulis merupakan anak kedua dari dua bersaudara.
Penulis menyelesaikan studi di SMAN 3 Bogor pada tahun 2006. Pada tahun yang
sama penulis diterima di Institut Pertanian Bogor (IPB) melalui jalur Undangan
Seleksi Masuk IPB (USMI). Tahun 2007 penulis diterima pada Program Studi
Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Penulis pernah menjadi pengajar Kimia di bimbingan belajar Avogadro
pada tahun 2008/2009 dan bimbingan belajar ERC pada tahun 2010, dan pernah
menjadi asisten praktikum mata kuliah Kimia Dasar pada tahun 2008/2009, Kimia
Pangan D3 Analisis Kimia tahun 2010, Kimia Organik Layanan tahun 2008,
Kimia Organik D3 Analisis Kimia tahun 2010, Praktikum Kimia Organik
Berbasis Kompetensi tahun 2010, dan Kimia TPB Alih Tahun tahun 2010. Penulis
juga berkesempatan melaksanakan kegiatan praktik lapangan di PT Novell
Pharmaceutical Lab, Bogor pada tahun 2009.
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ................................................................................................ vi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... vi
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ vii
PENDAHULUAN ................................................................................................ 1
TINJAUAN PUSTAKA
Dandang Gendis .........................................................................................
Antioksidan ...............................................................................................
Metode DPPH ...........................................................................................
Flavonoid ..................................................................................................
1
2
2
2
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat ..........................................................................................
Kadar Air ...................................................................................................
Isolasi Flavonoid .......................................................................................
Uji Aktivitas Antioksidan ..........................................................................
Analisis Flavonoid .....................................................................................
Uji Fitokimia ..............................................................................................
Uji Golongan Flavonoid .............................................................................
3
3
3
3
3
4
4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar air .....................................................................................................
Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid ........................................................
Uji Aktivitas Antioksidan ..........................................................................
Golongan Flavonoid Fraksi Aktif ..............................................................
Uji Fitokimia dan Golongan Flavonoid .....................................................
4
5
5
5
7
SIMPULAN DAN SARAN .................................................................................. 8
Simpulan .................................................................................................... 8
Saran ........................................................................................................... 8
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 8
LAMPIRAN ......................................................................................................... 10
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Uji kualitatif golongan flavonoid ..................................................................... 2
2 Rentang serapan spektrum UV-tampak senyawa flavonoid ............................. 3
3 Aktivitas antioksidan......................................................................................... 5
4 Uji fitokimia ekstrak etanol ............................................................................... 7
5 Uji golongan flavonoid ekstrak etanol, ekstrak etil asetat, dan F2 ................... 7
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Daun dandang gendis ........................................................................................ 1
2 Struktur DPPH: radikal bebas (a) bentuk tereduksi (b) .................................... 2
3 Struktur flavonoid ............................................................................................. 2
4 Noda pemisahan di bawah lampu UV 254 nm: KLT (a), KLT preparatif
dengan eluen BAA (b). ...................................................................................... 5
5 Spektrum F2 dalam pelarut metanol ................................................................ 6
6 Spektrum F2 dengan penambahan pereaksi geser NaOCH3 dan NaOCH3
setelah 5 menit ................................................................................................... 6
7 Spektrum F2 setelah penambahan pereaksi AlCl3 dan AlCl3/HCl ................. 6
8 Spektrum F2 setelah penambahan pereaksi NaOMe, NaOMe 5 menit, dan
H3BO3 ................................................................................................................ 7
9 Kromatogram 2 arah F2 dengan eluen BAA dan BEA ..................................... 7
10 Struktur senyawa flavonoid hipotesis F2 .......................................................... 8
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Diagram alir penelitian ..................................................................................... 11
2 Kadar air serbuk daun dandang gendis ............................................................ 12
3 Rendemen hasil ekstraksi ................................................................................. 12
4 Hasil uji aktivitas antioksidan ......................................................................... 13
5 Pergeseran panjang gelombang pada fraksi 2 setelah penambahan pereaksi
geser.................................................................................................................. 17
PENDAHULUAN
Negara
Indonesia
memiliki
keanekaragaman hayati yang kaya. Sekitar
40 000 spesies tumbuhan ditemukan di
Indonesia dan 180 di antaranya berpotensi
sebagai tanaman obat (Bermawi & Kristina
2003). Salah satu tanaman yang lazim
digunakan sebagai obat tradisional adalah
dandang gendis (Clinacanthus nutans).
Dandang gendis merupakan tanaman semak
belukar yang sering dijadikan tanaman pagar
dan dikenal oleh masyarakat sebagai obat
kencing manis, susah buang air kecil, dan
disenteri. Beberapa penelitian yang telah
dilakukan menunjukkan bahwa ekstrak
dandang gendis berpotensi sebagai antikanker
(Sofyan 2008), larvasida Aedes aegypti
(Andriani 2008), antivirus Herpes simplex
(Yoosook et al. 1999; Thongchai et al. 2008),
dan antioksidan (Pannangpetch et al. 2007;
Akbar 2010).
Ekstraksi pendahuluan daun dandang
gendis dengan berbagai pelarut menunjukkan
kandungan alkaloid, flavonoid, dan terpenoid
(Suharty 2004). Flavonoid yang terkandung
dalam ekstrak daun dandang gendis dapat
menghambat aktivitas radikal bebas. Radikal
bebas diketahui memiliki reaktivitas yang
tinggi sehingga dapat memicu reaksi berantai
dalam sel. Hal ini dapat merusak sel dan akan
menyebabkan munculnya berbagai penyakit
seperti inflamasi, penyakit kardiovaskular,
kanker, dan penuaan dini. Aktivitas radikal
tersebut dapat dihambat oleh kerja
antioksidan.
