Pengujian Spesifikasi Antibodi Monoklonal terhadap Escherichia coli O157:H7
PENGUJIAN SPESIFISITAS ANTIBODI MONOKLONAL
TERHADAP Esclzer.iclzin coli 0157:H7
Oleh :
Husniyati Rahmah
F 31.1826
1999
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANTAN
Ih'STITUT PERTANLAN BOGOR
BOGOR
I-lusiiiyati Ralinlah.
F 3 1.1826.
Peugujiaii Spesifisitas Antibodi Monolclonal
Terlladap Escherichirr coli 0157:H7.
Dibawali bimbingan
Ratih Dewanti-
a i i i 1999.
RINGKASAN
f euelitiau iui dilahdliau untulc meuguji kespesifacan autibodi monokloual
terhadap E. coli 0157H7 yaug diproduksi oleh lclon sel
-
sel iiibridoma B l l E l ,
B I I F ) , C9B9 dau B12G12 dan aplilcasiuya dalam ELISA yaug dimodifikasi dalarn
ha1 reage11 pemblok dan eekuensi pencucian. S e l hibridorna h i diperoleh dari hasil
fusi sel mieloma dau sel l i q a mencit yaug di hunisasi deligall sel mati E. coli
0157:H7
Pei~gujiau spesifisitas dilakukan dengan rnetode ELISA tidak langsullg,
dimana autigen yang diuji diadsorbsi oleh dasar sumur pelat, pelat diblok dengan
I-eagell l~ernblolcyang bertujuan uiituk memblolc dasar sumur yaug tidak ditempeli
;~litiscn.kemudia~i dilakultan proses pe~icuciaiiuiituk ~ne~ighilangkaii
reagen yang
i
t
t i ; t
I
I
I
1 1 i c 1 . Sctelali itu ditamballlta~i entibodi yang altan diuji,
;~ntibodisckui~dcl.yaitu a~~tiimunoglobuli~i
yallg berlabel enzim diniasukkau, terakliir
dita~i~balllca~i
substrat liroiiiogenilt ABTS seliiiigga membentuk wallla bijau. Wailla
I
e b c i t d
l liilai opticrrl derrsi/ynya dengan ELISA reader pada paujaug
-gelombang 412 urn.
Antibodi dari kloii BI 1EI bereaksi positif terutama dengan E. coli 0157:H7
ATCC 35150 , Shigella, Klebsiella azaetlue, Eriterobacter uglonzerails darr
Salrrror~ellablocklejj isolat kliiiis dengan nilai absorbansi alitara 0,4-0,7, antibodi
monokloiial dari klon C9B9 menu~ijukkan reaksi positif telutarna deugan E. coli
0157:H7, E. coli isolat klinis 007.6, 006.3, RC.2.3, Dl 1.1. E. coli 1377 dan semua
antigen no11 E. coli 0157tH7 dengan uilai absorbansi antara 0,2-0,3, semeutara itu
a~itibodi inoliolclo~lal dari itlon B l l F l bereaksi positif terutama dengau E.coli
0157tH7, E. coli BCC, dan Ei~terobacter aerogerzosa, ha1 iui terlihat dari uilai
absorbansi yaug lebih dari 0,13 dan autibodi monoklonal dari kloii B12G12 bereaksi
dens;lli fi'iebsiellrr eh.~~nrdii
dali Grterobucter sp dengau uilai absorbansi 0: 110 dau
0.146.
Dali basil l)eiigujiall, lceeulpat autibodi lliouokloilal tersebut tidak cukup
spesifilc sebagaiinana dil~al-aplca~lltarena terjadiiiya reaksi silang. Realcsi silaug
diduga teijadi kareua beberapa ha1 yaitu autigei~yaug disuntikkan me~upakansel
utuli E. coli OIj7:H7 yang luemiliki epitop berluacalu - macam, proses I l o n u ~ gyaug
Iia~ly;~
dilakukal~satu kali dan Iterusaltan aiitibodi i~~ouolcloiial
selama peiiyimpauan
Pel-cobaaii inodXiasi reagen peinblok dilakulcali dengaii mengganti BSA
(Bovirre Serlr~~z
Albunzirz) sebagai reageu peulblok deugan kaseiu. I
TERHADAP Esclzer.iclzin coli 0157:H7
Oleh :
Husniyati Rahmah
F 31.1826
1999
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANTAN
Ih'STITUT PERTANLAN BOGOR
BOGOR
I-lusiiiyati Ralinlah.
