Efekitifitas Ekstrak Viadu Karet Dalant Menghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli

EFEKTIFITAS EKSTRAK MADU KARET DALAM

MENGHAMBAT PERTUMBUHAN

BAKTERI Escherichia coli

Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA KEDOKTERAN

OLEH :

BAGUS KUSUMA WARDHANA

1111103000032

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

JAKARTA

1435 H / 2014 M

Dengan ini saya menyatakan bahwa :

l.

Laporan penelitian ini merupakan hasil karya asli saya yang diajukan untuk memenuhi salah satu persyaratan memperoleh gelar strata

I

di UIN Syarif

Hidayatullah Jakarta.

2.

Semua sumber yang saya gunakan dalam penulisan ini telah saya cantumkan sesuai dengan ketentuan yang berlaku di UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.

3.

Jika di kemudian hari terbukti bahwa karya

ini

bukan karya asli saya atau merupakan hasil jiplakan dari karya orang lain, maka saya bersedia menerima sanksi yang berlaku di UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.

i

t-l

t I I

f-Bdgus Kusuma Wardhana

EFEKTIFITAS EKSTRAK MADU KARET DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN

BAKTERI Escherichia coli

Laporan Penelitian

Diajukan kepada Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran dan

Ilmu Kesehatan untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran (S.Ked)

Oleh

Bagus Kusuma Wardhana NIM: 1111103000032

Pembimlqing 2

LI

vl'

dr. Siti Nur Aisyah Jauharoh. Ph.D

NIP. 19770102 200501 2007

PROGRAM STUDI PENDIDIKAI\ DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

JAKARTA 1435 H I 2014l1M dr. Erike Anggraini S. M.Pd

Laporan Penelitian berjudul EFEKTIFITAS EKSTRAK VIADU KARET DALANT

MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli yang diajukan oleh

Bagus Kusuma Wardhana

(NIM:

1111103000032), telah diujikan dalam sidang di

Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan pada5 September 2014. Laporan penelitian ini telah diterima sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Kedokteran (S. Ked)

pada Program Studi Pendidikan Dokter.

I akarta, 5 September 201 4

DEWAN PENGUJI

Ketua Sidang

cw&

dr. Erike Anegraini S. M.Pd

Pembimbipg

---- //

Vfi

NrP. 19810926 201101 2007

Yulia

NIP. 19

Dekan FKIK UIN

-dr. Siti Nur Aisyah Jauharoh. Ph.D

NrP. 19770102 200s01 2 007

Penguji 2

dCnvr-t5

dr. Alyya Siddiqa. Sp. FK

NrP. 197s080E2409n2005 PIMPINAN FAKULTAS

Kaprodi PSPD FKIK UIN

Penguji 1

S.Si, M.Biomed

90915 200801 2022

T

/r"-p.or.ffidin,sp.And

ar.

wi\ri

a.ain{ H,r.ciri.

spcr

-

_NrF]fqil

to23 2ot 1o1 2 oo3

v

Kata Pengantar

Alhamdulillah, dengan mengucapkan syukur atas kehadirat Allah SWT, atas rahmat dan hidayah-Nya akhirnya penulis dapat menyelesaikan dan menyusun

skripsi ini dengan judul “EFEKTIFITAS EKSTRAK MADU KARET DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli.

Dalam menyusun skripsi ini, penulis tidak akan melupakan jasa-jasa dari berbagai pihak yang telah bersedia meluangkan waktunya untuk memberikan petunjuk, bimbingan, nasehat-nasehat serta semangat yang sangat berguna bagi penulis. Sehubungan dengan itu, penulis menyampaikan ucapan terimakasih kepada :

1.Prof. DR. (hc). dr. M.K. Tadjudin, Sp. And selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2.dr. Witri Ardini, M.Gizi, SpGK selaku Ketua Program Studi Pendidikan Dokter 3.dr. Erike Anggraini S, M.Pd selaku pembimbing pertama.

4.dr Siti Nur Aisyah Jauharoh, PhD selaku pembimbing kedua. 5.Orang tua (Suharnoto, ST, M.Kes dan Ninik S, SKM, M.Kes)

6.Dr. P.A. Kodrat Pramudho, SKM, M. Kes selaku Kepala Balai Besar Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pencegahan Penyakit Menular Jakarta

7.Ibu Murni selaku staf Balai Besar Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pencegahan Penyakit Menular Jakarta

8.Kak Bayu selaku kakak kelas jurusan Kesehatan Masyarakat UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

9.Dosen dan staf Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

vi

Penulis berharap bahwa skripsi ini dapat berguna untuk pihak-pihak lain yang memerlukan. Namun penulis juga mengharapkan kritik dan saran yang sifatnya membangun untuk kemajuan wawasan ilmu pengetahuan.

Jakarta, 5 September 2014

vii

ABSTRAK

Bagus Kusuma Wardhana. Program Studi Pendidikan Dokter. EFEKTIFITAS EKSTRAK MADU KARET DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli. 2014.

Angka kejadian diare akibat Escherichia coli pada anak di Indonesia masih cukup tinggi. Penggunaan madu sebagai pilihan alternatif terapi diare akibat Escherichia coli pada anak diharapkan dapat menurunkan angka kejadian diare di Indonesia. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antimikroba madu dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli. Aktivitas antibakteri dari sampel madu karet yang diproduksi oleh lebah madu (Apis mellifera) diukur menggunakan metode difusi. Sampel madu karet dibagi menjadi 4 variasi konsentrasi (20%, 25%, 50%, 100%). Penelitian ini menggunakan 2 tipe pelarut yaitu aseton dan n-heksan. Hasil dari proses ekstraksi madu karet berupa residu/cairan dan sedimen/endapan. Pada residu madu tidak memiliki daya hambat. Sedangkan pada sedimen madu dan madu karet murni tanpa proses ekstraksi memiliki efek daya hambat pada konsentrasi 25-100%. Masing-masing kelompok uji yang memiliki efek menghambat terhadap bakteri Escherichia coli dibandingkan dengan amoksisilin 25 ug (22,1 mm). Kesimpulan, madu murni pada konsentrasi 100% (29,87 mm) memiliki daya hambat lebih baik dibandingkan dengan kelompok uji lainnya pada penelitian ini (p = 0,000).

Kata Kunci : daya hambat, madu, Escherichia coli

Bagus Kusuma Wardhana. Medical Study Program of FMHS. THE EFFECTIVENESS OF RUBBER HONEY EXTRACT IN INHIBITING

Escherichia coli GROWTH. 2014

Diarrhea caused by Escherichia coli infection incidence is still high among children in Indonesia. Honey has been one of the alternatives for the therapy of diarrhea caused by Escherichia coli infection in children. This study purpose to know antimicroba effect in honey to inhibit Escherichia coli growth. Once clinically proven to be effective, it may be widely used with the hope of decreasing

viii

the number of diarrhea cases significantly. Antibacterial effect of the rubber honey produced from the honey bee (Apis mellifera) is measured using the diffusion method. In this study, the rubber honey sample is divided into 4 different concentrations (20%, 25%, 50%, and 100%) and is dissolved in either aceton or n-hexane solvents. The results of the para honey extraction process, the residue (fluid) and the sediment (precipitate), are then analyzed. The residue does not show any inhibitory quality, whereas the honey sediment and the pure un-extracted rubber honey appear to have inhibitory effect at the concentration of 25% – 100%. Each of these test groups has inhibitory effect to Escherichia coli bacteria which was compared to that of Amoxicillin 25 ug (22.1 mm). In conclusion, this study proves that pure honey of 100% concentration (29.87 mm) has better inhibitory

effect compared to those of other test groups’ (p = 0,000). KEYWORDS : inhibitory effect, honey, Escherichia coli

ix

DAFTAR ISI

Lembar Judul... i

Lembar Pernyataan Keaslian Karya... ii

Lembar Persetujuan Pembimbing... iii

Lembar Pengesahan... iv

Kata Pengantar... v

Abstrak... vii

Daftar Isi... ix

Daftar Tabel... xi

Daftar Gambar... xii

Daftar Lampiran... xiii

Bab 1 : Pendahuluan... 1

1.1. Latar Belakang... 1

1.2. Rumusan Masalah... 2

1.3. Hipotesis... 3

1.4. Tujuan... 3

1.4.1. Tujuan Umum... 3

1.4.2. Tujuan Khusus... 3

1.5. Manfaat Penelitian... 3

Bab 2 : Tinjauan Pustaka... 4

2.1. Landasan Teori...4

2.1.1. Klasifikasi Lebah Penghasil Madu... 4

2.1.2. Definisi Madu... 5

2.1.3. Manfaat Madu... 7

2.1.4. Mekanisme Agen Antimikroba (Flavonoid)... 10

2.1.5. Kriteria Uji Madu... 11

2.1.6. Klasifikasi Zona Hambat Amoksisilin... 13

2.1.7. Uji Sensitifitas Agen Antimikroba...14

2.1.8. Morfologi dan Klasifikasi Escherichia coli... 15

2.1.9. Jenis-jenis Bakteri Escherichia coli... 17

2.1.10. Penyakit-penyakit akibat Escherichia coli...20

x

2.3. Definisi Operasional... 24

Bab 3 : Metode Penelitian... 26

3.1. Desain Penelitian... 26

3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian... 26

3.3. Sampel Penelitian... 26

3.4 Identifikasi Variabel... 27

3.4.1.Variabel Bebas... 27

3.4.2. Variabel Terikat... 27

3.5. Alat dan Bahan Penelitian... 28

3.5.1. Alat Penelitian... 28

3.5.2. Bahan Penelitian... 28

3.6. Cara Kerja Penelitian... 28

3.6.1. Sterilisasi alat... 28

3.6.2. Pembuatan media agar... 29

3.6.3. Kultur Bakteri... 29

3.6.4. Prosedur Ekstraksi... 29

3.6.5. Pembuatan Variabel Konsentrasi... 30

3.6.6. Metode disk diffusion... 30

3.7. Pengolahan dan Analisis Data... 31

3.8. Alur Penelitian... 32

Bab 4 : Hasil dan Pembahasan... 33

4.1. Hasil Uji Standarisasi Madu... 33

4.2. Metode Ekstraksi Madu Karet... 33

4.3. Hasil Uji Aktivitas Agen Antibakteri Ekstrak Madu... 34

Bab 5 : Kesimpulan dan Saran.... 41

5.1. Kesimpulan... 41

5.2. Saran... 41

Daftar Pustaka... 42

xi

DAFTAR TABEL

Tabel 2.2 Uji madu berdasarkan SNI 01-3545-2004... 12

Tabel 2.3 Klasifikasi Zona Hambat Amoksisilin terhadap bakteri... 13

Tabel 4.1 Hasil ekstrak cair-cair madu karet... 33

Tabel 4.2 Hasil pengukuran ... 35

Tabel 4.3 Kriteria Hasil Zona Hambat... 38

xii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Lebah Apis mellifera ...4

