Efikasi vaksin sel utuh Streptococcus agalactiae pada ikan nila Oreochromis niloticus melalui perendaman

EFIKASI VAKSIN SEL UTUH Streptococcus agalactiae PADA
IKAN NILA Oreochromis niloticus MELALUI PERENDAMAN

TRIAN RIZKY FEBRIANSYAH

DEPARTEMEN BUDIDAYA PERAIRAN
FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2013

PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN
SUMBER INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi berjudul “Efikasi vaksin sel utuh
Streptococcus agalactiae pada ikan nila Oreochromis niloticus melalui
perendaman” adalah benar karya saya dengan arahan dari komisi pembimbing dan
belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber
informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan dan tidak
diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam
Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini.
Dengan ini saya melimpahkan hak cipta dari karya tulis saya kepada Institut

Pertanian Bogor.
Bogor, Februari 2013
Trian Rizky Febriansyah
C14070056

ABSTRAK
TRIAN RIZKY FEBRIANSYAH. Efikasi vaksin sel utuh Streptococcus
agalactiae pada ikan nila Oreochromis niloticus melalui perendaman. Dibimbing
oleh SUKENDA dan SRI NURYATI.
Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi efikasi vaksin sel utuh
formalin-killed cell Streptococcus agalactiae tipe non-hemolitik isolat N14G dan
NK1 yang diberikan melalui perendaman dalam mencegah penyakit
streptococcosis pada ikan nila. Ikan nila yang digunakan memiliki bobot
10,79±0,99 g, dipelihara sebanyak 10 ekor dalam akuarium ukuran
(60x30x35) cm. Ikan divaksinasi dengan metode perendaman dengan dosis
109 CFU/ml. Uji tantang dilakukan pada hari ke-11 pascavaksinasi dengan dosis
105CFU/ml. Parameter yang diamati meliputi sintasan (SR), tingkat kelangsungan
hidup relarif/Relative Persent Survival (RPS), total leukosit, aktifitas fagositik,
titer antibodi, total eritrosit, kadar hemoglobin, kadar hematokrit, dan kualitas air.
Pengamatan parameter dilakukan pada hari ke-0, ke-10, ke-20, dan ke-30. Hasil

penelitian menunjukkan perlakuan kedua vaksin yang diinfeksi bakteri isolat
N14Gmemberikan nilai sintasan dan nilai RPS tertinggi dibanding perlakuan
lainnya. Nilai sintasan dan RPS kedua perlakuan tersebut adalah 60% dan 40%.
Nilai RPS yang cukup kecil menunjukkan vaksin yang diberikan masih kurang
efektif untuk mencegah infeksi bakteri S. agalactiae.
Kata kunci: ikan nila, perendaman, Streptococcus agalactiae, vaksin sel utuh

ABSTRACT
TRIAN RIZKY FEBRIANSYAH. Efficacy of whole cells vaccine Streptococcus
agalactiae in tilapia Oreochromis niloticus by bath immersion method.
Supervised by SUKENDA dan SRI NURYATI.
This study aimed to evaluateefficacyof formalin-killed whole cellsof
Streptococcusagalactiaecellnon-hemolytic isolate N14G and NK1vaccine givenby
bath immersionin preventing streptococcosis in tilapia. The weight of tilapia used
that is 10.79±0.99 g, kept as many as 10 fishes in a tank size (60x30x35) cm. The
fishes was vaccinated by bath immersion method at concentration 109 CFU/ml.
The fishes was challenged by intraperitoneal with 105 CFU/ml at 11 days postvaccination. Parameters that would observe are survival rate (SR), Relative
Persent Survival (RPS), leukocytes total, fagocyte activity, antibody titer,
erythrocytes total, haemoglobin value, haematocrit value, dan water quality. The
parameters observation held on days 0, 10, 20, and 30. Results showed vaccine

treatment that challenged by isolate N14G give the highest survival rate and RPS
values than other treatments. Survival rate and RPS both vaccine treatments was
60% and 40%. RPS values were fairly small exhibit vaccinations are less effective
in preventing bacterial infections S.agalactiae.
Keywords: tilapia, bath immersion, Streptococcus agalactiae, whole cell vaccine

EFIKASI VAKSIN SEL UTUH Streptococcus agalactiae PADA
IKAN NILA Oreochromis niloticus MELALUI PERENDAMAN

TRIAN RIZKY FEBRIANSYAH

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Perikanan
pada
Departemen Budidaya Perairan

DEPARTEMEN BUDIDAYA PERAIRAN
FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR
2013

Judul Skripsi : Efikasi vaksin sel utuh Streptococcus agalactiae pada ikan nila
Oreochromis niloticus melalui perendaman
Nama
: Trian Rizky Febriansyah
NIM
: C14070056

Disetujui oleh

Dr.Ir. Sukenda, M.Sc.
Pembimbing I

Dr. Sri Nuryati, M.Si.
Pembimbing II

Diketahui oleh

Dr.Ir.Sukenda, M.Sc.
Ketua Departemen

Tanggal Lulus:

PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah memberikan
rahmat dan karunianya sehingga penyusunan skripsi dengan judul “Efikasi vaksin
sel utuh Streptococcus agalactiae pada ikan nila Oreochromis niloticus melalui
perendaman” dapat diselesaikan. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei 2012
sampai Juni 2012 bertempat di Laboratorium Kesehatan Ikan, Departemen
Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian
Bogor. Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1. Ayahanda Soepardi Mario dan ibunda Poniyati (Almh.) atas dukungan dan
doanya.
2. Bapak Dr. Ir. Sukenda, M.Sc. selaku Pembimbing I dan Ibu Dr. Sri Nuryati,
M.Si. selaku pembimbing II yang telah banyak memberikan arahan dan
bimbingan kepada penulis sampai menyelesaikan skripsi ini.
3. Ibu Dr. Ir. Mia Setiawati, M.Si. selaku dosen penguji.
4. Vika, Ririn, Lita, Agus, Ezi, Reki, Arie, Wahyu, Ridha, Fatah, Asep, Mira,

Bachtiar, Ikhsan, serta rekan-rekan BDP 44 lainnya atas kebersamaannya.
5. Pak Ranta, Kang Abe, Kang Asep, Kang Adna, Kang Adi, Ka Rahman, Ka
Rahmat, Dendi, Titi, Lita, Wahyu dan rekan-rekan LKI’ers BDP 45 atas
bantuannya.
Kritik dan saran yang membangun sangat diharapkan untuk perbaikan di
masa depan. Demikian skripsi ini disusun, semoga bermanfaat.
.