Potensi ekstrak daun dandang gendis
sebagai antioksidan telah diteliti oleh Akbar
(2010)
yang
menunjukkan
aktivitas
antioksidan dengan nilai konsentrasi hambat
50% (IC50) sebesar 48.42 mg L-1. Ekstrak
daun dandang gendis dapat berpotensi sebagai
antioksidan karena mengandung senyawa
flavonoid.
Penelitian
ini
bertujuan
mengisolasi senyawa flavonoid, uji aktivitas
antioksidan, dan analisis senyawa golongan
flavonoid yang terkandung dalam daun
dandang
gendis
menggunakan
spektrofotometer UV-tampak.
TINJAUAN PUSTAKA
Dandang Gendis
Dandang gendis (Gambar 1)
tumbuhan semak belukar berbentuk
yang memiliki ciri fisik antara lain
yang beruas, berwarna hijau, dan
adalah
perdu
batang
tegak
dengan tinggi kurang lebih 2.5 m. Daunnya
mempunyai bentuk tunggal dan berhadapan
satu sama lain dengan panjang daun berkisar
8–12 cm, sedangkan lebar 4–6 cm. Daun
tersebut berbentuk tulang menyirip dan
berwarna hijau. Tanaman ini memiliki bunga
yang tumbuh di ketiak daun dan di ujung
batang. Mahkota daun berbentuk tabung
dengan panjang 2–3 cm. Warnanya merah
muda. Buah yang dihasilkan tanaman yang
termasuk famili Acanthaceae ini berwarna
cokelat dengan bentuk bulat memanjang
(Kristio 2007).
Gambar 1 Daun dandang gendis.
Secara taksonomi dandang gendis
diklasifikasikan dalam kerajaan Plantae, divisi
Spermatophyta, sub divisi Angiospermae,
famili Acanthaceae, genus Clinacanthus, dan
spesies Clinacanthus nutans. Masyarakat
Indonesia mengenal dandang gendis sebagai
obat kencing manis (diabetes melitus), susah
buang air kecil, dan disenteri. Selain itu,
beberapa penelitian menunjukkan bahwa
ekstrak daun dandang gendis berpotensi
sebagai antioksidan (Pannangpetch et al.
2007; Akbar 2010), larvasida terhadap Aedes
aegypti (Andriani 2008), antikanker (Sofyan
2008), dan antiradang (Wanikiat et al. 2008).
Daun dandang gendis memiliki aktivitas
antivirus yang tidak terlalu kuat terhadap
HSV1 (Thongchai et al. 2008) dan HSV2
(Yoosook et al. 1999).
Senyawa yang terkandung dalam daun
dandang gendis di antaranya C-glikosilflavon,
viteksin,
isoviteksin,
shaftosida,
isomolupentin,
7-O-ß-glukopiranosida,
orientin, 5 senyawa yang mengandung sulfur
(Teshima et al. 1997), 132-hidroksi-(132-R)faeofitin b, 132-hidroksi-(132-S)-faeofitin a,
132-hidroksi-(132-R)-faeofitin a (Sakdarat et
al. 2009), serta campuran 9 serebrosida dan
monoasilmonogalaktosilgliserol(Tuntiwachutt
tikul et al. 2004).
Antioksidan
Antioksidan alami mampu melindungi
tubuh terhadap kerusakan yang disebabkan
oleh spesies oksigen reaktif, mampu
menghambat terjadinya penyakit degeneratif,
serta mampu menghambat peroksidase lipid
pada makanan (Sunarni 2005). Senyawa
flavonoid
diketahui
mampu
berperan
menangkap radikal bebas atau sebagai
antioksidan alami (Amic et al. 2003).
Aktivitas antioksidan dari suatu bahan
alam dapat diuji dengan berbagai metode di
antaranya kemampuan mereduksi ion feri
(FRAP), 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH),
dan kapasitas mereduksi kupri (CUPRAC).
Aktivitas antioksidan ekstrak daun dandang
gendis dengan metode DPPH cukup kuat,
yang ditunjukkan dengan nilai IC50 sebesar
110.40 µg mL-1 (Pannangpetch et al. 2007).
Berdasarkan Akbar (2010), ekstrak teraktif
daun dandang gendis berpotensi sebagai
antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 48.42
mg L-1. Nilai IC50 yang kurang dari 200 ppm
menunjukkan aktivitas antioksidan yang kuat
(Hanani et al. 2005).
akan ditangkap oleh senyawa flavonoid, dan
flavonoid akan teroksidasi menghasilkan
bentuk radikal yang lebih stabil, yaitu radikal
dengan kereaktifan rendah. Flavonoid
mendonorkan radikal hidrogen dari cincin
aromatiknya untuk mengurangi radikal bebas
yang bersifat toksik menghasilkan radikal
flavonoid yang terstabilkan resonans dan
membuatnya tidak toksik (Amic et al. 2003).
Flavonoid
Flavonoid
merupakan
salah
satu
metabolit sekunder. Keberadaannya dalam
daun kemungkinan dipengaruhi oleh adanya
proses fotosintesis sehingga daun muda belum
terlalu banyak mengandung flavonoid
(Markham 1988). Senyawa flavonoid
mempunyai struktur C6-C3-C6. Tiap bagian
C6 merupakan cincin benzena yang
dihubungkan oleh atom C3 yang merupakan
rantai alifatik, seperti ditunjukkan pada
Gambar 3. Penggolongan jenis flavonoid
didasarkan pada sifat kelarutan dan reaksi
warna (Tabel 1).