Gambar 2.2 Escherichia coli ...15

Gambar 2.3 Escherichia coli ... 15

Gambar 2.4 Dinding Bakteri Gram Negatif... 17

Gambar 2.5 Patofisiologi Escherichia coli... 22

Gambar 2.6 Kerangka Konsep... 23

Gambar 3.1 Alur Penelitian... 32

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Hasil Uji Disk Difusi... 45

Lampiran 2. Uji Normalisasi SPSS... 47

Lampiran 3. Hasil Post Hoc One Way Anova... 48

Lampiran 4. Metode Ekstraksi... 49

Lampiran 5. Surat Determinasi... 50

Lampiran 6. Surat Keterangan Lebah Apis mellifera... 53

1

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kematian anak-anak di dunia akibat diare menurut data Centers for Disease Control and Prevention tahun 2013, sebanyak 2.195 anak per hari1. Kejadian ini melebihi data kematian anak akibat AIDS, campak, maupun malaria. Sedangkan menurut data dari National Center of Biotechnology Information kematian akibat infeksi sebesar 64% pada anak-anak dengan usia di bawah 5 tahun pada data tahun 2010 mencapai 6 juta anak. Di Indonesia diare masih menjadi masalah kesehatan dengan morbiditas dan mortalitasnya yang cukup tinggi. Diare merupakan penyebab kematian ke-13 di Indonesia dan penyebab kematian utama pada balita. Survei yang dilakukan oleh Subdit Diare Departemen Kesehatan dari tahun 2000 sampai 2010 menunjukkan adanya kenaikan setiap tahunnya, pada tahun 2000 tercatat kejadian diare sebesar 301/1000 penduduk dan tahun 2010 menunjukkan 411/1000 penduduk2.

Penyakit diare dapat disebabkan oleh infeksi bakteri, virus, maupun parasit. Beberapa bakteri yang sering menyebabkan diare yaitu Escherichia coli, Campylobacter, Shigella, Vibrio cholerae, dan Salmonella. Sedangkan pada infeksi virus dapat disebabkan oleh rotavirus maupun adenovirus. Pada golongan parasit yaitu Giardia intestinalis, Cryptosporidium parvum, Entamoeba histolytica, dan Cyclospora cayetanensis. Faktor risiko terbesar pada diare merupakan kebersihan yang buruk yang memudahkan tumbuhnya berbagai macam kuman penyebab infeksi.

Bakteri Escherichia coli yang bersifat flora normal di usus dapat berubah menjadi patogen sehingga menginfeksi saluran pencernaan. Pada saat mengkonsumsi makanan yang tingkat kebersihannya rendah, maka bakteri Escherichia coli akan masuk ke usus dan menginfeksinya. Hal ini diperburuk ketika sistem imun menurun. Rusaknya struktur saluran pencernaan akibat infeksi bakteri Escherichia coli akan menurunkan fungsi saluran pencernaan sehingga terjadi diare.

2

Penyakit lain yang dapat disebabkan oleh infeksi bakteri Escherichia coli yaitu Infeksi Saluran Kemih (ISK). Escherichia coli merupakan penyebab infeksi bakteri utama pada ISK. Diperkirakan 70-95% termasuk dalam penyakit yang didapat pada komunitas dan 50% infeksi nosokomial. Kasus ISK di dunia diperkirakan sebesar 150 juta per tahun22.

Telah banyak pengobatan secara medikamentosa untuk mengatasi diare dan ISK akibat infeksi mikroorganisme terutama Escherichia coli. Namun berkembang juga pengobatan alternatif menggunakan herbal dengan madu. Madu dianggap mempunyai efek antibakteri dan antiradang yang membantu penyembuhan dinding usus akibat infeksi mikroorganisme. Efektivitas madu yang dianggap memiliki kemampuan sebagai antibakteri sudah banyak dibuktikan oleh peneliti-peneliti terdahulu5. Pada penelitian terdahulu yang dilakukan oleh Agil Dananjaya (2013)23 tentang ekstrak metanol fraksi etil asetat madu terhadap pertumbuhan E-coli secara in vitro menggunakan metode disk diffusion dengan variasi konsentrasi 12,5%, 25%, 50%, dan 100%. Pada konsentrasi 12,5%, 25%, 50%, dan 100% menghasilkan masing-masing rata-rata zona hambat sebesar 11,8 mm, 16,6 mm, 19,6 mm, dan 25,6 mm.

Hal ini juga sesuai dengan Al-Quran surat An Nahl ayat 69 yang

menyebutkan “Dari perut lebah keluar minuman (madu) yang

bermacam-macam warnanya dan didalamnya terdapat obat yang dapat

menyembuhkan manusia”.

Oleh sebab itu, peneliti tertarik dalam meninjau lebih dalam lagi tentang efektivitas ekstrak madu dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli sehingga nantinya dapat dipergunakan sebagai alternatif terapi terhadap penyakit akibat Escherichia coli.

1.2 Rumusan Masalah

Apakah madu karet efektif menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli ?

1.3 Hipotesis

Madu karet efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli.

1.4 Tujuan

1.4.1 Tujuan Umum

Mengetahui pengaruh madu karet dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli.

1.4.2 Tujuan Khusus

Mengetahui konsentrasi ekstrak madu karet yang paling efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli.

1.5 Manfaat Penelitian

Masyarakat dapat mengetahui informasi tentang fungsi madu karet dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli sebagai salah satu bakteri penyebab penyakit diare.

4

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Landasan Teori

2.1.1 Klasifikasi Lebah Penghasil Madu

 Kingdom : Animalia

 Filum : Arthropoda

 Kelas : Insecta

 Ordo : Hymenoptera

 Famili : Apidae

 Genus : Apis

 Spesies : Apis andreniformis, Apis cerana, Apis dorsata, Apis florea, Apis koschevnikovi, Apis laboriosa, Apis mellifera

Sumber : Ketut Patra, 20114

Di dunia terdapat kurang lebih 20.000 jenis lebah. Namun hanya 6 jenis yang tergolong lebah penghasil madu. Diantara lebah penghasil madu tersebut, hanya terdapat 2 jenis lebah yang dapat diternakkan secara rasional dan ekonomis, yaitu Apis mellifera dan Apis cerana. Jenis yang hidup di Asia, termasuk di Indonesia yaitu Apismellifera indica.

Gambar 2.1 Lebah Apis mellifera

Lebah madu adalah jenis serangga yang berperan dalam menghasilkan madu. Lebah ini digolongkan menjadi 3 jenis yaitu lebah ratu, lebah pejantan, dan lebah pekerja. Serangga ini mengubah nektar yang dihasilkan tanaman menjadi madu selanjutnya madu akan disimpan dalam sarang lebah3.

2.1.2 Definisi Madu

Madu merupakan salah satu bahan pangan yang memiliki nilai gizi tinggi dan memiliki rasa yang manis. Lebah merupakan penghasil madu dengan cara megumpulkan kemudian mengubah hasil sekresi (nektar) dari salah satu tanaman lalu dicampurkan dengan invertin dan disimpan didalam sarangnya. Nektar merupakan cairan manis atau senyawa kompleks yang dihasilkan oleh kelenjar necterifier tanaman. Nektar terdiri dari zat gula, air, dan zat zat lainnya. Lebah harus mengumpulkan antara 3 kilogram sampai 4 kilogram nektar agar menghasilkan 1 kilogram madu.

Berdasarkan cara pengambilannya, madu dikelompokkan menjadi 2, yaitu :

1. Madu liar adalah madu yang diambil langsung dari sarang lebah yang terdapat di pohon-pohon di alam bebas.

2. Madu ternak adalah madu yang dihasilkan dipeternakan, lebah tinggal dalam kotak yang terbuat dari kayu dan suasananya dibuat senyaman mungkin dengan lokasi peternakan lebah harus dekat dengan tanamannya3.

Madu memiliki beberapa komposisi yaitu air (17,2%), zat gula (81,3%), dan sisanya merupakan asam-asam amino, vitamin, mineral (besi, fosfor, magnesium, aluminium, natrium, kalsium, dan kalium), enzim, hormon, zat bakterisida, dan zat aromatik. Zat gula dalam madu memiliki komposisi yaitu fruktosa (38,19%), glukosa (31,28%), sukrosa (5%), maltosa dan disakarida lain (6,83%). Madu memiliki kandungan vitamin C (asam askorbat), vitamin B6 (piridoksin), thiamin (B1),

6

riboflavin (B2), niasin, asam pantotenat, biotin, asam folat, dan vitamin K. Selain itu madu memiliki kandungan asam organik yaitu asam asetat, asam butirat, format, suksinat, glikolat, malat, proglutamat, sitrat, dan piruvat3.

Enzim yang terdapat pada madu murni memiliki keuntungan untuk kesehatan manusia, tetapi dalam proses pemanasan dan penyimpanan yang terlalu lama dapat mengurangi aktivitas enzim11. Madu juga memiliki beberapa jenis enzim yang terdapat didalamnya seperti enzim peroksidase, lipase, diastase, invertase, dan glukosa oksidase. Masing-masing enzim memiliki fungsi yang berbeda, yaitu :

1. Enzim diastase merupakan enzim yang mengubah karbohidrat komplek (polisakarida) menjadi karbohidrat yang sederhana (monosakarida)

2. Enzim invertase adalah enzim yang dapat memecah molekul sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa.

3. Enzim oksidase adalah enzim yang membantu proses oksidasi glukosa menjadi asam peroksida.

4. Enzim peroksidase berfungsi dalam melakukan proses oksidasi metabolisme.

Dalam 1 kg madu sama dengan 3.280 kalori. Kandungan kalori ini termasuk sangat besar. Sehingga nilai kalori 1 kg madu setara dengan 4 kg kentang, 5,7 liter susu, 1,68 kg daging, 25 buah pisang, 40 buah jeruk, dan 50 butir telur ayam. Selain itu madu memiliki kandungan karbohidrat yang tinggi sedangkan rendah lemak.

Faktor Penentu Kualitas Madu : 1. Kadar Air

Kuantitas kadar air dapat menentukan tingkat keawetan madu. Semakin tinggi kadar air maka semakin mudah terjadinya fermentasi. Hal ini disebabkan adanya jamur yang tumbuh aktif

didalam madu. Banyaknya kandungan air dalam madu dapat diukur menggunakan alat hydrometer.

2. Keasaman

Dalam kandungan madu terdapat kandungan asam organik seperti asam sitrat, asam asetat, asam laktat, asam butirat, asam oksalat, asam suksinat, dan asam format. Semakin tinggi kadar asam inilah yang dapat memperngaruhi pertumbuhan dari bakteri. Tetapi dengan kadar asam yang sangat tinggi maka madu tersebut tidak dapat dikonsumsi oleh manusia.

