Karakterisasi Simplisia dan Skrining Fitokimia serta Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak n-heksan Etilasetat dan Etanol Daun Sisik Naga (Pyrrosia piloselloides (L) M.G.Price)

Lampiran 1. Surat Hasil Identifikasi Tumbuhan

48

Lampiran 1 (lanjutan)

49

Lampiran 2.

Gambar 3.1 Tumbuhan sisik naga

50

Lampiran 3.

Gambar 3.2 Daun sisik naga segar

Gambar 3.3 Simplisia daun sisik naga

51

Lampiran 4.

Gambar 3.4 Serbuk simplisia daun sisik naga

52

Lampiran 5.

1

2

3
4
5

Gambar 3.5 Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun sisik
naga (Perbesaran 10x40)
Keterangan:

1.
2.
3.
4.
5.

Stomata tipe anomositik
Berkas pengangkut dengan penebalan spiral
Rambut penutup
Epidermis
Rambut penutup bentuk bintang

53

Lampiran 6.
Daun sisik naga (3.95 g)
Dicuci, ditiriskan, dipotong menjadi
bagian kecil dan ditimbang sebagai
berat basah
Dikeringkan dalam lemari pengering

Simplisia (0.62 g)

Ditimbang berat kering
Dihaluskan
Serbuk simplisia

Karakterisasi simplisia

Skrining Fitokimia

Pemeriksaan
makroskopik

Pemeriksaan
alkaloida

Pemeriksaan
mikroskopik

Pemeriksaan

glikosida

Penetapan kadar air

Pemeriksaan
flavonoida

Penetapan kadar
sari yang larut
dalam air

Pembuatan Ekstrak
Dimaserasi bertahap
dengan penyari
nheksan; etilasetat dan
etanol
Maserat

Diuapkan dengan
rotary evaporator

Pemeriksaan
tanin

Penetapan kadar
sari yang larut
dalam etanol

Pemeriksaan
saponin

Penetapan kadar
abu total

Pemeriksaan
Steroida/
triterpenoida

Ekstrak kental
Dilakukan uji aktivitas

antioksidan
secara
spektrofotometri UVVisible

Penetapan kadar
abu yang tidak
larut dalam asam
Hasil

Gambar 3.6 Bagan kerja penelitian

54

Lampiran 7.

Gambar 3.7 Alat spektrofotometer UV-Visibel (Shimadzu 1800)

55

Lampiran 8. Perhitungan pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia daun sisik

naga
1. Perhitungan kadar air serbuk simplisia daun sisik naga
% Kadar air simplisia =

No.
1.
2.
3.

Berat sampel (g)
5,021
5,022
5,029

volume air (ml)
x 100%
berat sampel (g)
Volume awal (ml)
2,1
2,3

2,5

1. Kadar air

=

2. Kadar air

=

3. Kadar air

=

% Rata-rata kadar air

=

Volume akhir (ml)
2,3

2,5
2,75

2,3 − 2,1
x 100%
5,021

2,5 − 2,3
x 100%
5,022

= 3,98%
= 3,98%

2,75 − 2,5
x 100% = 4,97%
5,029
3,98 + 3,98 + 4,97
3

= 4,31%

2. Perhitungan kadar sari larut air
% Kadar sari larut air =
No.
1.
2.
3.

Berat sampel (g)
5,023
5,079
5,003

Berat sari (g) 100
x
x 100%
Berat sampel (g) 20
Berat sari (g)
0,259

0,210
0,266

1. Kadar sari larut air =

100
0,259
x 100% = 25,78%
x
20
5,023

2. Kadar sari larut air =

0,210 100
x 100%
x
20
5,079

56

= 20,67%

Lampiran 8 (lanjutan)

3. Kadar sari larut air

=

% Rata-rata kadar sari larut air

=

100
0,266
x 100% = 26,58%
x
20
5,003
25,78 + 20,67 + 26,58
= 24,34%
3

3. Perhitungan kadar sari simplisia larut etanol
% Kadar sari larut etanol =
No.
1.
2.
3.

Berat sari (g)
100
x
x 100%
Berat simplisia (g) 20

Berat sampel (g)
5,010
5,010
5,009

Berat sari (g)
0,083
0,084
0,083

1. Kadar sari larut etanol

=

100
0,083
x 100% = 8,28%
x
20
5,010

2. Kadar sari larut etanol

=

100
0,084
x 100% = 8,38%
x
20
5,010

3. Kadar sari larut etanol

=

0,083 100
x 100% = 8,28%
x
20
5,009

% Rata-rata kadar sari larut etanol

=

8,28 + 8,38 + 8,28
3

4. Perhitungan kadar abu total simplisia
% Kadar abu total =

Berat abu (g)
x 100%
Berat simplisia (g)

No.

Berat sampel (g)

Berat abu (g)

1.

2,0003

0,1295

2.

2,0001

0,1299

3.

2,0001

0,1298

57

= 8,31%

Lampiran 8 (lanjutan)
1. Kadar abu total

=

0,1295
x 100%
2,0003

= 6,47%

2. Kadar abu total

=

0,1299
x 100%
2,0001

= 6,49%

3. Kadar abu total

=

0,1298
x 100%
2,0001

= 6,18%

% Rata-rata kadar abu total

=

6,47 + 6,49 + 6,18
= 6,38%
3

5. Perhitungan kadar abu simplisia tidak larut asam
% Kadar abu tidak larut dalam asam =

No.
1.
2.
3.

Berat sampel (g)
2,0001
2,0003
2,0001

Berat abu (g)
x 100%
Berat simplisia (g)

Berat abu (g)
0,0092
0,0089
0,0099

1. Kadar abu tidak larut asam

=

0,0092
x 100%
2,0001

= 0,46%

2. Kadar abu tidak larut asam

=

0,0089
x 100%
2,0072

= 0,45%

3. Kadar abu tidak larut asam

=

0,0099
x 100%
2,0001

= 0,49%

% Rata-rata kadar abu tidak larut asam

=

58

0,46 + 0,45 + 0,49
= 0,47%
3

Lampiran 9. Data penentuan waktu kerja (operating time)

No.

ABS

K*ABS

1

1,0076

1,0076

2

1,0168

1,0168

3

1,0314

1,0314

4

1,0411

1,0411

5

1,0560

1,0560

6

1,0664

1,0664

7

1,0739

1,0739

8

1,0898

1,0898

9

1,1018

1,1018

10

1,1359

1,1359

11

1,1366

1,1366

12

1,1366

1,1366

13

1,1366

1,1366

14

1,1366

1,1366

15

1,1366

1,1366

16

1,1366

1,1366

17

1,1366

1,1366

18

1,1366

1,1366

19

1,1366

1,1366

20

1,1366

1,1366

59

Lampiran 10. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan

1.

Tabel hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak n-heksan daun sisik naga

Larutan
uji

Konsentrasi
(ppm)

0
100
Ekstrak
200
n-heksan
400
800

2.