Metode DPPH
Salah satu metode
yang dapat
menunjukkan aktivitas antioksidan dari
senyawa alam adalah metode DPPH. 1,1difenil-2-pikrilhidrazil (Gambar 2a) tergolong
radikal bebas stabil. Delokalisasi elektron
pada molekul DPPH akan memberikan warna
ungu yang dicirikan dengan pita serapan pada
520 nm. Ketika DPPH ditambahkan ke dalam
senyawa yang dapat memberikan atom
hidrogen, DPPH akan berubah warna menjadi
kuning
muda,
yakni
warna
bentuk
tereduksinya, difenilpikrilhidrazin (Gambar
2b) (Molyneux 2004).
(a)
(b)
Gambar 2 Struktur DPPH: radikal bebas (a)
bentuk tereduksi (b).
Salah satu senyawa yang dapat
memberikan atom hidrogen kepada molekul
DPPH adalah flavonoid. Radikal bebas DPPH
Gambar 3 Struktur flavonoid.
Tabel 1
Uji kualitatif golongan flavonoid
(Harborne 1987)
Pereaksi
Golongan
Warna
flavonoid
hasil reaksi
CH3COONa Antosianidin
Merah
FeCl3
Antosianidin
Biru
Na2CO3
Antosianidin Ungu, biru,
hijau
CH3COOPb
Kalkon
Jingga
Auron
Merah
Flavon
Jingga–
krem
NaOH 0,1 N
Kalkon,
Merah–
auron
ungu
Flavonol,
Kuning
flavon
H2SO4 pekat
Flavon
Kuning
Flavonol
Kuning,
Jingga–
krem
Kalkon
Merah
2
Flavonoid mengandung sistem aromatik
terkonjugasi dan karena itu, menunjukkan pita
serapan kuat pada daerah spektrum UVtampak (Harborne 1987). Spektrum khas
flavonoid terdiri atas dua panjang gelombang
maksimum: 240–285 nm (pita 2) dan 300–550
nm (pita 1). Rentang serapan spektrum UVtampak senyawa flavonoid ditunjukkan pada
Tabel 2 (Markham 1988).
didinginkan dalam eksikator dan ditimbang
bobot keringnya. Serbuk dandang gendis
ditimbang teliti sebanyak 3 g dalam cawan
tersebut kemudian dipanaskan dalam oven
pada suhu 105 °C selama 3 jam. Setelah itu,
didinginkan dan ditimbang. Pemanasan dan
penimbangan dilakukan sampai bobotnya
konstan.
Isolasi Flavonoid (Markham 1988)
Tabel 2
Rentang serapan spektrum UVtampak
senyawa
flavonoid
(Markham 1988)
Pita 2 (nm) Pita 1 (nm) Jenis flavonoid
250–280
310–350
Flavon
250–280
330–360
Flavonol
(3-OH
tersubstitusi)
250–280
350–385
Isoflavon
245–275
310–330
Isoflavon
(bahu)
(5-deoksi-6,7320
dioksigenasi)
(puncak)
275–295
300–330
Flavanon dan
dihidroflavonol
230–270
340–390
Kalkon
230–270
380–430
Auron
270–280
465–560
Antosianidin
dan antosianin
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan adalah
serbuk daun dandang gendis dari daerah
Batuhulung Bogor, etanol 70%, NH4OH,
H2SO4 2 M, FeCl3 1%, metanol, etanol 98%,
anhidrida asetat, amil alkohol, serbuk Mg,
HCl pekat, HCl 2 N, CH3COONa, Na2CO3,
CH3COOPb, H2SO4 pekat, Butil Hidroksi
Toluena (BHT), n-heksana, etil asetat, DPPH,
n-butanol, asam asetat, NaOCH3, AlCl3,
H3BO3, pereaksi Mayer, Wagner, DragendoRf
, dan Lieberman-Buchard,.
Alat-alat yang digunakan adalah peralatan
kaca yang biasa digunakan di laboratorium,
kromatografi lapis tipis preparatif (KLT
preparatif), pelat KLT, penguap putar, dan
spektrofotometer UV-1700 PharmaSpec.
Kadar Air
Diagram alir penelitian ditunjukkan pada
Lampiran 1. Cawan porselen dikeringkan
pada suhu 105 °C selama 3 jam, kemudian
Serbuk daun dandang gendis direndam
dengan etanol 70% selama 24 jam pada suhu
kamar. Ekstrak yang diperoleh disaring dan
ampasnya direndam kembali dengan etanol
70%. Filtratnya dipekatkan dengan penguap
putar.
Ekstrak etanol daun dandang gendis
dipartisi dengan n-heksana, kemudian
dihidrolisis dengan HCl 2 N pada suhu 100 °C
selama 60 menit. Ekstrak daun dandang
gendis terhidrolisis dipartisi dengan etil asetat.
Fraksi etil asetat dikumpulkan dan dipekatkan
dengan penguap putar, lalu difraksionasi
dengan KLT preparatif. Eluen yang
digunakan adalah campuran n-butanol:
air:asam asetat (BAA) (4:5:1).
Noda
pemisahan dideteksi di bawah lampu UV 254
nm. Setiap fraksi dikerok, dilarutkan dengan
etanol 70%, kemudian dipekatkan dan diuji
aktivitas antioksidan. Fraksi teraktif dianalisis
dengan spektrofotometer UV-tampak dan
diuji kemurniannya menggunakan KLT dua
dimensi dengan eluen BAA dan n-butanol:
etanol:air (BEA) (4:1:2).
