Efek Genistein Topikal Tetes Mata Terhadap Ekspresi IL-1β Pada Kornea Tikus (Rattus novergicus) Model Inflamasi
KARYA TULIS AKHIR
EFEK GENISTEIN TOPIKAL TETES MATA TERHADAP EKSPRESI
IL-1β PADA KORNEA TIKUS PUTIH JANTAN (Rattus novergicus strain
wistar) MODEL INFLAMASI
Oleh :
JASINDA ANDINI PUTRI SUCIPTO
NIM : 201010330311090
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
FAKULTAS KEDOKTERAN
2014
i
HASIL PENELITIAN
EFEK GENISTEIN TOPIKAL TETES MATA TERHADAP EKSPRESI
IL-1β PADA KORNEA TIKUS PUTIH JANTAN (Rattus novergicus strain
wistar) MODEL INFLAMASI
KARYA TULIS AKHIR
Diajukan kepada
Universitas Muhammadiyah Malang
Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan
Dalam Menyelesaikan Program Sarjana
Fakultas Kedokteran
Oleh :
JASINDA ANDINI PUTRI SUCIPTO
NIM : 201010330311090
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
FAKULTAS KEDOKTERAN
2014
ii
iii
iv
KATA PENGANTAR
Puji syukur saya ucapkan kepada Allah SWT, karena atas berkat dan
rahmat-Nya, penulis telah berhasil menyelesaikan penelitian yang berjudul “Efek
Genistein Topikal Tetes Mata Terhadap Ekspresi Il-1β Pada Kornea Tikus Putih
Jantan (Rattus Novergicus Strain Wistar) Model Inflamasi”. Penulisan penelitian
ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar
Sarjana Kedokteran Jurusan Pendidikan Dokter pada Fakultas Kedokteran
Universitas Muhammadiyah Malang.
Pada penulisan karya akhir ini, penulis banyak mendapat bimbingan dan
bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu dalam kesempatan ini penulis
mengucapkan terima kasih yang tak terhingga kepada:
1. dr. Irma Suswati, M.Kes, selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas
Muhammadiyah Malang.
2. dr. Moch. Ma’roef, SpOG, selaku Pembantu Dekan I Fakultas Kedokteran
Universitas Muhammadiyah Malang.
3. dr. Rahayu, SpS, selaku Pembantu Dekan II Fakultas Kedokteran
Universitas Muhammadiyah Malang.
4. dr. Iwan Sys Indrawanto, SpKJ, selaku Pembantu Dekan III Fakultas
Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang.
5. dr. Yuliono Trika Nur Hasan, SpM, selaku dosen pembimbing I yang telah
meluangkan waktu serta banyak memberikan masukan dan dukungan demi
kesempurnaan penelitian ini sehingga tugas akhir ini dapat terselesaikan.
v
6. dr. Nur Kaputrin, selaku dosen pembimbing II yang telah meluangkan
waktu serta banyak memberikan masukan dan dukungan demi
kesempurnaan penelitian ini sehingga tugas akhir ini dapat terselesaikan.
7. dr. Kusuma Andriana, SpOG, selaku dosen penguji tugas akhir yang telah
memberi tambahan ilmu dan kritik demi kesempurnaan penelitian ini.
8. Papa tercinta, Hadi Sucipto, SE dan mama Siti Mariyam tersayang serta
adikku Javier Daniswara yang tidak pernah bosan mendoakan dan
memberikan semangat selama proses pengerjaan skripsi.
9. Pakde dan Bude tersayang yang selalu memberikan dukungan dan doa.
10. Dhimas Ikhlasul Amal yang telah sabar menemani dalam segala situasi
dan mengorbankan waktu serta tenaganya.
11. Sahabat-sahabatku tersayang Novi, Riko, Amel, Lisa, Ayu, Maulida,
Melisa, Sofi atas semua bantuannya.
12. Teman-temanku Inas, Iwana, Mas Baim, Lianda yang selalu baik hati
membantu tanpa pamrih dan teman-teman angkatan 2010.