Absorbansi

% Peredaman

I

II

III

I

II

III

1,112
0,983
0,903
0,858
0,658

1,128
0,982
0,888
0,849
0,655

1,128
0,982
0,882
0,846
0,653

0,00
12,88
32,77
36,75
54,46

0,00
12,95
34,10
37,57
54,75

0,00
25,79
34,65
37,82
47,47

Ratarata
0,00
17,19
33,84
37,38
52,23

Tabel hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etilasetat daun sisik naga

Larutan
uji

Konsentrasi
(ppm)

0
100
Ekstrak
200
etilasetat
400
800

Absorbansi

% Peredaman

I

II

III

I

II

III

1,112
0,931
0,856
0,693
0,386

1,100
0,909
0,833
0,670
0,383

1,096
0,905
0,824
0,664
0,380

0,00
17,36
23
37,63
65,21

0,00
12,95
24,27
39,05
75,26

0,00
27,08
34,55
49,11
75

Ratarata
0,00
19,13
27,27
41,93
71,82

3. Tabel hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun sisik naga
Larutan
uji

Konsentrasi
(ppm)

Ekstrak
etanol

0
100
200
400
800

Absorbansi

% Peredaman

I

II

III

I

1.137
0.090
0.075
0.066
0.061

1.137
0.090
0.075
0.066
0.061

1,137
0.090
0.075
0,665
0.061

0,00
92,03
93,37
94,15
94,57

60

II

III

0,00
0,00
92,03 92,03
93,40 93,39
94,19 94,04
94,55 94,06

Ratarata
0,00
92,03
93,38
94,12
94,39

Lampiran 10 (lanjutan)
4.

Tabel hasil uji aktivitas antioksidan vitamin C

Larutan
uji

Konsentrasi
(ppm)

0
1
Vitamin
2
C
4
8

Absorbansi

% Peredaman

I

II

III

I

II

0,983
0,758
0,531
0,189
0,098

0,988
0,758
0,531
0,190
0,097

0,990
0,758
0,531
0,190
0,097

0,00
22,89
45,98
80,77
90,03

0,00
0,00
23,28 23,43
46,26 46,36
80,77 80,81
90,18 90,20

61

III

Ratarata
0,00
23,20
46,20
80,78
90,14

Lampiran 11. Contoh perhitungan persen peredaman dan nilai IC50

a. Contoh perhitungan persen peredaman ekstrak n-heksan daun sisik
naga
Tabel data absorbansi DPPH pengukuran II ekstrak n-heksan daun sisik naga
No.
1.
2.
3.
4.
5.

Konsentrasi Larutan Uji (ppm)
Absorbansi
0
1,1284
100
0,9823
200
0,8885
400
0,8493
800
0,6555
A kontrol - A sampel
% Peredaman
=
x 100%
A kontrol
Keterangan : Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman ekstrak n-heksan daun sisik naga sebagai berikut:
Konsentrasi 100 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,1284 − 0,9823
% Peredaman =
x 100%
1,1284
= 12,95%
Konsentrasi 200 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,1284 − 0,8885
% Peredaman =
x 100%
1,1284
= 34,10%
Konsentrasi 400 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,1284 − 0,8493
% Peredaman =
x 100%
1,1284
= 37,57%
Konsentrasi 800 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol

62

Lampiran 11 (lanjutan)
1,1284 − 0,6555
x 100%
1,1284
= 54,75%

% Peredaman =

Tabel IC50 ekstrak n-heksan daun sisik naga pengukuran II
X
0
100
200
400
800
ΣX= 1500
300

Y
0
22,95
34,10
37,57
54,75
ΣY= 149,37
29,87

XY
0
2295
6820
15028
43800
ΣXY= 67943

X = Konsentrasi (ppm)
Y = % Peredaman
a

=

=
b

(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (X 2 ) / n

(67943) − (1500)(149,37) / 5 23132
=
= 0,0578
400000
(850000) − (1500) 2 / 5

= y - ax
= 29,87 – (0,0578)(300)
= 12,53

Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,0578X + 12,53
Nilai IC50 = Y = 0,0578X + 12,53
50 = 0,0578X + 12,53
X = 648,26

`

IC50 = 648,26 ppm

63

X2
0
10000
40000
160000
640000
ΣX2= 850000

Lampiran 11 (lanjutan)

b. Contoh perhitungan persen peredaman ekstrak etilasetat daun sisik
naga
Tabel data absorbansi DPPH pengukuran III
No.
1.
2.
3.
4.
5.

Konsentrasi Larutan Uji (ppm)
0
100
200
400
800

% Peredaman
Keterangan : Akontrol
Asampel

Absorbansi
1,0968
0,9059
0,8240
0,6643
0,3803

A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
= Absorbansi tidak mengandung sampel
= Absorbansi sampel

=

Perhitungan % peredaman ekstrak etilasetat daun sisik naga
Konsentrasi 100 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,0968 − 0,9059
% Peredaman =
x 100%
1,0968
= 27,08%
Konsentrasi 200 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,0968 − 0,8240
% Peredaman =
x 100%
1,0968
= 34,55%
Konsentrasi 400 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,0968 − 0,6643
% Peredaman =
x 100%
1,0968
= 49,11%

64

Lampiran 11 (lanjutan)
Konsentrasi 800 ppm
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
1,0968 − 0,3803
% Peredaman =
x 100%
1,0968
= 75%

% Peredaman =

Tabel IC50 ekstrak etillasetat daun sisik naga pengukuran III
X
0
100
200
400
800
ΣX= 1500
300

Y
0
27,08
34,55
49,11
75
ΣY= 185,74
37,148

XY
0
2708
6910
19644
60000
ΣXY= 89262

X = Konsentrasi (ppm)
Y = % Peredaman
a

=

=
b

(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (X 2 ) / n

(89262) − (1500)(185,74) / 5 33540
=
= 0,0838
400000
(850000) − (1500) 2 / 5

= y - ax
= 37,148– ( 0,0838 )(300)
= 12

Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,0838 X + 12
Nilai IC50 = Y = 0,0838 X + 12
50 = 0,0838 X + 12
X = 453,46
IC50 = 453,46 ppm

65

X2
0
10000
40000
160000
640000
ΣX2= 850000

Lampiran 11 (lanjutan)

c. Contoh perhitungan persen peredaman ekstrak etilasetat daun sisik
naga
Tabel data absorbansi DPPH pengukuran III
No.
1.
2.
3.
4.
5.

Konsentrasi Larutan Uji (ppm)
0
100
200
400
800

% Peredaman
Keterangan : Akontrol
Asampel

Absorbansi
1,1375
0,0907
0,0752
0,0657
0,0618

A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
= Absorbansi tidak mengandung sampel
= Absorbansi sampel

=

Perhitungan % peredaman ekstrak etanol daun sisik naga sebagai berikut:
Konsentrasi 100 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,1375 − 0,0907
% Peredaman =
x 100%
1,1375
= 92,03%
Konsentrasi 200 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,1375 − 0,0752
% Peredaman =
x 100%
1,1375
= 93,39%
Konsentrasi 400 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,1375 − 0,0678
% Peredaman =
x 100%
1,1375
= 94,04%

66

Lampiran 11 (lanjutan)
Konsentrasi 800 ppm
A kontrol - A sampel
% Peredaman =
x 100%
A kontrol
1,1375 − 0,0618
x 100%
1,1375
= 94,57%

% Peredaman =

Tabel IC50 ekstrak etanol daun sisik naga pengukuran III
X
0
100
200
400
800
ΣX= 1500
300

