Analisis Inhibisi Enzim α-Glukosidase dan Sitotoksisitas Ekstrak Air-Etanol Benalu Jeruk (Loranthus spp.)

Analisis Inhibisi
I
En
nzim α-Gllukosidasee dan Sitottoksisitas Ekstrak
Air-Etaanol Benalu Jeruk (Loranthus
(
s spp.)

HILMAN
NIE RAMA
ADHAN

DEPART
TEMEN BIO
OKIMIA
FAKUL
LTAS MAT
TEMATIKA
A DAN ILM
MU PENGET
TAHUAN ALAM

A
INSITUT
I
PERTANIAN
N BOGOR
BOGOR
2013

ABSTRAK
HILMANIE
RAMADHAN. Analisis Inhibisi Enzim α-Glukosidase dan
Sitotoksisitas Ekstrak Air-Etanol Benalu Jeruk (Loranthus spp.). Dibimbing oleh
ANNA P ROSWIEM dan WARAS NURCHOLIS.
Benalu jeruk merupakan tumbuhan parasit yang termasuk ke dalam suku
Loranthaceae yang hidup menempel pada tumbuhan jeruk (Citrus spp.).
Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas antidiabetes dan sitotoksisitas
ekstrak benalu jeruk dengan variasi pelarut ekstraksi yaitu air dan etanol.
Aktivitas antidiabetes ekstrak benalu jeruk diuji dengan metode inhibisi enzim αglukosidase dan menggunakan acarbose sebagai kontrol positif. Sitotoksisitas
benalu jeruk dilakukan dengan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test).
Ekstraksi benalu jeruk dilakukan secara maserasi dengan pelarut air, etanol 30%,

70%, dan 96%. Penghambatan enzim α-glukosidase ekstrak air, etanol 30%, 70%,
dan 96% memiliki nilai IC50 berturut-turut sebesar 3488; 180; 65.15; dan 70.71
ppm. Nilai IC50 acarbose sebagai pembanding adalah sebesar 0.04 ppm. Hasil
pengujian pada ekstrak etanol 70% dan 96% menunjukkan benalu jeruk
berpotensi sebagai antidiabetes. Pengujian toksisitas ekstrak air, etanol 30%, 70%,
dan 96% memperoleh nilai LC50 berturut-turut sebesar 699.92; 648.15; 864.60;
dan 978.85 ppm. Hasil pengujian toksisitas menunjukkan semua ekstrak bersifat
toksik karena memiliki nilai LC50 yang termasuk dalam golongan toksik.
Kata kunci : Benalu jeruk, α-glukosidase, Sitotoksisitas

ABSTRACT
HILMANIE RAMADHAN. Analysis of α-Glucosidase Enzyme Inhibition and
Cytotoxicity of Water-Ethanol Loranthus spp. Extract. Under direction of ANNA
P ROSWIEM and WARAS NURCHOLIS.
Loranthus spp. is a plant parasite belonging to the Loranthaceae tribes that
live attached to the citrus plants (Citrus spp.). This study aimed to examine
antidiabetic activity and cytotoxicity of Loranthus spp. with the variation of
solvent extraction of water and ethanol. Antidiabetic activity of the extracts was
tested by the method of inhibition against α-glucosidase enzyme activity and
using acarbose as a positive control. Cytotoxicity of Loranthus spp. extracts was

conducted by BSLT (Brine Shrimp Lethality Test). Extraction of Loranthus spp.
carried by maceration with water solvent, 30% ethanol, 70% and 96%. Inhibition
of α-glucosidase enzyme extract water, ethanol 30%, 70%, and 96% had IC50
values, respectively for 3488, 180, 65.15, and 70.71 ppm. IC50 values for
acarbose as a comparison is 0.04 ppm. The test results in 70% and 96% ethanol
extract showed Loranthus spp. have an antidiabetic. Toxicity testing of water
extract, ethanol 30%, 70%, and 96% gain in a row LC50 value of 699.92; 648.15;
864.60, and 978.85 ppm. Toxicity test results showed all the extracts are toxic
because it had LC50 values were included in the class according to the degree of
toxicity.
Keywords : Loranthus spp., α-Glucosidase, Cytotoxicity

i

Analisis Inhibisi Enzim α-Glukosidase dan Sitotoksisitas Ekstrak
Air-Etanol Benalu Jeruk (Loranthus spp.)

HILMANIE RAMADHAN

Skripsi

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Biokimia

DEPARTEMEN BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2013

ii

Judul Skripsi : Analisis Inhibisi Enzim α-Glukosidase dan Sitotoksisitas Ekstrak
Air-Etanol Benalu Jeruk (Loranthus spp.)
Nama
: Hilmanie Ramadhan
NIM
: G84070063

Disetujui

Komisi Pembimbing,

Dr. Anna P Roswiem, MS
Ketua

Waras Nurcholis, S.Si, M.Si
Anggota

Diketahui,

Dr. I Made Artika, M. App. Sc
Ketua Departemen Biokimia

Tanggal Lulus :

iii

PRAKATA
Assalamu’alaikum Warahmatullahi Wabarakatuh
Puja puji serta syukur penulis ucapkan pada Allah, Rabb semesta alam yang

telah mencurahkan begitu banyak nikmat, begitu banyak kemudahan dalam hidup
penulis hingga mampu menyelesaikan laporan penelitian ini dengan lancar. Tak
lupa pula shalawat beriringkan salam kepada Nabi besar penyampai risalah Allah
dan penutup para nabi yaitu Nabi Muhammad Shallallahu ‘Alaihi Wasallam, yang
berkat jasa beliau manusia bisa mengenal Allah-nya lewat Islam.
Terima kasih juga penulis ucapkan pada Ibu Anna P Roswiem dan Bapak
Waras Nurcholis atas bimbingan, arahan berikut kritik dan sarannya dalam
penulisan laporan penelitian ini. Secara khusus juga penulis ucapkan terima kasih
yang sangat besar pada kedua orang tua penulis Ayah dan Ibu atas doa dan
dorongan semangat untuk kesuksesan, kelancaran dan kemudahan jalan hidup
bagi penulis. Terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Sri Laraswati yang telah
banyak membantu penulis dan teman - teman biokimia 44, Ganep, Isa, Deo, Indra,
Rama, Danio dan teman - teman lainnya yang tidak dapat dituliskan satu-persatu.
Kepedulian dan bantuan mereka sangat berarti, sehingga penulis dapat
menyelesaikan dan terus bersemangat dalam menjalani hidup.
Penulis sadar penuh bahwa tulisan dalam laporan penelitian ini masih sangat
jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu saran maupun kritik yang membangun
sangat penulis harapkan. Penulis berharap hasil penelitian ini dapat memberikan
kontribusi bagi masyarakat secara umum dalam hal pemanfaatan benalu jeruk
dalam kesehariannya.

Wassalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh

Bogor, Maret 2013

Hilmanie Ramadhan

iv

RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 19 April 1989 sebagai anak ketiga
dari tiga bersaudara, putra dari pasangan Sukirmin Haryanto dan Ana Kurnia.
Tahun 2007 penulis lulus dari SMA Negeri 78 Jakarta Barat dan memperoleh
kesempatan melanjutkan studi di Institut Pertanian Bogor melalui Seleksi
Penerimaan Mahasiswa Baru (SPMB). Penulis kemudian memilih Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA) dan mengambil Biokimia
sebagai mayor.
Selama perkuliahan, penulis pernah mengikuti praktik lapangan di Badan
Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia (BPOM RI) dengan judul
laporan Penetapan Kadar Formaldehida dari Gelas Berbahan Dasar Melamin
dengan Simulan Akuades dan Asam Asetat 3%.

v

DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. vi
DAFTAR TABEL .................................................................................................. vi
DAFTAR LAMPIRAN ...........................................................................................vi
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................................... 2
Benalu Jeruk .................................................................................................. 2
Diabetes Melitus ............................................................................................ 3
Enzim α-glukosidase ..................................................................................... 4 
Metode Ekstraksi dan Pelarut ........................................................................ 5 
BAHAN DAN METODE ....................................................................................... 5
Bahan dan Alat .............................................................................................. 5
Metode Penelitian .......................................................................................... 5 
HASIL DAN PEMBAHASAN................................................................................6
Kadar Air Benalu Jeruk ................................................................................. 7 
Ekstrak Benalu Jeruk ..................................................................................... 7 

Inhibisi Enzim α-Glukosidase ....................................................................... 7 
Uji Toksisitas Metode BSLT ......................................................................... 9 
SIMPULAN DAN SARAN...................................................................................10
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 10
LAMPIRAN ...........................................................................................................13 

vi

DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Benalu (Loranthus spp.) ...................................................................................... 2 
2 Struktur Acarbose ............................................................................................... 4

DAFTAR TABEL
Halaman
1 Nilai rendemen ekstrak benalu jeruk................................................................... 7 
2 Uji aktivitas inhibisi enzim α-glukosidase .......................................................... 8 
3 Tingkat kekuatan IC50 ......................................................................................... 9 
4 LC50 ekstrak benalu jeruk.................................................................................... 9 
5 Tingkat toksisitas suatu ekstrak .......................................................................... 9

DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Diagram alir penelitian...................................................................................... 15 
2 Perhitungan kadar air serbuk benalu jeruk ........................................................ 16 
3 Rendemen hasil ekstraksi benalu jeruk ............................................................. 17 
4 Data nilai absorbansi dan % inhibisi ekstrak etanol 96% benalu jeruk ............ 18 
5 Data nilai absorbansi dan % inhibisi ekstrak etanol 70% benalu jeruk ............ 19 
6 Data nilai absorbansi dan % inhibisi ekstrak etanol 30% benalu jeruk ............ 20 
7 Data nilai absorbansi dan % inhibisi ekstrak air benalu jeruk .......................... 21 
8 Data hasil pengujian toksisitas .......................................................................... 22 

1

PENDAHULUAN
Salah satu kebiasaan manusia yang
diwarisi dari nenek moyangnya adalah
melakukan pengobatan sendiri jika menderita
sakit. Pengobatan sendiri di Indonesia
dilakukan

dengan
menggunakan
obat
tradisional atau jamu dan obat-obat paten baik
dari golongan obat bebas maupun golongan
obat bebas terbatas (Sartono 1996). Sejak
ribuan tahun yang lalu, obat dan pengobatan
tradisional sudah ada di Indonesia, jauh
sebelum pelayanan kesehatan formal dengan
obat-obatan modernnya dikenal masyarakat
(Wijayakusuma 2002). Tumbuh-tumbuhan
punya peran penting dalam kehidupan
masyarakat, baik sebagai sumber pangan,
papan, maupun obat-obatan. Dewasa ini telah
terjadi perubahan gaya hidup pada
masyarakat. Salah satu diantaranya adalah
pergeseran pola makan. Ada kecenderungan
masyarakat untuk mengkonsumsi makanan
cepat saji atau fast food. Komposisi makanan
cepat saji tersebut pada umumnya banyak
mengandung karbohidrat dan lemak. Hasil
studi yang dilakukan oleh Nuryati (2009)
menunjukkan bahwa pria berumur 45 tahun
atau lebih tua beresiko 12,7 kali lebih tinggi
terkena diabetes mellitus dibanding pria
berumur lebih muda dari 45 tahun, sedangkan
wanita berumur 45 tahun atau lebih tua
beresiko 13,0 kali lebih tinggi terkena diabetes
mellitus dibanding wanita berumur lebih
muda dari 45 tahun.
Diabetes
mellitus
(DM)
telah
dikategorikan sebagai penyakit global oleh
World Health Organization (WHO) dengan
jumlah penderita di dunia mencapai 199 juta
jiwa pada tahun 2009. Menurut statistik dari
studi Global Burden of Disease WHO pada
tahun 2004, Indonesia menempati peringkat
pertama di Asia Tenggara, dengan prevalensi
penderita sebanyak 8,426,000 jiwa di tahun
2000 dan diproyeksi meningkat 2,5 kali lipat
sebanyak 21,257,000 penderita pada tahun
2030 (Astiyandani 2010). Diabetes mellitus
(DM) adalah kondisi konsentrasi glukosa
dalam darah secara kronis lebih tinggi
daripada nilai normal (hiperglikemia) akibat
tubuh kekurangan insulin atau fungsi insulin
tidak efektif (Widiastuti 2008). Diabetes
mellitus terdiri atas dua tipe utama, yaitu DM
tipe 1 dan DM tipe 2. DM tipe 1, sel beta
pankreas yang kerja utamanya memproduksi
insulin tidak mampu lagi memenuhi
kebutuhan insulin tubuh bahkan produksinya
dapat terhenti sama sekali (Pulungan &
Herqutanto 2009), sedangkan DM tipe 2

terjadi karena kurangnya produksi insulin atau
penggunaan insulin yang kurang efektif
perhari (Paran 2008). Kedua DM ini samasama berakibat pada kehilangan atau
menurunkan insulin. Pengobatan yang
diberikan pada penderita DM yaitu pemberian
insulin secara subkutan, bila sel-sel beta
pankreas tidak mampu lagi memproduksi
insulin, serta penggunaan obat-obatan oral
bila jumlah insulin yang disekresikan oleh selsel beta pankreas tidak mencukupi. Namun,
pengobatan dengan menggunakan insulin dan
obat-obatan oral tersebut dirasakan cukup
mahal bagi penderita (Jaya 2007). Perlu
penggunaan obat yang mudah diperoleh dan
murah. Salah satunya adalah dengan herbal.
Peningkatan angka kejadian DM yang pesat
dan belum adanya terapi yang dianggap tepat
untuk mengatasinya memicu banyaknya
penelitian terhadap bahan-bahan alami yang
memiliki
potensial
mengobati
atau
mengurangi efek yang ditimbulkan dalam
prosesnya. Berdasarkan kebiasaan masyarakat
dalam memanfaatkan obat-obatan tradisional,
benalu yang menempel pada tumbuhan
tertentu telah dikenal secara luas seperti
benalu mangga, benalu teh, dan benalu kopi.
Benalu merupakan salah satu kelompok
tumbuhan parasit yang termasuk dalam suku
Loranthaceae. Di Indonesia sebenarnya ada
berbagai spesies benalu (Windari & Rahajoe
1998) tetapi masyarakat umum lebih
mengenal benalu berdasarkan tumbuhan inang
tempat tumbuhnya seperti benalu teh, benalu
duku, benalu mangga dan lain-lain (Pitoyo
1996). Keunikan benalu adalah disatu pihak
dianggap
sebagai
tumbuhan
yang
mengganggu karena sifat parasitnya pada
tumbuhan komersial seperti teh dan tumbuhan
penghasil buah-buahan, tetapi di lain pihak
benalu dianggap sebagai tumbuhan yang
bermanfaat karena potensinya sebagai
tumbuhan obat. Benalu pada umumnya
digunakan sebagai obat campak, benalu pada
jeruk nipis dimanfaatkan sebagai ramuan obat
untuk penyakit amandel. Benalu teh dan
benalu mangga sendiri digunakan sebagai obat
kanker (Purnomo 2000), sedangkan benalu
jeruk belum ada penelitian secara ilmiah
hanya berdasarkan pengalaman empiris.
Benalu
secara
umum
kebanyakan
mengandung senyawa yang memiliki sifat
toksik, namun sifat toksik ini dapat
dimanfaatkan dalam penggunaannya secara
tepat. Senyawa bioaktif yang terkandung di
dalam
benalu
berupa
asam
amino,
karbohidrat, alkaloid, dan saponin (Richter
1992).