Penulis menyadari bahwa penulisan ini masih jauh dari sempurna, oleh
karena itu menulis membuka diri untuk segala saran dan kritik yang membangun,
serta penulis mengharapkan agar karya tulis ini dapat berguna serta bermanfaat.
Malang, Maret 2014
Penulis
vi
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL……………………………………………….……… i
DAFTAR ISI……………………………………………………………….. ii
DAFTAR GAMBAR………………………………………………………. v
DAFTAR TABEL…………………………………………………………. vi
DAFTAR SINGKATAN…………………………………………………... vii
ABSTRAK………………………………………………………………… ix
BAB I PENDAHULUAN
1.1
Latar Belakang……………………………………………………... 1
1.2
Rumusan Masalah………………………………………………….. 2
1.3
Tujuan Penelitian…………………………………………………... 2
1.4
1.3.1
Tujuan Umum……………………………………………… 2
1.3.2
Tujuan Khusus……………………………………………... 2
Manfaat Penelitian…………………………………………………. 3
1.4.1
Manfaat Akademik………………………………………….3
1.4.2
Manfaat Klinis……………………………………………... 3
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA
2.1
2.2
Kornea……………………………………………………………… 4
2.1.1
Definisi……………..………………………………………. 4
2.1.2
Anatomi dan Fisiologi Kornea……………………………... 4
2.1.3
Kornea Angiogenic Privillage dan Imune privillage………. 6
Inflamasi…………………………………………………………… 8
2.2.1
2.3
Definisi…………………………………………………….. 8
Inflamasi Kornea…………………………………………………… 9
2.3.1
Definisi…………………………………………………...… 9
vii
2.4
2.5
2.3.2
Penyembuhan Luka Pada Kornea……………….…………. 10
2.3.3
Respon Air Mata dan Penyembuhan Epitel……………….. 13
2.3.4
Penyembuhan Epitel……………………………………….. 13
2.3.5
Proliferasi dan Migrasi Keratosit…………………………... 14
2.3.6
Infiltrasi Sel Inflamasi dan Fungsi………………………..... 14
2.3.7
Peran IL-1β dalam inflamasi………………………………..15
2.3.8
Bahan Alkali Menginduksi Kerusakan Kornea……………. 15
Isoflavon………………………………………………………….... 16
2.4.1
Definisi…………………………………………………….. 16
2.4.2
Biosintesis Senyawa Isoflavon…………………………….. 17
2.4.3
Potensi Senyawa Isoflavon………………………………… 18
Genistein…………………………………………………………… 19
2.5.1
Definisi Genistein…………………………………………. 19
2.5.2
Efek Molekular…………………………………………….. 19
2.5.3
Bioavaibilitas Genistein……………………………………. 20
2.5.4
Bioavabilitas Topikal Isoflavon pada Mata………………... 21
2.5.5
Peran Genistein terhadap Ekspresi IL-1β………………….. 23
BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS
3.1
Kerangka Konsep…………………………………………………... 25
3.2
Hipotesis…………………………………………………………… 26
BAB 4 METODOLOGI PENELITIAN…………………………………… 27
4.1
Rancangan Penelitian………………………………………………. 27
4.2
Tempat dan Waktu Penelitian……………………………………… 27
4.3
Populasi dan Sampel..................................................................
viii
27
4.4
4.3.1
Populasi.........................................................................
27
4.3.2
Sampel..........................................................................
27
4.3.3
Besar Sampel Penelitian..................................................
28
4.3.4
Tehnik Pengambilan Sampel…….……………………..….. 29
4.3.5
Karakteristik Sampel Penelitian.......................................
29
4.3.6
Variabel Penelitian.........................................................
30
4.3.7
Definisi Operasional Variabel Penelitian...........................