Bogor, Februari 2013
Trian Rizky Febriansyah

DAFTAR ISI
DAFTAR TABEL .................................................................................................. vi
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. vi
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... vi
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
Latar Belakang ............................................................................................... 1
Tujuan ............................................................................................................ 2
METODOLOGI ...................................................................................................... 2
Karakterisasi bakteri Streptococcus agalactiae ............................................. 2

Postulat Koch ................................................................................................. 2
Preparasi vaksin whole cellSteptococcus agalactiae ..................................... 2
Rancangan penelitian ..................................................................................... 3
Persiapan wadah dan ikan uji ........................................................................ 3
Uji in vivo ...................................................................................................... 3
Penghitungan data .......................................................................................... 4
Parameter teknis ................................................................................... 4
Parameter haematologi ......................................................................... 4
Analisa data .......................................................................................... 6
HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................... 6
Karakterisasi bakteri Streptococcus agalactiae ............................................. 9
Tingkat kelangsungan hidup relatif (RPS/Relative Percent Survival) ......... 7
Perhitungan sel darah putih ........................................................................... 7
Pengukuran aktifitas fagositosis .................................................................... 8
Pengukuran titer antibodi ............................................................................... 9
Perhitungan sel darah merah ........................................................................ 10
Pengukuran hemoglobin .............................................................................. 10
Pengukuran hematokrit ................................................................................ 11
Kualitas air ................................................................................................... 12
Pembahasan ................................................................................................. 12

KESIMPULAN ..................................................................................................... 16
Kesimpulan .................................................................................................. 16
Saran ............................................................................................................ 16
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 16
LAMPIRAN .......................................................................................................... 19
RIWAYAT HIDUP ............................................................................................... 22

DAFTAR TABEL
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Perlakuan pengujian efikasi vaksin S. agalactiae ............................................ 3

Hasil karakterisasi bakteri S. agalactiae .......................................................... 7
Nilai RPS ikan yang diberi vaksin S. agalactiae.............................................. 7
Jumlah leukosit ikan uji selama pemeliharaan ................................................. 8
Nilai aktifitas fagositik ikan uji selama pemeliharaan ..................................... 8
Nilai titer antibodi ikan uji selama pemeliharaan ............................................. 9
Jumlah eritrosit ikan uji selama pemeliharaan ............................................... 10
Kadar hemoglobin ikan uji selama pemeliharaan .......................................... 10
Kadar hematokrit ikan uji selama pemeliharaan ............................................ 11
Hasil uji kualitas air selama penelitian ........................................................... 12

DAFTAR GAMBAR
1
2

Alur penelitian .................................................................................................. 4
Gejala klinis ikan yang terinfeksi bakteri S. agalactiae ................................ 13

DAFTAR LAMPIRAN
1Contoh perhitungan analisis statistik nilai sintasan ikan uji setelah akhir
pemeliharaan ..................................................................................................... 19

2 Contoh perhitungan analisis statistik jumlah leukosit pada H30
pemeliharaan ..................................................................................................... 19
3 Contoh perhitungan analisis statistik aktifitas fagositik pada H30
pemeliharaan ..................................................................................................... 19
4 Contoh perhitungan analisis statistik titer antibodi pada H30 pemeliharaan.... 20
5 Contoh perhitungan analisis statistik jumlah eritrosit pada H30
pemeliharaan ..................................................................................................... 20
6 Contoh perhitungan analisis statistik kadar hemoglobin pada H30
pemeliharaan ..................................................................................................... 21
7 Contoh perhitungan analisis statistik kadar hematokrit pada H30
pemeliharaan ..................................................................................................... 21

1

PENDAHULUAN
Latar Belakang
Ikan nila (Oreochromis niloticus) merupakan salah satu komoditas air
tawar yang banyak dibudidayakan di Indonesia. Ikan nila juga termasuk
produk unggulan dalam sektor perikanan budidaya karena memiliki nilai
ekonomis yang cukup tinggi. Selain itu, ikan ini cukup mudah untuk

dipelihara dan pertumbuhannya relatif cepat.
Pemerintah berencana untuk meningkatkan produksi ikan nila sebesar
1,25 juta ton pada tahun 2014. Pada tahun 2011, produksi ikan nila
mencapai 567.078 ton (KKP, 2012). Untuk mewujudkan target produksi
tersebut, upaya yang dapat dilakukan adalah menerapkan sistem budidaya
intensif. Akan tetapi, sistem budidaya intensif dapat meningkatkan peluang
terjadinya berbagai penyakit parasitik, bakterial, ataupun viral. Salah satu
penyakit bakterial yang terjadi adalah penyakit streptococcosis pada ikan
nila yang disebabkan bakteri Streptococcus agalactiae. Bakteri ini terbagi
menjadi dua tipe, yaitu tipe β-hemolitik dan non-hemolitik. Bakteri tipe
non-hemolitik memiliki tingkat virulensi yang lebih tinggi dibandingkan
tipe β-hemolitik (Hardi, 2011).
Penyakit streptococcosis dilaporkan telah terjadi di beberapa negara
seperti Amerika Serikat, Israel, Jepang, dan Thailand (Evans et al., 2006).
Di Thailand, penyakit ini menyebabkan kematian 40-60 % selama dua
minggu pada budidaya ikan nila (Yuasa et al., 2008). Beberapa tahun
terakhir, penyakit streptococcosis dilaporkan terjadi di sejumlah wilayah
Indonesia, yaitu wilayah Sumatera, Jawa Barat, Jawa Tengah, Sulawesi, dan
Nusa Tenggara (Hardi, 2011).
Pada mulanya, antibiotik digunakan untuk mengatasi penyakit
streptococcosis. Hanya saja penggunaan antibiotik memiliki efek samping
karena dapat meningkatkan resistensi bakteri tersebut terhadap antibiotik.
Beberapa antibiotik juga sudah dilarang karena dapat mencemari
lingkungan. Bahkan negara-negara di Eropa menolak impor ikan yang
menggunakan antibiotik dalam pemeliharaannya (Anonim, 2006). Oleh
karena itu diperlukan tindakan alternatif untuk menanggulangi penyakit ini.
Salah satu alternatif adalah penggunaan vaksin untuk mencegah penyakit
streptococcosis. Hardi (2011) memberikan injeksi sel utuh vaksin formalinkilled cell S. agalactiae tipe non-hemolitik yang diuji tantang dengan bakteri
S. agalactiae pada ikan nila ukuran 15 gram menghasilkan sintasan 91,11%.
Pada penelitian ini akan dikaji pemberian vaksin dari isolat bakteri yang
sama pada penelitian Hardi (2011) melalui metode perendaman.

Tujuan Penelitian
Penelitian ini bertujuan untuk menguji efikasi vaksin sel utuh
formalin-killed cellS. agalactiaetipe non-hemolitik yang diberikan melalui
perendaman dalam mencegah penyakit streptococcosis pada ikan nila.

