e.
Nutrient Agar
Ditimbang sebanyak 2,2 gram, dilarutkan dengan 110 ml akuades. Tuangkan 10 ml ke dalam masing-masing tabung reaksi. Dipanaskan hingga larut
sempurna. f.
Tryptose Broth
Ditimbang sebanyak 1,43 gram, dilarutkan dengan 55 ml akuades. Tuangkan 5 ml ke dalam tabung reaksi.
g.
MR-VP
Ditimbang sebanyak 3,74 gram, dilarutkan dengan 220 ml akuades. Tuangkan 10 ml ke dalam 22 tabung reaksi.
h.
Simmons Citrate
Ditimbang sebanyak 2,48 gram, dilarutkan dengan 110 ml akuades. Tuangkan 10 ml ke dalam tabung reaksi. Dipanaskan hingga larut sempurna.
Semua media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
3.4.2 Pengujian Bakteri Escherichia coli Berdasarkan SNI 01-2897-1992
Metode APM Angka Paling Mungkin menggunakan 5 tabung.
3.4.2.1 Uji Sangkaan
a. Pipet masing-masing 10 ml cuplikan ke dalam 5 tabung pertama yang berisi 10
ml Lactose Broth double strength, yang di dalamnya terdapat tabung Durham terbalik.
b. Pipet masing-masing 1 ml dan 0,1 ml cuplikan ke dalam 5 tabung yang kedua
dan ketiga yang berisi masing-masing 10 ml perbenihan yang sama tetapi yang single strength.
Universitas Sumatera Utara
c. Simpan semua tabung dalam lemari pengeram inkubator pada suhu 36
±
1°C selama 24 jam dan 48 jam.
d. Setelah 24 jam kemudian catat jumlah tabung yang membentuk gas pada
masing-masing pengenceran dan simpan lagi tabung yang tidak membentuk gas dalam inkubator pada suhu 36
±
1°C selama 24 jam, kemudian catat jumlah tabung yang membentuk gas.
3.4.2.2 Uji Penegasan
a. Masukkan 1 sengkelit 1 loopful biakan yang positif gas pada uji sangkaan ke
dalam tabung berisi E.C. Broth yang di dalamnya terdapat tabung Durham terbalik.
b. Inkubasikan dalam penangas air pada suhu 44-45°C selama 24-48 jam.
c. Catat tabung yang di dalamnya terbentuk gas E.coli dianggap positif jika di
dalam tabung terbentuk gas. d.
Lanjutkan penetapan E.coli dengan menginokulasikan biakan yang membentuk gas ke perbenihan EMB Agar pada cawan petri.
e. Inkubasikan pada suhu 35°C selama 18-24 jam.
f. Pilih koloni berwarna kilap logam dan inokulasikan pada Nutrient Agar miring
dalam tabung, inkubasikan pada suhu 35°C selama 18-24 jam.
3.4.2.3 Uji Biokimia Uji IMViC
a. Uji Indol
Dari biakan murni Nutrient Agar miring, inokulasikan 1 sengkelit biakan ke dalam Tryptose Broth. Inkubasikan pada suhu 35
±
1°C selama 18-24 jam.
Universitas Sumatera Utara
Tambahkan 0,3 ml pereaksi indol ke dalam masing-masing tabung dan kocok selama 10 menit. Warna merah tua pada permukaan menunjukkan reaksi
indole positif. Warna jingga menunjukkan reaksi indol negatif. b.
Uji Merah Metil Methyl Red Dari biakan murni Nutrien Agar miring, inokulasikan 1 ose sengkelit biakan
ke dalam perbenihan MR-VP. Inkubasikan pada suhu 35°C selama 48 jam. Tambahkan 5 tetes merah metil dan kocok. Warna kuning menunjukkan reaksi
negatif, sedangkan warna merah menunjukkan reaksi positif. c.
Uji VP Voges-Proskouer Dari biakan murni Nutrien Agar miring, inokulasikan 1 ose sengkelit
biakan ke dalam perbenihan MR-VP. Inkubasi pada suhu 36
±
1°C selama 48 jam.
Tambahkan 0,6 ml larutan alfa-naftol dan 0,2 ml larutan kalium hidroksida dan kocok. Diamkan selama 2-4 jam. Warna merah muda hingga
merah tua menunjukkan reaksi positif, sedangkan warna tidak berubah menunjukkan reaksi negatif.
d. Uji Sitrat
Dari biakan murni Nutrien Agar miring, inokulasikan 1 ose sengkelit biakan murni Nutrient Agar miring, inokulasikan 1 ose sengkelit biakan ke dalam
perbenihan Simmons Citrate. Inkubasikan pada suhu 35°C selama 48-96 jam. Warna biru menunjukkan reaksi positif, warna hijau menunjukkan reaksi negatif.
Universitas Sumatera Utara
3.5 Pengambilan Kesimpulan