30
Alat dan Bahan Penelitian………………………………………….. 31
4.4.1
Alat…………………………………………………………. 31
4.4.2
Bahan………………...…………………………………….. 31
4.5
Kerangka Operasional Penelitian……...………………………….. 32
4.6
Prosedur Penelitian………………………………………………… 33
4.6.1
Pembuatan Solutio Genistein Tetes Mata Topikal………... 33
4.6.2
Perlakuan Sampel………………………………………….. 33
4.6.3
Adaptasi……………………………………………………. 34
4.6.4
Pengambilan Sampel Kornea Untuk Pengamatan Ekspresi
IL-1………………………………………………………… 34
4.6.5
Pemeriksaan IL-1 dengan Metode Imunohistokimia……… 35
4.6.6
Pengamatan Ekspresi IL-1 dengan Metode
Immunohistokimia pada Kornea…………………………… 36
4.6.7
4.7
Penghitungan Ekspresi IL-1……………………………….. 37
Analisis Statistik………………………………………………….... 38
BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA………………….. 39
5.1
Hasil Penelitian…………………………………………………….. 39
ix
5.2
Analisis Data……………………………………………………….. 42
5.2.1
Analisis data ekspresi IL-1β dengan menggunakan Uji
One Way Anova……………………………………………. 42
5.2.2
Uji Korelasi dan Regresi…………………………………… 44
BAB 6 PEMBAHASAN…………………………………………………… 47
BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN……………………………………. 48
7.1
Kesimpulan………………………………………………………… 48
7.2
Saran……………………………………………………………….. 48
DAFTAR PUSTAKA……………………………………………………… 49
Lampiran…………………………………………………………………… 53
x
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1
Lapisan Kornea…………………………………………….. 5
Gambar 2.2
Anatomi kornea……………………………………………. 8
Gambar 2.3
Struktur kimia isoflavon…………………………………… 20
Gambar 2.4
Struktur kimia genistein dan daidzein………………………21
Gambar 5.1
Gambaran ekspresi IL-1β setelah 24 jam induksi NaOH
1 M menggunakan mikroskop cahaya pembesaran
1000x…………………………………………………….… 40
Gambar 5.2
Grafik perubahan ekspresi IL-1β………………………...… 42
Gambar 5.3
Grafik hubungan dosis genistein dan perubahan ekspresi
IL-1β……………………………………………………….. 46
xi
DAFTAR TABEL
Tabel 5.1
Data Perubahan Eskpresi IL-1β…………………………… 40
Tabel 5.2
Hasil Uji Anova…………………………………………… 43
Tabel 5.3
Hasil Uji HSD Tukey 5%...............................................
Tabel 5.4
Hasil Uji Korelasi…………………………………………. 44
xii
43
DAFTAR SINGKATAN
AgNO3
: Silver Nitrate
APCs
: Antigen-Presenting Cells
bFGF
: Basic Fibroblast Growth Factor
BMP-2
: Bone Morphogenetic Protein-2
BMP-4
: Bone Morphogenetic Protein-4
BOB
: Blood-Ocular Barrier
BRB
: Blood-Retinal Barrier
DNA
: Deoxyribose Nucleic Acid
EGF
: Epidermal Growth Factor
G-CSF
: Granulocyte Colony Stimulating Factor
GM-CSF
: Granulosite Macrophage Colony Stimulating Factor
HGF
: Hepatocyte Growth Factor
IFN-g
: Interferon gamma
IGF
: Insulin like Growth Factor
IgG
: Immunoglobulin G
IgM
: Immunoglobulin M
IL-1
: Interleukin-1
IL-1α
: Interleukin-1 alpha
IL-1β
: Interleukin-1 beta
IL-4
: Interleukin-4
IL-6
: Interleukin-6
IL-10
: Interleukin-10
xiii
IL-11
: Interleukin-11
IL-13
: Interleukin-13
INF
: Interferon gamma
KGF
: Keratinosit Growth Factor
LC
: Langerhans Cell
MCP-1
: Monocyte Chemotactic Protein
MHC
: Major Hystoeornpatibility Complex
mRNA
: Ribonucleic Acid messenger
NaOH
: Natrium Hidroksida
NOS
: Nitric Oxyde Syntase
PDGF
: Platelet-Derived Growth Factor
PDGF-2
: Platelet-Derived Growth Factor-2
PKA
: Protein Kinase A
PKC
: Protein Kinase C
PTK
: Protein Tyrosine Kinase
RANTES
: Regulated upon activation normal T cell expressed and
presumably secreted
ROS
: Reactive Oxygen Species
TNF-alpha
: Tumor Necrosis Factor alpha
TXA2
: Tromboksan A2
xiv
ABSTRAK
Sucipto, Jasinda Andini Putri. 2014. Efek Genistein Topikal Tetes Mata Terhadap
Ekspresi IL-1β Pada Kornea Tikus (Rattus novergicus) Model
Inflamasi. Tugas Akhir, Fakultas Kedokteran, Universitas
Muhammadiyah Malang. Pembimbing : (I) Yuliono Trika Nur
Hasan (II) Nur Kaputrin.