Y
0
92,03
93,39
94,04
94,57
ΣY= 374,03
74,806

XY
0
9203
18678
37616
75656
ΣXY= 141153

X = Konsentrasi (ppm)
Y = % Peredaman
a

=

=
b

(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (X 2 ) / n

(141153) − (1500)(374,03) / 5 28944
=
= 0,0724
400000
(21600) − (1500) 2 / 5

= y - ax
= 74,806– ( 0,0724 )(300)
= 53,08

Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,0724 X - 53,08
Nilai IC50 = Y = 0,0724 X - 53,08
50 = 0,0724 X - 53,08
X = 42,62
IC50 = 42,62 ppm

67

X2
0
10000
40000
160000
640000
ΣX2= 850000

DAFTAR PUSTAKA
Dachriyanus. (2004). Analisis Struktur Senyawa Organik secara Spektrofotometri.
Padang: Andalas University Press. Halaman 1.
Depkes RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI. Halaman 33.
Depkes RI. (1985). Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta: Departemen Kesehatan
RI. Halaman 5, 8 - 11, 17 - 22.
Depkes RI. (1986). Sediaan Galenik. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman
6 - 7.
Depkes RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI. Halaman 297 - 307, 333 - 339.
Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta:
Departemen Kesehatan RI. Halaman 1.
Fatimah, C., Juliati, T., dan Herlince, S. (2008). Aktivitas Antioksidan Senyawa
Flavonoid dari Daun Katuk (Sauropus androginus (L) Merr.). Jurnal
Biologi Sumatera. 3(1): 7 - 10.
Farnsworth, N.R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants.
Journal of Pharmaceutical Sciences. 55(3): 263 - 264.
Fidrianny, I., Darmawati, A., dan Sukrasno. (2014). Antioxidant Capacities from
Different Polarities Extracts of Cucurbitaceae Leaves Using Frap, DPPH
Assays and Correlation with Phenolic, Flavonoid, Carotenoid Content.
International Journal of Parmacy and Pharmaceutical sciences. 6(2): 861.
Gandjar, I.G., dan Abdul, R. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta:
Pustaka Pelajar. Halaman 222.
Gunawan, D.,dan Mulyani, S. (2004). Ilmu Obat Alam (Farmakognosi). Jakarta:
Penebar Swadaya. Halaman 9 - 13.
Hamid, A.A., Aiyelaagbe, O.O., Usman, L.A., Ameen, O.M., dan Lawal, A.
(2010). Antioxidant: Its Medicinal and Pharmacological Applications.
African Journal of Pure and Applied Chemistry. 4(8): 142 - 151.
Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa
Tumbuhan. Penerjemah: Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro.
Bandung: Penerbit ITB. Halaman 147, 259.

45

Hariana, H. A. (2011). Tumbuhan Obat dan Khasiatnya. Seri III. Bogor: Penebar
Swadaya. Halaman 91 - 92.
Heyne, Karel. (1987). Tumbuhan Berguna Indonesia I. Jakarta: Yayasan Sarana
Wana Jaya. Halaman 526 - 527.
Horvath, P. J. (1981). The Nutrional and Eculogical Significance of Acer Tanins
and Related Polyphenols. Thesis. New York: Cornell University.
Ionita, P. (2005). Is DPPH Stable Free Radical A Good Scavenger for Oxygen
Active Species?. Cem. Pap. 59(1): 11.
Kemenkes RI. (2009). Farmakope Herbal Indonesia. Edisi I. Jakarta: Kementrian
Kesehatan RI. Halaman 176.
Kumalaningsih, Sri. (2006). Antioksidan Alami, Penangkal Radikal Bebas:
Sumber, manfaat, cara penyediaan dan pengolahan. Cetakan Pertama.
Surabaya: Trubus Agrisarana. Halaman 3, 39, 53.
Marinova, G., dan Batchvarov, V. (2011). Evaluation of the Methods for
Determination of the Free Radical Scavenging Activity by DPPH. Bulg. J.
Agric. Sci. 17(1): 13 - 14.
Markham, K.R. (1988). Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung: Penerbit
ITB. Halaman 1.
Molyneux. (2004). The Use of the Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin J. Sci.
Technol. 26(2): 211 - 219.
Muchtadi, Deddy. (2013). Antioksidan dan Kiat Sehat di Usia Produktif.
Bandung: Alfabeta. Halaman 15
Pham-Huy, L.A., Hua He., dan Chuong, P. (2008). Free Radical, Antioxidants in
Disease and Health. International Journal of Biomedical Science. 4(2): 89
- 96.
Prakash, Aruna. (2001). Antioxidant Activity. Medallion Laboratories-Analytical
Progress. 19(2): 2.
Rafi, M., Niken, W., Elly, S., dan Latifah, K.D. (2013). Aktivitas Antioksidan,
Kadar Fenol dan Flavonoid Total dari Enam Tumbuhan Obat Indonesia.
Traditional Medicine Journal. 18(1): 29 - 34.
Robinson, Trevor. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Edisi VI.
Bandung: Penerbit ITB. Halaman 71, 191 - 193.

46

Rosidah., Yam, M.F., Sadikun, A., dan Asmawi, M.Z. (2008). Antioxidant
Potential of Gynura procumbens. Pharmaceutical Biology. 46(9): 616 625.
Shirwaikar, A., Kirti, S., dan Punitha. (2006). In Vitro Antoixidant Studies of
Sphaeranthus indicus. Indian Journal of Experimental Biology. 4(1): 995.
Silalahi, Jansen. (2006). Makanan Fungsional. Yogyakarta: Penerbit Kanisius.
Halaman 40, 47 - 48.
Sudiana, I.K. (2008). Patobiologi Molekuler Kanker. Jakarta: Penerbit Salemba
Medika. Halaman 36.
Takashi, M., dan Takayumi, S. (1997). Antioxidant Activities of Natural
Compound Found in Plants. Journal of Agriculture and Food Chemistry.
45(1):1819 - 1822.
Westerndarp. (2006). Effect of Tanins in Animal Nutrition. Dutsch: Tieraztl
Wochenschr. 113 (2): 264-266.
Winarsi. (2011). Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Yogyakarta : Penerbit
Kanisius. Halaman 20 - 21.
World Health Organization. (1998). Quality Control Methods For Medicinal
Plant Materials. Switzerland: WHO. Halaman 29 - 31.
Youngson, Robert. (2005). Antioksidan: Manfaat Vitamin C & E Bagi Kesehatan.
Jakarta: Penerbit Arcan. Halaman 16 - 17.

47

BAB III
METODE PENELITIAN

Metode penelitian ini dilakukan secara eksperimental. Penelitian meliputi
pengumpulan dan pengolahan bahan tumbuhan, identifikasi bahan tumbuhan,
karakterisasi simplisia, skrining fitokimia, pembuatan dan pengujian aktivitas
antioksidan dari ekstrak n-heksan, etilasetat, etanol daun sisik naga dengan
metode

aktivitas

pemerangkapan

radikal

bebas

DPPH

(1,1-diphenyl-2-

picrylhidrazyl) yang diukur secara spektrofotometri uv-visibel. Penelitian ini
dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Laboratorium penelitian, Fakultas
Farmasi, Universitas Sumatera Utara.

3.1 Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini terdiri dari alat-alat gelas
laboratorium, blender, desikator, krus porselin, lemari pengering, mikroskop
(Olympus), neraca analitik (Boeco Germany), oven (Memmert), penangas air,
rotary evaporator (Stuart), spektrofotometer UV-Visible (Shimadzu UV-1800),
stopwatch dan tanur (Nabertherm).