Uji Aktivitas Antioksidan (Blois 1958)
Larutan ekstrak dibuat dengan konsentrasi
10, 30, 50, dan 70 mg L-1. Sebanyak 4.5 mL
larutan ekstrak dimasukkan ke dalam tabung
reaksi dan ditambahkan 1.5 mL larutan DPPH
0.1 mM dalam etanol. Campuran diinkubasi
pada suhu 37 °C selama 30 menit, lalu diukur
serapannya pada panjang gelombang 515 nm.
BHT dengan konsentrasi 2, 4, 6, dan 8 mg L-1
digunakan sebagai kontrol positif. Kemudian
nilai IC50 dihitung menggunakan rumus
persamaan regresi.
Analisis Flavonoid (Markham 1988)
Sebanyak 0.1 mg fraksi teraktif ekstrak
daun dandang gendis dilarutkan dengan 10
mL metanol. Identifikasi flavonoid dengan
spektrum UV-tampak dilakukan dengan
menambahkan
pereaksi
geser
AlCl3,
campuran AlCl3 dengan HCl, CH3COONa,
3
campuran CH3COONa dengan H3BO3, dan
NaOCH3. Data pergeseran pita serapan
sebelum dan sesudah ditambahkan pereaksi
geser menentukan jenis senyawa golongan
flavonoid.
tabung reaksi lalu ditambahkan 0.5 g serbuk
Mg, 1 mL HCl pekat, dan 1 mL amil alkohol,
dan dikocok kuat. Uji positif flavonoid
menghasilkan warna kuning atau jingga pada
lapisan amilalkohol.
Uji Fitokimia (Harborne 1987)
Uji Golongan Flavonoid (Harborne 1987)
Alkaloid
Sebanyak 0.1 g ekstrak dilarutkan dalam
10 mL CHCl3 dan 4 tetes NH4OH. Larutan
disaring dan filtratnya dimasukkan ke dalam
tabung reaksi tertutup. Ekstrak CHCl3 dalam
tabung reaksi dikocok dengan 10 tetes H2SO4
2 M dan lapisan asamnya dipisahkan ke
dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam
ini diteteskan pada lempeng tetes dan
ditambahkan pereaksi Mayer, Wagner, dan
DragendoRf
yang akan menimbulkan
endapan berturut-turut berwarna putih,
cokelat, dan merah jingga jika terdapat
alkaloid.
Sebanyak 0.5 g ekstrak dilarutkan dengan
10 mL metanol-HCl 1 N (1:1) dan dipanaskan
pada suhu 95 °C selama 1 jam. Setelah itu,
didinginkan dan disaring, lalu filtratnya
diekstraksi dengan etil asetat.
Saponin
Sebanyak 0.1 g ekstrak ditambahkan 10
mL air panas dan dididihkan selama 5 menit.
Setelah itu, disaring dan filtratnya digunakan
untuk pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
tabung reaksi tertutup kemudian dikocok
selama 10 detik dan didiamkan selama 10
menit. Adanya saponin ditunjukkan dengan
terbentuknya buih yang stabil.
Triterpenoid dan Steroid
Sebanyak 0,1 g ekstrak dilarutkan dengan
25 mL etanol panas (50 °C). Larutan disaring
dalam pinggan porselen dan diuapkan sampai
kering. Residu ditambahkan eter dan ekstrak
eter dipindahkan ke dalam lempeng tetes.
Kemudian ditambahkan 3 tetes anhidrida
asetat dan 1 tetes H2SO4 pekat (uji
Lieberman-Buchard). Warna merah atau ungu
menunjukkan
kandungan
triterpenoid,
sedangkan
warna
hijau
atau
biru
menunjukkan kandungan steroid.
Tanin
Sebanyak 0.1 g ekstrak ditambahkan 10
mL air panas, dididihkan selama 5 menit, dan
disaring. Sebagian filtrat yang diperoleh
ditambahkan larutan FeCl3 1%. Hasil positif
ditunjukkan oleh warna hijau kehitaman.
Flavonoid
Sebanyak 0.1 g ekstrak ditambahkan 10
mL air panas dan dididihkan selama 5 menit.
Setelah itu, disaring dan filtratnya digunakan
untuk pengujian. Filtrat dimasukkan ke dalam
Antosianidin
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambahkan 3 tetes CH3COONa lalu diamati,
kemudian ditambahkan 3 tetes FeCl3 dan
diamati
lagi.
Antosianidin
dengan
CH3COONa memberikan warna merah atau
ungu dan bila ditambahkan FeCl3 menjadi
biru.
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambahkan
Na2CO3
lalu
diamati.
Antosianidin memberikan warna ungu, biru,
atau hijau.
Flavon, Kalkon, Auron, dan Flavonol
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambahkan 3 tetes CH3COOPb lalu diamati
warnanya. Flavon memberikan warna jingga
hingga krem, kalkon memberikan warna
jingga tua, dan auron memberikan warna
merah.
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat
ditambah 3 tetes NaOH 0,1 N lalu diamati
warnanya. Flavon memberikan warna kuning,
flavonol memberikan warna kuning, jingga
hingga krem, dan kalkon memberikan warna
krem hingga merah tua.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Penentuan kadar air dilakukan dengan
metode gravimetri evolusi tidak langsung.
Bobot air dihitung setelah proses pengeringan
dengan suhu 105 °C pada periode waktu
tertentu sampai diperoleh bobot yang konstan.
Menurut Harjadi (1993), air yang terikat
secara fisik dapat dihilangkan dengan
pemanasan pada suhu 100–105 °C. Salah satu
kegunaan penentuan kadar air adalah untuk
mengetahui ketahanan suatu bahan dalam
penyimpanan.