Latar Belakang : Inflamasi kornea adalah penyakit mata yang paling sering
menyebabkan kebutaan. Genistein sebagai anti-inflamasi dapat menghambat IL1β dan apoptosis pada awal infeksi. Serta dapat menghambat growth factor
neovaskularisasi dan enzim metalloproteinase.
Tujuan : Mengetahui pengaruh pemberian genistein terhadap ekspresi IL-1β
kornea tikus model inflamasi.
Metode : Penelitian ini menggunakan The Post Test Only Control Group Design.
Dengan sampel 30 tikus yang dipilih secara acak dan terdiri dari 6 tikus sebagai
kelompok kontrol negatif, 6 tikus sebagai kelompok yang diinduksi NaOH 1 M,
dan 3 kelompok dengan 6 tikus ditetesi genistein tetes mata topikal dengan dosis
0.25 mg/ml, 0.5 mg/ml, 1 mg/ml empat kali sehari.
Hasil Penelitian : Uji ANOVA menyimpulkan bahwa terdapat perbedaan bermakna
ekspresi IL- β pada er agai kelo pok perlakua Sig .
< p . 5 . Uji korelasi
pearson bernilai 0.000 < p (0.05) arah korelasi negatif dan kekuatan korelasi sebesar
0.873 berarti peningkatan dosis genistein cenderung menurunkan ekspresi IL- β se ara
signifikan. Pada uji regresi diperoleh persamaan Y = 16,400 – 15,771 X dengan hasil
rerata ekspresi kontrol negatif sebesar 0, maka didapatkan dosis efektif sebesar 1,04
mg/ml. Dalam penelitian ini, genistein topikal tetes mata pada dosis 1 mg/ml
menurunkan ekspresi IL- β (p< 0.05) secara signifikan.
Kesimpulan : Pemberian genistein topikal tetes mata dengan dosis 0,25 mg/ml,
0,50 mg/ml dan 1 mg/ml pada kornea tikus putih jantan (Rattus novergicus strain
wistar) model inflamasi dapat menurunkan ekspresi IL-1β. Dosis efektif untuk
penurunan ekspresi IL-1β pada penelitian ini adalah 1,04 mg/ml.
Kata Kunci: Genistein, ekspresi IL-1β, inflamasi kornea.
xv
ABSTRACT
Sucipto, Jasinda Andini Putri. 2014. The Effect of Topical Eye Drops To
Expression of IL-1β At Corneal Rats (Rattus novergicus) Model Of
inflammatory. Final Assignment, Faculty of Medicine, University of
Muhammadiyah Malang. Supervisors : (I) Yuliono Trika Nur Hasan
(II) Nur Kaputrin.
Background : Corneal inflammation is the most common eye disease that causes
blindness. Genistein as an anti-inflammatory to inhibit IL-1β and apoptosis in the
early infection. And also inhibiting neovascularization growth factor and
metalloproteinase enzymes.
Objective : To determine the effect of genistein to the expression of IL-1β
corneal rats model of inflammatory .
Methods : This was The Post Test Only Control Group Design study. Samples were 30
rats and randomly choosen, include 6 rats as negative control group, 6 rats were treated
with NaOH 1 M as positive control group, and 3 groups with 6 rats administered with
0.25 mg/ml, 0.5 mg/ml, 1 mg/ml genistein topical eye drops doses for 24 hours.
