6. Analisis Glukosamin dengan Spektrometer UV-Vis
Analisis glukosamin menggunakan spektromoter ultraviolet-visible UV-Vis dilakukan setelah didapat filtrat hasil fermentasi.
6.1 Pembuatan Standar Glukosamin
Sebanyak 0,05 gram glukosamin Glc standar WAKO dilarutkan dalam 50 ml akuades dalam labu ukur diperoleh konsentrasi akhir 1000 mgL. Kemudian
larutan glukosamin standar 1000 mgL ini diencerkan hingga diperoleh konsentasi akhir msing-masing 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, dan 150 mgL.
Dari berbagai konsentrasi larutan standar ini, masing-masing diambil 4 ml lalu ditambahkan 0,5 ml larutan ninhidrin 0,8 dan 0,5 ml larutan buffer fosfat pH 6.
Larutan ini kemudian dipanaskan pada 100
o
C dalam penangas selama 15 menit. Setelah terbentuk warna ungu, larutan didiamkan dalam suhu kamar dan diukur
dengan spektrofotomer UV-Vis pada panjang gelombang 570 nm Wu et al., 2005.
6.2 Pembuatan Sampel Glukosamin
Filtrat hasil fermentasi masing-masing diambil dan diencerkan sebanyak 30 kali dengan akuades. Larutan tersebut diambil 4 ml lalu ditambahkan 0,5 ml larutan
ninhidrin 0,8 dan 0,5 ml larutan buffer fosfat pH 6. Larutan ini kemudian dipanaskan pada 100
o
C dalam penangas selama 15 menit. Reaksi antar glukosamin dengan ninhidrin menghasilkan warna ungu, larutan didiamkan dalam
suhu kamar dan diukur dengan spektrofotomer UV-Vis pada panjang gelombang 570 nm.
6.3 Pemilihan Panjang Gelombang Maksimum
Pemilihan panjang gelombang λ maksimum dilakukan menggunakan larutan glukosamin standar dan hasil fermentasi yang telah direaksikan dengan larutan
ninhidrin 0,8 dan buffer fosfat pH 6. Kemudian dilakukan scanning menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada rentang panjang gelombang λ
450-600 nm.
6.4 Kalibrasi Glukosamin Sampel
Absorbansi glukosamin dalam sampel dikalibrasikan dengan kurva glukosamin Glc standar menggunakan persamaan regresi linear. Hasil yang diperoleh
dikalikan dengan faktor pengenceran sehingga diperoleh konsentrasi glukosamin dalam larutan hasil fermentasi tiap selang waktu 5 hari.
Kategori