3. Glukosa

Kandungan gula pada nektar sebagian besar merupakan sukrosa. Selama proses pematangan maka enzim invertase akan memcah sukrosa menjadi lebih sederhana lagi yaitu fruktosa dan glukosa. 4. Warna

Madu secara umum memiliki warna coklat. Namun ada beberapa faktor yang mempengaruhi warna madu, yaitu jenis asal tanaman yang diambil nektarnya, sifat tanah asal tanaman, serta tingkat pemanasan. Pemanasan madu dalam jangka yang lama akan merubah warna madu menjadi lebih tua dan akan menimbulkan kerak pada dasar madu.

5. Aroma

Aroma madu akan sejalan dengan warna madu. Makin gelap warna madunya maka aromanya akan makin keras atau menyengat. Tetapi jika kemasan tidak ditutup rapat maka aroma akan cepat menguap. Begitu juga jika dilakukan pemanasan, maka aroma akan mudah menghilang.

2.1.3 Manfaat Madu

Di dalam Al-Qur’an pada surat An Nahl ayat 68 yang berbunyi

“Dan Tuhanmu mewahyukan kepada lebah “Buatlah sarang sarang di

bukit-bukit, di pohon pohon kayu, dan di tempat yang dibikin

8

makanlah dari tiap tiap (macam) buah-buahan dan tempuhlah jalan Tuhanmu yang telah dimudahkan (bagimu). Dari perut lebah itu keluar minuman (madu) yang bermacam macam warnanya, di dalamnya terdapat obat yang menyembuhkan bagi manusia. Sesungguhnya pada yang demikian itu benar benar terdapat tanda kebesaran Tuhan bagi

orang orang yang memikirkan.”

Beberapa penelitian menyebutkan khasiat ataupun manfaat dari madu. Beberapa manfaat madu, yaitu :

1. Madu dapat mempercepat proses penyembuhan pada luka bakar4. Jika madu dioleskan pada kulit yang mengalami luka bakar, maka madu akan mengurangi rasa sakit dan mencegah pembentukan lepuhan.

2. Madu dapat mengatasi masalah insomnia (susah tidur). Dokter asal Inggris berpendapat bahwa madu memiliki kandungan zat yang berfungsi untuk mengurangi rasa stres dan memiliki zat tidur. Dokter asal Rusia pun berpendapat bahwa dengan mengkonsumsi satu sendok sedang madu di pagi hari akan mempermudah proses tidur pada malam hari, namun pada penderita insomnia berat dianjurkan mengkonsumsi dua sendok kecil madu sebelum tidur. 3. Madu baik untuk pencernaan. Madu memiliki molekul gula yang

mudah dirubah menjadi fruktosa dan glukosa sehingga pada pencernaan yang sensitif pun dapat mencerna madu dengan mudah. 4. Madu sidr telah digunakan dalam aplikasi medis yaitu terapi

penyakit hati, ulkus lambung, infeksi respirasi, gangguan digestif, penyakit mata, terapi bedah (caesarian section). Madu sidr memiliki antioksidan kuat dan antibakteri9.

5. Madu dapat memperkuat kinerja otot jantung. Ibnu sina menyebutkan bahwa dengan mengkonsumsi madu dan buah delima dapat memberikan energi dan vitalitas untuk memperkuat otot jantung berdasarkan ensiklopedia medis. Hal ini terjadi karena efek madu terhadap peluasan pembuluh darah arteri.

6. Madu dapat meredakan batuk maupun menghilangkan dahak dan untuk terapi kolitis14.

7. Madu sangat bermanfaat bagi bayi, luka bakar10, dan saluran pernapasan bagian atas4.

8. Madu sebagai antioksidan. Kandungan dalam madu memiliki komposisi vitamin C, enzim, fenol, flavonoid, asam organik.

9. Madu sebagai obat alternatif kecantikan. Madu dapat digunakan sebagai masker wajah dengan manfaat membuat kulit halus, kuat, lembut, segar, dan mencegah proses penuaan.

10. Memiliki potensi mengurangi patogen pada makanan13 dan mencegah masuknya infeksi15

Beberapa penelitian tentang madu menunjukkan adanya aktivitas bakterisidal terhadap organisme patogen termasuk bakteri Gram negatif dan Gram positif5,6. Madu juga telah dilaporkan memiliki efek menghambat pertumbuhan pada 60 spesies bakteri termasuk aerob dan anaerob7. Banyak juga penelitian bahwa madu memiliki efek antibakteri terhadap bakteri yang sudah resisten terhadap beberapa jenis antibiotik8. Madu gunung memiliki aktivitas antibakteri yang tinggi terhadap bakteri Gram negatif maupun positif12.

Banyak penelitian yang sudah meneliti khasiat madu seperti pengaruhnya sebagai agen antibakteri. Beberapa faktor yang berpengaruh yaitu :

1. Kadar gula yang tinggi dapat menghambat pertumbuhan bakteri 2. Tingkat keasaman madu yang tinggi akan mengurangi pertumbuhan

dan kehidupan bakteri8.

3. Terdapat senyawa hidrogen peroksida (H2O2) yang membunuh

mikroorganisme patogen8.

4. Adanya senyawa organik (polifenol, flavonoid, inhibin, dan glikosida) yang bersifat antibakteri19. Bahan aktif tersebut dapat merusak integritas dinding sel sehingga dapat menghambat atau

10

membunuh bakteri. Inhibin lebih sensitif terhadap bakteri Gram negatif daripada Gram positif.

5. Memiliki efek osmotik yang tinggi dan fitokimia alami8.

Madu murni memiliki efek bakterisidal terhadap beberapa organisme patogenik termasuk enteropatogen yaitu Salmonella sp, Shigella sp, Escherechia coli, dan organisme gram negatif lainnya. Madu dapat memperpendek durasi pada pasien diare dengan gastroenteritis akibat infeksi bakteri. Sehingga madu menjadi salah satu alternatif terapi kolitis14.

2.1.4 Mekanisme Agen Antimikroba (Flavonoid)

Madu memiliki senyawa-senyawa yang dianggap sebagai agen antimikroba. Agen antimikroba memiliki efek bakteriostatik dan bakterisidal. Salah satu jenis antimikroba pada madu adalah flavonoid. Beberapa mekanisme flavonoid sebagai agen antimikroba, yaitu :

1. Menghambat fungsi membran sitoplasma

Sophoraflavanone G memberikan dampak pada membran sel bakteri. Jenis flavonoid ini mengganggu tingkat kestabilan lapisan membran bagian dalam dan luar. Hal ini terjadi akibat flavonoid menyerang daerah membran sel yang bersifat hidrofobik maupun hidrofilik. Epigallocatechin gallate dapat menginduksi terjadinya kebocoran pada ruang intraliposomal sehingga molekul-molekul kecil dapat memasuki ruang tersebut. Catechins dapat penetrasi ke lapisan membran lipid sehingga menggangu fungsi dari lapisan membran tersebut. Cathechins dapat juga menyebabkan fusi pada membran luar dan dalam sehingga terjadi kebocoran dan agregasi dari meterial. Semua mekanisme tersebut pada akhirnya dapat meningkatkan permeabilitas sel sehingga sel akan lisis.

2. Menghambat metabolisme energi

Licochalcone A dapat menghambat penggabungan prekursor radioaktif menjadi makromolekul (DNA, RNA dan protein), menghambat konsumsi oksigen, menghambat aktivitas NADH-sitokrom c reduktase. Sehingga pembentukkan energi yang seharusnya dibutuhkan tidak dapat terbentuk. Akhirnya menyebabkan kematian sel.

3. Menghambat sintesis asam nukleat

Penelitian yang dilakukan oleh Mori dan rekan kerjanya21 membuktikan bahwa flavonoid jenis robinetin dan myricetin dapat menghambat sintesis DNA dan RNA. Menghambat sintesis protein dan lemak. Hal ini terjadi karena cincin B pada flavonoid dapat berikatan dengan unsur hidrogen pada penghubung antara basa purin (guanin & adenin) dengan basa pirimidin (sitosin & timin) sehingga enzim helikase yang berfungsi sebagai pemutus ikatan ganda DNA tidak dapat mengenalinya dan tidak dapat berfungsi sehingga sintesis asam nukleat tidak dapat terjadi.

Flavonoid menghambat aktifitas DNA girase karena flavonoid dapat berikatan dengan subunit GyrB pada DNA girase Escherichia coli sehingga proses perbaikan segmen yang bermasalah dan replikasi DNA tidak dapat terjadi. Berhubung aktivitas DNA girase sangat bergantung pada kebutuhan ATP, maka apabila flavonoid pun menghambat aktivitas enzim ATPase maka sintesis asam nukleat pada bakteri Escherichia coli tidak dapat terjadi.

2.1.5 Kriteria Uji Madu

Hasil uji sampel madu karet yang dilakukan di Laboraturium Analisis dan Kalibrasi Balai Besar Industri Agro. Hasil uji akan ditinjau berdasarkan SNI 01-3545-2004, antara lain :

1. Enzim diastase berfungsi dalam merubah polisakarida menjadi monosakarida. Proses pengujian aktifitas enzim diastase

12

berdasarkan prinsip larutan pati dengan ditambahkan iod menghasilkan warna biru. Enzim diastase mengubah pati menjadi gula. Sehingga jika adanya aktifitas enzim diastase, warna biru akan pada larutan pati akan menghilang. Semakin tinggi aktifitas enzim diastase maka semakin cepat warna biru akan menghilang.

2. Hidroksimetilfurfural (HMF) pada madu merupakan indikator kesegaran dan pemprosesan panas yang dilakukan pada madu serta dapat dilakukan untuk pedoman lamanya penyimpanan. Pada saat penyimpanan, kadar HMF dapat meningkat 2-3 mg/kg/tahun, berdasarkan suhu dan pH pada proses penyimpanan. Proses pengujian hidroksimetilfurfural (HMF) berdasarkan prinsip perbedaan absorbansi, contoh panjang gelombang 284 nm dari 336 nm, dengan menggunakan pembanding berupa larutan natrium bisulfit (NaHSO3).

3. Proses pengujian kadar air menggunakan prinsip pembacaan nilai indeks bias madu dengan suhu 20oC atau suhu pembaca yang telah dikoreksi 20oC menunjukkan besarnya kadar air pada madu. Proses pengujian tingkat keasaman pada madu menggunakan prinsip netralisasi asam dengan basa. Metode pengujian arsen dapat dilakukan dengan cara yaitu spektrofotometri biru molibdenium, spektrofotometri perak dietilditiokarbamat, dan spektrofotometri serapan atom.