Results : From the results of ANOVA test it was concluded that there were
significant between-group differences in expression of IL-1β levels (Sig 0.010
EFEK GENISTEIN TOPIKAL TETES MATA TERHADAP EKSPRESI
IL-1β PADA KORNEA TIKUS PUTIH JANTAN (Rattus novergicus strain
wistar) MODEL INFLAMASI
Oleh :
JASINDA ANDINI PUTRI SUCIPTO
NIM : 201010330311090
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
FAKULTAS KEDOKTERAN
2014
i
HASIL PENELITIAN
EFEK GENISTEIN TOPIKAL TETES MATA TERHADAP EKSPRESI
IL-1β PADA KORNEA TIKUS PUTIH JANTAN (Rattus novergicus strain
wistar) MODEL INFLAMASI
KARYA TULIS AKHIR
Diajukan kepada
Universitas Muhammadiyah Malang
Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan
Dalam Menyelesaikan Program Sarjana
Fakultas Kedokteran
Oleh :
JASINDA ANDINI PUTRI SUCIPTO
NIM : 201010330311090
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
FAKULTAS KEDOKTERAN
2014
ii
iii
iv
KATA PENGANTAR
Puji syukur saya ucapkan kepada Allah SWT, karena atas berkat dan
rahmat-Nya, penulis telah berhasil menyelesaikan penelitian yang berjudul “Efek
Genistein Topikal Tetes Mata Terhadap Ekspresi Il-1β Pada Kornea Tikus Putih
Jantan (Rattus Novergicus Strain Wistar) Model Inflamasi”. Penulisan penelitian
ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar
Sarjana Kedokteran Jurusan Pendidikan Dokter pada Fakultas Kedokteran
Universitas Muhammadiyah Malang.
Pada penulisan karya akhir ini, penulis banyak mendapat bimbingan dan
bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu dalam kesempatan ini penulis
mengucapkan terima kasih yang tak terhingga kepada:
1. dr. Irma Suswati, M.Kes, selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas
Muhammadiyah Malang.
2. dr. Moch. Ma’roef, SpOG, selaku Pembantu Dekan I Fakultas Kedokteran
Universitas Muhammadiyah Malang.
3. dr. Rahayu, SpS, selaku Pembantu Dekan II Fakultas Kedokteran
Universitas Muhammadiyah Malang.
4. dr. Iwan Sys Indrawanto, SpKJ, selaku Pembantu Dekan III Fakultas
Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang.
5. dr. Yuliono Trika Nur Hasan, SpM, selaku dosen pembimbing I yang telah
meluangkan waktu serta banyak memberikan masukan dan dukungan demi
kesempurnaan penelitian ini sehingga tugas akhir ini dapat terselesaikan.
v
6. dr. Nur Kaputrin, selaku dosen pembimbing II yang telah meluangkan
waktu serta banyak memberikan masukan dan dukungan demi
kesempurnaan penelitian ini sehingga tugas akhir ini dapat terselesaikan.
7. dr. Kusuma Andriana, SpOG, selaku dosen penguji tugas akhir yang telah
memberi tambahan ilmu dan kritik demi kesempurnaan penelitian ini.
8. Papa tercinta, Hadi Sucipto, SE dan mama Siti Mariyam tersayang serta
adikku Javier Daniswara yang tidak pernah bosan mendoakan dan
memberikan semangat selama proses pengerjaan skripsi.
9. Pakde dan Bude tersayang yang selalu memberikan dukungan dan doa.
10. Dhimas Ikhlasul Amal yang telah sabar menemani dalam segala situasi
dan mengorbankan waktu serta tenaganya.
11. Sahabat-sahabatku tersayang Novi, Riko, Amel, Lisa, Ayu, Maulida,
Melisa, Sofi atas semua bantuannya.
12. Teman-temanku Inas, Iwana, Mas Baim, Lianda yang selalu baik hati
membantu tanpa pamrih dan teman-teman angkatan 2010.
Penulis menyadari bahwa penulisan ini masih jauh dari sempurna, oleh
karena itu menulis membuka diri untuk segala saran dan kritik yang membangun,
serta penulis mengharapkan agar karya tulis ini dapat berguna serta bermanfaat.