2

METODOLOGI
Karakterisasi bakteri Streptococcus agalactiae
Bakteri yang akan digunakan adalah bakteri Streptococcus agalactiae
dengan kode isolat N14G dan NK1 yang berasal dari Balai Riset Perikanan
Budidaya Air Tawar, Balai Riset Kelautan dan Perikanan, Departemen
Kelautan dan Perikanan. Bakteri tersebut ditumbuhkan pada media agar BHI
(Brain Heart Infusion) lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 oC.
Koloni bakteri yang tumbuh kemudian diuji untuk memastikan bakteri yang
akan digunakan adalah bakteri S. agalactiae. Uji yang dilakukan meliputi
pewarnaan Gram, uji motilitas, uji oksidatif-fermentatif, uji katalase, uji
oksidase, uji produksi asam dari D-manitol, dan uji aktivitas hemolitik.

Postulat Koch
Bakteri S. agalactiae yang telah dikarakterisasi kemudian digunakan
pada postulat Koch untuk menjaga virulensi bakteri pathogen yang akan
digunakan. Bakteri stok pada media agar BHI dikultur pada media cair BHI
20 ml pada water bath shaker selama 9 jam. Masing-masing bakteri dengan
kepadatan 105 CFU/ml kemudian disuntikkan pada 5 ekor ikan (tiap
perlakuan) sebanyak 0,1 mL/10 g bobot ikan. Ikan kemudian dipelihara dan
diamati untuk mengetahui gejala yang timbul setelah infeksi serta waktu
kematiannya. Ikan yang menunjukkan gejala streptococcosis kemudian
dipisahkan dan diambil organ mata dan otak untuk pengisolasian bakteri
dari organ tersebut. Bakteri tersebut kemudian dikarakterisasi kembali untuk
memastikan bahwa bakteri tersebut adalah bakteri S. agalactiae. Bakteri
hasil postulat Koch yang telah dikarakterisasi inilah yang digunakan untuk
preparasi vaksin dan uji tantang pada penelitian ini.

Preparasi vaksin whole cellStreptococcus agalactiae
Bakteri S. agalactiae dikultur dalam 2 tahap. Tahap pertama biakan
bakteri dari media agar dikultur pada media cair BHI 50 ml selama 24 jam.
Pada tahap kedua, biakan dari tahap pertama dikultur pada media cair BHI
650 ml sehingga volume total media cair adalah 700 ml. Biakan tersebut
kemudian dikultur selama 72 jam. Biakan tersebut kemudian ditambahkan
neutral buffer formaline 3% dan diinkubasi selama 24 jam untuk inaktifasi
bakteri. Biakan kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 7000 rpm pada
suhu 4 oC selama 30 menit sehingga terpisah antara pellet dan supernatan
(Evans et al., 2004). Untuk mendapatkan vaksin sel utuh, pellet hasil
senrifugasi dicuci dengan PBS (Phosphate Buffer Saline) sebanyak dua kali,
terakhir ditambahkan PBS sesuai dengan volume awal. Sampel vaksin
kemudian ditumbuhkan pada media agar BHI untuk memastikan sel bakteri
yang digunakan sudah tidak aktif. Jika pada media agar tersebut tidak

3

tumbuh bakteri, maka vaksin tersebut dapat digunakan untuk uji
selanjutnya.

Rancangan penelitian
Penelitian ini terdiri dari tiga perlakuan vaksin, yaitu non vaksin,
vaksin isolat N14G, dan vaksin isolat NK1. Sedangkan uji tantang
menggunakan bakteri S. agalactiae isolat N14G dan NK1. Model penelitian
seperti yang disajikan pada Tabel 1.
Tabel1.Perlakuan pengujian efikasi vaksin S. agalactiae
Vaksin
Non vaksin
Vaksin isolat N14G
Vaksin isolat NK1

Uji Tantang
Isolat N14G

Isolat NK1

Persiapan wadah dan ikan uji
Tahap persiapan wadah pemeliharaan diawali dengan pembersihan
akuarium dan peralatan aerasi dengan sabun, setelah itu dibilas dengan air
kemudian dilakukan pengeringan akuarium dan penjemuran peralatan
aerasi. Setelah kering, peralatan aerasi dipasang dan akuarium ditutup
dengan plastik hitam pada sisi luar lalu diisi air sebanyak 45 L. Air tersebut
kemudian didesinfeksi menggunakan klorin 30 ppm selama 24 jam. Setelah
itu ditambahkan natrium thiosulfat 15 ppm dan diberi aerasi kuat selama 24
jam untuk menghilangkan residu klorin pada air.
Ikan yang digunakan adalah ikan nila yang berasal dari daerah
Ciseeng, Bogor dengan bobot rata-rata 10,79±0,55 gram. Ikan diadaptasikan
pada wadah pemeliharaan berupa akuarium ukuran (60x30x35) cm selama
satu minggu dengan kepadatan 10 ekor/akuarium. Ikan diberi makan pakan
komersil merk F999 berupa pelet terapung sebanyak 3 kali sehari dengan
FR (feeding rate) 5%. Penyifonan dan pergantian air dilakukan tiap 3 hari
untuk menjaga kualitas air.

Uji in vivo
Pengujian in vivo dilakukan untuk mengetahui kemampuan vaksin
yang diberikan dalam mencegah infeksi bakteri S. agalactiae. Ikan
perlakuan direndam selama 20 menit dalam larutan vaksin yang telah
diencerkan dengan kepadatan akhir bakteri 109 CFU/mL (Evans et al.,
2004). Uji tantang dilakukan 10 hari setelah vaksinasi dengan
menginjeksikan bakteri S. agalactiae 0,1 mL/ekor dengan kepadatan bakteri
105 CFU/mL. Ikan kemudian dipelihara selama 30 hari dan dilakukan
pengamatan tiap 10 hari. Alur penelitian ini disajikan pada Gambar 1.