4
Sampel yang digunakan dalam penelitian
ini adalah serbuk daun dandang gendis. Kadar
airnya diperoleh sebesar 9.74% (Lampiran 2).
Menurut Winarno (1997), sampel dapat
disimpan dalam jangka waktu lama jika
memiliki kadar air di bawah 10%. Nilai kadar
air yang diperoleh kurang dari 10%. Hal ini
menunjukkan bahwa sampel memiliki masa
simpan yang relatif lama.
Isolasi Senyawa Golongan Flavonoid
Tahap pertama dalam isolasi senyawa
golongan flavonoid adalah maserasi sampel
dengan pelarut etanol 70%. Etanol 70%
digunakan karena flavonoid bersifat polar,
dengan sejumlah gugus hidroksil, baik yang
terikat ataupun yang tidak terikat gula
(Markham 1988). Selain itu, berdasarkan
Macari et al. (2006), aktivitas antioksidan
tanaman obat dalam etanol 70% lebih tinggi
dibandingkan dengan beberapa pelarut
lainnya. Maserasi dilakukan berulang kali
sampai filtrat tidak berwarna hijau lagi,
sehingga dapat dianggap semua senyawa yang
berbobot molekul rendah telah terekstraksi
(Harborne 1987). Filtrat yang diperoleh
dipekatkan dengan penguap putar sehingga
diperoleh ekstrak kasar etanol. Rendemen
yang dihasilkan dari 200.04 g serbuk daun
dandang gendis yang dimaserasi adalah 31.24
% (Lampiran 3).
Ekstrak daun dandang gendis kemudian
dipartisi cair-cair menggunakan pelarut nheksana untuk menghilangkan kandungan
lemak. Tahapan selanjutnya adalah hidrolisisasam
terhadap
ekstrak
bebas-lemak.
Hidrolisis bertujuan memutus gula dari
aglikon flavonoid. Hasil hidrolisis kemudian
dipartisi dengan etil asetat untuk memisahkan
aglikon flavonoid dengan gulanya. Aglikon
flavonoid akan berada dalam fraksi etil asetat
dan gula dalam fraksi air (Markham 1988).
Pemisahan aglikon flavonoid dilakukan
dengan KLT preparatif menggunakan eluen
BAA dengan nisbah 4:1:5 (Markham 1988).
Noda pemisahan diamati di bawah lampu UV
254 nm, dan diperoleh 3 noda (Gambar 4).
Nilai Rf untuk fraksi 1, 2, dan 3 berturutturut adalah 0.25, 0.52, dan 0.85. Setiap fraksi
dikerok, kemudian dilarutkan dengan etanol
hingga jumlah setiap fraksi mencukupi untuk
analisis kualitatif, uji aktivitas antioksidan,
dan analisis senyawa golongan flavonoid.
F3
Rf 0.85
F2
Rf 0.52
F1
Rf 0.25
(a)
(b)
Gambar 4 Noda pemisahan di bawah lampu
UV 254 nm: KLT (a), KLT
preparatif dengan eluen BAA (b).
Uji Aktivitas Antioksidan
Uji aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat
dan ketiga fraksi hasil KLT preparatif
dilakukan dengan metode DPPH (Lampiran
4). Metode ini dipilih karena mudah
digunakan, cepat, dan cukup teliti (Prakash
2001). Aktivitas antioksidan metode DPPH
dinyatakan dengan nilai IC50, yakni
konsentrasi sampel yang mampu menghambat
aktivitas DPPH sebesar 50%.
Ekstrak etil asetat memiliki aktivitas
antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 178.40
mg L-1. Fraksi 2 (F2) hasil KLT preparatif
menunjukkan nilai IC50 yang paling kecil,
yakni 52.93 mg L-1. Semakin kecil nilai IC50,
semakin tinggi pula aktivitas antioksidan
(Molyneux 2004). Fraksi 1 (F1) dan fraksi 3
(F3) memiliki aktivitas antioksidan yang
kecil. Nilai IC50 cukup besar yakni 43932.07
mg L-1 dan 9226.48 mg L-1. Menurut Hanani
et al. (2005), suatu senyawa dikatakan
memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi
jika memiliki nilai IC50 kurang dari 200 mg L1
. Namun, jika dibandingkan dengan BHT
sebagai kontrol positif, aktivitas antioksidan
F2 masih lebih rendah. Nilai IC50 untuk BHT
sebesar 16.71 mg L-1 (Tabel 3).
Tabel 3 Aktivitas antioksidan
Larutan uji
IC50 (mg L-1)
BHT
16.71
Ekstrak etil asetat
178.40
F1
43932.07
F2
52.93
F3
9226.48
Golongan Flavonoid Fraksi Aktif
Analisis F2 sebagai fraksi teraktif dari
ekstrak daun dandang gendis dilakukan
5
dengan merekam spektrum UV-tampak.
Identifikasi senyawa golongan flavonoid
didasarkan
pada
perubahan
panjang
gelombang setelah ditambahkan pereaksi
geser (Lampiran 5). Spektrum UV-tampak F2
dalam pelarut metanol (Gambar 5)
menunjukkan serapan maksimum pita 1 pada
panjang gelombang 332 nm dan pita 2 pada
panjang gelombang 274 nm.
A
b
s
o
r
b
a
n
s
Panjang gelombang (nm)
NaOCH3
NaOCH3 setelah 5 menit
Gambar 6 Spektrum F2 dengan penambahan
pereaksi geser NaOCH3 dan
NaOCH3 setelah 5 menit.