Malang, Maret 2014
Penulis
vi
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL……………………………………………….……… i
DAFTAR ISI……………………………………………………………….. ii
DAFTAR GAMBAR………………………………………………………. v
DAFTAR TABEL…………………………………………………………. vi
DAFTAR SINGKATAN…………………………………………………... vii
ABSTRAK………………………………………………………………… ix
BAB I PENDAHULUAN
1.1
Latar Belakang……………………………………………………... 1
1.2
Rumusan Masalah………………………………………………….. 2
1.3
Tujuan Penelitian…………………………………………………... 2
1.4
1.3.1
Tujuan Umum……………………………………………… 2
1.3.2
Tujuan Khusus……………………………………………... 2
Manfaat Penelitian…………………………………………………. 3
1.4.1
Manfaat Akademik………………………………………….3
1.4.2
Manfaat Klinis……………………………………………... 3
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA
2.1
2.2
Kornea……………………………………………………………… 4
2.1.1
Definisi……………..………………………………………. 4
2.1.2
Anatomi dan Fisiologi Kornea……………………………... 4
2.1.3
Kornea Angiogenic Privillage dan Imune privillage………. 6
Inflamasi…………………………………………………………… 8
2.2.1
2.3
Definisi…………………………………………………….. 8
Inflamasi Kornea…………………………………………………… 9
2.3.1
Definisi…………………………………………………...… 9
vii
2.4
2.5
2.3.2
Penyembuhan Luka Pada Kornea……………….…………. 10
2.3.3
Respon Air Mata dan Penyembuhan Epitel……………….. 13
2.3.4
Penyembuhan Epitel……………………………………….. 13
2.3.5
Proliferasi dan Migrasi Keratosit…………………………... 14
2.3.6
Infiltrasi Sel Inflamasi dan Fungsi………………………..... 14
2.3.7
Peran IL-1β dalam inflamasi………………………………..15
2.3.8
Bahan Alkali Menginduksi Kerusakan Kornea……………. 15
Isoflavon………………………………………………………….... 16
2.4.1
Definisi…………………………………………………….. 16
2.4.2
Biosintesis Senyawa Isoflavon…………………………….. 17
2.4.3
Potensi Senyawa Isoflavon………………………………… 18
Genistein…………………………………………………………… 19
2.5.1
Definisi Genistein…………………………………………. 19
2.5.2
Efek Molekular…………………………………………….. 19
2.5.3
Bioavaibilitas Genistein……………………………………. 20
2.5.4
Bioavabilitas Topikal Isoflavon pada Mata………………... 21
2.5.5
Peran Genistein terhadap Ekspresi IL-1β………………….. 23
BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS
3.1
Kerangka Konsep…………………………………………………... 25
3.2
Hipotesis…………………………………………………………… 26
BAB 4 METODOLOGI PENELITIAN…………………………………… 27
4.1
Rancangan Penelitian………………………………………………. 27
4.2
Tempat dan Waktu Penelitian……………………………………… 27
4.3
Populasi dan Sampel..................................................................
viii
27
4.4
4.3.1
Populasi.........................................................................
27
4.3.2
Sampel..........................................................................
27
4.3.3
Besar Sampel Penelitian..................................................
28
4.3.4
Tehnik Pengambilan Sampel…….……………………..….. 29
4.3.5
Karakteristik Sampel Penelitian.......................................
29
4.3.6
Variabel Penelitian.........................................................
30
4.3.7
Definisi Operasional Variabel Penelitian...........................
