Penentuan aktivitas enzim xilanase per unit dapat ditentukan dengan rumus :
Aktivitas Enzim UmL = kadar xilosa µg x faktor pengenceran BM Xilosa x waktu inkubasi
Aktivitas Enzim Relatif = Aktifitas enzim yang diperoleh Uml Aktivitas enzim optimum Uml
Keterangan = BM xilosa : 150,13 gmol
Wakti inkubasi : 30 menit
Kadar xilosa : x µgmol
10. Karakterisasi Enzim Xilanase
a. Pengaruh Suhu Terhadap Aktivitas Enzim Xilanase
Penentuan suhu inkubasi optimum enzim xilanase dilakukan dengan menginkubasi 0,5 mL ekstrak kasar enzim dan 0,5mL
0,5 xylan beechwood dalam buffer sitrat 0,05 M pada suhu 30
o
C, 40
o
C, 50
o
C , 60
o
C , 70
o
C , 80
o
C, dan 90
o
C selama 30 menit. Setelah 30 menit, ditambakan 1 mL larutan DNS dan dipanaskan
dalam air mendidih selama 15 menit. Kemudian didinginkan dalam wadah berisi air dingin selama 20 menit. Dilakukan
pengukuran absorbansi menggunakan spektrofotometer pada λ
575 nm. X 100
b. Pengaruh pH Terhadap Aktivitas Enzim Xilanase
Penentuan suhu inkubasi optimum enzim xilanase dilakukan dengan menginkubasi 0,5 mL ekstrak kasar enzim dan 0,5mL
0,5 xylan beechwood dalam buffer 0,05 M pada suhu optimum dan suhu 40
o
C selama 30 menit. Untuk pengujian pH optimum pelarutan 0,5 xylan beechwood dilakukan dalam buffer yang
memiliki pH yang berbeda. Buffer yang digunakan, yaitu buffer sitrat pH 4, 5, dan 6, bufer fosfat pH 7, dan bufer Tris-HCl pH 8
dan 9. Setelah 30 menit, ditambakan 1mL larutan DNS dan dipanaskan dalam air mendidih selama 15 menit. Kemudian
didinginkan dalam wadah berisi air dingin selama 20 menit. Dilakukan pengukuran absorbansi menggunakan
spektrofotometer pada λ 575 nm.
c . Pengaruh Lama Waktu Penyimpanan Terhadap
Kestabilan Enzim
Ekstrak kasar enzim yang telah dihasilkan selanjutnya disimpan pada suhu optimum dan 40
o
C. Pengujian terhadap lama penyimpanan dilakukan pada 5 variasi waktu yang terdiri dari 0,
1, 2, 3, 4, dan 5 jam. Setelah dilakukan penyimpanan dilakukan pengujian aktivitas enzim tabel. 4 dengan menggunakan suhu
optimum dan suhu 40
o
C sebagai suhu inkubasi dan pH buffer optimum dalam melarutkan 0,5 xylan beechwood.
D. Diagram Alir
Bacilus sp
Peremajaan Bacillus sp menggunakan media Mandels dan Reese dan agar Inkubasi selama 12 jam
Uji Kualitatif Xilanolitik Bacillus sp Inkubasi selama 12 jam
Ada Tidak
Penentuan Waktu Inkubasi Optimum Uji Aktivitas Enzim dengan Metode DNS
Karakterisasi Enzim Xilanase