2

Penelitian ini bertujuan untuk menguji
aktivitas antidiabetes dan sitotoksisitas ekstrak
benalu jeruk dari variasi pelarut ekstrak air
dan etanol benalu jeruk. Aktivitas antidiabetes
diuji dengan menggunakan metode inhibisi
enzim α-glukosidase dengan acarbose sebagai
kontrol positif. Adapun parameter uji yang
digunakan adalah persen penghambatan
aktivitas
enzim
α-glukosidase
yang
ditunjukkan dalam nilai IC50.
Hipotesis dalam penelitian ini adalah
pelarut air dan etanol dapat mengekstraksi
senyawa aktif dari benalu jeruk yang memiliki
aktivitas
antidiabetes
dengan
cara
menghambat enzim α-glukosidase. Hasil
penelitian ini diharapkan dapat memberikan
informasi kepada masyarakat mengenai
potensi benalu jeruk sebagai obat alternatif
antidiabetes sehingga manfaat benalu jeruk
dapat dieksplorasi secara optimal.

TINJAUAN PUSTAKA
Benalu Jeruk
Benalu (Loranthus spp.) merupakan salah
satu kelompok tumbuhan parasit yang
termasuk dalam suku Loranthaceae. Benalu
merupakan jenis tumbuhan yang hidupnya
tidak memerlukan media tanah. Benalu hidup
sebagai parasit, menempel pada dahan-dahan
pohon kayu lain dan mengisap mineral yang
larut dalam pohon kayu yang ditempelinya.
Bunga benalu berkelamin tunggal dan pada
biji buahnya mengandung getah. Benalu
biasanya terdiri atas akar pelekat, batang,
daun, dan bunga (Gambar 1). Keunikan
benalu adalah disatu pihak dianggap sebagai
tumbuhan yang mengganggu karena sifat
parasitnya pada tumbuhan komersial seperti
teh dan tumbuhan penghasil buah-buahan,
tetapi di lain pihak benalu dianggap sebagai
tumbuhan yang bermanfaat karena potensinya
sebagai tumbuhan obat. Pengembangbiakan
benalu tersebut biasanya melalui binatang atau
burung yang memakan biji buah benalu
tersebut. Proses pengembangbiakannya sangat
sederhana yaitu biji benalu yang bergetah itu
dimakan binatang atau burung, kemudian biji
benalu tersebut melekat di dahan kayu
bersama dengan kotoran burung yang
memakannya dan tumbuh di dahan itu.
Tumbuhan parasit ini umumnya menyerang
pepohonan atau tumbuhan perdu terutama
pada bagian ranting dan cabang-cabangnya.
Pohon atau perdu yang diserang benalu akan
terganggu bahkan dapat mati apabila serangan
tersebut dalam jumlah besar (Sunaryo et al.

2006). Benalu memiliki penyebaran yang
sangat luas di semua belahan dunia. Hal ini
dipengaruhi oleh migrasi fauna. Fauna yang
berperan penting dalam penyebaran ini ialah
burung. Burung bermigrasi pada waktu-waktu
tertentu dikarenakan beberapa faktor seperti
perubahan
cuaca,
kelangkaan
jumlah
makanan, dan kebiasaan burung tersebut.
Burung-burung tersebut membawa biji yang
dimakan oleh burung tersebut seusai
memakan buah-buahan. Biji yang dibawa oleh
burung tersebut kemudian akan jatuh di pohon
daerah lain lalu akan tumbuh menjadi parasit
di tumbuhan inang tersebut. Benalu banyak
ditemukan di daerah tropis seperti di Asia
Tenggara. Benalu di daerah tersebut banyak
dijumpai di beberapa negara yang memiliki
kawasan hutan yang luas, sebagai contoh
benalu dapat dijumpai di Malaysia. Benalu di
kawasan ini terdiri atas 23 marga dan 193
jenis (Barlow 1997), sedangkan di Jawa
dilaporkan terdapat 14 marga dan 38 jenis
benalu (Backer & Van Den Brink 1965).
Tanaman jeruk (Citrus spp.) adalah
tanaman buah tahunan yang berasal dari Asia.
Cina dipercaya sebagai tempat pertama kali
jeruk tumbuh. Sejak ratusan tahun yang lalu,
jeruk sudah tumbuh di Indonesia baik secara
alami atau dibudidayakan. Tanaman jeruk
yang ada di Indonesia adalah peninggalan
orang Belanda yang mendatangkan jeruk
manis dan keprok dari Amerika dan Itali.
Keragaman genetik jeruk sangat luas, hal ini
ditunjukkan dengan keragaman taksonomi
yang sangat tinggi. Klasifikasi botani tanaman
jeruk terdiri dari divisi Spermatophyta, sub
divisi Angiospermae, kelas Dicotyledonae,
ordo Rutales, keluarga Rutaceae, genus
Citrus, dan spesies Citrus spp. (Cottin 1997).
Benalu jeruk merupakan tanaman benalu
yang hidup menumpang pada tanaman jeruk.
Biji benalu yang hinggap pada suatu tanaman
dimakan oleh burung dan akan dikeluarkan
bersama kotorannya. Biji benalu pada kotoran
burung yang menempel pada dahan tanaman
jeruk akan tumbuh dan hidup dengan
mengisap mineral yang larut pada tanaman
jeruk yang ditempelinya.

Gambar 1 Batang, bunga dan daun dari benalu
(Loranthus spp.)
(Sumber : Dokumen pribadi 2012)