30
Alat dan Bahan Penelitian………………………………………….. 31
4.4.1
Alat…………………………………………………………. 31
4.4.2
Bahan………………...…………………………………….. 31
4.5
Kerangka Operasional Penelitian……...………………………….. 32
4.6
Prosedur Penelitian………………………………………………… 33
4.6.1
Pembuatan Solutio Genistein Tetes Mata Topikal………... 33
4.6.2
Perlakuan Sampel………………………………………….. 33
4.6.3
Adaptasi……………………………………………………. 34
4.6.4
Pengambilan Sampel Kornea Untuk Pengamatan Ekspresi
IL-1………………………………………………………… 34
4.6.5
Pemeriksaan IL-1 dengan Metode Imunohistokimia……… 35
4.6.6
Pengamatan Ekspresi IL-1 dengan Metode
Immunohistokimia pada Kornea…………………………… 36
4.6.7
4.7
Penghitungan Ekspresi IL-1……………………………….. 37
Analisis Statistik………………………………………………….... 38
BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA………………….. 39
5.1
Hasil Penelitian…………………………………………………….. 39
ix
5.2
Analisis Data……………………………………………………….. 42
5.2.1
Analisis data ekspresi IL-1β dengan menggunakan Uji
One Way Anova……………………………………………. 42
5.2.2
Uji Korelasi dan Regresi…………………………………… 44
BAB 6 PEMBAHASAN…………………………………………………… 47
BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN……………………………………. 48
7.1
Kesimpulan………………………………………………………… 48
7.2
Saran……………………………………………………………….. 48
DAFTAR PUSTAKA……………………………………………………… 49
Lampiran…………………………………………………………………… 53
x
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1
Lapisan Kornea…………………………………………….. 5
Gambar 2.2
Anatomi kornea……………………………………………. 8
Gambar 2.3
Struktur kimia isoflavon…………………………………… 20
Gambar 2.4
Struktur kimia genistein dan daidzein………………………21
Gambar 5.1
Gambaran ekspresi IL-1β setelah 24 jam induksi NaOH
1 M menggunakan mikroskop cahaya pembesaran
1000x…………………………………………………….… 40
Gambar 5.2
Grafik perubahan ekspresi IL-1β………………………...… 42
Gambar 5.3
Grafik hubungan dosis genistein dan perubahan ekspresi
IL-1β……………………………………………………….. 46
xi
DAFTAR TABEL
Tabel 5.1
Data Perubahan Eskpresi IL-1β…………………………… 40
Tabel 5.2
Hasil Uji Anova…………………………………………… 43
Tabel 5.3
Hasil Uji HSD Tukey 5%...............................................
Tabel 5.4
Hasil Uji Korelasi…………………………………………. 44
xii
43
DAFTAR SINGKATAN
AgNO3
: Silver Nitrate
APCs
: Antigen-Presenting Cells
bFGF
: Basic Fibroblast Growth Factor
BMP-2
: Bone Morphogenetic Protein-2
BMP-4
: Bone Morphogenetic Protein-4
BOB
: Blood-Ocular Barrier
BRB
: Blood-Retinal Barrier
DNA
: Deoxyribose Nucleic Acid
EGF
: Epidermal Growth Factor
G-CSF
: Granulocyte Colony Stimulating Factor
GM-CSF
: Granulosite Macrophage Colony Stimulating Factor
HGF
: Hepatocyte Growth Factor
IFN-g
: Interferon gamma
IGF
: Insulin like Growth Factor
IgG
: Immunoglobulin G
IgM
: Immunoglobulin M
IL-1
: Interleukin-1
IL-1α
: Interleukin-1 alpha
IL-1β
: Interleukin-1 beta
IL-4
: Interleukin-4
IL-6
: Interleukin-6
IL-10
: Interleukin-10
xiii
IL-11
: Interleukin-11
IL-13
: Interleukin-13
INF
: Interferon gamma
KGF
: Keratinosit Growth Factor
LC
: Langerhans Cell
MCP-1
: Monocyte Chemotactic Protein
MHC
: Major Hystoeornpatibility Complex
mRNA
: Ribonucleic Acid messenger
NaOH
: Natrium Hidroksida
NOS
: Nitric Oxyde Syntase
PDGF
: Platelet-Derived Growth Factor
PDGF-2
: Platelet-Derived Growth Factor-2
PKA
: Protein Kinase A
PKC
: Protein Kinase C
PTK
: Protein Tyrosine Kinase
RANTES
: Regulated upon activation normal T cell expressed and
presumably secreted
ROS
: Reactive Oxygen Species
TNF-alpha
: Tumor Necrosis Factor alpha
TXA2
: Tromboksan A2
xiv
ABSTRAK
Sucipto, Jasinda Andini Putri. 2014. Efek Genistein Topikal Tetes Mata Terhadap
Ekspresi IL-1β Pada Kornea Tikus (Rattus novergicus) Model
Inflamasi. Tugas Akhir, Fakultas Kedokteran, Universitas
Muhammadiyah Malang. Pembimbing : (I) Yuliono Trika Nur
Hasan (II) Nur Kaputrin.