Panjang gelombang (nm)
Gambar 5
A
b
s
o
r
b
a
n
s
Spektrum F2 dalam pelarut
metanol.
Berdasarkan puncak serapan pada pita 1
dan 2, F2 diduga merupakan senyawa
flavonoid golongan flavon atau flavonol.
Menurut Markham (1988), flavon dan
flavonol memiliki serapan maksimum pita 2
di 250–280 nm. Sementara untuk pita 1,
flavon memiliki serapan maksimum pada 310
–350 nm dan flavonol pada 330–360 nm. Pita
1 berasal dari cincin B dan C, dan pita 2
berasal dari konjugasi pada cincin A.
Penambahan pereaksi geser NaOCH3 pada
F2 menyebabkan pergeseran batokromik
sebesar 64 nm pada pita 1 (Gambar 6).
Markham
(1988)
melaporkan
bahwa
pergeseran serapan maksimum sebesar 45–65
nm dengan kekuatan serapan yang tidak
menurun menunjukkan adanya gugus
hidroksil di C-4'. Karena itu, dapat
disimpulkan bahwa senyawa flavonoid pada
F2 memiliki gugus hidroksil pada C-4'. Selain
itu, terbentuk pita baru pada 326.5 nm yang
menunjukkan adanya gugus hidroksil di posisi
C-7. Menurut Markham (1988), pita serapan
baru pada 320–335 nm muncul jika terdapat
gugus hidroksil pada C-7.
Tidak terdapatnya gugus hidroksil di C-3
ditunjukkan dengan tidak adanya pergeseran
batokromik pada pita 1 sejauh 50–60 nm
(Markham 1988) pada spektrum AlCl3/HCl
(Gambar 7). Tidak adanya gugus hidroksil
pada C-3 manunjukkan bahwa F2 merupakan
senyawa
flavonoid
golongan
flavon.
Pergeseran batokromik sejauh 17 nm pada
pita 1 menunjukkan adanya gugus hidroksil di
posisi C-5. Penambahan AlCl3 akan
membentuk kompleks dengan gugus hidroksil
di C-5 dan gugus karbonil sehingga terjadi
geseran batokromik. Tidak terbentuknya
kompleks antara AlCl3 dengan gugus odihidroksi pada cincin B menyebabkan tidak
teramati
geseran
hipsokromik
yang
diakibatkan penguraian kompleks tersebut
ketika ditambahkan HCl (Markham 1988).
A
b
s
o
r
b
a
n
s
Panjang gelombang (nm)
AlCl3
AlCl3/HCl
Gambar 7 Spektrum F2 setelah penambahan
pereaksi AlCl3 dan AlCl3/HCl.
6
Penambahan
pereaksi
CH3COONa
menyebabkan pergeseran batokromik sejauh
8.5 nm (Gambar 8) pada pita 2 yang
menunjukkan adanya gugus hidroksil di C-7.
Berdasarkan Markham (1988), intensitas yang
tidak menurun menunjukkan tidak adanya
gugus yang peka terhadap basa, seperti 6,7diOH; 7,8-diOH dan 3',4'-diOH. Pada
spektrum dengan penambahan H3BO3
(Gambar 8), tidak terjadi pergeseran
batokromik yang menunjukkan tidak adanya
gugus o-diOH pada cincin A dan B.
Pergeseran batokromik sejauh 12 sampai 36
nm pada pita 1 akan terjadi jika ada gugus
tersebut (Markham 1988).
(Gambar 9) lebih baik karena hanya
menunjukkan satu noda tunggal. Karena itu,
dapat ditarik simpulan bahwa F2 merupakan
senyawa flavonoid golongan flavon.
Eluen 1
BAA
Eluen 2 BEA
Gambar 9 Kromatogram 2 arah F2 dengan
eluen BAA dan BEA.
A
b
s
o
r
b
a
n
s
Uji Fitokimia dan Golongan Flavonoid
Uji fitokimia dilakukan terhadap ekstrak
etanol (Tabel 4), sedangkan uji golongan
flavonoid dilakukan terhadap ekstrak etanol,
ekstrak etil asetat, dan F2 (Tabel 5).
Panjang gelombang (nm)
Tabel 4 Uji fitokimia ekstrak etanol
CH3COONa
CH3COONa 5 menit
H3BO3
Gambar 8 Spektrum F2 setelah penambahan
pereaksi
NaOMe, NaOMe 5
menit, dan H3BO3.
KLT 2 arah dilakukan untuk menguji
tingkat kemurnian F2. Dibandingkan dengan
KLT 2 arah yang dilakukan Akbar (2010)
yang menunjukkan dua berkas noda, hasil
KLT 2 arah dengan eluen BAA dan BEA
Golongan senyawa
Hasil uji
Alkaloid
Saponin
Flavonoid
Steroid
Triterpenoid
Tanin
+++
+
+++
+
-
Keterangan:
(+) menunjukkan intensitas warna, (-) menunjukkan
tidak terdapat senyawa tersebut dalam ekstrak etanol.
Tabel 5 Uji golongan flavonoid ekstrak etanol, etil asetat dan F2
Pereaksi
Ekstrak
F2
Golongan flavonoid
Krem
Kuning
Krem
Kuning
Flavon
Flavon, flavonol
Jingga
-
Jingga
Cokelat
Kuning
kecokelatan
Kuning
Cokelat
Kuning
Cokelat
-
Jingga
Kuning
Kuning
-
Etanol
Etil asetat
CH3COOPb
NaOH 0,1 N
Krem
Kuning
H2SO4
Cokelat
CH3COONa
CH3COONa+FeCl3
Na2CO3
Keterangan : (-) Tidak terdeteksi adanya senyawa golongan flavonoid.
Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa
ekstrak etanol daun dandang gendis
mengandung
senyawa
tanin,
steroid,
flavonoid, dan saponin (Tabel 4). Uji
golongan flavonoid terhadap ekstrak etanol,
ekstrak etil asetat, dan F2 menunjukkan
senyawa flavon atau flavonol. Berdasarkan
hasil identifikasi dengan sinar UV-tampak,
dapat disimpulkan bahwa senyawa aktif
antioksidan yang terkandung dalam daun
7
dandang gendis adalah flavon dengan gugus
hidroksil yang terletak pada C-4', C-5, dan C7 (Gambar 10).
OH
HO
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Pertanian Bogor.
Bermawi N, Kristina NN. 2003. Penyimpanan
in vitro tanaman obat potensial.
Perkembangan Teknol TRO 15:51-60.
O
Blois MS. 1958. Antioxidant determinations
by the use of stable free radical. Nature
181: 1199-1200.
OH
Gambar 10
O
Struktur senyawa flavonoid
hipotesis F2.
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Ekstrak etil asetat daun dandang gendis
memiliki aktivitas antioksidan. Fraksi 2
menunjukkan aktivitas antioksidan tertinggi
dibandingkan dengan 2 fraksi lainnya dengan
nilai IC50 sebesar 52.93 mg L-1. Hasil uji
golongan flavonoid, dan spektrum UVtampak memperlihatkan bahwa fraksi 2
dihipotesiskan adalah senyawa flavonoid
golongan flavon dengan gugus hidroksil yang
terletak pada C-4', C-5, dan C-7.
Saran
Perlu diadakan analisis lebih lanjut dengan
spektrometer inframerah, resonans magnetik
inti 1H, 13C, dan spektrometer massa untuk
mengidentifikasi senyawa pasti dalam fraksi
2.
DAFTAR PUSTAKA
Akbar HR. 2010. Isolasi dan identifikasi
golongan flavonoid daun dandang
gendis
(Clinachantus
nutans)
berpotensi
sebagai
antioksidan
[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Pertanian Bogor.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Padmawinata
K,
Soediro
I,
penerjemah; Niksolihin S, editor.
Bandung: ITB. Terjemahan dari:
Phytochemical Methods.
Hanani E, Abdul M, Ryany S. 2005.
Identifikasi senyawa antioksidan dalam
Callyspongia sp dari Kepulauan
Seribu. Maj Ilmu Kefarmasian 2:127133.
Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar.
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Kristio 2007. Tanaman obat Indonesia. http://
toiusd. Multiply. com/ journal?
&page_start=160. [23 Mar 2010]
Macari PdAT, Portela CN, Polhit AM. 2006.
Antioxidant, cytotoxic, and UVBabsorbing activity of Maynetus
guyanensis Klotzch (Celastraceae) bark
extract. Acta Amazonica 36:513-518.
Markham KR. 1988. Cara Mengidentifikasi
Flavonoid.
Padmawinata
K,
penerjemah.
Bandung:
ITB.
Terjemahan dari: Techniques of
Flavonoid of Identification.
Molyneux P. 2004. The use of stable free
radical
diphenylpicryl-hydrazyl
(DPPH) for estimazing antioxidant
activity. Songklanakarin J Sci Technol
26:211-219.
Amic D, Beslo D, Trinajstic N, Davidovic.
2003. Structure-radical scavenging
activity relationship of flavonoids.
Croatia Chem Acta 76:55-61.
Pannangpetch et al. 2007. Antioxidant
activity and protective effect against
oxidative hemolysis of Clinachantus
nutans
(Burm.f)
Lindau.
Songklanakarin J Sci Technol 29:1-9.
Andriani A. 2008. Uji potensi larvasida fraksi
ekstrak daun dandang gendis terhadap
larva instar III nyamuk Aedes aegypti
[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika
Prakash A. 2001. Antioxidant activity.
Medallion Laboratories Analytical
Progress 19(2).
8
Sakdarat S, Shuyprom A, Pientong C,
Ekalaksananan T, Thongcai S. 2009.
Bioactive constituent from the leaves
of Clinachantus nutans Lindau.
Bioanorg Med Chem 17:1857-1860.
Thongcai S et al. 2008. Anti-herpes simplex
virus type 1 activity of crude ethyl
acetate extract derived from leaves of
Clinacanthus nutans Lindau. J Sci
Technol 27:318-326.
Sofyan D. 2008 Inhibisi fraksi aktif daun
dandang gendis (Clinachantus nutans)
pada
pertumbuhan
Saccharomyes
cerevisiae
sebagai
uji
potensi
antikanker [skripsi]. Bogor: Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Institut Pertanian Bogor.
Tuntiwachwuttikul P, Pootaeng-on Y, Phansa
P, Taylor WS. 2004. Cerebrosides and
a
monoacylmonogalactosylglycerol
from Clinachanthus nutans. Chem
Pharm Bull 52: 27-32.
Suharty NS. 2004. Isolasi terpenoid dari daun
Clinachantus nutans. http: //digilib.
itb.ac.id/go.php?id= jbptitbpp-gdl-s22004-nengsrisuh-1734 & width=300.
[23 Mar 2010]
Sunarni T. 2005. Aktivitas antioksidan
penangkap radikal bebas beberapa
kecambah dari biji tanaman familia
Papilionaceae. J Farm Indones 2:5361.