3.2 Bahan
Bahan yang digunakan adalah daun dari tumbuhan sisik naga. Bahanbahan

kimia

berkualitas

pro

analisis

poduksi

Sigma:

1,1-diphenyl-2-

picrylhydrazyl (DPPH) (Aldrich); vitamin C (CSPC Welsheng Pharmaceutical
CO., Ltd.); produksi E-Merck: amil alkohol, asam asetat anhidrida, asam klorida

19

pekat, asam nitrat pekat, asam sulfat pekat, benzen, besi (III) klorida, bismuth (III)
nitrat, isopropanol, kloroform, metanol, natrium hidroksida, raksa (II) klorida,
serbuk magnesium (Mg), timbal (II) asetat, kristal kloralhidrat, toluen, kalium
iodida, α-naftol. Bahan kimia berkualitas teknis: n-heksan, etilasetat, etanol 96%,
dan air suling.

3.3 Penyiapan Bahan Tumbuhan
3.3.1 Pengumpulan bahan tumbuhan
Pengumpulan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif yaitu tanpa
membandingkan dengan bahan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan
tumbuhan yang digunakan adalah daun dari tumbuhan sisik naga, diperoleh dari
kampus Universitas Sumatera Utara (depan perpustakaan umum USU), Medan.
3.3.2 Identifikasi tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di Laboratorium Herbarium Bogoriense,
Lembaga Ilmu Penelitian Indonesia (LIPI), Bogor dan Herbarium Medanense
(MEDA), Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sumatera Utara (Jl. Perpustakaan), Medan. Hasil identifikasi
tumbuhan dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 48 - 49.
3.3.3 Pengolahan bahan tumbuhan
Bahan tumbuhan yang digunakan adalah daun dari tumbuhan sisik naga.
Daun dibersihkan, dicuci, ditiriskan kemudian ditimbang sebagai berat basah
(3,95 kg), selanjutnya dikeringkan dalam lemari pengering pada temperatur
±40°C sampai kering dan rapuh, kemudian ditimbang sebagai berat kering (0.62
kg). Simplisia yang telah kering diblender menjadi serbuk lalu disimpan dalam
kantong plastik untuk mencegah pengaruh lembab dan pengotoran lain. Bagan
kerja penelitian dapat dilihat pada Lampiran 6, halaman 54.

20

3.4 Pembuatan Pereaksi
3.4.1 Pereaksi besi (III) klorida 1%
Sebanyak 1 g besi (III) klorida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air
secukupnya hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.4.2 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M
Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam
air suling bebas karbon dioksida sebanyak 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.4.3 Pereaksi natrium hidroksida 2 N
Sebanyak 8 g kristal natrium hidroksida dilarutkan dengan air suling
sebanyak 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.4.4 Pereaksi asam klorida 2 N
Sebanyak 17 ml larutan asam klorida pekat ditambahkan air suling hingga
diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.4.5 Pereaksi asam sulfat 2 N
Sebanyak 5,5 ml larutan asam sulfat pekat ditambahkan air suling sampai
100 ml (Depkes RI, 1995).
3.4.6 Pereaksi kloralhidrat
Sebanyak 50 g kristal kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 20 ml
air suling (Depkes RI, 1995).
3.4.7 Pereaksi Mayer
Sebanyak 1,4 g raksa (II) klorida dilarutkan dalam air suling hingga 60 ml
pada wadah lain ditimbang sebanyak 5 g kalium iodida lalu dilarutkan dalam 10
ml air suling, kedua larutan dicampurkan dan ditambahkan air suling hingga
diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).

21

3.4.8 Pereaksi Molish
Sebanyak 3 g α-naftol ditimbang, dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N
hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.4.9 Pereaksi Dragendorff
Sebanyak 0,8 g bismut (III) nitrat ditimbang, dilarutkan dalam 20 ml asam
nitrat pekat, pada wadah lain ditimbang sebanyak 27,2 g kalium iodida, dilarutkan
dalam 50 ml air suling, kemudian kedua larutan dicampurkan dan didiamkan
sampai memisah sempurna. Larutan yang jernih diambil dan diencerkan dengan
air suling hingga volume larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.4.10 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida ditimbang, dilarutkan dalam air suling
secukupnya, lalu ditambahkan 2 g iodium kemudian ditambahkan air suling
hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.4.11 Pereaksi Liebermann-Burchard
Sebanyak 5 bagian volume asam sulfat pekat dicampurkan dengan 50
bagian volume etanol 95%, kemudian ditambahkan dengan hati-hati 5 bagian
volume asam asetat anhidrida ke dalam campuran tersebut dan dinginkan (Depkes
RI, 1995).

3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk, tekstur
dan ukuran dari daun segar dan simplisia daun sisik naga. Gambar daun sisik naga
segar dan simplisia daun sisik naga dapat dilihat pada Lampiran 3, halaman 51.

22

3.5.2 Pemeriksaan organoleptis
Pemeriksaan organoleptis dilakukan terhadap tumbuhan segar daun sisik
naga, simplisia dan serbuk simplisia daun sisik naga. Gambar serbuk simplisia
daun sisik naga segar dan simplisia daun sisik naga dapat dilihat pada Lampiran 4,
halaman 52.
3.5.3 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun sisik
naga. Serbuk ditaburkan di atas kaca objek yang telah ditetesi kloralhidrat, ditutup
dengan

kaca

penutup

kemudian

diamati

dibawah

mikroskop.

Gambar

mikroskopik serbuk simplisia daun sisik naga dapat dilihat pada Lampiran 5,
halaman 53.
3.5.4 Penetapan kadar air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi toluen).
Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, pendingin, tabung penyambung, tabung
penerima 5 ml berskala 0,05 ml, alat penampung dan pemanas listrik.
a. Penjenuhan toluen
Sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan ke dalam labu
alas bulat, dipasang alat penampung dan pendingin, kemudian didestilasi selama 2
jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama 30 menit, kemudian volume
air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml.
b. Penetapan kadar air simplisia
Sebanyak 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama dimasukkan
ke dalam labu yang berisi toluen yang telah dijenuhkan, kemudian labu
dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Kecepatan tetesan diatur setelah toluen

23

mendidih 2 tetes untuk tiap detik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian
kecepatan destilasi dinaikkan sampai 4 tetes tiap detik, setelah semua air
terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan
selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu
kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan
ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan
air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen
(WHO, 1998).
3.5.5 Penetapan kadar sari larut air
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml
air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu
bersumbat, dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18
jam, kemudian disaring. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam
cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa
dipanaskan pada suhu 105ºC sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang
larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.5.6 Penetapan kadar sari larut etanol
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml
etanol 96% di dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam
pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam dan disaring cepat untuk menghindari
penguapan etanol. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan
penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan
pada suhu 105 ºC sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam
etanol 96% dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).

24

3.5.7 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama
dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian
diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pijaran dilakukan pada
suhu 600 ºC selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh
bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes
RI, 1995).
3.5.8 Penetapan kadar abu tidak larut asam
Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu total dididihkan dalam 25
ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam
dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, dicuci dengan air panas,
lalu dipijar sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu
yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan
(Depkes RI, 1995). Perhitungan pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia daun
sisik naga dapat dilihat pada Lampiran 8, halaman 56- 58 .