Tabel 2.2 Uji madu berdasarkan SNI 01-3545-2004

No Jenis uji Satuan Persyaratan

1 Aktifitas enzim diastase DN Minimal 3

2 Hidroksimetilfurfural

(HMF) mg/kg Makssimal 50

2.1.6 Klasifikasi Zona Hambat Amoksisilin

Pada uji sensitivitas terhadap mikroba dapat dilakukan menggunakan antibiotik amoksisilin. Zona hambat dari hasil pengukuran tersebut akan diklasifikasikan berdasarkan CLSI guidelines 2011.

Tabel 2.3 Klasifikasi Zona Hambat Amoksisilin terhadap bakteri

Zona hambat agen antimikroba berdasarkan CLSI guidelines 2011

Antibiotik Dosis Perlakuan Susceptible Intermedietly susceptible

Resistant

Amoksisilin 20/10 ug

Enterobacteriaceae ≥ 18 mm 14-17 mm ≤ 13 mm Haemophilus

influenzae

≥ 20 mm ≤ 19 mm

Staphylococcus aureus

≥ 20 mm ≤ 19 mm

4 Gula pereduksi (dihitung

sebagai glukosa) % b/b Minimal 65

5 Keasaman ml NaOH

1 N/kg Maksimal 50

6 Sukrosa % b/b Maksimal 5

7 Padatan yang tak larut

dalam air % b/b Maksimal 0,5

8 Abu % b/b Maksimal 0,5

9

Cemaran logam Timbal (Pb) Tembaga (Cu)

mg/kg mg/kg

1,0 5,0

14

2.1.7 Uji Sensitifitas Agen Antimikroba

Melakukan uji sensitifitas bakteri terhadap agen antimikroba dapat dilakukan dengan 2 metode, yaitu metode disk diffusion dan metode Minimal Inhibitory Concentration (MIC). Interpretasi hasil dari kedua metode tersebut berdasarkan The National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS).

Metode disk diffusion terdiri dari 8 tahapan prosedur yaitu tentukan koloni, siapkan suspensi inokulum, standarisasi suspensi inokulum, inokulasikan pada cawan, letakkan disk antimikroba, inkubasi cawan, ukur zona hambat, dan interpretasikan hasil24. Pada tahap penentuan koloni lakukan seleksi koloni secara tepat terlebih dahulu, biakan pada media selektif, dan lakukan standarisasi suspensi tersebut. Jika pada penelitian menggunakan lebih dari satu koloni maka peluang untuk mendeteksi adanya resistensi menjadi lebih besar. Pada tahap selanjutnya, saat melakukan standarisasi suspensi inokulum dapat dilakukan dengan 2 cara yaitu secara langsung dan fase pertumbuhan dengan perbandingan logaritma. Namun sebelum menggunakan kedua metode tersebut, kekeruhan suspensi harus dicocokkan dengan larutan McFarland 0,5. Pada tahap inokulasi pada cawan dapat dilakukan dengan swab yang dicelupkan pada media suspensi kemudian goreskan pada cawan yang sudah ada media agar selektif. Pada tahap selanjutnya, disk yang sudah direndam di agen antimikroba selama 15 menit dapat diletakkan pada cawan inokulum. Lalu inkubasi cawan 35OC selama 16-18 jam. Kemudian ukur zona hambat yang terbentuk dengan menggunakan penggaris atau jangka sorong.

Metode Minimal Inhibitory Concentration (MIC) merupakan metode untuk mengetahui konsentrasi terendah agen antimikroba yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Determinasi jumlah koloni bakteri pada dilusi yang spesifik terhadap agen antimikroba. Ada 7 tahapan prosedur dalam menggunakan metode MIC yaitu inokulasi, persiapan suspensi inokulum, campurkan suspensi inokulum sampai

mencair/merata, cek kejernihan inokulum, pencegahan agar tidak menguap, inkubasi pada suhu 35OC selama 16-20 jam. Pada proses inokulasi, lakukan isolasi koloni pada media agar selektif selama 18-24 jam. Kemudian buatlah suspensi dengan mencocokkan dengan McFarland 0,5. Lalu campur suspensi 2 mL dengan aquade 38 mL untuk pengenceran, lakukan dengan hati-hati. Kemudian untuk mengecek kemurnian inokulum, lakukan kultur pada media agar di cakram lalu inkubasi 37OC untuk mengecek apakah ada koloni bakteri yang tumbuh.

2.1.8 Morfologi dan Klasifikasi Escherichia coli

Taksonomi :

 Kingdom : Bacteria

 Filum : Proteobacteria

 Kelas : Gamma Proteobacteria

 Ordo : Enterobacteriales

 Famili : Enterobacteriaceae

 Genus : Escherichia

 Spesies : Escherichia coli

Sumber : ncbi.nlm.nih.gov

Bakteri Escherichia coli merupakan bakteri yang bersifat Gram negatif, berbentuk batang, tidak memiliki spora, dan memiliki fimbrae (flagella peritrikus). Bakteri ini bersifat anaerobik fakultatif, dapat hidup pada suhu optimum 370C. Escherichia coli memiliki kemampuan untuk memfermentasi karbohidrat dan menghasilkan gas.

Gambar 2.3 Escherichia coli

Sumber :Kayser, 2005

Gambar 2.2 Escherichia coli

16

Dinding sel terdiri dari beberapa lapisan yang bersifat rigid yang melapisi bagian luar dari membran plasma17. Fungsi dari dinding sel, yaitu :

1. Memberikan bentuk dari sel bakteri tersebut

2. Melindungi sel dari proses lisis osmotik, seperti efek yang ditimbulkan oleh beberapa jenis antibiotik dan substansi yang bersifat toksik

3. Bersifat patogenik

Bakteri Gram negatif memiliki dinding sel yang kompleks dengan ketebalan 2-7 nm lapisan peptidoglikan yang kemudian dilapisi lagi oleh lapisan peptidoglikan 2-8 nm pada bagian luar (outer membrane). Dinding bakteri Gram negatif lebih rentan terhadap tekanan osmotik.

Pada Gram negatif terdapat struktur yang penting, terletak diantara membran plasma dengan outer membrane yang disebut periplasmic space. Ruangan ini terisi oleh periplasm. Terdapat lapisan peptidoglikan tipis setelah membran plasma dan selanjutnya terdapat periplasmic space dengan kontribusi terhadap dinding sel sebesar 5-10 %. Salah satu contoh, pada bakteri E. coli, lapisan ini termasuk tebal dengan 2 nm dan terdiri hanya satu atau dua lapisan peptidoglikan.

Pada Bakteri Gram negatif terdapat periplasmic space yangmemiliki daya tarik lebih kuat daripada bakteri Gram positif. Ketika ada gangguan pada dinding sel bakteri maka dengan kemampuan yang dimiliki oleh periplasmic space, membran plasma akan tetap kokoh pada tempatnya. Serta periplasmic space dapat mengeluarkan enzim periplasmic dan protein dalam sistem pertahanannya.

Pada membran terluar terdapat lipopolisakarida (LPSs), yang merupakan kompleks molekul terdiri dari lipid, karbohidrat, dan 3 bagian yaitu lipid A, inti polisakarida, antigen O. Daerah lipid A terdiri dari dua glukosamine derivat gula dengan 3 asam lemak dan phospat yang melekat. Asam lemak A melekat pada permukaan membran terluar

dan bergabung dengan inti polisakarida. Antigen O merupakan rantai polisakarida .

Lipopolisakarida (LPS) memiliki beberapa fungsi yaitu :

1. Berkontribusi terhadap gangguan pada permukaan bakteri karena memiliki inti polisakarida yang terdiri dari gula dan phospat,

2. Membantu stabilisasi pada struktur permukaan membran karena lipid A sebagai pemegang peranan terbesar dalam hal ini, 3. Proses pertahanan dalam mekanisme pembuatan biofilm,

4. Bertanggungjawab terhadap permeabilitas dinding sel dari faktor-faktor gangguan seperti antibiotik dan toksik bagi bakteri. Lapisan membran terluar lebih permeabel daripada membran plasma sehingga nutrisi dapat mudah masuk melalui protein porin seperti glukosa dan jenis monosakarida lainnya,

5. Mempertahankan sifat patogen bakteri terhadap serangan imun tubuh,

6. Lipid A pada LPS merupakan toksik bagi tubuh, sehingga jika memasuki pembuluh darah manusia dapat menimbulkan gejala gejala toksik seperti shok septik.

2.1.9 Jenis-jenis Bakteri Escherichia coli

1. EnteropathogenicEscherichia coli (EPEC)

EPEC merupakan penyebab tersering diare pada neonatus di negara berkembang. Pada awalnya EPEC menempel pada sel mukosa di usus kecil. Manifestasi klinis berupa diare yang sangat

Gambar 2.4 Dinding Bakteri Gram Negatif

18

cair. Hal ini dapat sembuh sendiri tanpa pengobatan namun bisa juga menjadi kronis sehingga harus menggunakan antibiotik.

2. EnterotoxigenicEscherichia coli (ETEC)

ETEC merupakan penyebab tersering diare pada neonatus di negara berkembang yang sering berpergi-pergian ke suatu daerah yang baru traveler’s diarrhea dan gastroenteritis. Jalur transmisi melalui fecal-oral; sanitasi dan kebersihan yang buruk, serta makanan dan minuman yang sudah terkontaminasi.

Pada awalnya ETEC menempel pada sel epitel pada usus kecil. Beberapa strain jenis ETEC memproduksi heat-labile exotoxin (LT). Toksik ini mempengaruhi aktivitas adenilat siklase. Sehingga meningkatkan konsentrasi cyclic adenosine monophosphate (cAMP). Hal ini menyebabkan hipersekresi cairan dan clorin dan menghambat reabsorbsi sodium. Lumen usus mejadi terenggang akibat hipersekresi cairan dan hipermotilitas. Beberapa jenis ETEC lainnya ada yang menghasilkan heat-stable enterotoxin (ST). Toksik ini dapat mengaktifkan guanilat siklase pada epitel sel enterik sehingga dapat menyebabkan diare yang lebih berat.

Masa inkubasinya sekitar 24-72 jam. Gejala-gejala yang dapat muncul pada seseorang yang terinfeksi yaitu demam rendah, diare akan cair tanpa disertainya darah maupun mukus, muntah, asidosis, terasa keram pada perut, dan dehidrasi.

3. Shiga Toxin Producing Escherichia coli (STEC)

Bakteri ini memiliki 2 jenis sitotoksik yaitu Shiga-like toksik 1 dan Shiga-like toksik 2. STEC dapat menyebabkan perdarahan kolon, diare berat, hemolisis uremi sindrom, gagal ginjal akut, mikroangiopati hemolitik anemia, dan trombositopenia. The Shiga-like toxins memiliki struktur yang mirip dengan toksik yang dihasilkan shigella yaitu Shigella dysenteriae type 1. Pemeriksaan penunjang yang dapat dilakukan adalah uji sitotoksik sel kultur

menggunakan metode vero sel dan polymerase chain reaction (PCR). Beberapa manifestasi klinis diatas seperti perdarahan kolon dapat dicegah dengan memasak terlebih dahulu daging yang ingin dikonsumsi.