4

H0

H1

Keterangan:

H10 H11
H20
Gambar 1. Alur Penelitian
H0 = Gambaran darah awal
H1 = Vaksinasi awal
H10 = Gambaran darah pasca vaksinasi
H11 = Uji tantang
H20 = Gambaran darah pasca uji tantang
H30 = Gambaran darah akhir

H30

Penghitungan Data
Penghitungan parameter teknis meliputi :
1) Pengamatan nilai RPS (Relative Percent Survival) dilakukan pada
akhir penelitian untuk mengetahui efikasi dari vaksin yang
digunakan. Penghitungan nilai RPS menggunakan rumus berikut
(Ellis, 1988):
RPS (%) = [1 – (

)] x 100%

2) Pengamatan mortalitas ikan dilakukan pada akhir penelitian.
Penghitungan sintasan menggunakan rumus berikut:
Mortalitas (%) =

x 100%

Keterangan: Mt = Jumlah ikan akhir yang mati
N0 = Jumlah ikan akhir
3) Parameter kualitas air yang diukur berupa suhu yang diukur
menggunakan termometer, pH yang diukur menggunakan pH-meter,
dissolved oxygen (DO) diukur menggunakan DO-meter, dan Total
Amoniak Nitrogen (TAN) diukur menggunakan spektrofotometer.
Pengukuran data kualitas air dilakukan pada awal dan akhir
penelitian.
Penghitungan parameter haematologi
Pengamatan parameter haematologi dilakukan empat kali selama
penelitian berlangsung, yaitu sebelum perlakuan (H0), pascaperlakuan
vaksin (H10), pasca-uji tantang (H20), dan akhir penelitian (H30). Kegiatan
ini dilakukan dengan mengambil sampel darah ikan uji kemudian dilihat
jumlah eritrosit, jumlah leukosit, kadar hemoglobin, kadar hematokrit,
aktifitas fagositik, dan titer antibodi. Pengambilan darah menggunakan
syringe steril yang telah dibilas menggunakan natrium sitrat (Na-sitrat)
3,8% sebagai antikoagulan. Darah diambil pada bagian vena caudalis
kemudian ditempatkan dalam microtube yang juga telah dibilas dengan Nasitrat 3,8% untuk selanjutnya dilakukan pengamatan. Parameter haematologi
yang diukur meliputi:
1) Perhitungan sel darah putih (Blaxhall dan Daisley, 1973 dalam
Alifuddin, 1999). Sampel darah dihisap menggunakan pipet bulir
putih sampai skala 0,5 kemudian larutan Turk dihisap sampai skala

5

11. Pipet kemudian digoyangkan menyerupai angka delapan selama
3-5 menit untuk menghomogenkan darah dengan larutan Turk. Dua
tetesan pertama dari pipet dibuang, tetesan berikutnya diteteskan
pada hemasitometer untuk dihitung jumlah sel darah putihnya.
Pengamatan dilakukan menggunakan mikroskop dengan menghitung
jumlah sel darah pada lima kotak besar hemasitometer.
Penghitungan jumlah sel darah putih menggunakan rumus berikut:
Σ SDP = rata-rata sel terhitung x
x faktor pengencer
2) Pengukuran aktifitas fagositosis (Anderson dan Siwicki, 1993).
Sampel darah diambil sebanyak 50 µL dan diletakkan dalam
microtube steril. Darah kemudian dicampur dengan bakteri
Staphylococcus aureus dengan kepadatan 108 cfu/mL sebanyak
50 µL dan dihomogenkan. Campuran tersebut kemudian diinkubasi
selama 20 menit. Setelah itu, campuran tersebut diambil 5 µL dan
diteteskan pada kaca preparat untuk dijadikan preparat ulas. Setelah
kering, preparat tersebut direndam dalam methanol selama
5-10 menit kemudian dikeringkan. Setelah kering, preparat direndam
dalam larutan Giemsa selama 10-15 menit kemudian dikeringkan
kembali. Setelah kering, preparat tersebut dapat diamati
menggunakan mikroskop.dan dihitung persentase sel yang aktif
melakukan proses fagositosis dari 100 sel fagosit yang teramati.
Penentuan nilai aktifitas fagositosis menggunakan rumus berikut:
Σ
x 100%
AF (%) =
Σ

3) Pengukuran titer antibodi (Roberson, 1990). Untuk mengukur titer
antibodi, sampel yang dibutuhkan adalah serum darah. Serum
didapat dengan cara mengendapkan sampel darah yang telah
ditampung dalam microtube kemudian disentrifugasi dengan
kecepatan 3000 rpm selama 3 menit. Serum kemudian dipisahkan
dari sel darah dan diinkubasi selama 20 menit untuk mengaktifkan
komplemen. Serum dapat disimpan dalam refrigerator untuk
pengamatan titer antibodi.Pengukuran titer antibodi dilakukan
dengan memasukkan larutan PBS sebanyak 25 µL kedalam lubang
microplate dari lubang 2 sampai 12. Serum sebanyak 25 µL
dimasukkan kedalam lubang 1 dan 2. Setelah itu dilakukan
pengenceran bertingkat dari lubang 2 sampai lubang 11. Bakterin
sebanyak 25 µL kemudian dimasukkan kedalam lubang 1 sampai 12,
kemudian dihomogenkan dengan cara menggoyang microplate
secara perlahan. Microplate ditutup menggunakan plastik kemudian
diinkubasi semalam dan dilakukan pengamatan keesokan harinya.
Nilai titer antibodi ditentukan dari lubang terakhir pada microplate
yang terdapat reaksi aglutinasi.
4) Perhitungan sel darah merah (Blaxhall dan Daisley, 1973 dalam
Alifuddin, 1999). Sampel darah dihisap menggunakan pipet bulir
merah sampai skala 0,5 kemudian larutan Hayem dihisap sampai
skala 101. Pipet kemudian digoyangkan menyerupai angka delapan
selama 3-5 menit untuk menghomogenkan darah dengan larutan
Hayem. Dua tetesan pertama dari pipet dibuang, tetesan berikutnya

6

diteteskan pada hemasitometer untuk dihitung jumlah sel darah
merahnya. Pengamatan dilakukan menggunakan mikroskop dengan
menghitung jumlah sel darah pada lima kotak besar hemasitometer.
Penghitungan jumlah sel darah merah menggunakan rumus berikut:
Σ SDM = rata-rata sel terhitungx
x faktor pengencer
5)Pengukuran hemoglobin (Wedemeyer dan Yasutake, 1977 dalam
Alifuddin, 1999). Sampel darah dihisap menggunakan pipet Sahli
sampai skala 20 mm3 kemudian dimasukkan kedalam tabung Hbmeter yang telah diisi HCl 0,1 N sampai skala 10 pada skala merah.
Sampel darah tersebut kemudian didiamkan selama 3-5 menit agar
hemoglobin bereaksi dengan HCl. Larutan tersebut kemudian
ditambahkan akuades sampai warnanya sama dengan larutan standar.
Pembacaan skala dilihat dengan mencocokkan tinggi larutan dengan
nilai pada skala kuning yang memiliki satuan G% pada tabung.
6) Pengukuran hematokrit (Anderson dan Siwicki, 1993). Sampel darah
dihisap menggunakan tabung mikrohematokrit dengan sistem
kapiler. Setelah sampel darah mencapai ¾ bagian tabung, ujung
tabung disumbat menggunakan crystoseal. Tabung kemudian
disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 5 menit.
Pengukuran nilai hematokrit dilakukan dengan cara membandingkan
tinggi endapan darah dengan tinggi total darah dalam tabung.
Penghitungan nilai hematokrit menggunakan rumus berikut:
x 100%
Hc (%) =
Analisa Data
Penelitian ini dirancang dengan menggunakan Rancangan Acak
Lengkap (RAL) Faktorial dengan tiga ulangan pada uji in vivo. Data
sintasan, RPS, dan pengamatan hematologi berupa jumlah sel darah putih,
aktifitas fagositik, titer antibodi, jumlah sel darah merah, hemoglobin, serta
hematokrit dianalisa menggunakan program Microsoft Excel 2007, SPSS
16, dan SAS 16 dengan uji lanjut Duncan. Sedangkan untuk data kualitas air
dianalisa secara deskriptif.

HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakterisasi bakteri Streptococcus agalactiae
Untuk mengetahui karakteristik bakteri yang akan digunakan,
dilakukan beberapa uji meliputi pewarnaan Gram, sifat biokimia dan
fisiologi bakteri. Hasil karakterisasi disajikan pada Tabel 2.

7

Tabel2. Hasil karakterisasi bakteri S. agalactiae
Uji
Pewarnaan Gram
Bentuk dan penataan sel
Oksidatif/Fermentatif
Motilitas
Oksidase
Katalase
Produksi asam dari Dmanitol
Uji aktifitas hemolitik

Isolat N14G
+
Bulat berantai
Fermentatif
-

Isolat NK1
+
Bulat berantai
Fermentatif
-

-

-

Non hemolitik

Non hemolitik

Hasil pengamatan menunjukkan kedua bakteri uji memiliki
karakteristik yang sama, baik itu sifat Gram, sifat biokimia dan
fisiologisnya. Uji aktifitas hemolitik menunjukkan bahwa kedua bakteri
termasuk tipe non hemolitik. Perbedaan bakteri ini terletak pada kandungan
protein terlarut pada ECP yang dihasilkan bakteri . Bakteri isolat N14G
memilki kandungan protein ECP 56,75 ppm, sedangkan bakteri isolat NK1
kandungan protein ECP 81,75 ppm (Dwinanti, 2012).

Tingkat kelangsungan hidup relatif (RPS /Relative Percent Survival)
Nilai RPS digunakan untuk mengetahui efektifitas vaksin untuk
melindungi inang setelah diuji dengan panyakit. Data nilai RPS disajikan
pada Tabel 3.
Tabel3. Nilai RPS ikan yang diberi vaksin S. agalactiae
Kode
perlakuan
1
2
3
4
5
6

Vaksin
Non
vaksin
Vaksin
isolat
N14G
Vaksin
isolat NK1

Uji tantang
Isolat
N14G
IsolatNK1
IsolatN14G
Isolat NK1
IsolatN14G
Isolat NK1

Total
ikan

Jumlah
ikan mati

MR (%)

RPS (%)

30

20

66,67±5.77a

-

30
30

23
12

76,67±15.27a
40±10 a

40

30

18

60±10 a

21,74

12
20

a

40
13,04

30
30

40±10
66,67±15.27a

Dari data yang terlihat, masih terdapat ikan yang mati walaupun telah
diberi vaksin. Nilai RPS tertinggi terdapat pada perlakuan 3 dan 5, yaitu
40%. Sedangkan nilai RPS terendah terdapat pada perlakuan 6, yaitu
13,04%.

Total sel darah putih
Parameter hematologi yang dapat menggambarkan respon imun tubuh
adalah jumlah leukosit. Jumlah leukosit biasanya sejalan dengan aktifitas
fagositik. Jumlah rata-rata leukosit pada tiap perlakuan disajikan pada
Tabel 4.

8

Tabel4.Jumlah leukosit ikan uji selama pemeliharaan
Kode

Vaksin

1

Non
vaksin

2
3

Uji
tantang
Isolat
N14G
IsolatNK1
IsolatN14G

H0

Jumlah leukosit (x105 sel/mm3)
H10
H20
H30
4.7±0.86c

12.37±1.07a

5.41±0.49a

6.68±0. 95b
7.82±0.09ab

9±0.81a
13.99±1.08a

14.17±5.69a
5.29±0.23a

Vaksin
2.81±0.68
isolat
4
Isolat NK1
3.74±0.03c 10.62±5.00a 10.25±4.23a
N14G
Vaksin
5
IsolatN14G
6.80±0.06b 14.66±1.13a 24.74±11.18a
isolat
6
Isolat NK1
NK1
9.12±0.95a
10±0.24a
12.38±7.38a
Keterangan: huruf superscript yang berbeda menunjukkan hasil yang berbeda nyata (p <
0,05) dan dibaca dalam kolom yang sama

Jumlah awal leukosit ikan uji pada H0 berkisar 2,81x105 sel/mm3.
Berdasarkan Tabel 4, dapat dilihat bahwa jumlah leukosit ikan selama
penelitian menunjukkan nilai yang fluktuatif. Pada H10, jumlah leukosit
ikan perlakuan semuanya meningkat dibanding H0. Pada H20, jumlah
leukosit semua perlakuan terus meningkat. Peningkatan jumlah leukosit
pada H10 dan H20 mengindikasikan sistem imun pada ikan uji bekerja
setelah diberi perlakuan vaksin dan uji tantang bakteri. Pada H30, jumlah
leukosit perlakuan 1 dan 3 mengalami penurunan, sedangkan pada pelakuan
lainnya jumlah leukosit semakin meningkat. Hal tersebut menunjukkan
tubuh ikan terus menghasilkan leukosit untuk melindungi tubuh dari
serangan bakteri. Sedangkan perlakuan yang jumlah leukositnya menurun
menunjukkan bakteri yang menginfeksi tubuh sudah mulai berkurang. Hasil
uji statisitik menunjukkan jumlah leukosit pada H30 menunjukkan nilai
yang tidak berbeda nyata.