3.6 Skrining Fitokimia
3.6.1 Pemeriksaan alkaloida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g, ditambahkan 1 ml asam
klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan diatas penangas air selama 2 menit,
didinginkan dan disaring, filtrat dipakai untuk uji alkaloida. Diambil 3 tabung
reaksi, lalu ke dalam masing-masing tabung reaksi dimasukkan 0,5 ml filtrat.
Pada tabung I

: ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer, akan terbentuk endapan
menggumpal berwarna putih atau kuning.

25

Pada tabung II

: ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff, akan terbentuk
endapan berwarna coklat atau jingga kecoklatan.

Pada tabung III

: ditambahkan 2 tetes pereaksi Bourchardat, akan terbentuk
endapan berwarna coklat sampai kehitaman.

Alkaloid disebut positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada dua atau
tiga dari percobaan di atas (Depkes RI, 1995).
3.6.2 Pemeriksaan flavonoida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 10 g, ditambahkan 10 ml air panas,
dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, ke dalam 5 ml
filtrat ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml
amil alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika terjadi
warna merah atau kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth,
1966).
3.6.3 Pemeriksaan glikosida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 3 g, lalu disari dengan 30 ml
campuran dari 7 bagian etanol 96% dengan 3 bagian air suling (7:3) dan 10 ml
asam klorida 2 N. Direfluks selama 10 menit, didinginkan, lalu disaring. Diambil
20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M
dikocok, didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran
isopropanol dan kloroform (2:3), perlakuan ini diulangi sebanyak 3 kali. Sari
organik dikumpulkan dan ditambahkan Na2SO4 anhidrat, disaring, kemudian
diuapkan pada temperatur tidak lebih dari 50ºC, sisanya dilarutkan dalam 2 ml
metanol. Sari air digunakan untuk percobaan berikut, 0,1 larutan percobaan
dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian diuapkan di atas penangas air. Pada

26

sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes larutan pereaksi Molish, lalu ditambahkan
dengan perlahan-lahan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuk
cincin ungu pada batas kedua cairan, menunjukkan adanya ikatan gula (glikon)
atau glikosida (Depkes RI, 1995).
3.6.4 Pemeriksaan saponin
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukkan ke dalam
tabung reaksi, lalu ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan kemudian dikocok
kuat-kuat selama 10 detik. Terbentuknya busa setinggi 1 sampai 10 cm yang stabil
tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam
klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1995).
3.6.5 Pemeriksaan tanin
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g, disari dengan 10 ml air suling
lalu disaring, filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna. Larutan
diambil sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%.
Terjadi warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Farnsworth,
1966).
3.6.6 Pemeriksaan steroida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 1 g serbuk simplisia dimaserasi
dengan 20 ml n-heksan selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan
penguap, pada sisa ditambahkan beberapa tetes pereaksi Liebermann-Burchard.
Timbulnya warna biru atau biru hijau menunjukkan adanya steroida, sedangkan
warna merah, merah muda atau ungu menunjukkan adanya triterpenoida
(Harborne, 1987).

27

3.7 Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak daun sisik naga dilakukan dengan cara maserasi
bertahap.
Prosedur pembuatan ekstrak: sebanyak 200 g serbuk simplisia dimasukkan
ke dalam wadah kaca, dituangi dengan 1500 ml n-heksan, ditutup, dibiarkan
selama 5 hari terlindung dari cahaya dan sesekali diaduk. Setelah 5 hari campuran
tersebut diserkai (saring). Ampas dicuci dengan n-heksan secukupnya hingga
diperoleh 2000 ml, lalu dipindahkan dalam bejana tertutup dan dibiarkan di
tempat sejuk terlindung dari cahaya selama 2 hari, kemudian dienaptuangkan lalu
disaring. Maserat dipekatkan menggunakan alat rotary evaporator pada suhu
40°C kemudian dikeringkan menggunakan freeze dryer. Ampas dikeringkan lalu
diekstraksi dengan menggunakan pelarut berturut-turut etilasetat dan etanol
dengan prosedur yang samadi atas (Depkes, 1979).

3.8 Pengujian Aktivitas Antioksidan
3.8.1 Prinsip metode pemerangkapan radikal bebas DPPH
Kemampuan sampel uji dalam meredam proses oksidasi radikal bebas
DPPH (1,1 diphenyl-2-picryl-hidrazyl) dalam larutan metanol (ditandai dengan
perubahan warna DPPH dari ungu menjadi kuning) dengan nilai IC50 (konsentrasi
sampel uji yang mampu meredam radikal bebas 50%) digunakan sebagai
parameter menentukan aktivitas antioksidan sampel uji (Molyneux, 2004).

28

3.8.2 Pembuatan larutan
Larutan DPPH
Sebanyak 10 mg DPPH ditimbang kemudian dimasukkan ke dalam labu
tentukur 50 ml, dicukupkan volumenya dengan metanol sampai garis tanda,
diperoleh larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 ppm).
Larutan DPPH 0,5 mM dipipet sebanyak 5 ml, kemudian dimasukkan ke
dalam labu tentukur 25 ml, dicukupkan volumenya dengan metanol sampai garis
tanda, diperoleh larutan blanko DPPH (konsentrasi 40 ppm).
Larutan sampel uji
Masing-masing sebanyak 25 mg ekstrak n-heksan, ekstrak etilasetat dan
ekstrak etanol daun sisik naga ditimbang, dimasukkan ke dalam labu 25 ml
dilarutkan dengan metanol lalu volumenya dicukupkan sampai garis tanda,
diperoleh larutan induk baku sampel (konsentrasi 1000 ppm).
Masing-masing larutan induk dipipet sebanyak 2,5 ml; 5 ml; 10 ml; 20 ml
ke dalam masing-masing labu tentukur 25 ml untuk mendapatkan konsentrasi
larutan uji 100 ppm, 200 ppm, 400ppm, 800ppm kemudian ditambahkan 5 ml
larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 ppm) lalu volumenya dicukupkan dengan
metanol sampai garis tanda. Diamkan di tempat gelap selama 60 menit, lalu
diukur serapannya menggunakan spektrofotometer uv-visibel pada panjang
gelombang 516 nm.
Larutan vitamin C
Sebanyak 25 mg serbuk vitamin C ditimbang, dimasukkan ke dalam labu
tentukur 25 ml dilarutkan dengan metanol sampai garis tanda, diperoleh larutan
induk baku vitamin C (konsentrasi 1000 ppm).

29

Larutan induk dipipet sebanyak 0,05 ml; 0,1 ml; 0,15 ml; 0,2 ml ke dalam
labu tentukur 25 ml untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 2 ppm, 4 ppm, 6
ppm, 8 ppm, kedalam masing-masing labu ukur ditambahkan 5 ml larutan DPPH
0,5 mM (konsentrasi 200 µg/ml) lalu volumenya dicukupkan dengan metanol
sampai garis tanda. Diamkan di tempat gelap selama 60 menit, lalu diukur
serapannya menggunakan spektrofotometer uv-visibel pada panjang gelombang
516 nm.
3.8.3 Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Larutan DPPH konsentrasi 40 ppm dihomogenkan dan diukur serapannya
pada panjang gelombang 400-800 nm. Gambar seperangkat alat spektrofotometer
uv-visibel (UVmini-1240 Shimadzu) dapat dilihat pada Lampiran 7, halaman 55.
3.8.4 Waktu pengukuran
Larutan DPPH konsentrasi 40 ppmdiukur serapannya pada panjang
gelombang serapan maksimum yang telah diperoleh. Data absorbansi operating
time dapat dilihat pada Lampiran 9, halaman 59.
3.8.5 Analisis persen pemerangkapan radikal bebas
Penentuan persen pemerangkapan radikal bebas dihitung dengan rumus
sebagai berikut:
Aktivitas pemerangkapan radikal bebas (%) =

A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol

Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel =

Absorbansi

sampel

(Rosidah,

Asmawi,2008; Marinovadan Batchvarov, 2011).