4. EnteroinvasiveEscherichia coli (EIEC)

EIEC sering terjadi pada anak-anak di negara berkembang dan pada orang-orang yang sering berpergi-pergian ke daerah tertentu. Bakteri ini memiliki sifat patogen mirip shigella yaitu nonmotil dan dapat memfermentasikan laktosa. EIEC dapat menimbulkan manifestasi klinis jika menginvasi epitel sel mukosa pada intestine. Masa inkubasi sekitar 12-72 jam. EIEC dapat menyebabkan basilar disentri pada anak-anak. Jalur transmisi masuknya bakteri ini melalui fecal-oral. Gejala khas yang muncul adalah diare dengan campuran darah pada fesesnya.

5. EnteroaggregativeEscherichia coli (EAEC)

EAEC dapat menyebabkan diare akut dan kronik (>14 hari). Biasanya terjadi pada negara-negara berkembang maupun negara-negara industri penghasil pangan. Bakteri ini dapat memproduksi ST-like toxin dan hemolisin serta enterotoksin. Jalur transmisi melalui fecal-oral; sanitasi dan kebersihan yang buruk, serta makanan dan minuman yang sudah terkontaminasi. Masa inkubasi selama 12-72 jam. Gejala yang dapat timbul adalah gangguan saluran pencernaan disertai diare yang sangat cair, demam, kram dan muntah, terkadang ditemukan darah pada fesesnya. Ini merupakan penyakit yang serius jika diderita oleh infant.

6. Escherichia coli-Enterohemorrhagic (EHEC)

EHEC dapat menyebabkan hemorragic colitis. Sebagian besar transmisi melalui person to person, makanan yang terkontasminasi,

20

seperti daging setengah matang dan melalui fecal-oral. Masa inkubasi selama 2-8 hari. Beberapa gejala yang dapat mencul seperti demam rendah, kram, nyeri perut, diare yang sangat cair disertai darah. Sebagian kecil pasien anak-anak, penyakit ini akan berkelanjutan menjadi hemolitik uremik syndrom. Sebagian besar kasus, penyakit ini bersifat self-limitied.

2.1.10 Penyakit-penyakit akibat Escherichia coli

Bakteri Escherichia coli memiliki habitat asli pada saluran gastrointestinal. Namun bakteri ini dapat bermigrasi ke organ-organ lainnya dan dapat menyebabkan keadaan patogen pada daerah yang ditempatinya seperti bermigrasi ke saluran kemih sehingga menyebabkan Infeksi Saluran Kemih (ISK). Kondisi optimum untuk bakteri ini tumbuh pada temperatur antara 45-114oF, pH antara 6-8. Tetapi ada beberapa jenis Escherichia coli yang dapat hidup pada pH dibawah 4,3 maupun pH antara 9-10.

Bakteri Escherichia coli merupakan bakteri penyebab terbesar penyakit diare. Diare lebih banyak menyerang usia muda seperti anak-anak daripada dewasa. Hal ini bisa disebabkan oleh beberapa faktor yaitu makanan dan kebersihan yang kurang. Banyak anak yang tidak memperhatikan kebersihan tangannya sebelum mengkonsumsi makanan. Hal ini lah yang menjadi faktor risiko terbesar anak-anak mengalami diare.

Diare merupakan keluarnya cairan abnormal pada saluran keluar gastrointentinal dengan peningkatan frekuensi. Diare akut terjadi kurang dari 2 minggu, kemudian jika 2 sampai 4 minggu terjadi maka disebut diare persisten, sedangkan jika durasi sudah melebihi 4 minggu maka dikatakan diare kronik.

Sebagian besar (90%) penyebab diare akut merupakan akibat dari infeksi agen mikroorganisme. Hal ini dapat disertai dengan manifestasi klinis berupa demam, muntah, dan nyeri abdomen. Namun penyebab

lainnya dapat disebabkan oleh medikasi, toksik, serta kondisi-kondisi lainnya.

E.coli merupakan organisme flora normal pada fecal. Mekanisme E.coli dapat menyebabkan diare, diawali dengan menempelnya organisme pada glikoprotein atau reseptor glikolipid kemudian diikuti dengan produksi substansi berbahaya yang dapat merusak dan menggangu fungsi dari sel usus18.

ETEC dapat menyebabkan sedikit atau bahkan tidak ada perubahan terhadap mukosa usus. Tetapi organisme ini dapat membentuk kolonisasi pada usus kecil dan membentuk sebuah enterotoksin. Kolonisasi pada usus memerlukan adanya fimbrial colonization factor antigens (CFAs). CFAs yang kemudian menginduksi terjadinya penempelan pada epitel usus. ETEC dapat memproduksi heat-labile enterotoxin (LT) atau heat-stable enterotoxin (ST) atau keduanya. Kedua jenis enterotoksin ini memiliki mekanisme yang berbeda dalam menyebabkan diare. LT merupakan molekul besar yang terdiri dari 5 subunit reseptor pengikat dan 1 subunit enzimatik aktif. LT secara struktural dan fungsional mirip dengan toksin kolera. LT dapat menstimulasi adenilat siklase sehingga siklus adenosin phospat meningkat. Sedangkan ST merupakan molekul kecil yang berbeda dengan LT maupun toksin kolera. ST dapat menstimulasi guanilat siklase sehingga siklus guanosin monophospat meningkat.

EIEC menyebabkan lesi dengan disertainya ulkus, perdarahan, dan infiltrasi dari polymorphonuclear leukocytes (PMN) dan edema pada mukosa bahkan dapat mencapai submukosa. Strain EIEC memiliki mekanisme yang mirip dengan shigella dalam menginvasi epitel usus dan menyebabkan gejala mirip disentri. Proses terjadinya invasi dimulai dari organisme memasuki sel kemudian melakukan multiplikasi di dalam sel lalu menyebar melalui intraselular dan interselular dan akhirnya sel tersebut akan mati.

22

EPEC dapat menyebabkan struktur vili usus menjadi rusak, perubahan area menjadi inflamasi dan terkelupasnya mukosa sel superfisial. Lesi ini biasanya terjadi pada daerah duodenum sampai kolon. Mekanisme EPEC menyebabkan diare terbagi menjadi 3 tahap. Pertama, bakteri menempel pada epitel usus pada lokasi tertentu. Kedua, memproduksi dan mentranslokasi protein bakteri sampai membentuk komplek menyerupai jembatan yang menghubungkan bakteri dengan sel host. Ketiga, terjadi penempelan yang sangat kuat antara bakteri dengan sel host. Pada tahap ketiga ditandai dengan penempelan bakteri pada sel host yang sangat kuat, penghapusan enterosit, dan membentuk formasi bertumpuk-tumpuk.

STEC biasanya menginfeksi bagian kolon sehingga menyebabkan edema, deposit fibrin, perdarahan pada submukosa, terbentuk ulkus pada mukosa, infiltrasi netrofil, dan mikrovaskular trombus. Biasanya juga terlihat pseudomembran kolitis. Organisme ini memproduksi toksin Stx16, yang terdiri dari 2 tipe yaitu Stx1 dan Stx2. Masing-masing toksin

Gambar 2.5 Patofisiologi Escherichia coli

memiliki sub unit A dan B. Sub unit B akan mengikat reseptor glikospingolipid pada host. Sub unit A akan di endositosis. Toksin akan menyerang target 28S rRNA sehingga sisntesis protein akan terhenti dan sel akan mati. Stx pada akhirnya akan bersirkulasi pada pembuluh darah sehingga mengaktifkan kaskade koagulasi yang menyebabkan terbentuknya mikrotrombus, intravaskular hemolisis, dan iskemia.

2.2 Kerangka Konsep

Gambar 2.6 Kerangka Konsep

Madu memiliki banyak manfaat. Salah satu manfaat madu sebagai agen antimikroba. Senyawa antimikroba tersebut yaitu flavonoid. Jenis-jenis flavonoid yaitu apigenin, galangin, pinocembrin, ponciretin, genkwanin, sophoraflavanone G dan derivatnya, naringin, naringenin, epigallocatechin gallate dan derivatnya, luteolin, luteolin 7-glucoside, quercetin,

Madu

Agen Antimikroba

Unsur-unsur penyebab

penyakit

Etiologi : Escherichia coli

patogen

Pertumbuhan koloni Escherichia coli

terhambat Bakteriostatik Bakteriosidal

24

3-O-methylquercetin, quercetin glycosides, kaempferol dan derivatnya. Jenis flavonoid lainnya adalah flavone glycosides, isoflavones, flavanones, isoflavanones, isoflavans, flavonols, flavonol glycosides, dan chalcones. Senyawa-senyawa dapat menghambat pertumbuhan dan multiplikasi bakteri (bakteriostatik) serta dapat membunuh sel bakteri (bakterisidal). Sehingga pertumbuhan koloni bakteri seperti Escherichia coli dapat terhambat.

2.3 Definisi Operasional

Variabel Definisi Operasional Skala Kategori Variabel Terikat (dependent)

Zona Hambat

Diameter zona hambat pada pertumbuhan bakteri Escherichia coli secara in

vitro

Numerik Numerik / angka

Variabel Tidak Terikat (independent)

Madu Karet Konsentrasi madu karet

tanpa proses ekstraksi Kategorik

100% 50% 25% 20% Residu (Madu Karet + Aseton)

Konsentrasi residu madu karet dengan proses ekstraksi menggunakan pelarut aseton Kategorik 100% 50% 25% 20% Sedimen (Madu Karet + Aseton) Konsentrasi sedimen madu karet dengan proses

ekstraksi menggunakan pelarut aseton Kategorik 100% 50% 25% 20% Residu (Madu Karet + n-Heksan)

Konsentrasi residu madu karet dengan proses ekstraksi menggunakan pelarut n-heksan Kategorik 100% 50% 25% 20%

Sedimen (Madu Karet

+ n-Heksan)

Konsentrasi sedimen madu karet dengan proses

ekstraksi menggunakan pelarut n-heksan

Kategorik

100% 50% 25% 20%

Kontrol Negatif

Pelarut dalam proses ekstraksi yang digunakan

sebagai kontrol pertumbuhan Escherichia

coli secara in vitro

Kategorik Aseton n-heksan

Kontrol Positif

Antibiotik yang digunakan sebagai kontrol

pertumbuhan Escherichia coli secara in vitro

Kategorik Amoksisilin 25 ug

26

BAB 3

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Desain Penelitian

Penelitian ini menggunakan jenis penelitian uji eksperimental secara in vitro dengan post test control only design menggunakan teknik disk diffusion untuk melihat peranan ekstrak madu karet dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli.