Aktifitas fagositosis
Nilai aktifitas fagositik pada tiap perlakuan disajikan pada Tabel 5.
Tabel5.Nilai aktifitas fagositik ikan uji selama pemeliharaan
Aktifitas Fagositik (%)
Uji
tantang
H0
H10
H20
H30
Isolat
a
ab
1
78.5±6.36
48.5±16.26
56.5±6.36a
N14G
Non vaksin
2
IsolatNK1
55.5±7.78a
31±11.31b
57±5.66a
3
IsolatN14G 14.5±0.71
73±8.48a
30.5±6.36b
39±1.41b
Vaksin
a
a
isolat N14G Isolat NK1
4
67±4.24
58.5±4.95
64±7.07a
a
a
5
53.5±37.48
55.5±2.12
67±5.66a
Vaksinisolat IsolatN14G
NK1
6
Isolat NK1
69±4.24a
43±1.41ab
62.5±6.36a
Keterangan: huruf superscript yang berbeda menunjukkan hasil yang berbeda nyata
(p < 0,05) dan dibaca dalam kolom yang sama
Kode

Vaksin

Nilai aktifitas fagositik ikan uji pada H0 adalah 14,5%. Berdasarkan Tabel
5, dapat dilihat bahwa nilai aktifitas fagositik ikan selama penelitian
menunjukkan nilai yang fluktuatif. Pada H10, nilai aktifitas fagositik ikan
uji pada semua perlakuan meningkat. Hal ini menunjukkan sistem
pertahanan tubuh langsung merespon saat vaksin masuk ke dalam tubuh.
Nilai aktifitas fagositik tertinggi perlakuan vaksin ditunjukkan pada

9

perlakuan 2 dengan nilai 73%. Pada H20, nilai aktifitas fagositik cenderung
menurun kemudian meningkat pada H30. Berdasarkan uji statistik, jumlah
leukosit pada H20 menunjukkan nilai yang berbeda nyata. Nilai aktifitas
fagositik pada H30 menunjukkan masih adanya aktifitas leukosit dalam
memfagosit bakteri. Perlakuan 5 menunjukkan nilai aktifitas fagositik
tertinggi yaitu 67%. Sedangkan nilai aktifitas fagositik terendah pada
perlakuan 4 yaitu 39 %. Hasil uji statisitik menunjukkan nilai aktifitas
fagositik pada H30 menunjukkan nilai yang berbeda nyata.

Titer antibodi
Nilai titer antibodi pada tiap perlakuan disajikan pada Tabel6.
Tabel6.Nilai titer antibodi ikan uji selama pemeliharaan
Titer Antibodi (- log 2)
H10
H20
H30
1
Isolat N14G
8±0.00ab
5±0.00a
Non vaksin
2
IsolatNK1
3.5±2.12bc
4±0.00a
a
a
3
IsolatN14G
8.5±2.12
10±1.41
4.5±2.12a
Vaksin
0±0.00
a
bc
isolat N14G Isolat NK1
4
9±1.41
5.5±0.71
3±0.00a
5
IsolatN14G
6±0.00a
10±0.00a
4±0.00a
Vaksin
a
a
isolat NK1
6
Isolat NK1
6.5±0.71
10.5±0.71
4±0.00a
Keterangan: huruf superscript yang berbeda menunjukkan hasil yang berbeda nyata
(p < 0,05) dan dibaca dalam kolom yang sama
Kode

Vaksin

Uji tantang

H0

Berdasarkan Tabel 6, pada H0 antibodi pada semua perlakuan ikan uji
belum terbentuk.Berdasarkan Tabel 6, dapat dilihat bahwa nilai titer
antibodi ikan selama penelitian menunjukkan nilai yang fluktuatif. Pada
H10 antibodi terbentuk dan nilainya cenderung meningkat pada H20. Nilai
titer tertinggi ditunjukkan pada perlakuan 4, yaitu pada pengenceran 1:512.
Hal ini menunjukkan bahwa vaksin yang diberikan mampu meningkatkan
sistem imun pada ikan uji untuk membentuk antibodi Hasil uji statistik
menunjukkan nilai yang tidak berbeda nyata pada tiap perlakuan. Pada H20,
nilai titer perlakuan meningkat setelah dilakukan uji tantang. Nilai titer
tertinggi pada perlakuan 6, yaitu pada pengenceran 1:1.448. Pada H30,
antibodi ikan uji masih terbentuk namun nilai titernya lebih rendah
dibanding nilai titer pada H20. Walau nilai titer menurun pada H30, sistem
pertahanan tubuh masih bekerja. Hal ini dapat dilihat pada data jumlah
leukosit dan aktifitas fagositik yang cukup tinggi pada H30. Pada Tabel 5,
nilai aktifitas fagositik pada H30 menunjukkan aktifitas fagositik yang
masih cukup tinggi.

Total sel darah merah
Jumlah rata-rata eritrosit pada tiap perlakuan disajikan pada Tabel 7.

10

Tabel7.Jumlah eritrosit ikan uji selama pemeliharaan
Kode

Vaksin

1

Non
vaksin

2
3

Uji
tantang
Isolat
N14G
IsolatNK1
IsolatN14G

H0

Jumlah Eritrosit ( x106 sel/mm3)
H10
H20
H30
1±0.03ab

1.67±0.19a

0.53±0.03a

1.55±0.54ab
1.2±0.18ab

0.91±0.41a
1.7±0.75a

1.28±0.56a
0.88±0.47a

Vaksin
3.66±0.73
isolat
4
Isolat
NK
1
N14G
1.63±0.06a 1.43±0.00a 0.88±0.18a
5
IsolatN14G
1.32±0.15ab 1.11±0.66a 0.84±0.67a
Vaksin
isolat NK1 Isolat NK1
6
0.92±0.09b 1.2±0.00a 1.47±0.49a
Keterangan: huruf superscript yang berbeda menunjukkan hasil yang berbeda nyata
(p < 0,05) dan dibaca dalam kolom yang sama

Jumlah awal eritrosit ikan uji sebelum perlakuan (H0) berkisar
3,66x106 sel/mm3. Berdasarkan Tabel 7, dapat dilihat bahwa jumlah eritrosit
ikan selama penelitian menunjukkan nilai yang fluktuatif. Setelah vaksinasi
dilakukan (H10), jumlah eritrosit ikan perlakuan semuanya mengalami
penurunan dibanding H0. Berdasarkan hasil uji statistik, jumlah eritrosit tiap
perlakuan pada H10 menunjukkan nilai yang berbeda nyata. Pasca uji
tantang (H20) hanya jumlah eritrosit perlakuan 1, 3, dan 6 yang mengalami
peningkatan. Akan tetapi, hasil uji statistik menunjukkan nilai yang tidak
berbeda nyata pada tiap perlakuan. Pada akhir pengamatan (H30), jumlah
eritrosit perlakuan 1, 3, 4, dan 5 mengalami penurunan. Pada perlakuan 2
dan 6 jumlah eritrosit semakin meningkat dibanding H20. Akan tetapi, hasil
uji statistik pada H30 menunjukkan nilai yang tidak berbeda nyata pada tiap
perlakuan.