Wanikiat et al. 2008. The anti-inflammatory
effects and the inhibition of neutrophil
responsiveness by Barleria lupulina
and Clinachantus nutans extract. J
Ethnopharmacology 116: 234-244.
Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi.
Jakarta: Gramedia.
Yoosook C, Panpisutchai Y, Chaichana S,
Santisuk T, Reutrakul V. 1999.
Evaluation of anti-HSV-2 activities of
Barleria lupulina and Clinacanthus
nutans. J Ethnopharmacol 67:179-187.
Teshima I et al. 1997. Sulfur-containing
glucosides from Clinacanthus nutans.
Phytochemistry 48:831-835.
9
LAMPIRAN
11
Lampiran 1 Diagram alir penelitian
Serbuk daun dandang gendis
Penetapan kadar air
Ekstraksi dengan etanol 70%
Residu
Ekstrak etanol
Partisi dengan n-heksana
Fraksi n-heksana
Fraksi etanol
Hidrolisis HCl
Fraksi etanol terhidrolisis
Partisi dengan
etil asetat
Uji golongan flavonoid
dan antioksidan
Fraksi etil asetat
Fraksi etanol
Fraksionasi (KLTp)
Fraksi 1
Fraksi 2
Fraksi 3
Uji antioksidan
Fraksi teraktif
Analisis flavonoid dengan
Spektrofotometer UV-tampak
Senyawa golongan flavonoid
11
Lampiran 2 Kadar air serbuk daun dandang gendis
Bobot (g)
Ulangan
Pinggan
kosong
Contoh
Contoh kering
+ pinggan
Contoh
kering
Kadar
air
(%)
1
2
3
21.0364
18.5684
18.7146
3.0000
3.0000
3.0000
23.7457
21.2764
21.4204
2.7093
2.7080
2.7058
9.69
9.73
9.81
Kadar
air
rerata
(%)
9.74
Contoh perhitungan:
= 9.69 %
Lampiran 3 Rendemen hasil ekstraksi
Bobot serbuk daun dandang gendis (W contoh) = 200.04 g
Bobot ekstrak (W ekstrak)
= 56.40 g
Kadar air
= 9.74 %
Contoh perhitungan :
= 31.24%
13
12
Lampiran 4 Hasil uji aktivitas antioksidan
a) Ekstrak etil asetat
Konsentrasi (mg L-1)
10
30
50
70
ln Konsentrasi
2.3026
3.4012
3.9120
4.2485
Inhibisi (%)
9.69
23.00
29.96
38.94
y = 14.3209x – 24.2399
50 = 14.3209x – 24.2399
x = 5.1840
IC50 = antiln (5.1840)
IC50 = 178.40 mg L-1
Kurva uji aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat
b) Fraksi 1
Konsentrasi (mg L-1)
10
30
50
70
ln Konsentrasi
2.3026
3.4012
3.9120
4.2485
Inhibisi (%)
1.15
6.38
10.60
12.45
y = 5.8628x – 12.6759
50 = 5.8628x – 12.6759
62.6759 = 5.8628x
x = 10.6904
IC50 = antiln (10.6904)
IC50 = 43932.07 mg L-1
13
Lanjutan Lampiran 4 Hasil uji aktivitas antioksidan
Kurva uji aktivitas antioksidan fraksi 1
c) Fraksi 2
Konsentrasi (mg L-1)
10
30
50
70
ln Konsentrasi
2.3026
3.4012
3.9120
4.2485
Inhibisi (%)
24.87
44.62
47.80
53.58
y = 14.4806x – 7.4732
50 = 14.4806x– 7.4732
x = 3.9690
IC50 = antiln (3.9690)
IC50 = 52.93 mg L-1
Kurva uji antioksidan fraksi 2
13
14
Lanjutan Lampiran 4 Hasil uji aktivitas antioksidan
d) Fraksi 3
Konsentrasi (mg L-1)
10
30
50
70
ln Konsentrasi
2.3026
3.4012
3.9120
4.2485
Inhibisi (%)
1.23
10.35
11.05
16.12
y = 7.1176x – 14.9825
50 = 7.1176x – 14.9825
x = 9.1298
IC50 = antiln (9.1298)
IC50 = 9226.48 ppm
Kurva uji aktivitas antioksidan fraksi 3
e) BHT
Konsentrasi (mg L-1)
2
4
6
8
ln Konsentrasi
0.6931
1.3863
1.7918
2.0794
Inhibisi (%)
24.15
30.41
39.21
40.24
y = 12.4208x + 15.0247
50 = 12.4208x + 15.0247
x = 2.8158
IC50 = antiln (2.8158)
IC50 = 16.71 mg L-1
13
15
Lanjutan Lampiran 4 Hasil uji aktivitas antioksidan
Kurva uji aktivitas antioksidan BHT
13
16
Lampiran 5 Pergeseran panjang gelombang pada fraksi 2 setelah penambahan
pereaksi geser
Pereaksi geser
Fraksi 2
NaOCH3
NaOCH3
(5 menit)
AlCl3
AlCl3+HCl
CH3COONa
CH3COONa
(5 menit)
CH3COONa
+H3BO3
Pita 1
Pita 2
Pita 1
Pita 2
332
396
397.5
274
281.5
280.5
+ 64
+ 65.5
+7.5
+6.5
Dugaan
substitusi
gugus
hidroksil
C-4'
-
349
349
384.5
383.5
280
281
282.5
282.5
+17
+17
+52.5
+51.5
+6
+7
+8.5
+8.5
C-5
C-7
-
321
278
-11
+278
-
Panjang gelombang
serapan (nm)
Pergeseran serapan
(nm)
13
17