Latar Belakang : Inflamasi kornea adalah penyakit mata yang paling sering
menyebabkan kebutaan. Genistein sebagai anti-inflamasi dapat menghambat IL1β dan apoptosis pada awal infeksi. Serta dapat menghambat growth factor
neovaskularisasi dan enzim metalloproteinase.
Tujuan : Mengetahui pengaruh pemberian genistein terhadap ekspresi IL-1β
kornea tikus model inflamasi.
Metode : Penelitian ini menggunakan The Post Test Only Control Group Design.
Dengan sampel 30 tikus yang dipilih secara acak dan terdiri dari 6 tikus sebagai
kelompok kontrol negatif, 6 tikus sebagai kelompok yang diinduksi NaOH 1 M,
dan 3 kelompok dengan 6 tikus ditetesi genistein tetes mata topikal dengan dosis
0.25 mg/ml, 0.5 mg/ml, 1 mg/ml empat kali sehari.
Hasil Penelitian : Uji ANOVA menyimpulkan bahwa terdapat perbedaan bermakna
ekspresi IL- β pada er agai kelo pok perlakua Sig .
< p . 5 . Uji korelasi
pearson bernilai 0.000 < p (0.05) arah korelasi negatif dan kekuatan korelasi sebesar
0.873 berarti peningkatan dosis genistein cenderung menurunkan ekspresi IL- β se ara
signifikan. Pada uji regresi diperoleh persamaan Y = 16,400 – 15,771 X dengan hasil
rerata ekspresi kontrol negatif sebesar 0, maka didapatkan dosis efektif sebesar 1,04
mg/ml. Dalam penelitian ini, genistein topikal tetes mata pada dosis 1 mg/ml
menurunkan ekspresi IL- β (p< 0.05) secara signifikan.
Kesimpulan : Pemberian genistein topikal tetes mata dengan dosis 0,25 mg/ml,
0,50 mg/ml dan 1 mg/ml pada kornea tikus putih jantan (Rattus novergicus strain
wistar) model inflamasi dapat menurunkan ekspresi IL-1β. Dosis efektif untuk
penurunan ekspresi IL-1β pada penelitian ini adalah 1,04 mg/ml.
Kata Kunci: Genistein, ekspresi IL-1β, inflamasi kornea.
xv
ABSTRACT
Sucipto, Jasinda Andini Putri. 2014. The Effect of Topical Eye Drops To
Expression of IL-1β At Corneal Rats (Rattus novergicus) Model Of
inflammatory. Final Assignment, Faculty of Medicine, University of
Muhammadiyah Malang. Supervisors : (I) Yuliono Trika Nur Hasan
(II) Nur Kaputrin.
Background : Corneal inflammation is the most common eye disease that causes
blindness. Genistein as an anti-inflammatory to inhibit IL-1β and apoptosis in the
early infection. And also inhibiting neovascularization growth factor and
metalloproteinase enzymes.
Objective : To determine the effect of genistein to the expression of IL-1β
corneal rats model of inflammatory .
Methods : This was The Post Test Only Control Group Design study. Samples were 30
rats and randomly choosen, include 6 rats as negative control group, 6 rats were treated
with NaOH 1 M as positive control group, and 3 groups with 6 rats administered with
0.25 mg/ml, 0.5 mg/ml, 1 mg/ml genistein topical eye drops doses for 24 hours.
Results : From the results of ANOVA test it was concluded that there were
significant between-group differences in expression of IL-1β levels (Sig 0.010