Hemoglobin
Kadar hemoglobin pada tiap perlakuan disajikan pada Tabel 8.
Tabel8.Kadar hemoglobin ikan uji selama pemeliharaan
Kadar Hemoglobin (G%)
H10
H20
H30
1
Isolat N14G
2.1±0.14d 5.2±0.28a 4.7±1.27a
Non vaksin
2
IsolatNK1
4.1±0.42b 2.8±0.56b 4.3±1.84a
3
IsolatN14G
Vaksin
6.2±0.28
6.1±0.14a 5.2±0.28a
4±0.28a
a
b
isolat N14G Isolat NK1
4
6.7±0.42
2.5±0.42
3.4±0.28a
c
a
5
IsolatN14G
2.9±0.14
5.1±0.42
5.6±1.41a
Vaksin
b
b
isolat NK1
6
Isolat NK1
4.5±0.14
3.6±0.56
3.2±0.85a
Keterangan: huruf superscript yang berbeda menunjukkan hasil yang berbeda nyata
(p < 0,05) dan dibaca dalam kolom yang sama
Kode

Vaksin

Uji tantang

H0

Jumlah awal kadar hemoglobin ikan uji pada H0 berkisar 6,2 G%.
Berdasarkan Tabel 8, dapat dilihat bahwa kadar hemoglobin ikan selama
penelitian menunjukkan nilai yang fluktuatif. Pada H10, kadar hemoglobin
ikan perlakuan semuanya menurun kecuali pada perlakuan 4 yang
meningkat menjadi 6,7 G%. Kadar hemoglobin terendah pada perlakuan 1
dengan nilai 2,1 G%. Hasil uji statistik menunjukkan nilai yang berbeda
nyata pada tiap perlakuan. Pada H20, kadar hemoglobin ikan uji cenderung
menurun, kecuali pada perlakuan 1 dan 5 yang kadar hemoglobinnya

11

meningkat. Kadar hemoglobin perlakuan terendah terdapat pada perlakuan
4, yaitu 2,5 G%. Hasil uji statistik menunjukkan nilai yang berbeda nyata
terhadap kadar hematokrit. Pada H30, kadar hemoglobin ikan uji cenderung
mengalami peningkatan. Kadar hemoglobin tertinggi terdapat pada
perlakuan 5 dengan nilai 5,6 G%. Akan tetapi nilainya tidak berbeda nyata
setelah dilakukan uji statistik.

Hematokrit
Berdasarkan hasil yang diperoleh, kadar hematokrit yang diamati
memiliki nilai yang bevariasi. Rata-rata kadar hematokrit pada tiap
perlakuan disajikan pada Tabel 9.
Tabel9.Kadar hematokrit ikan uji selama pemeliharaan
Kode

Vaksin

1

Non
vaksin

2
3

Uji
tantang
Isolat
N14G
IsolatNK1
IsolatN14G

H0

Kadar Hemoglobin (G%)
H10
H20
27.75±2.59a
25.1±10.73a

17.21±2.59a
12.98±0.25a

H30

18.56±5.56a
14.91±10.73a

Vaksin
18.24±2.95a 26.86±2.95a 14.58±2.95a
19.82±0.83
isolat
4
Isolat NK1
16.91±3.72a 21.05±3.72a 16.16±4.73a
N14G
Vaksin IsolatN14G
5
17.53±0.56a 21.82±0.56a 14.45±0.25a
isolat
6
Isolat NK1
20.27±5.73a 18.92±0.00a 15.95±5.73a
NK1
Keterangan: huruf superscript yang berbeda menunjukkan hasil yang berbeda nyata
(p < 0,05) dan dibaca dalam kolom yang sama

Jumlah awal kadar hematokrit ikan uji pada H0 berkisar 19,82%.
Berdasarkan Tabel 11, dapat dilihat bahwa kadar hemoglobin ikan selama
penelitian menunjukkan nilai yang fluktuatif. Pada H10, kadar hematokrit
ikan perlakuan cenderung meningkat kemudian menurun pada H20. Kadar
hematokrit tertinggi terdapat pada perlakuan 1, yaitu 27,75%. Sedangkan
nilai perlakuan terendah pasca vaksinasi terpadapat pada perlakuan 4, yaitu
16,91%. Hasil uji statistik menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata pada
tiap perlakuan. Pada H20, kadar hematokrit semakin bervariasi. Perlakuan 3
memiliki kadar hematokrit tertinggi dengan nilai 26,86%. Pada H30, kadar
hematokrit ikan uji tetap fluktuatif. Hasil uji statistik pada H30
menunjukkan nilai yang tidak berbeda nyata pada tiap perlakuan.

Kualitas air
Uji kualitas air dilakukan pada H0 dan pada H30. Parameter yang
diukur meliputi suhu, pH, Dissolve Oxygen (DO) atau kandungan oksigen
terlarut, dan total amoniak nitrogen (TAN). Hasil uji kualitas air disajikan
pada Tabel 10.

12

Tabel10.Hasil uji kualitas air selama penelitian
Kode perlakuan
Awal
1
2
3
4
5
6
Kisaran
toleransi

Suhu (oC)
26,7
27,7
27,35
26,75
27,1
26,75
27
25-30

Parameter kualitas air
pH
DO (mg/L)
7,14
5,3
6,55
4,85
6,62
5,6
6,59
5,55
6,48
4,45
6,56
5,05
6,51
4,25
>3
7-8
(Suyanto, 2003)