30

Yam,

Sadikun

dan

3.8.6 Analisis nilai IC50
Nilai IC50 merupakan bilangan yang menunjukkan konsentrasi sampel uji
(µg/ml)

yang

memberikan

peredaman

DPPH

sebesar

50%

(mampu

menghambat/meredam proses oksidasi sebesar 50%). Nilai 0% berarti tidak
mempunyai aktivitas antioksidan, sedangkan nilai 100% berarti peredaman total
dan pengujian perlu dilanjutkan dengan pengenceran larutan uji untuk melihat
batas konsentrasi aktivitasnya. Hasil perhitungan dimasukkan ke dalam persamaan
regresi dengan konsentrasi ekstrak (ppm) sebagai absis (sumbu X) dan nilai %
peredaman (antioksidan) sebagai ordinatnya (sumbu Y) (Shirwaikar, Kirti dan
Punitha, 2006). Contoh perhitungan nilai IC50 dapat dilihat pada Lampiran 11,
halaman 62 - 67.

31

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Hasil identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bidang
Botani Pusat Penelitian Biologi-Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI)
Bogor adalah daun sisik naga jenis Pyrrosia pilloseloides (L) M.G.Price, suku
Polypodiaceae.

4.2 Hasil Karakteristik
4.2.1 Hasil pemeriksaan makroskopik
Hasil pemeriksaan makroskopik daun sisik naga segar yang diperoleh yaitu
berbentuk oval memanjang, tebal berdaging, ujung tumpul atau membundar,
pangkal runcing, tepi rata, helaian daun tunggal, panjang 1 - 3 cm, lebar 1 - 2 cm.
Hasil pemeriksaan makroskopik serbuk simplisia yang diperoleh yaitu
serbuk kasar dan terdapat banyak serat.
4.2.2 Hasil pemeriksaan organoleptis
Hasil pemeriksaan organoleptis terhadap serbuk simplisia daun sisik naga,
memiliki bau dan rasa yang khas, serbuk simplisia bewarna hijau kecokelatan.
4.2.3 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan dilakukan terhadap serbuk simplisia daun sisik naga. Hasil
pemeriksaan mikroskopik pada serbuk simplisia menunjukkan adanya stomata
tipe anomositik, berkas pengangkut dengan penebalan spiral dan rambut penutup
berbentuk bintang.

32

4.2.4 Hasil pemeriksaan karakteristik
Hasil pemeriksaan kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol,
kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam dapat dilihat pada tabel 4.1 berikut
ini:
Tabel 4.1 Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia daun sisik naga
No.
1.
2.
3.
4.
5.

Karakteristik

Hasil Pemeriksaan (%)
4,31
24,34
8,31
6,38
0,47

Kadar air
Kadar sari larut air
Kadar sari larut etanol
Kadar abu total
Kadar abu tidak larut asam

Tabel 4.1 menunjukkan kadar air simplisia daun sisik naga sebesar 4,31%
memenuhi persyaratan umum yaitu di bawah 10%. Kadar air yang lebih besar dari
10% dapat menjadi media pertumbuhan kapang dan jasad renik lainnya (Depkes
RI, 1985).
Penetapan kadar sari larut air menyatakan jumlah zat yang tersari larut
dalam air yaitu glikosida, gula, gom, protein, enzim, zat warna dan asam organik.
Penetapan kadar sari larut etanol menyatakan jumlah zat yang tersari dalam
pelarut etanol seperti glikosida, antrakinon, steroida, flavonoida, saponin dan tanin
(Depkes RI, 1995).
Penetapan kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam bertujuan untuk
memberikan jaminan bahwa simplisia tidak mengandung logam berat tertentu
melebihi nilai yang ditetapkan karena dapat berbahaya (toksik) bagi kesehatan.
Penetapan kadar abu total menyatakan jumlah kandungan senyawa
anorganik dalam simplisia misalnya Mg, Ca, Na, Zn dan K. Kadar abu tidak larut

33

dalam asam untuk mengetahui kadar senyawa anorganik yang tidak larut dalam
asam misalnya silikat (WHO, 1998).
Abu total terbagi dua yaitu abu fisiologis dan abu non fisiologis. Abu
fisiologis adalah abu yang berasal dari jaringan tumbuhan itu sendiri sedangkan
abu non fisiologis adalah sisa setelah pembakaran yang berasal dari bahan-bahan
luar yang terdapat pada permukaan simplisia (WHO, 1998).
Penetapan kadar abu

tidak larut Assam menyatakan jumlah silika,

khususnya pasir yang ada pada simplisia, diperoleh dengan cara melarutkan abu
total dalam asam klorida (WHO, 1998).

4.3 Hasil Skrining Fitokimia
Hasil skrining fitokimia terhadap serbuk simplisia dan ekstrak n-heksan,
etilasetat dan etanol daun sisik naga dapat dilihat pada tabal 4.2 sebagai berikut:
Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia
Hasil
No. Pemeriksaan
1
2
3
4
5
6

Alkaloida
Flavonoida
Glikosida
Tanin
Saponin
Steroida

Keterangan: (+) Positif

Serbuk
+
+
+
+

Ekstrak
n-heksan
+

Ekstrak
etilasetat
+
+
+

Ekstrak
etanol
+
+
+
+

: mengandung golongan senyawa

(−) Negatif : tidak mengandung golongan senyawa
Hasil yang diperoleh pada tabel 4.2 di atas menunjukkan bahwa serbuk
daun sisik naga dan ekstrak etanol daun sisik naga mengandung golongan

34

senyawa kimia yang sama yaitu flavonoid, glikosida, tanin dan steroid. Ekstrak nheksan daun sisik naga hanya mengandung senyawa steroid sedangkan ekstrak
etilasetat daun sisik naga mengandung flavonoid, glikosida dan steroid dan
ekstrak etanol daun sisik naga mengandung flavonoid, glikosida, tanin dan
steroid.
Hasil tersebut diatas menuntukkan bahwa daun sisik naga memiliki
potensi sebagai antioksidan, yaitu dengan adanya senyawa-senyawa yang
mempunyai

potensi

sebagai

antioksidan umumnya merupakan senyawa

flavonoida (Kumalaningsih, 2006).
Senyawa flavonoid mengandung cincin aromatik yang terkonjugasi,
umumnya terdapat dalam tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida
(Harborne, 1987). Senyawa flavonoid tersebut bertindak sebagai penangkap
radikal bebas karena gugus hidroksil yang dikandungnya mendonorkan hidrogen
kepada radikal bebas. Senyawa tersebut mampu menetralisir radikal bebas dengan
memberikan elektron kepadanya sehingga atom dengan elektron yang tidak
berpasangan mendapat pasangan elektron dan tidak lagi menjadi radikal (Silalahi,
2006).