3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian

Lokasi pembelian dan determinasi dilakukan di Taman Wisata Lebah Madu Cibubur daerah Bumi Perkemahan Pramuka Cibubur. Sedangkan pengekstrakan dan uji sensitivitas madu karet dilakukan di Balai Besar Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pengendalian Penyakit Jakarta. Penelitian ini dilakukan mulai pada bulan Februari sampai Agustus 2014.

3.3 Sampel Penelitian

Penelitian ini menggunakan bakteri Escherichia coli yang ditanamkan dalam media nutrien agar. Pada penelitian ini menggunakan uji in vitro.

Pada penelitian ini, peneliti menggunakan jumlah kelompok sebanyak 7 kelompok yaitu madu karet tanpa ekstraksi, ekstrak madu dengan variasi konsentrasi 20%, 25% , 50% , 100%, serta kontrol positif menggunakan antibiotik amoksisilin 25 ug maupun kontrol negatif menggunakan pelarut aseton dan n-heksan.

Penentuan jumlah sampel menggunakan rumus federer :

Keterangan :

k = jumlah kelompok perlakuan

n = jumlah sampel dalam tiap kelompok

Sehingga hasil penghitungan sampel menurut rumus federer, sebagai berikut :

(k-1).(n-1) ≥ 15 (7-1).(n-1) ≥ 15 6.(n-1) ≥ 15 6n - 6 ≥ 15 6n ≥ 21 n ≥ 21/6

n ≥ 4 (hasil pembulatan)

Maka jumlah pengulangan yang dipakai pada penelitian ini berjumlah 4 pengulangan.

3.4 Identifikasi Variabel 3.4.1 Variabel Bebas

Madu karet 100% dan hasil ekstraksi madu karet yang berasal dari lebah Apis mellifera berupa sedimen maupun residu dari pelarut aseton dan n-heksan dengan berbagai variasi konsentrasi (20% , 25% , 50% , 100%), kontrol positif menggunakan antibiotik amoksisilin 25 ug serta kontrol negatif menggunakan pelarut aseton dan n-heksan.

3.4.2 Variabel Terikat

Zona hambat (zona bening) pada pertumbuhan bakteri Escherichia coli di media nutrien agar yang diukur diameternya menggunakan jangka sorong dengan satuan milimeter (mm)

28

3.5 Alat dan Bahan Penelitian 3.5.1 Alat Penelitian

3.5.2 Bahan Penelitian

3.6 Cara Kerja Penelitian 3.6.1 Sterilisasi Alat

Seluruh peralatan yang akan digunakan selama penelitian harus dibersihkan dengan cara dicuci kemudian dikeringkan lalu dibungkus dengan kertas alumunium foil. Kemudian dilakukan sterilisasi di dalam autoclave selama 30 menit dengan mengatur tekanan sebesar 1,5 atm pada suhu 121o C.

1. Bunsen

2. Alumunium foil 3. Laminar air flow 4. Tabung reaksi 5. Rak tabung 6. Blank disk 7. Mikro pipet 8. Autoclav 9. Ose

13. Alat tulis 14. Label 15. Timbangan 16. Kamera 17. Baki 18. Vortex 19. Tissue 20. Pinset 21. Korek api

25. Alkohol

26. _{Jangka sorong} 27. _Inkubator 28. _{Kapas swab} 29. _{Pengukur waktu} 30. _{Cawan petri} 31. _Spatula

1. Nutrien agar 2. Madu Karet 3. Ekstrak Madu 4. Aseton 5. n-Heksan

6. Amoksisilin 25 ug 10. Labu ukur

11. Timbangan elektronik 12. Gelas beker

22. Oven 23. Shaker 24. Corong pisah

3.6.2 Pembuatan Media Agar

11,5 gram nutrient agar dilarutkan dalam 500 mL akuades lalu dipanaskan sampai mendidih selama ± 40 menit. Setelah itu disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 1,5 atm selama 15 menit.

3.6.3 Kultur Bakteri

Butiran cryo Escherichia coli yang berasal dari microbank dengan suhu -800C dimasukkan ke dalam media cair Buffered Peptone Waters (BPW). Kemudian inkubasi di dalam inkubator selama 24 jam dengan suhu 37oC.

3.6.4 Prosedur Ekstraksi

Proses ekstrasi madu karet menggunakan metode ekstrak cair-cair. Dengan perbandingan (madu : pelarut) sebanyak (1 : 1). Ambil madu karet sebanyak 50 mL. Kemudian madu karet dimasukan kedalam masing-masing corong pisah A dan B. Lalu tambahkan pelarut 50 mL aseton pada corong pisah A dan 50 mL n-heksan pada corong pisah B. Setelah itu corong pisah dikocok selama 3 jam dengan shaker. Lalu pindahkan dari corong pisah A ke gelas beker C dan corong pisah B ke gelas beker D untuk dilakukan pemisahan secara sempurna antara madu karet dan pelarut selama 12 jam. Lalu hasil ekstrak madu karet dengan pelarut yang sudah didiamkan selama 12 jam pada gelas beker C dan D kemudian dikeluarkan dan dipisahkan menggunakan pipet lalu diletakkan pada gelas beker E, F, G, H. Kemudian dipekatkan menggunakan oven dengan suhu 80oC.

Keterangan (Lampiran 5) :

1. Corong pisah A : campuran (madu karet + aseton) 2. Corong pisah B : campuran (madu karet + n-heksan) 3. Gelas beker C : hasil ekstrak (madu karet + aseton) 4. Gelas beker D : hasil esktrak (madu karet + n-heksan)

30

6. Gelas beker F : sedimen/endapan hasil ekstrak (madu karet + aseton) 7. Gelas beker G : residu/ cairan hasil ekstrak (madu karet + n-heksan) 8. Gelas beker H : sedimen/endapan hasil ekstrak (madu karet +

n-heksan)

3.6.5 Pembuatan Variabel Konsentrasi

Uji antibakteri dengan madu karet tanpa ekstraksi dan ekstrak madu karet dengan variasi konsentrasi yang disesuaikan dengan penelitian sebelumnya yaitu 20 %, 25 %, 50 %, 100 % dan kontrol positif menggunakan antibiotik amoksisilin 25 ug. Sedangkan kontrol negatif menggunakan pelarut aseton dan n-heksan.

Keterangan : n = volume zat terlarut

Sehingga peneliti menggunakan volume zat terlarut saat konsentrasi 20%, 25%, 50%, dan 100% berturut-turut yaitu 1 mL, 1,25 mL, 2,5 mL, dan 5 mL.

3.6.6 Metode disk diffusion

Ambil kultur dalam BPW (Buffered Peptone Water) menggunakan pipet sebanyak 1 mL lalu masukkan ke dalam masing-masing cawan petri kemudian campur dengan nutrien agar sebanyak 15-20 mL.

Kemudian blank disk direndam didalam wadah yang berisi residu/sedimen/aseton/n-heksan/madu karet selama 15 menit. Kemudian blank disk yang sudah terendam serta antibiotic disk amoksisilin 25 ug diletakkan di cawan petri yang sudah berisi biakan murni bakteri Escherichia coli. Lalu diinkubasi didalam inkubator dengan suhu 37o selama 24 jam. Kemudian disk akan berdifusi pada media nutrient agar tersebut. Area jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan pada mikroorganisme di permukaan media nutrient agar. Kemudian

Konsentrasi Volume zat terlarut

Volume zat terlarut + volume pelarut

100% X

diukur diameter zona hambat menggunakan jangka sorong dengan ketelitian 0,02 milimeter (mm).

3.7 Pengolahan dan Analisis Data

Analisis data yang digunakan adalah uji statistik one way ANOVA. Uji statistik one way ANOVA digunakan untuk mengetahui adanya pengaruh pemberian ekstrak madu karet terhadap pertumbuahan Escherichia coli. Analisis data menggunakan program SPSS (Statistical Product of Service Solution) for Windows versi 17.

32

3.8 Alur Penelitian

Gambar 3.1 Alur Penelitian Uji Determinasi Pengambilan Sampel Madu Ekstrak Madu Variasi Konsentrasi Nutrien agar

Uji disk difusi

Uji statistik Kultur Bakteri Escherichia coli Rerata tiap kelompok Kesimpulan G Madu tanpa ekstrak A 20 % E Kontrol Negatif (aseton & n-heksan) F Kontrol Positif (amoksisilin 25 ug) B 25 % C 50 % D 100 %

33

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Uji Standarisasi Madu

Pihak PT. Madu Pramuka melakukan uji standarisasi sampel madu karet murni di Laboratorium Analisis dan Kalibrasi Balai Besar Industri Agro. Berdasarkan uji Standarisasi Nasional Indonesia (SNI) 01-3545-2004, maka dari hasil 10 parameter yang sudah dilakukan pada uji madu karet yaitu uji aktifitas enzim diastase, hidroksimetilfurfural (HMF), kadar air, gula pereduksi (dihitung sebagai glukosa), tingkat keasaman, dan sukrosa telah memenuhi standarisasi uji.

4.2 Metode Ekstraksi Madu Karet

Pencampuran antara madu karet dengan pelarut yang berbeda kepolarannya bertujuan untuk memisahkan zat aktif pada madu karet dengan tingkat kepolaran yang berbeda. Namun untuk lebih mempermudah pemisahannya digunakan corong pisah selama 3 jam. Kemudian menghasilkan fasa residu/cair pada bagian atas dan fasa sedimen/endapan pada bagian bawah. Pada ekstrak madu karet menggunakan pelarut aseton menghasilkan 2 fasa ekstrak, yaitu fasa residu/cairan berwarna bening krem dan endapan berwarna krem. Pelarut aseton telah menarik zat aktif yang terdapat pada madu karet yang ditandai dengan perubahan warna pelarut menjadi bening krem.

Tabel 4.1 Hasil ekstrak cair-cair madu karet

Jenis

pelarut Fasa residu/cair Fasa sedimen/endapan

Aseton Cairan berwana bening

krem Warna krem agak kental

34

Proses pemisahan menggunakan pelarut n-heksan menghasilkan fasa residu/cair berwarna bening dan endapan/sedimen berwarna putih susu. Lalu fasa residu/cair dan fasa sedimen/endapan dipisahkan dan dimasukkan ke dalam gelas beker yang berbeda. Kemudian gelas beker dimasukkan kedalam oven untuk menguapkan sehingga fasa tersebut menjadi lebih pekat. Selanjutnya diencerkan untuk mendapatkan variasi konsentrasi yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri.