3

Diabetes Mellitus
Kelainan yang disebabkan oleh defisiensi
insulin disebut diabetes melitus (Ganong
2002). Menurut Dallimunthe (2004) penyakit
DM telah diketahui sejak ribuan tahun
sebelum masehi. Ebers Papyurus menuliskan
bahwa di Mesir sekitar tahun 1550 Sebelum
Masehi ditemukan suatu penyakit yang
ditandai dengan banyak kencing. Sebagian
besar kasus DM disebabkan oleh rusaknya sel
β pankreas sehingga produksi insulin menjadi
terhambat atau tidak ada sama sekali.
Beberapa ahli berpendapat bahwa dengan
meningkatnya umur, maka intoleransi
terhadap glukosa juga meningkat.
Intoleransi glukosa pada usia lanjut
berkaitan dengan obesitas, aktivitas fisik yang
kurang, berkurangnya massa otot, penyakit
penyerta, penggunaan obat – obatan, sehingga
terjadi penurunan sekresi insulin dan resistensi
insulin (Misnadiarly 2006). DM merupakan
penyakit yang diturunkan atau diwariskan,
bukan ditularkan. Para ahli kesehatan juga
menyebutkan DM merupakan penyakityang
terpaut kromosom seks atau kelamin. Faktor
herediter sering kali pula penyebab timbulnya
DM melalui peningkatan kerentanan sel – sel
β terhadap penghancuran oleh virus atau
mempermudah
perkembangan
antibodi
autoimun melawan sel – sel β, sehingga
mengarah pada penghancuran sel – sel β.
Gejala klinis DM meliputi gejala – gejala
pada stadium kompensasi dan dekompensasi
pankreas, serta gejala – gejala kronik lainnya.
Gejala – gejala pada stadium kompensasi,
misalnya polifagia, poliuria, polidipsia dan
penurunan berat badan. Adanya gejala klinis
hiperglikemia
dan
glukosuria
akan
menyebabkan tekanan osmotik di dalam tubuli
ginjal naik dan menghambat rearbsorsi air
sehingga menyebabkan poliuria dan akibat
adanya poliuria akan terus menerus
menyebabkan dehidrasi tingkat jaringan.
Penderita DM tidak dapat menggunakan
glukosa dalam darah dan akan menggunakan
lemak tubuhnya untuk mengganti energi atau
makanan bagi sel, sehingga terjadi ketonemia
dan ketonuria dan tubuh terlihat kurus.
Adanya badan – badan keton di dalam darah
akan menimbulkan terjadinya asidosis,
sehingga frekuensi nafas meningkat dan
penderita mengalami koma (Ressang 1984).
Cara umum yang digunakan untuk
mendiagnosa penyakit DM didasarkan pada
berbagai tes kimiawi terhadap urin dan darah
(Guyton & John 1997). Pemeriksaan glukosa
urin melalui tes sederhana atau kuantitatif
laboratorium,
dapat
digunakan
untuk

menentukan jumlah glukosa yang hilang
dalam urin. American Diabetes Association
(ADA 2004) menggunakan tiga standar untuk
menentukan diagnose terjadinya DM, yaitu 1)
konsentrasi glukosa plasma puasa lebih dari
atau sama dengan 200 mg/dl atau 11.1
mmol/l; 2) glukosa plasma puasa lebih dari
atau sama dengan 126 mg/dl atau 7 mmol/l,
puasa dilakukan selama 8 jam; 3) glukosa
darah lebih dari atau sama dengan 200 mg/dl
atau 11.1 mmol/l (Rimbawan & Siagian 2004;
Rubin 2004). Sebelum terjadi DM, biasanya
diawali dengan prediabetes. Standar yang
digunakan
untuk
mengetahui
adanya
prediabetes adalah bila gula darah sebelum
makan mencapai 100 – 126 mg/dl atau 5.5 – 7
mmol/l dan glukosa darah setelah satu jam
makan mencapai 140 – 199 mg/dl atau 7.8 –
11.1 mmol/l (Rubin 2004).
Pengobatan diabetes mellitus umumnya
dilakukan dengan pengaturan diet, pemberian
obat antidiabetes oral, dan terapi insulin. Akan
tetapi pemberian obat-obatan antidiabetes oral
dapat menimbulkan efek samping yang
berbahaya. Efek tersebut dapat berupa
gangguan mekanisme dalam tubuh hingga
kematian (Tuyet & Chuyen 2007). Pemberian
obat secara oral merupakan cara pemberian
obat yang paling umum dilakukan karena
mudah, murah, dan aman. Pada umumnya
pemberian obat antidiabetes oral hanya
dilakukan untuk penderita DM tipe 2, obat
tersebut terbagi menjadi dua jenis diantaranya
obat sintetik dan obat tradisional (Mathur &
Shiel 2003). Obat sintetik yang memiliki
aktivitas antidiabetes dibagi menjadi 4 kelas
menurut mekanisme kerjanya. Pertama,
golongan
sulfonilurea
yang
memiliki
mekanisme kerja utama pada peningkatan
insulin. Kedua, golongan biguanida yang
dapat mengurangi produksi glukosa hati
sehingga dapat meningkatkan sensitivitas
periferal dan mengurangi penyerapan glukosa
intestinal. Ketiga, golongan inhibitor αglukosidase salah satunya adalah Acarbose
(Gambar 2). Obat ini dapat menghambat
enzim spesifik yang menguraikan pati dalam
usus halus sehingga menunda penyerapan
glukosa hasil pemecahan karbohidrat di dalam
usus. Keempat, merupakan insulin eksogen
yang
berperan
dalam
meningkatkan
sensitivitas insulin secara tidak langsung dan
menekan produksi glukosa hati (Thuyet &
Chuyen 2007).
Klasifikasi Diabetes Mellitus
Menurut
Misnadiarly
(2006)
DM
diklasifikasikan ke dalam dua tipe yaitu DM

4

ttipe 1, DM yang tergantuung insulin aatau
D
Diabetes
Melllitus Dependenn-Insulin (IDD
DM)
d tipe 2 DM
dan
M tidak terganntung insulin aatau
D
Diabetes
Melllitus Non-Deependent Insuulin
(
(NIDDM).
Diabetes Tipee 1
D
Diabetes tipe
t
1 adalaah kondisi yyang
d
ditandai
oleh tingginya kaddar glukosa daarah
y
yang
disebabk
kan oleh ketiaddaan total horm
mon
i
insulin.
Diabetes tipe 1 terjadi ketika sisttem
i
imun
tubuh menyerang sel β yyang
m
menghasilkan
insulin padaa pankreas dan
m
menghancurka
annya (Jacquie et al. 20004).
M
Menurut
PER
RKENI (2002)) diabetes tipee 1
m
memiliki
kaarakteristik
mudah
terjjadi
k
ketoasidosis,
pengobatanny
ya harus denngan
i
insulin,
onset akut, penderita biasanya kurrus,
t
terjadi
pada um
mur muda, diddapatkan antibbodi
s islet.
sel
Individu yang
y
mengalaami DM tipee 1
m
mempunyai
cirri – ciri poliurria, polidipsia dan
p
poliphagia.
Berdasarkan peengujian glukkosa
d
darah,
pasien yang mengalami tipe ini jika
j
d
diberi
75 graam glukosa secara oral dan
s
sebelumnya
teelah melakukaan puasa selaama
s
satu
malam, konsentrasi
k
gula darahnya aakan
m
meningkat
lebbih dari 200 md/dl,
m
sedanggkan
p
pada
individu normal dengaan perlakuan yyang
s
sama
akan meeningkat glukoosa darah berkkisar
140 mg/dl. Tin
ngginya kandunngan darah dallam
t
tubuh,
mengak
kibatkan laju filtrasi
f
glomeruulus
t
terhadap
gluko
osa menjadi beerlebihan dan urin
u
a
akan
mengand
dung banyak glukosa
g
(Cham
mpe
& Harvey 19944).
D
Diabetes
Tipee 2
Diabetes tiipe 2 tidak teergantung insuulin
a Diabetes Mellitus
atau
M
Non-D
Dependent Insuulin
(
(NIDDM),
sebab tidak membutuhhkan
hormon
p
penambahan
insulin
unntuk
m
mempertahank
kan keseimbanggan glukosa daarah
(
(Carolyn
200
01). Diabetes Melitus tipee 2
(
(DMT2)
merup
pakan suatu keelompok penyakit
m
metabolik
yanng ditandai oleh
o
hiperglikemi
a
akibat
kelainaan sekresi inssulin oleh sel β
p
pankreas,
ganngguan kerja insulin/resisteensi
i
insulin,
atau keeduanya.
Kasus diab
betes terbanyaak adalah DM
MT2
y
yang
umumny
ya mempunyaai latar belakkang
r
resistensi
insuulin. Pada aw
walnya, resisteensi
i
insulin
belum menyebabkan
n diabetes kliinis.
S β pankreass masih dapat mengkompens
Sel
m
sasi,
s
sehingga
terj
rjadi hiperinsulinemi, kaadar
g
glukosa
darahh masih norm
mal atau seddikit
m
meningkat.
Jika terjadi keelelahan sel bbeta
p
pankreas,
mak
ka dapat menngakibatkan DM
D
k
klinis,
yang ditandai
d
dengaan kadar glukkosa
d
darah
yang meeningkat.