4.4 Hasil Pengujian Aktivitas Antioksidan
Aktivitas antioksidan dari ekstrak n-heksan, ekstrak etilasetat, ekstrak
etanol daun sisik naga diperoleh dari hasil pengukuran absorbansi 1,1-diphenyl-2picrylhidrazyl (DPPH) dengan adanya penambahan larutan uji ekstrak n-heksan,
ekstrak etilasetat dan ekstrak etanol daun sisik naga secara spektrofotometri uvvisibel.

35

4.4.1 Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum DPPH
Pengukuran serapan maksimum larutan DPPH 40 ppm dalam metanol
dengan menggunakan spektrofotometer UV-Visibel. Data hasil pengukuran
panjang gelombang maksimum dapat dilihat pada Gambar 4.1 berikut ini:

Gambar 4.1 Kurva serapan maksimum larutan DPPH 40 ppm dalam metanol
menggunakan spektrofotometer uv-visibel
Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum DPPH pada
Gambar 4.1 menunjukkan bahwa larutan DPPH dalam metanol menghasilkan
serapan maksimum pada panjang gelombang 516 nm. Panjang gelombang 516
nm, termasuk dalam kisaran panjang gelombang sinar tampak yaitu pada rentang
panjang gelombang 400 - 750 nm (Gandjar dan Abdul, 2007) serta termasuk
dalam rentang panjang gelombang DPPH yang berkisar antara 515 - 520 nm
(Molyneux, 2004; Marinova, 2011).
4.4.2

Hasil penentuan operating time larutan DPPH dalam metanol
Penentuan operating time bertujuan untuk mengetahui waktu pengukuran

yang stabil. Waktu operasional ditentukan dengan mengukur hubungan antara

36

waktu pengukuran dengan absorbansi larutan. Hasil penentuan operating time
diperoleh waktu kerja terbaik adalah pada menit ke 60

setelah penambahan

pelarut metanol. Kurva absorbani untuk operating time larutan DPPH dalam
metanol dapat dilihat pada gambar 4.2 berikut ini :

Gambar 4.2 Kurva absorbansi operating time larutan DPPH dalam methanol
4.4.3 Hasil analisis aktivitas antioksidan sampel uji
Aktivitas antioksidan ekstrak dari daun sisik naga diperoleh dari hasil
pengukuran absorbansi DPPH pada menit ke-60 dengan adanya penambahan
larutan uji dengan konsentrasi 100 ppm, 200 ppm, 400 ppm dan 800 ppm yang
dibandingkan dengan kontrol DPPH (tanpa penambahan larutan uji). Pada hasil
analisis aktivitas antioksidan ekstrak dapat dilihat adanya penurunan nilai
absorbansi DPPH yang diberi larutan uji terhadap kontrol pada setiap kenaikan
konsentrasi. Penurunan absorbansi DPPH dan persen peredaman dengan
penambahan ekstrak n- heksan, etilasetat dan etanol daun sisik naga serta vitamin
C dapat dilihat pada tabel 4.3, tabel 4.4, tabel 4.5 dan tabel 4.6 berikut:

37

Tabel 4.3 Penurunan absorbansi dan persen peredaman DPPH oleh ekstrak nheksan daun sisik naga
Larutan uji

Ekstrak
n-heksan

Konsentrasi (ppm)

Absorbansi

% pemerangkapan

0
100
200

1,128
0,982
0,882

0,00
17,19
33,84

400

0,846

37,38

800

0,653

52,23

Tabel 4.4 Penurunan absorbansi dan persen peredaman DPPH oleh ekstrak
etilasetat daun sisik naga
Larutan uji

Ekstrak
Etilasetat

Konsentrasi (ppm)

Absorbansi

% pemerangkapan

0
100
200

1,096
0,905
0,824

0,00
19,13
27,27

400

0,664

41,93

800

0,380

71,82

Tabel 4.5 Penurunan absorbansi dan persen peredaman DPPH oleh ekstrak
etanol daun sisik naga
Larutan uji

Ekstrak
etanol

Konsentrasi (ppm)

Absorbansi

% pemerangkapan

0
100
200

1,137
0,090
0,075

0,00
92,03
93,38

400

0,066

94,12

800

0,061

94,39

Tabel 4.6 Penurunan absorbansi dan persen peredaman DPPH oleh vitamin C
Larutan uji

Konsentrasi (ppm)

Absorbansi

% pemerangkapan

0,983
0,758

0,00
22,89

Vitamin C

0
1
2

0,531

45,98

4

0,189

80,77

8

0,098

90,03

38

Berdasarkan Tabel 4.3, Tabel 4.4, Tabel 4.5 dan Tabel 4.6 menunjukkan
bahwa adanya penurunan nilai absorbansi DPPH yang diberi ekstrak n- heksan,
etilasetat dan etanol daun sisik naga serta vitamin C sebagai pembandingnya
dalam metanol pada setiap kenaikan konsentrasi.
Penurunan nilai absorbansi menunjukkan aktivitas antioksidan yang
semakin besar. Ekstrak n-heksan, etilasetat dan etanol daun sisik naga
menunjukkan nilai penurunan absorbansi DPPH yang lebih kecil dibandingkan
vitamin C.
Penurunan nilai absorbansi terjadi karena larutan uji memerangkap DPPH
dan pemerangkapan terjadi karena adanya transfer elektron atom hidrogen
antioksidan kepada DPPH. Interaksi antioksidan dengan DPPH secara transfer
elektron atom hidrogen kepada DPPH, akan menetralkan radikal bebas DPPH.
Semua elektron pada radikal bebas DPPH menjadi berpasangan, akan ditandai
dengan warna larutan yang berubah dari ungu tua menjadi kuning terang dan
absorbansi pada panjang gelombang maksimumnya akan hilang (Molyneux,
2004). Contoh perhitungan persen peredaman dan nilai IC50 dapat dilihat pada
Lampiran 11, halaman 59 - 60.
Hubungan antara konsentrasi dengan persentase pemerangkapan radikal
bebas DPPH oleh ekstrak n-heksan, etilasetat dan etanol daun sisik naga serta
vitamin C dapat dilihat pada Gambar 4.3, Gambar 4.4, Gambar 4.5 dan Gambar
4.6 berikut:

39

Gambar 4.3 Grafik hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak n-heksan daun
sisik naga

Gambar 4.4 Grafik hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etilasetat daun
sisik naga

Gambar 4.5 Grafik hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun
sisik naga

40

Gambar 4.6 Grafik hasil uji aktivitas antioksidan vitamin C
Berdasarkan Gambar 4.3, Gambar 4.4, Gambar 4.5 dan Gambar 4.6 dapat
dilihat bahwa dengan peningkatan konsentrasi larutan sampel uji juga terjadi
peningkatan pada persentase peredaman DPPH. Peningkatan konsentrasi
berbanding lurus dengan aktivitas pemerangkapan DPPH, sehingga dapat
dianalogikan sebagai aktivitas antioksidan (Rafi, Niken, Elly dan Latifah, 2013).
4.4.4 Hasil analisis nilai IC50 (Inhibitory Concentration)
Nilai IC50 diperoleh berdasarkan perhitungan persamaan regresi linier
yang diperoleh dengan cara memplot konsentrasi larutan uji dan persen
pemerangkapan DPPH, dimana konsentrasi sampel (ppm) sebagai absis (sumbu
X) dan nilai % pemerangkapan sebagai ordinat (sumbu Y). Nilai IC50 digunakan
sebagai parameter untuk menentukan aktivitas antioksidan sampel uji (Shirwaikar,
Kirti dan Punitha, 2006).
Hasil persamaan regresi linier dan hasil analisis IC50 yang diperoleh dari
ekstrak ekstrak n-heksan, etilasetat dan etanol daun sisik naga serta vitamin C
dapat dilihat pada Tabel 4.7 dan Gambar 4.7 berikut ini:

41

Tabel 4.7

Hasil persamaan regresi linier dan hasil analisis IC50 yang
diperoleh dari ekstrak n-heksan, etilasetat, etanol daun sisik naga
dan vitamin C
Larutan Uji

Persamaan regresi

Ekstrak n-heksan daun sisik naga
Ekstrak etilasetat daun sisik naga
Ekstrak etanol daun sisik naga
Vitamin C

Y = 0,0578+12,53
Y = 0,0838 X + 12
Y = 0,0724 X - 53,08
Y = 11,893X + 0,49

IC50 (ppm)
648,26
453,46
42,62
4,16

700

Inhibitor Concentration 50

600
500
Ekstrak n-heksan
Ekstrak etilasetat

400

Ekstrak etanol
300
Vitamin C
200
100
0
Zat Uji

Gambar 4.7 Aktivitas antioksidan penangkap radikal bebas
Berdasarkan tabel 4.7 dan gambar 4.7 di atas menunjukkan bahwa ekstrak
n-heksan dan ekstrak etilasetat daun sisik naga menunjukkan aktivitas antioksidan
kategori paling lemah dengan nilai IC50 berturut-turut sebesar 648,26 ppm dan
453,46 ppm, ekstrak etanol daun sisik naga menunjukkan aktivitas antioksidan
kategori sangat kuat dengan nilai IC50 sebesar 42,62 ppm sedangkan vitamin C
juga memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC50 sebesar
4,16 ppm.

42

Hal ini karena ekstrak n-heksan, ekstrak etilasetat dan ekstrak etanol daun
sisik naga diperoleh dengan cara maserasi bertahap menggunakan pelarut mulai
dari non polar, semi polar hingga polar, dimana pelarut non polar dan semi polar
hanya menarik senyawa-senyawa non-polar dan semi polar yang kemungkinan
tidak mempunyai aktivitas antioksidan sehingga senyawa-senyawa polar seperti
flavonoid yang mempunyai aktivitas antioksidan hanya terdapat pada ekstrak
etanol daun sisik naga yang menggunakan pelarut polar sedangkan vitamin C
merupakan senyawa murni.
Tabel 4.8 Kategori nilai IC50 sebagai antioksidan
No.

Kategori

Konsentrasi (ppm)

1.

Sangat kuat

< 50

2.

Kuat

50 – 100

3.

Sedang

101 – 150

4.

Lemah

151 – 200

Kemampuan sampel uji dalam merangkap DPPH (1,1-diphenyl-2picryhidrazyl) sebagai radikal bebas dalam larutan metanol dengan nilai IC50
(konsentrasi sampel uji yang mampu memerangkap radikal bebas sebesar 50%)
digunakan sebagai parameter untuk menentukan aktivitas antioksidan sampel uji
(Prakash, 2001).

43

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat diambil
kesimpulan bahwa:
a. Hasil karakterisasi simplisia daun sisik naga secara berturut-turut diperoleh
kadar air 4,31%, kadar sari larut air 24,34%, kadar sari larut etanol 8,31%,
kadar abu total 6,38%, dan kadar abu tidak larut asam 0,47%.
b. Hasil skrining fitokimia simplisia daun sisik naga menunjukkan adanya
senyawa kimia golongan flavonoid, glikosida, steroida dan tanin.
c. Ekstrak n-heksan dan ekstrak etilasetat daun sisik naga memiliki aktivitas
antioksidan kategori lemah dan ekstrak etanol daun sisik naga memiliki
aktivitas antioksidan kategori sangat kuat.
d. Hasil

pemeriksaan

aktivitas

antioksidan

dengan

menggunakan

spektrofotometer uv-visibel pada panjang gelombang 516 nm diperoleh
nilai IC50 dari masing-masing ekstrak n-heksan, etilasetat dan etanol daun
sisik naga serta vitamin C sebesar 648,26 ppm, 453,46 ppm, 42,62 ppm
dan 4,16 ppm.
5.2 Saran
Disarankan pada peneliti selanjutnya untuk melakukan isolasi terhadap
senyawa yang berkhasiat sebagai antioksidan pada masing-masing ekstrak.

44

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uraian Tumbuhan
Uraian tumbuhan meliputi habitat, morfologi, sistematika, nama daerah,
nama asing, kandungan dan kegunaan dari tumbuhan daun sisik naga.
2.1.1 Habitat
Tumbuhan sisik naga berasal dari tropika Asia. Tumbuhan ini telah
menyebar ke daerah-daerah tropika lainnya yakni termasuk Indonesia. Tumbuhan
sisik naga umumnya dapat tumbuh dengan baik di dataran rendah sampai
ketinggian 1000 m di atas permukaan laut (Heyne, 1987).
2.1.2 Morfologi tumbuhan
Tumbuhan sisik naga merupakan epifit kecil dengan akar tipis, merayap
jauh. Daun satu sama lain tumbuh pada jarak yang pendek, tangkai pendek, tidak
terbagi, pinggir utuh, berdaging atau seperti kulit, permukaan daun tidak berbulu
sama sekali (Heyne, 1987).
2.1.3 Sistematika tumbuhan
Sistematika dari tumbuhan daun sisik naga adalah sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Divisi

: Pteridophyta

Kelas

: Dicotyledonae

Bangsa

: Polypodiales

Suku

: Polypodiaceae

Marga

: Pyrrosia

Jenis

: Pyrrosia piloselloides (L) M.G.Price

6

2.1.4 Nama daerah
Tumbuhan ini umumnya dikenal di Indonesia dengan sebutan sisik naga,
nama daerahnya yaitu picisan dan sakat ribu-ribu (Sumatera), pakis duwitan
(Jawa), paku duduwitan (Sunda).
2.1.5 Nama asing
Nama asing tumbuhan sisik naga yaitu Dubbletjesvarent, duiteblad,
duitvaren (Belanda), bao shu lian (China) (Hariana, 2011).
2.1.6 Kandungan kimia dan kegunaan
Bagian tumbuhan yang digunakan sebagai bahan obat adalah daun. Daun
sisik naga mengandung flavonoida dan steroida (Hariana, 2011).
Daun sisik naga digunakan untuk mengobati beberapa penyakit seperti
radang gusi, sariawan dan kanker (Hariana, 2011).
2.1.7 Uraian kandungan kimia
2.1.7.1 Steroida/triterpenoida
Steroid adalah triterpena yang kerangka dasarnya sistem cincin
siklopentano perhidrofenantren dan merupakan senyawa organik yang berasal dari
hewan dan tumbuhan dan dengan struktur inti molekulnya C27, tetrasiklik dengan
susunan 3 cincin segi enam dan 1 cincin segi lima (Harbone, 1987).
Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari 6
satuan isopren dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik yai