TAN (mg/L)
0,053
0,12
0,14
0,21
0,34
0,28
0,27
50%.
Status kesehatan ikan selama penelitian dapat diamati dari hematologi
ikan. Dalam penelitian ini, parameter hematologi yang diukur adalah jumlah
leukosit, aktifitas fagositik, titer antibodi, jumlah eritrosit, kadar
hemoglobin, dan kadar hematokrit. Leukosit berperan dalam sistem
pertahanan tubuh karena beberapa jenis leukosit seperti monosit dan
neutrofil merupakan sel yang aktif melakukan aktifitas fagositik jika tubuh
diinvasi oleh materi asing. Leukosit juga berperan dalam pembentukan
antibodi. Jumlah leukosit ikan uji selama penelitian berkisar antara 2,8124,74x106 sel/mm3. Jumlah leukosit sebelum diberi perlakuan adalah
2,81x106 sel/mm3. Jumlah ini meningkat setelah ikan diberi perlakuan
vaksin dan uji tantang bakteri. Jumah leukosit yang meningkat
pascavaksinasi dan pascauji tantang menunjukkan sistem pertahanan tubuh
merespons adanya antigen yang masuk kedalam tubuh sebagai upaya
pertahanan tubuh. Tubuh ikan membaca bahwa vaksin yang masuk
dianggap sebagai antigen. Tubuh memberi respon dengan memproduksi
leukosit. Selain itu tubuh juga memberi respon dengan membentuk antibodi,
namun antibodi ini kurang efektif pada awal infeksi, dalam hal ini pada awal
vaksinasi. Martins et al. (2008) menyatakan bahwa jumlah leukosit pada
ikan yang terinfeksi patogen akan meningkat sebagai upaya pertahanan
tubuh. Pada akhir pengamatan, jumlah leukosit masih cukup tinggi pada
beberapa perlakuan. Hal tersebut menunjukkan tubuh masih memberikan
perlawanan terhadap infeksi bakteri.
Jumlah leukosit juga terkait dengan aktifitas fagositosis dan titer
antibodi pascavaksinasi dan uji tantang. Sebelum vaksinasi nilai aktifitas
fagositik ikan uji adalah 14,5%. Setelah dilakukan vaksinasi, nilai aktifitas
fagositik meningkat. Setelah uji tantang, nilai aktifitas fagositik lebih rendah
dibandingkan pasca-vaksinasi. Akan tetapi nilai titer antibodi tertinggi
terjadi pada saat pascauji tantang, yaitu pada pengenceran 1:512. Hal
tersebut menunjukkan pada saat pascauji tantang, leukosit, dalam hal ini
limfosit B yang berdiferensiasi menjadi sel-sel plasma lebih banyak
memproduksi antibodi dibandingkan melakukan aktifitas fagositik. Pada
akhir pengamatan yang terjadi justru sebaliknya, yaitu nilai aktifitas
fagositik meningkat pada akhir pengamatan sedangkan nilai titernya
cenderung menurun. Hal tersebut menunjukkan bahwa pada akhir
pengamatan sistem imun masih memberikan perlawanan terhadap infeksi
bakteri. Hal ini juga didukung oleh jumlah leukosit pada akhir pengamatan
yang masih cukup tinggi jumlahnya. Terbentuknya sistem imun menurut
Tizard (1988) dalam Lusiastuti et al. (2010) yaitu antigen yang masuk
kedalam tubuh akan difagosit oleh monosit (makrofag) dan neutrofil.
Komponen antigen hasil proses fagositik diikat oleh limfosit T kemudian
mengirimkan informasi ke limfosit B. Limfosit B akan membentuk antibodi
spesifik berdasarkan antigen yang diterima. Antibodi berperan dalam
melumpuhkan patogen dan mengurangi toksisitas racun sehingga mudah
diserang oleh sel fagosit. Selain itu, antibodi juga mengaktifkan komplemen
sehingga patogen menjadi lisis (Sugiani, 2004).

15

Jumlah eritrosit setelah perlakuan vaksin menunjukkan nilai yang
menurun dibandingkan sebelum diberi vaksin. Hal ini diduga karena vaksin
yang diberikan dianggap benda asing sehingga ikan menjadi stres yang
mengakibatkan turunnya eritrosit dan tubuh lebih banyak memproduksi
leukosit sebagai bentuk pertahanan tubuh. Setelah uji tantang, jumlah
eritrosit cenderung meningkat akan tetapi menurun pada akhir pengamatan.
Hal tersebut diduga karena infeksi bakteri masih ada sehingga tubuh
memproduksi leukosit lebih banyak sebagai bentuk pertahanan tubuh.
Walaupun jumlah eritrosit cenderung menurun, akan tetapi jumlahnya masih
pada kisaran normal. Affandi dan Tang (2002) menyatakan, jumlah eritrosit
ikan teleostei dalam keadaan normal berkisar antara 1,05-3x106 sel/mm3.
Kadar hemoglobin ikan uji sebelum diberi vaksin yaitu 6,2 G%. Kadar
hemoglobin ikan uji kemudian menurun pascavaksinasi dan pascauji
tantang. Pola menurunan kadar hemoglobin sama dengan pola menurunnya
jumlah eritrosit pascavaksinasi dan pascauji tantang. Fujaya (2004)
memenyatakan terdapat korelasi antara jumlah eritrosit, kadar hemoglobin,
dan kadar hematokrit. Semakin rendah jumlah eritrosit, semakin rendah pula
kadar hemoglobin dan kadar hematokritnya.
Kadar hematokrit didefinisikan sebagai perbandingan antara padatan
sel darah merah dalam darah yang dinyatakan dalam persen
(Affandi dan Tang, 2002). Nilai hematokrit awal ikan uji yaitu 19,82%.
Kadar hematokrit meningkat pasca vaksinasi. Nilai hematokritnya masih
ada pada kisaran normal. Kadar hematokrit ikan normal berkisar antara 2030% (Bond, 1982). Kadar hematokrit menurun setelah uji tantang sampai
akhir pengamatan. Bahkan kadar hematokrit pada akhir pengamatan
nilainya dibawah kisaran normal. Kadar hematokrit yang semakin menurun
diduga karena infeksi bakteri. Blaxhall (1971) menyatakan kadar hematokrit
yang rendah dapat menjadi petunjuk kurangnya protein dalam pakan,
defisiensi vitamin, atau ikan terkena infeksi sehingga nafsu makannya
menurun.Pada akhir pengamatan, kadar hematokrit tiap perlakuan ada yang
meningkat dan ada juga yang menurun. Namun jumlahnya tidak berbeda
nyata antara perlakuan satu dengan yang lainnya.
Selama penelitian, pemeliharaan kualitas air dilakukan untuk menjaga
kualitas media hidup ikan uji. Penyifonan dan pergantian air dilakukan
sebagai upaya menjaga kualitas air. Selain itu dilakukan juga pengukuran
kualitas air untuk memastikan kelayakan media pemeliharaan. Parameter
yang diukur meliputi suhu, pH, DO, dan TAN. Hasil uji kualitas air pada
Tabel 11 menunjukkan parameter yang diukur masih pada kisaran normal
sehingga layak digunakan sebagai media pemeliharaan. Selain itu, hal ini
menunjukkan ikan yang terserang penyakit bukan berasal dari media
pemeliharaan yang buruk melainkan dari infeksi bakteri yang sengaja
dilakukan.

16

KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan
Vaksin sel utuh formalin-killed cellS. agalactiaetipe non-hemolitik
dengan kepadatan 109 CFU/ml yang diberikan dengan cara perendaman
dapat meningkatkan sistem imun, akan tetapi nilai RPS yang kecil
menunjukkan vaksin yang diberikan masih kurang efektif untuk mencegah
infeksi bakteri S. agalactiae.

Saran
Perlu dilakukan penelitian untuk mengkaji efikasi vaksin yang
diberikan melalui pakan dalam mencegah penyakit infeksi yang disebabkan
bakteri S. agalactiae.

DAFTAR PUSTAKA
Affandi R., Tang U.M., 2002. Fisiologi Hewan Air. Pekanbaru: Unri Pres
Alifuddin M., 1999. Peran imunostimulan (lipopolisakarida, Saccharomyces
cerevisiae dan levamisol) pada gambaran respon imunitas ikan jambal
siam (Pangasius hypophthalmus Fowler). [Tesis]. Program Studi Ilmu
Perairan. Program Pasca Sarjana. Institut Pertanian