Gambar 2 Struktur Acarb
bose
Menurut
M
PERK
KENI (2002) karakteristik
dari DMT2
D
, yaitu sukar terjadi ketoasidosis,
pengo
obatannya tiddak harus menggunakan
m
insuliin, onsetnya laambat, penderiitanya gemuk
atau tidak gemuk, biasanya
b
terjaddi pada umur
tua, tidak ada anttibody sel isleet, 30% ada
riwayyat diabetes paada keluarga, 100% terjadi
pada kembar identikk.
Enzim α-glukosidasee
Enzim
E
α-glukossidase memilikki nama kimia
α-D-gglikosida gllukohidrolase merupakan
enzim
m yang berpperan dalam usus halus
manu
usia. Enzim tersebut meruppakan enzim
kuncii pada proses akhir pemecahan
karboohidrat. α-Glukosidase mengkatalisis
m
hidroolisis terminaal residu glukosa
g
non
pered
duksi yang berrikatan α-1,4 pada
p
berbagai
substtrat dan dihaasilkan α-D-g
glikosida. αGlukkosidase mennghidrolisis
ikatan αglikoosidik pada oligosakarida dan α-Dglikoosida (Gao et all. 2008).
Penumpukan gllukosa yang teerbentuk dari
aktivvitas enzim inni merupakann salah satu
pemicu terjadinya diabetes melitus tipe 2.
Perkeembangan ilmu pengetahuan dan
tekno
ologi dalam dunia biookimia dan
kedok
kteran telahh banyak memberikan
inform
masi yang teerkait dengan mekanisme
kerjaa enzim α-gllukosidase. Innformasi ini
mem
mbantu para ilm
muwan untuk menemukan
baru
yaang
senyaawa-senyawa
dapat
meng
ghambat aktivvitas enzim α-glukosidase.
Inhibbitor enzim α
α-glukosidase ini berperan
untukk mengatasi bberbagai macam penyakit
yang berhubungaan dengan metabolisme
karboohidrat, diantaranya diabettes mellitus,
kanker, HIV, hepattitis, serta keggemukan (Liu
et al. 2006)
mbat terhadap
Pengujian aktivvitas daya ham
m α-glukosidasse dapat dilaku
ukan secara in
enzim
vivo dan in vitro.. Metode spek
ktrofotometri
banyak digunakan dalam pengujian secara in
vitro dengan menggunakan pseeudo-substrat,
seperrti p-nitrofeniil-α-D-glukopirranosida (pNPG) dan enzim α-glukosidasee, sedangkan
gunakan sel
secarra pseudo inn vivo mengg
pankrreas penghassil enzim α-glukosidase.
Dayaa hambat terhadap aktivitas α-glukosidase
α

5

sendiri dipelajari secara pseudo-substrat
dengan mengetahui kemampuan sampel untuk
menghambat reaksi hidrolisis glukosa pada
substrat p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida (pNPG). Setelah mengalami hidrolisis substrat
akan terhidrolisis menjadi α-D-glukosa dan pnitrofenol yang berwarna kuning. Warna
kuning yang dihasilkan p-nitrofenol menjadi
indikator kemampuan inhibitor untuk
menghambat reaksi yang terjadi. Semakin
besar
kemampuan
inhibitor
untuk
menghambat maka produk yang dihasilkan
semakin sedikit atau warna larutan setelah
inkubasi lebih cerah dibandingkan dengan
larutan tanpa inhibitor (Sugiwati 2005).

Metode Ekstraksi dan Pelarut
Ekstraksi merupakan proses penarikan
komponen atau zat aktif dari suatu campuran
padatan atau cairan dengan menggunakan
pelarut tertentu. Pelarut yang digunakan tidak
bercampur atau hanya bercampur sebagian
dengan campuran padat atau cairan. Dengan
kontak yang intensif, komponen aktif pada
campuran akan berpindah ke dalam pelarut
(Gamse 2002). Pemilihan pelarut merupakan
salah satu faktor yang dapat menentukan
kesempurnaan proses ekstraksi. Pelarut yang
digunakan pada proses ekstraksi harus dapat
menarik komponen aktif dari campuran dalam
sampel (Gamse 2002).
Faktor-faktor yang harus diperhatikan
dalam
memilih
pelarut
diantaranya,
selektivitas, sifat pelarut dan kemampuan
pelarut untuk mengekstraksi, tidak bersifat
racun, mudah diuapkan, dan relatif murah
(Gamse 2002). Pelarut yang digunakan dalam
proses ekstraksi dapat menembus pori-pori
bahan padat sehingga bahan yang ingin
diekstrak dapat dengan mudah tertarik. Pelarut
yang umum digunakan diantaranya, etil asetat,
heksana, eter, benzena, toluene, etanol,
isopropanol, aseton dan air (Simpen 2008).
Secara umum ekstraksi senyawa metabolit
sekunder menggunakan metode maserasi
dengan pelarut polar atau nonpolar.
Metode ekstraksi ini dapat dikelompokkan
menjadi dua yaitu ekstraksi sederhana dan
ekstraksi khusus. Ekstraksi sederhana terdiri
atas
maserasi,
perkolasi,
reperkolasi,
evakolasi, dan dialokasi. Ekstraksi khusus
terbagi atas sokletasi, arus balik dan ultrasonik
(Harborne 1987). Penelitian ini menggunakan
metode maserasi. Maserasi merupakan proses
perendaman sampel pelarut organik yang
digunakan pada temperatur ruangan. Proses
ini sangat menguntungkan dalam isolasi