4.3 Hasil Uji Aktivitas Agen Antibakteri Ekstrak Madu Karet

Uji aktivitas antibakteri ekstrak madu karet dilakukan terhadap bakteri Escherichia coli yang bersifat Gram negatif secara in vitro menggunakan metode difusi cakram. Terbentuknya zona difusi di koloni menunjukkan tidak efektifnya hambatan pertumbuhan pada koloni. Namun terbentuknya zona hambat/bening menunjukkan adanya hambatan terhadap pertumbuhan koloni bakteri Escherichia coli. Dalam penelitian ini digunakan zona bening sebagai indikasi adanya hambatan pada koloni bakteri yang diukur menggunakan jangka sorong dinyatakan dalam satuan ukur milimeter (mm)24. Semakin luas zona hambat/bening mengindikasikan bahwa aktifitas antibakteri madu karet semakin tinggi.

Diameter zona hambat/bening dengan variasi konsentrasi pada koloni bakteri dibandingkan dengan zona bening/hambat disekitar cakram yang berisi kontrol positif (amoksisilin 25ug) dan kontrol negatif (aseton maupun n-heksan)24. Apabila zona hambat/bening yang dihasilkan oleh ekstrak madu karet lebih besar daripada kontrol positif maka ekstrak lebih efektif sebagai antibakteri daripada kontrol positif secara in vitro. Sedangkan apabila zona hambat/bening yang dihasilkan oleh ekstrak madu karet lebih kecil daripada kontrol positif maka ekstrak kurang efektif sebagai antibakteri. Penggunaan kontrol negatif bertujuan untuk memastikan bahwa tidak ada efek antibakteri dari pelarut. Apabila kontrol negatif memiliki zona hambat/bening maka efek antibakteri pada ekstrak akan berkurang validitasnya. Hasil uji aktifitas antibakteri pada madu karet terdapat pada tabel 4.2.

Tabel 4.2 Hasil pengukuran

Sampel Uji

Rata-rata Zona Hambat (mm) 20% 25% 50% 100%

Madu Karet 0 0 21,03 29,88

Residu/cairan (Madu Karet +

Aseton) 0 0 0 0

Sedimen (Madu Karet +

Aseton) 0 0 21,18 28,58

Residu/cairan (Madu Karet +

n-Heksan) 0 0 0 0

Sedimen (Madu Karet +

n-Heksan) 0 14,70 18,08 26,18

Kontrol Negatif

(Aseton maupun n-heksan) - - - 0

Kontrol Positif

(Amoksisilin 25 ug) - - - 22,10

Berdasarkan tabel diatas, zona hambat tertinggi ditunjukkan oleh madu murni dengan konsentrasi 100% sebesar 29,88 mm. Madu karet tanpa proses ekstraksi memiliki daya hambat yang paling besar dibandingkan dengan parameter lainnya. Hal ini mengindikasikan bahwa tanpa memisahkan molekul-molekul agen antimikroba aktif berdasarkan kepolaritasannya menggunakan pelarut aseton maupun n-heksan, madu karet murni sudah banyak mengandung agen antimikroba aktif. Gabungan antara agen antimikroba aktif yang bersifat polar, non polar, dan semi polar pada madu karet murni menyebabkan pada penelitian ini memiliki zona hambat yang paling besar sehingga madu karet tanpa proses ekstraksi menjadi kelompok yang paling sensitif. Senyawa yang memiliki tingkat kepolaran rendah yaitu isoflavones, flavones, methylated flavones, dan flavonols. Sedangkan senyawa yang memiliki tingkat kepolaran lebih tinggi yaitu flavonoid glycosides dan aglycones25.

36

Peneliti memilih kontrol positif dari golongan antibiotik beta-laktam yaitu amoksisilin dengan dosis 25 ug. Secara keseluruhan mekanisme kerja antibiotik golongan beta-laktam yaitu merusak dinding sel bakteri24.

Data peneliti terlihat bahwa pada saat madu karet dengan ekstraksi menggunakan pelarut aseton maupun n-heksan yang menghasilkan zona hambat pada pertumbuhan bakteri Escherichia coli yaitu hanya kelompok sedimen sedangkan kelompok residu tidak menghasilkan zona hambat. Pelarut aseton menarik senyawa yang bersifat polar pada madu karet, sehingga pelarut aseton akan bercampur dengan senyawa polar pada madu karet dan senyawa-senyawa lainnya yang dicurigai memiliki efek antimikroba akan tertinggal pada sedimen/endapan hasil ekstrasi. Sedangkan pada pelarut n-heksan akan menarik senyawa-senyawa yang bersifat non-polar pada madu karet sehingga pelarut akan bercampur dengan senyawa non-polar madu karet21 dan meninggalkan sisa berupa endapan/sedimen yang memiliki efek antimikroba.

Hal ini diduga karena banyaknya dan tingginya efek antimikroba yang terdapat pada madu karet. Efek antibakteri pada madu karet berasal dari flavonoid. Jenis-jenis flavonoid yaitu apigenin, galangin, pinocembrin, ponciretin, genkwanin, sophoraflavanone G dan derivatnya, naringin, naringenin, epigallocatechin gallate dan derivatnya, luteolin, luteolin 7-glucoside, quercetin, 3-O-methylquercetin, quercetin glycosides, kaempferol dan derivatnya. Jenis flavonoid lainnya adalah flavone glycosides, isoflavones, flavanones, isoflavanones, isoflavans, flavonols, flavonol glycosides, dan chalcones21.

Flavonoid dapat merusak membran sel dengan cara menghambat sintesis makromolekul20. Flavonoid juga dapat mendepolarisasi membran sel dan menghambat sistesis DNA, RNA, maupun protein yang sudah diobservasi pada S.aureus20. Selain itu flavonoid juga dapat menghambat sintesis asam nukleat, menghambat fungsi membran sitoplasma, dan menghambat metabolisme energi pada bakteri21.

Gambar 4.1 Hasil pengukuran zona hambat

Hasil pengukuran zona hambat dihubungkan dengan klasifikasi zona hambat berdasarkan tabel CLSI guidelines 2011. Bakteri Escherichia coli merupakan keluarga dari Enterobacteriaceae. Pada penelitian ini digunakan antibiotik amoksisilin 25 ug. Dosis amoksisilin ini yang menjadi keterbatasan peneliti karena tidak sesuai dengan CLSI guidelines 2011. Madu karet dengan konsentrasi 100% dengan rata-rata zona hambat 29,88 mm maupun dengan konsentrasi 50 % dengan rata-rata zona hambat 21,03 mm bersifat susceptible. Sedangkan semua hasil parameter uji madu karet pada konsentrasi 25% dan 20 % dikategorikan menjadi resistant, kecuali konsentrasi 25% pada sedimen (madu karet + n-heksan), namun peneliti memiliki keterbatasan dalam mengkategorikan sedimen (madu karet + n-heksan) konsentrasi 25% sebagai zona hambat atau zona difusi. Karena peneliti hanya menggunakan indera penglihatan tanpa alat bantu spesifik dalam melihat zona yang terbentuk dalam cawan petri.

Berdasarkan hasil pengukuran zona hambat pada madu karet yang dihubungkan dengan klasifikasi kriteria respon penghambatan pertumbuhan bakteri menurut Greenwood 2011 sebagai berikut :

38

Tabel 4.3 Kriteria Hasil Zona Hambat

Sampel Uji

Rata-rata Zona Hambat (mm) 20% 25% 50% 100%

Madu Karet Lemah Lemah Sangat

kuat

Sangat kuat Residu/cairan (Madu Karet +

Aseton) Lemah Lemah Lemah Lemah

Sedimen (Madu Karet +

Aseton) Lemah Lemah

Sangat kuat

Sangat kuat

Residu/cairan (Madu Karet +

n-Heksan) Lemah Lemah Lemah Lemah

Sedimen (Madu Karet +

n-Heksan) Lemah Kuat Kuat

Sangat kuat

Pada penelitian Osho dan Bello15 tahun 2010 menggunakan variasi konsentrasi 5%, 25%, 50%, dan 100% dari madu yang diproduksi oleh lebah Apis mellifera dengan lokasi perkebunan terletak di Negara Nigeria dan Oyo state terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumonia, Bacillus subtilis dan Escherichia coli. Pada penelitian tersebut menggunakan metode well diffusion dandidapatkan hasil yaitu pada konsentrasi 25% merupakan konsentrasi terendah ditemukan zona hambat. Tetapi pada penelitian ini, pada konsentrasi 25% tidak ditemukan zona hambat kecuali pada sedimen (madu karet + n-heksan) konsentrasi 25%. Namun pada sedimen ini, peneliti merasa memiliki keterbatasan dalam mengkategorikan bahwa adanya zona pada konsentrasi 25% termasuk dalam zona difusi atau zona hambat. Karena pada penelitian ini, peneliti hanya menggunakan indera penglihatan untuk mengkategorikan zona tersebut. Namun untuk memastikan lebih lanjut, dilakukan swab pada zona tersebut lalu dikultur pada media nutrien agar yang baru kemudian dilihat apakah ada bakteri yang hidup pada media nutrien agar baru tersebut.

Pada penelitian yang dilakukan oleh Alqurashi dkk10 tahun 2013, penelitian perbandingan antara madu sidr dan madu gunung dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli, K. Pneumonia, P. aeruginosa, dan A. baumanni. Penelitian tersebut menggunakan 4 metode yang berbeda yaitu disk diffusion dengan variasi konsentrasi (10%, 20%, 40%, 60%, 80%), gel diffusion, minimal inhibitory concentration (MIC) dan minimal bactericidal concentration (MBC). Hasil dari penelitian tersbut ditemukan bahwa pada pengukuran MIC madu sidr dan madu gunung terhadap E-coli yaitu 20 mg/mL dan 20 mg/mL. Sedangkan pada pengukuran MBC madu sidr dan madu gunung terhadap E-coli yaitu 40 mg/mL dan 40 mg/mL. Pada pengukuran zona hambat pada konsentrasi terbesar (80%) madu sidr dan madu gunung terhadap E-coli menghasilkan zona hambat sebesar 25 mm dan 21 mm. Sedangkan pengukuran zona hambat pada konsentrasi terkecil (10%) madu sidr dan madu gunung terhadap E-coli menghasilkan zona hambat sebesar 14 mm dan 13 mm. Kesimpulan pada penelitian tersebut yaitu madu sidr lebih kuat dalam menghambat pertumbuhan bakteri daripada madu gunung. Hal ini berbeda dengan hasil yang ada pada penelitian ini, pada penelitian ini pada konsentrasi 20% sudah tidak mengindikasikan adanya zona hambat. Hal ini terjadi karena efek agent antibakteri dengan konsentrasi terkecil yang terdapat pada madu sidr maupun madu gunung pada peneliti tersebut lebih besar dibandingkan oleh madu karet yang diteliti oleh peneliti. Namun jika dibandingkan zona hambat pada konsentrasi terbesar antara madu sidr (25.0 ± 0.58 mm) dan madu gunung (21.0 ± 0.58 mm) dengan madu karet peneliti (29,87 ± 1,1 mm), madu karet memiliki zona hambat lebih besar dibandingkan dengan kedua madu tersebut. Hal ini dapat terjadi karena perbedaan konsentrasi terbesar yang digunakan pada madu sidr (80%) dan madu gunung (80%) dengan madu karet (100%) dan dugaan kandungan agen antimikroba pada madu karet lebih besar daripada madu gunung dan madu sidr.