F 3 1.1826.
Peugujiaii Spesifisitas Antibodi Monolclonal
Terlladap Escherichirr coli 0157:H7.
Dibawali bimbingan
Ratih Dewanti-
a i i i 1999.
RINGKASAN
f euelitiau iui dilahdliau untulc meuguji kespesifacan autibodi monokloual
terhadap E. coli 0157H7 yaug diproduksi oleh lclon sel
-
sel iiibridoma B l l E l ,
B I I F ) , C9B9 dau B12G12 dan aplilcasiuya dalam ELISA yaug dimodifikasi dalarn
ha1 reage11 pemblok dan eekuensi pencucian. S e l hibridorna h i diperoleh dari hasil
fusi sel mieloma dau sel l i q a mencit yaug di hunisasi deligall sel mati E. coli
0157:H7
Pei~gujiau spesifisitas dilakukan dengan rnetode ELISA tidak langsullg,
dimana autigen yang diuji diadsorbsi oleh dasar sumur pelat, pelat diblok dengan
I-eagell l~ernblolcyang bertujuan uiituk memblolc dasar sumur yaug tidak ditempeli
;~litiscn.kemudia~i dilakultan proses pe~icuciaiiuiituk ~ne~ighilangkaii
reagen yang
i
t
t i ; t
I
I
I
1 1 i c 1 . Sctelali itu ditamballlta~i entibodi yang altan diuji,
;~ntibodisckui~dcl.yaitu a~~tiimunoglobuli~i
yallg berlabel enzim diniasukkau, terakliir
dita~i~balllca~i
substrat liroiiiogenilt ABTS seliiiigga membentuk wallla bijau. Wailla
I
e b c i t d
l liilai opticrrl derrsi/ynya dengan ELISA reader pada paujaug
-gelombang 412 urn.
Antibodi dari kloii BI 1EI bereaksi positif terutama dengan E. coli 0157:H7
ATCC 35150 , Shigella, Klebsiella azaetlue, Eriterobacter uglonzerails darr
Salrrror~ellablocklejj isolat kliiiis dengan nilai absorbansi alitara 0,4-0,7, antibodi
monokloiial dari klon C9B9 menu~ijukkan reaksi positif telutarna deugan E. coli
0157:H7, E. coli isolat klinis 007.6, 006.3, RC.2.3, Dl 1.1. E. coli 1377 dan semua
antigen no11 E. coli 0157tH7 dengan uilai absorbansi antara 0,2-0,3, semeutara itu
a~itibodi inoliolclo~lal dari itlon B l l F l bereaksi positif terutama dengau E.coli
0157tH7, E. coli BCC, dan Ei~terobacter aerogerzosa, ha1 iui terlihat dari uilai
absorbansi yaug lebih dari 0,13 dan autibodi monoklonal dari kloii B12G12 bereaksi
dens;lli fi'iebsiellrr eh.~~nrdii
dali Grterobucter sp dengau uilai absorbansi 0: 110 dau
0.146.
Dali basil l)eiigujiall, lceeulpat autibodi lliouokloilal tersebut tidak cukup
spesifilc sebagaiinana dil~al-aplca~lltarena terjadiiiya reaksi silang. Realcsi silaug
diduga teijadi kareua beberapa ha1 yaitu autigei~yaug disuntikkan me~upakansel
utuli E. coli OIj7:H7 yang luemiliki epitop berluacalu - macam, proses I l o n u ~ gyaug
Iia~ly;~
dilakukal~satu kali dan Iterusaltan aiitibodi i~~ouolcloiial
selama peiiyimpauan
Pel-cobaaii inodXiasi reagen peinblok dilakulcali dengaii mengganti BSA
(Bovirre Serlr~~z
Albunzirz) sebagai reageu peulblok deugan kaseiu. I