senyawa bahan alam karena dengan
perendaman sampel tumbuhan akan terjadi
pemecahan dinding dan membran sel akibat
perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar
sel sehingga metabolit sekunder yang ada
dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut
organik dan ekstrak senyawa akan sempurna
karena dapat diatur lama perendaman yang
dilakukan. Pemilihan pelarut untuk proses
maserasi akan memberikan efektivitas yang
tinggi dengan memperhatikan kelarutan
senyawa bahan alam pelarut tersebut. Prinsip
dari ekstraksi maserasi adalah penyarian zat
aktif yang dilakukan dengan cara merendam
serbuk dalam cairan penyari yang sesuai
selama sehari atau beberapa hari pada suhu
kamar dan terlindung dari cahaya (Sudjadi
1986).
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah benalu jeruk, akuades,
etanol 30%, etanol 70%, etanol 96%, enzim αglukosidase, p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida
(p-NPG), larutan bufer fosfat (pH 7), Bovine
Serum Albumin (BSA), acarbose (glukobay),
dimetilsulfoksida (DMSO), HCl 2N, H2SO4 2
M, dan Na2CO3.
Alat-alat yang digunakan dalam
penelitian ini adalah corong kaca, kertas
saring, penangas air, neraca analitik,
maserator, corong pisah, ayakan 20-100 mesh,
pipet mikro, pipet volumetrik, pipet tetes, labu
Erlenmeyer, tabung reaksi, microplate dan
microplate reader.
Metode Penelitian
Ekstraksi Benalu Jeruk
Benalu jeruk yang telah didapat, diproses
dengan dua tahapan, preparasi dan ekstraksi.
Benalu jeruk dikeringkan dalam oven dengan
suhu 40-50°C selama 4 hingga 5 hari.
Simplisia benalu jeruk yang sudah kering
kemudian digiling hingga berukuran 20-100
mesh dan berbentuk serbuk (dengan kadar air
≤ 10 %). Sampel yang berbentuk serbuk
diproses dengan metode ekstraksi yang
mengacu pada Badan Pengawas Obat dan
Makanan atau BPOM (2005) yaitu maserasi.
Maserasi sampel dilakukan dengan merendam
sampel dalam pelarut dengan perbandingan
1:10, proses ini dilakukan dalam maserator
selama 6 jam dan sesekali diaduk. Kemudian
ekstrak sampel tersebut didiamkan selama 24
jam, maserat yang didapat dipisahkan,

6

dilakukan penggantian pelarut dan dilakukan
pengulangan sebanyak 3 kali. Pelarut yang
digunakan yaitu air, etanol 30%, etanol 70%,
dan etanol 96%. Keseluruhan filtrat sampel
diuapkan dalam rotavapor dan dihasilkan
ekstrak berbentuk serbuk. Ekstrak serbuk ini
akan diuji inhibisinya terhadap enzim αglukosidase.
Penentuan Kadar Air Benalu Jeruk
(AOAC 1999 dalam Samson 2010)
Penentuan kadar air dilakukan untuk
mengetahui kadar air dari sampel. Sebanyak 2
gram sampel dimasukkan ke dalam cawan,
dikeringkan pada suhu 105 oC selama 30
menit lalu ditimbang. Perlakuan dilakukan
berulang-ulang sampai diperoleh bobot yang
konstan. Penentuan kadar air pada sampel
dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan.
Uji Inhibisi α-Glukosidase (Sancheti et al.
2009)
Pengujian aktivitas inhibisi α-glukosidase
dilakukan dengan microplate reader. Larutan
standar, blanko, dan sampel dimasukkan ke
dalam sumur microplate sebanyak 50 μL.
Masing-masing sumur yang sudah berisi
standar, blanko, sampel ditambahkan dengan
50 μL larutan bufer. Sebanyak 25 μL enzim αglukosidase dengan konsentrasi 1 mg/mL
dalam buffer fosfat 0.01 M dimasukkan ke
dalam sumur microplate. Selanjutnya, substrat
berupa campuran berisi bufer fosfat 0.1 M
sebanyak 50 μL dan 25 μL 4-nitrophenyl α-Dglucopyranoside (p-NPG) 0.5 mM dalam 0.1
M bufer fosfat ditambahkan beberapa saat
sebelum esai dimulai. Semua uji dilakukan
sebanyak 3 kali ulangan. Inkubasi dilakukan
pada suhu 37oC selama 30 menit. Reaksi
enzim dihentikan dengan menambahkan 0.2
M Na2CO3 sebanyak 100 μL. Hasil reaksi
diukur dengan microplate reader pada
panjang gelombang 400 nm. Selanjutnya
dilakukan penghitungan % inhibisi untuk
menentukan nilai IC50 dengan menggunakan
rumus :

% inhibisi = C – S x 100%
C
C adalah absorban larutan tanpa adanya
ekstrak (kontrol) dan S adalah absorban
larutan dengan pemberian ekstrak dari sampel
(Sugiwati 2005, Tuyet & Chuyen 2007). IC50
dihitung dengan menggunakan persamaan
regresi linear, konsentrasi sampel sebagai
sumbu x dan % inhibisi sebagai sumbu y.

Nilai IC50 dihitung dari persamaan y = a + bx
dengan menggunakan rumus IC50 = (50-a) : b.
Uji Toksisitas dengan metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT) (Meyer et al. 1982)
Telur Artemia salina menetas menjadi
larva udang dalam air laut setelah inkubasi 48
jam. Masing-masing 10-12 larva dimasukkan
ke dalam microplate, tambahkan ekstrak yang
dilarutkan dalam air laut dengan konsentrasi
10, 100, dan 1000 ppm, inkubasi 24 jam.
Toksisitas diukur berdasarkan jumlah larva A.
salina yang mati setelah inkubasi. LC50 adalah
konsentrasi
yang
diperlukan
untuk
menyebabkan 50% kematian larva.

HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air Benalu Jeruk
Kadar air dalam sampel serbuk benalu
jeruk diukur sebanyak tiga kali ulangan dan
mempunyai rata-rata sebesar 2.33%. Persen
kadar air tersebut menunjukkan bahwa serbuk
benalu jeruk yang digunakan dapat disimpan
untuk jangka waktu panjang. Hal ini sesuai
dengan Winarno (1992) yang menyatakan
bahwa sampel yang baik untuk dapat
disimpan dalam jangka waktu panjang adalah
sampel yang memiliki kadar air kurang dari
10% karena dapat terhindar dari pencemaran
mikroorganisme dan jamur. Persen kadar air
juga digunakan untuk mengetahui persen
bahan kering dan sebagai faktor koreksi suatu
sampel, jika sampel yang digunakan memiliki
lingkungan agrobiofisik yang berbeda,
sehingga dapat dipakai untuk memperkirakan
jumlah bahan yang dibutuhkan jika ingin
mengekstraksi bahan langsung dalam keadaan
basah dan sebagai koreksi rendemen pada
proses ekstraksi.
Ekstrak Benalu Jeruk
Ekstraksi merupakan suatu proses
perpindahan komponen suatu bahan ke dalam
cairan lain. Ekstraksi bertujuan untuk
mengambil zat-zat yang terkandung dalam
suatu campuran dengan bantuan pelarut
tertentu. Sampel benalu jeruk yang diekstrak
berbentuk serbuk. Hal ini dapat meningkatkan
efektifitas ekstraksi karena semakin kecil atau
halus ukuran bahan yang digunakan maka
semakin luas bidang kontak antara bahan
dengan pelarutnya (Tuyet & Chuyen 2007).
Pelarut yang digunakan dalam proses
ekstraksi benalu jeruk adalah air, etanol 30%,