40

Peneliti melakukan pengolahan data statistik menggunakan software SPSS. Uji nomalitas menghasilkan signifikansi 0,077 (p>0,05) berarti distribusi data normal dan uji homogenitas dengan signifikansi 0,210 (p>0,05) yang mengindikasikan bahwa varian data homogen.

Tabel 4.4 Hasil pengolahan data

Parameter Hasil

Mean Median SD

Madu Karet 100% 29,8750 29,80 1,10265

Madu Karet 50% 21,0250 21,150 0,72744

Sedimen (Madu Karet +

Aseton) 100% 28,5750 28,30 1,11766

Sedimen (Madu Karet +

Aseton) 50% 21,1750 21,20 0,29861

Sedimen (Madu Karet +

n-Heksan) 100% 26,1750 26,350 0,63966

Sedimen (Madu Karet +

n-Heksan) 50% 18,0750 18,050 1,24197

Amoksisilin 25 ug 22,10 22,10 0,42426

Uji one-way anova menghasilkan signifikansi 0,000 (p<0,05) yang mengindikasikan bahwa terdapat perbedaan signifikan pada tiap konsentrasi terhadap zona hambat. Hasil uji Post Hoc menunjukkan bahwa kelompok madu karet dengan konsentrasi 100% memiliki peran dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli lebih baik daripada kelompok yang lain.

41

BAB 5

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

1.Sebagian besar kelompok uji ekstrak madu karet berpengaruh dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli.

2.Ekstrak sedimen madu karet yang berasal dari pelarut aseton maupun n-heksan dan madu karet tanpa proses ekstraksi memiliki daya hambat minimal pada konsentrasi 50%

3.Madu karet tanpa proses ekstraksi memiliki daya hambat yang lebih baik terhadap bakteri Escherichia coli secara in vitro daripada kelompok ekstrak yang lainnya.

4.Berdasarkan hasil uji statistik Post Hoc One Way Anova disimpulkan bahwa dosis yang paling efektif dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli yaitu madu karet 100% tanpa proses ekstraksi.

5.2 Saran

1.Untuk lebih mengetahui perbandingan daya hambat yang lebih baik dari setiap kelompok maka diperlukan penelitian selanjutnya menggunakan pelarut yang bersifat semi polar seperti etil acetate.

42

DAFTAR PUSTAKA

1.Liu L, Johnson HL, Cousens S, Perin J, Scott S, Lawn JE, Rudan I, Campbell H, Cibulskis R, Li M, Mathers C, Black RE; Child Health Epidemiology Reference Group of WHO and UNICEF. Global, regional, and national causes of child mortality: an updated systematic analysis for 2010 with time trends since 2000. Lancet. 2012;379(9832):2151-61.

2. Kementrian Kesehatan RI. Data dan Informasi Kesehatan Triwulan II Situasi Diare di Indonesia). Jakarta. 2011

3. Suranto Adji. Khasiat dan Manfaat Madu Herbal. Jakarta : Agromedia Pustaka. 2004

4. Patra Ketut. Lebah untuk Kesejahteraan Masyarakat. Bekasi : Gaceca Exact. 2011

5. Ceyhan, N. and Ugur,A. Investigation of in vitro antimicrobial activity of honey. Riv. Biol. B. Forum, 94(2): 363-371. 2001

6. Al-Jabri, A.A., Nzeako, B., Al-Mahrooqi, Z., Al-Naqdy, A. and Nsanze, H. In vitro antibacterial activity of Omani and African honey. Br. J. Biomed. Sci., 60(1):1-4. 2003

7. Hannan A, Barkaat M, Saleem S, Usman M, Gilani WA . Manuka honey and its antimicrobial potential against multi drug resistant strains of Typhoidal salmonellae, Ph.D. thesis, Department of Microbiology, University of Health Science, Lahore, Pakistan. 2004

8. Patton T, Barrett J, Brennan J, Moran N. "Use of a spectrophotometric bioassay for determination of microbial sensitivity to manuka honey". J. Microbiol. Methods 64(1):84-95. 2006

9. Alandejani T, Marsan J, Ferris W, Slinger R, Chan F. Effectiveness of honey on Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa biofilms. Otolaryngol Head Neck Surg; 141(1):114-8. Epub. Mar. 2009

10. Alqurashi, A. M., Masoud, E. A., & Alamin, M. A. Antibacterial activity of Saudi honey against Gram negative bacteria, 5(January), 1–5. doi:10.5897/JMA2012.0235. 2013

11. Badawy, O. F. H., Shafii, S. S. A., Tharwat, E. E., & Kamal, A. M. Antibacterial activity of bee honey and its therapeutic usefulness against Escherichia coli O157  : H7 and Salmonella typhimurium infection, 23(3), 1011–1022. 2004

12. Mekawey, AAI. Evaluation the inhibitory action of Egyptian honey from various sources on fungal and bacterial growth and aflatoxins production. Ann. Agric. 55(2):221-223. 2010

13. Taormia, P.J., Niemira, B.A. and Beuchat, L.R. Inhibitory activity of honey against foodborne pathogens as influenced by the presence of hydrogen peroxide and level of antioxidant power. Int. J. of Food Microbiol. 69:217-225. 2001

14. Bilsel, Y., Bugra, D., Yamaner, S., Bulut, T. and Cevikbas, U. Could honey have a place in colitis therapy? Effects of honey, prednisolone and disulfiram on inflammation, nitric oxide and free radical formation. Dig. Surgery 19:306-311. 2002

15. Osho, A & Bello, O. Antimicrobial Effect of Honey Produced by Apis mellifera on some common Human Pathogens. Department of

Microbiology, Olabisi Onabanjo University, P.M.B. 2002, Ago-Iwoye. Asian J. Exp. Biol. SCI. Vol 1 (4) 2010:875-880. 2010

16. Kaper, J. B., Nataro, J. P., & Mobley, H. L. Pathogenic Escherichia coli. Nature Reviews. Microbiology, 2(2), 123–40. 2004

17. Jawetz, Melnick & Adelberg’s. Medical Microbiology 25th Edition. Mc Graw Hill Lange. 2010

18. Pomerance, H. H. Nelson Textbook of Pediatrics. Archives of Pediatrics & Adolescent Medicine. 1997

19. M Motior Rahman, Allan Richardson, & M Sofian-Azirun. Antibacterial Activity of Propolis and Honey Against Staphylococcus aureus and Escherichia coli. African Journal of Microbiology Research Vol. 4(16) pp. 1872-1878, 18 September, 2010

20. Jean Paul Dzoyem, Hiroshi Hamamoto, Barthelemy Ngameni, Bonaventure Tchaleu Ngadjui, Kazuhisa Sekimizu. Antimicrobial action mechanism of flavonoids from Dorstenia Species. Drug Discoveries & Therapeutics. 2013; 7(2):66-72. 2013

21. T.P. Tim Cushnie, Andrew J. Lamb. Review Antimicrobial Activity of flavonoids. International Journal of Antimicrobial Agents 26 (2005) 343–356. Elsevier. 2005

22. Lau, S., & Reddy, S. Major uropathogenic Escherichia coli strain isolated in the northwest of England identified by multilocus sequence typing. Journal of Clinical. 2008

23. Agil Dananjaya, Sri Winarsih, Bambang Prijadi. Pengaruh Ekstrak Metanol Fraksi Etil Asetat Madu Terhadap Pertumbuhan Escherichia coli Secara In Vitro. Universitas Brawijaya. 2013

44

24. Stephen J. Cavalieri, et al. Manual of Antimicrobial Susceptibility Testing. American Society for Microbiology. 2005

25. Andersen and Kenneth. Flavonoids Chemistry, Biochemistry and Applications. Taylor & Francis Group. 2006

LAMPIRAN 1 Hasil Uji Disk Difussion

Sedimen (madu + aseton) Madu Karet

Residu (madu + aseton) Residu (madu + n-heksan)

46

Lanjutan

LAMPIRAN 2 Uji Normalisasi SPSS

48

LAMPIRAN 3 Hasil Post Hoc One Way Anova

Parameter Perlakuan

Parameter Pembanding

Mean Difference

(I-J) Sig.

Madu Karet 100% Madu Karet 50% 8.85000* 0.000 Sedimen (madu karet +

aseton) 100% 1.30000 0,418

Sedimen (madu karet +

aseton) 50% 8.70000

*

0,000

Sedimen (Madu Karet +

n-Heksan) 100% 3.70000

*

0,000

Sedimen (Madu Karet +

n-Heksan) 50% 11.80000

*

0,000

LAMPIRAN 4 Metode Ekstraksi

A

Shaker

B

C D

50

LAMPIRAN 5 Surat Determinasi

52

LAMPIRAN 6 Surat Keterangan Lebah Apis mellifera

54

LAMPIRAN 7 Riwayat Penulis

Nama : Bagus Kusuma Wardhana

Tempat, tanggal lahir : Jakarta, 23 Desember 1993

Alamat : Perum Villa Mas Indah Blok B1 No 6 RT 001 RW 014, Kel Perwira, Kec Bekasi Utara

No HP : 085719077745

Email : baguswardhan@gmail.com

Riwayat Pendidikan

1.TK Bakti Siwi (1997-1999)

2.SDN Ujung Menteng 04 Pagi (1999-2005)

3.SMPN 236 Jakarta (2005-2008)

4.SMAN 103 Jakarta (2008-2011)

LAMPIRAN 4 Metode Ekstraksi A Shaker B

C D

LAMPIRAN 5 Surat Determinasi

LAMPIRAN 6 Surat Keterangan Lebah Apis mellifera

LAMPIRAN 7 Riwayat Penulis

Nama : Bagus Kusuma Wardhana

Tempat, tanggal lahir : Jakarta, 23 Desember 1993

Alamat : Perum Villa Mas Indah Blok B1 No 6 RT 001 RW 014, Kel Perwira, Kec Bekasi Utara

No HP : 085719077745

Email : baguswardhan@gmail.com

Riwayat Pendidikan

1.TK Bakti Siwi (1997-1999)

2.SDN Ujung Menteng 04 Pagi (1999-2005)

3.SMPN 236 Jakarta (2005-2008)

4.SMAN 103 Jakarta (2008-2011)