7

etanol 70%, dan etanol 96%. Etanol
digunakan sebagai pelarut dalam proses
ekstraksi karena etanol merupakan pelarut
serbaguna yang baik digunakan untuk
ekstraksi pendahuluan. Selain itu, etanol
merupakan
senyawa
yang
tergolong
bertoksisitas rendah sehingga etanol relatif
aman digunakan (BPOM 2005).
Metode ekstraksi yang digunakan adalah
metode maserasi yang mengacu pada BPOM
(2005). Pemilihan metode maserasi dengan
cara perendaman sampel dilakukan karena
metode ini sederhana, tidak memerlukan alatalat yang rumit, relatif mudah, murah, dan
tidak menggunakan pemanasan sehingga
dapat mencegah rusaknya metabolit sekunder
yang tidak tahan terhadap suhu tinggi. Proses
perendaman simplisia yang dilakukan dalam
metode maserasi menyebabkan terjadinya
difusi akibat dari perbedaan konsentrasi di
dalam dan di luar sel. Hal ini menyebabkan
metabolit sekunder yang terdapat di dalam
sitoplasma akan terekstrak (Campbell et al.
2002).
Ekstrak berupa cairan yang diperoleh
setelah penyaringan kemudian dievaporasi
untuk menguapkan sisa pelarut yang
digunakan sehingga diperoleh ekstrak padatan
berupa serbuk. Pemekatan dilakukan dengan
menggunakan rotary evaporator pada suhu
40oC
untuk
mencegah
kemungkinan
terjadinya kerusakan komponen bahan aktif
yang terkandung dalam ekstrak. Hasil ekstrak
ini kemudian digunakan dalam pengujian
inhibisi enzim α-glukosidase dan uji
toksisitas.
Hasil pemekatan ekstrak tersaji dalam
persentase rendemen (Tabel 1). Data pada
Tabel 1 menunjukkan bahwa ekstrak benalu
jeruk yang menggunakan pelarut etanol 96%
memiliki nilai rendemen tertinggi diantara
ekstrak lainnya. Hal ini menunjukkan bahwa
senyawa yang terkandung di dalam simplisia
terekstrak lebih banyak dengan menggunakan
pelarut etanol 96%. Etanol digunakan untuk
mengekstrak senyawa-senyawa bioaktif yang
bersifat polar dan semipolar.
Tabel 1 Nilai rendemen ekstrak benalu jeruk
Ekstrak

Nilai rataan rendemen (%)

Etanol 96%

66.23

±0.39

Etanol 70%

47.20

±0.29

Etanol 30%

31.47

±0.33

Air

44.03

±0.14

Etanol diduga dapat merusak membran sel
dan mengekstrak endoselular dalam jumlah
yang lebih banyak (Ghisalberti 1993).
Kandungan etanol yang sangat tinggi dalam
pelarut etanol 96% menyebabkan senyawa
aktif terekstrak lebih banyak sehingga nilai
rendemen pada pelarut etanol 96% lebih
tinggi dibandingkan dengan pelarut lainnya.
Senyawa metabolit sekunder yang mudah
larut dalam pelarut polar diantaranya adalah
alkaloid dan flavonoid. Kedua metabolit ini
menyebabkan suatu tanaman berpotensi
sebagai antidiabetes melalui penghambatan
kerja enzim α-glukosidase (Sari 2010).
Inhibisi Enzim α-Glukosidase
Pengujian terhadap daya hambat aktivitas
enzim α-glukosidase menggunakan substrat pnitrofenil- α-D-glukopiranosida (p-NPG) dan
enzim α-glukosidase. Pada pengujian tersebut
α-glukosidase akan menghidrolisis substrat pNPG menjadi glukosa dan p-nitrofenol yang
berwarna kuning. Sampel yang ditambahkan
ke dalam campuran substrat diharapkan akan
menghambat
kerja
enzim
sehingga
mengurangi terbentuknya glukosa dan
intensitas warna kuning yang terbentuk.
Inhibisi enzim α-glukosidase dilakukan
untuk mengetahui ada atau tidaknya aktivitas
antidiabetes pada empat ekstrak benalu jeruk
(etanol 96%, etanol 60%, etanol 30%, dan
air). Enzim yang dihambat adalah enzim αglukosidase yang merupakan enzim yang
berperan dalam pembentukan glukosa di usus
halus manusia melalui hidrolisis karbohidrat.
Penghambatan terhadap kerja enzim ini dapat
dilakukan untuk mencegah peningkatan secara
drastis kadar glukosa di dalam tubuh penderita
diabetes melitus tipe II melalui penundaan
proses pemecahan karbohidrat sehingga dapat
menunda penyerapan glukosa oleh usus ke
dalam darah (Sari 2010).
Pengujian aktivitas inhibisi pada penelitian
ini dilakukan secara in vitro melalui reaksi
enzimatis yang terjadi yaitu hidrolisis oleh
enzim α-glukosidase terhadap substrat p-NPG
menjadi glukosa dan p-nitrofenol yang
berwarna kuning. Daya inhibisi terhadap
aktivitas
enzim
diukur
berdasarkan
terbentuknya produk p-nitrofenol yang
dihasilkan. Jumlah glukosa yang terbentuk
sebanding dengan jumlah p-nitrofenol
sehingga p-nitrofenol yang berwarna kuning
dijadikan sebagai indikator pengukuran
aktivitas enzim α-glukosidase. Intensitas
warna kuning yang dihasilkan oleh pnitrofenol menjadi indikator kemampuan

8

suatu senyawa inhibitor untuk menghambat
reaksi enzimatis yang tejadi.
Aktivitas tersebut diukur berdasarkan
absorbansi
p-nitrofenol
pada
panjang
gelombang 400 nm. Semakin besar aktivitas
inhibisi dari suatu sampel, maka jumlah pnitrofenol yang terbentuk semakin sedikit,
sehingga intensitas warna kuning yang
terbentuk semakin berkurang. Apabila ekstrak
yang diuji memiliki kemampuan menghambat
kerja enzim maka p-nitrofenol yang dihasilkan
akan berkurang sehingga warna larutan yang
dihasilkan setelah inkubasi lebih cerah
dibandingkan warna larutan tanpa inhibitor
(Sugiwati
2005).
Harborne
(1987)
menyebutkan
bahwa
kisaran
panjang
gelombang 230-560 nm merupakan serapan
maksimum bagi senyawa flavonoid. Hal ini
menjadi dasar untuk menentukan panjang
gelombang yang tepat dalam pengukuran
persentase inhibisi enzim α-glukosidase.
Hasil uji menunjukkan terdapat 3 sampel
yang mempunyai persentase inhibisi di atas
50% yaitu etanol 96%, etanol 70%, dan etanol
30%. Sampel etanol 96% memiliki persentase
inhibisi di atas 50% pada konsentrasi 250
ppm, 125 ppm, dan 62.5 ppm. Persentase
tersebut berturut-turut sebesar 71.22%,
67.77%, dan 54.24%. Pada sampel etanol
70%, persentase inhibisi di atas 50%
ditunjukkan pada tiga konsentrasi tertinggi,
yaitu 250 ppm, 125 ppm, dan 62.5 ppm.
Persentase inhibisi tersebut berturut-turut
sebesar 75.88%, 64.29%, dan 59.51%.
Persentase inhibisi di atas 50% juga terlihat
pada sampel etanol 30% tetapi hanya pada
konsentrasi tertinggi yaitu 250 ppm dengan
persentase inhibisi 53.42%. Ekstrak air
dengan konsentrasi 1000 ppm hanya
mempunyai persentase inhibisi sebesar
43.05%. Acarbose (glukobay) sebagai
pembanding atau kontrol positif memiliki
persentase inhibisi paling tinggi di empat
varian konsentrasinya yaitu 5 ppm, 2.5 ppm,
1.25 ppm, dan 0.625 ppm. Persentase
inhibisinya berturut-turut sebesar 85.35%,
83.19%, 77.65%, dan 73.42%.
Berdasarkan hasil persentase inhibisi di
atas, maka persentase inhibisi yang paling
baik adalah ekstrak etanol 70% karena
mempunyai persentase inhibisi paling besar
yaitu 75.88% pada konsentrasi 250 ppm.
Namun, apabila dibandingkan dengan
acarbose (glukobay) sebagai kontrol positif,
nilai persentase inhibisi yang dimiliki ekstrak
etanol 70% lebih kecil. Persentase inhibisi
yang dimiliki acarbose (glukobay) adalah

85.35% dengan konsentrasi 5 ppm, sedangkan
nilai persentase inhibisi ekstrak etanol 70%
adalah 75.88% pada konsentrasi 250 ppm.
Nilai ini menunjukkan bahwa acarbose
(glukobay) memiliki kemampuan inhibisi
lebih baik dibandingkan dengan ekstrak etanol
70%.
Acarbose
(glukobay)
memiliki
kemampuan yang lebih baik karena dengan
konsentrasi yang lebih kecil acarbose
(glukobay) memiliki daya inhibisi yang lebih
besar. Sedangkan ekstrak etanol 70%
memiliki daya inhibisi lebih kecil daripada
acarbose (glukobay) dan juga membutuhkan
konsentrasi yang lebih besar. Hasil uji juga
menunjukkan bahwa aktivitas penghambatan
kerja enzim α-glukosidase ekstrak etanol 96%,
etanol 70%, etanol 30%, dan air memiliki nilai
IC50 berturut-turut sebesar 70.71 ppm, 65.15
ppm, 180 ppm, dan 3488 ppm. Data tersebut
menunjukkan bahwa diantara ekstrak etanol
dan air yang diuji, ekstrak etanol 70%
memiliki aktivitas antidiabetes terbaik karena
mempunyai nilai IC50 terendah yaitu 65.15
ppm. Berdasarkan tingkat kekuatan IC50
(Tabel 3) ekstrak etanol 96% dan etanol 70%
masuk ke dalam golongan aktif karena nilai
IC50 nya pada kisaran 50-100 ppm. Sedangkan
ekstrak etanol 30% masuk dalam golongan
sedang dan ekstrak air masuk dalam golongan
tidak aktif.
Tabel 2 Uji aktivitas inhibisi enzim αglukosidase
Sampel
Konsentrasi Inhibisi IC50
(ppm)
(%)
(ppm)
Ekstrak
Etanol
96%
Ekstrak
Etanol
70%
Ekstrak
Etanol
30%
Ekstrak
Air

Acarbose

250
125
62.5
31.25
250
125
62.5
31.25
250
125
62.5
31.25
1000
500
250
125
5
2.5
1.25
0.625

71.22
67.77
54.24
29.18
75.88
64.29
59.51
30.37
53.42
43.62
40.42
16.18
43.05
30.18
21.80
9.66
85.35
83.19
77.65
73.42

70.71

65.15

180

3488

0.04

9

Tabel 3 Tingkat kekuatan IC50 (Jun et al.
2003)
Intensitas
Nilai IC50
Sangat aktif

< 50 ppm

Aktif

50-100 ppm

Sedang

101-250 ppm

Lemah

250-500 ppm

Tidak aktif

> 500 ppm

Ekstrak benalu jeruk masih ekstrak kasar
sehingga jika dibandingkan dengan kontrol
positif (Acarbose) dengan nilai IC50 sebesar
0.04 ppm sangat aktif dalam menginhibisi
enzim α-glukosidase maka masih sangat jauh
aktivitas yang dimiliki oleh ekstrak benalu
jeruk. Efektivitas acarbose (glukobay) yang
ditunjukkan oleh nilai IC50 tersebut
menyebabkan acarbose digunakan sebagai
obat antidiabetes. Namun, penggunaan obat
sintetik ini menyebabkan efek samping seperti
kembung, diare, dan kram usus (Hartika
2009). Berdasarkan hasil uji, ekstrak etanol
70% memiliki rata-rata persentase inhibisi
tertinggi dari ekstrak etanol 96%, 30% dan air
sehingga dapat dikatakan ekstrak etanol 70%
memiliki aktivitas inhibisi terbaik dibanding
ekstrak etanol 30%, etanol 96%, dan air. Hasil
uji penelitian telah menunjukkan bahwa
ekstrak etanol 70% dan 96% berpotensi
sebagai antidiabetes dibanding dengan sampel
uji yang lainnya, tetapi disarankan oleh
BPOM (2005) untuk ekstraksi tanaman obat
lebih baik menggunakan ekstrak etanol 70%
karena lebih rendah toksisitasnya sehingga
lebih aman untuk digunakan.
Uji Toksisitas
Uji toksisitas pada tumbuhan berkhasiat
obat dilakukan untuk mencegah terjadinya
efek yang merugikan (Ismail et al. 2007).
Pada uji toksisitas metode BSLT (Brine
Shrimp Lethality Test) menggunakan hewan
uji berupa larva udang Artemia salina Leach.
Artemia termasuk ke dalam kelas Eranchipoda
yang memiliki membran kulit yang sangat
tipis sehingga memungkinkan terjadinya
difusi zat dari lingkungan yang mempengaruhi
metabolisme dalam tubuhnya. Larva udang
Artemia ditemukan hampir di semua tempat di
permukaan bumi yang memiliki kisaran
salinitas dari 10-20 g/L sampai dengan 180220 g/L. Hal ini menyebabkan larva udang
Artemia mudah untuk dibiakkan dan dipelajari
dengan teliti. Saat digunakan dalam pengujian
Artemia dbiakkan selama 48 jam. Jika lebih

dari itu, dikhawatirkan kematian larva udang
bukan disebabkan oleh toksisitas ekstrak
melainkan oleh terbatasnya persediaan
makanan (Kadarisman 2000).
Berdasarkan hasil uji toksisitas larva
udang (Tabel 4) dari ekstrak etanol 96%,
etanol 70%, etanol 30%, dan air diperoleh
nilai LC50 berturut-turut sebesar 978.85 ppm,
864.60 ppm, 648.15 ppm, dan 699.92 ppm.
Nilai ini menunjukkan bahwa pada
konsentrasi 978.85 ppm, 864.60 ppm, 648.25
ppm, dan 699.92 ppm ekstrak etanol 96%,
etanol 60 %, etanol 30%, dan air mampu
membunuh larva udang sampai 50% populasi.
Pada data hasil uji toksisitas larva udang
ekstrak etanol 30% menunjukkan ada
kematian cukup banyak hingga konsentrasi
akhir 1000 ppm ini dikarenakan kebanyakan
dari senyawa metabolit sekunder yang lebih
aktif pada saat berada dalam ekstrak etanol
30% dan menyebabkan nilai LC50 ekstrak
etanol 30% lebih kecil dibandingkan ekstrak
etanol 96%, etanol 70%, dan air. Nilai LC50
dari uji toksisitas larva udang diperoleh dari
perhitungan persamaan regresi linier ( y = ax
+ b ) yang dihasilkan berdasarkan data uji
toksisitas larva udang ekstrak etanol 96%,
etanol 70%, etanol 30%, dan air.
Hasil uji (Tabel 4) menunjukkan bahwa
ekstrak etanol 30% memiliki bioaktivitas yang
lebih tinggi diantara ekstrak lainnya terhadap
larva udang, yang ditunjukkan dengan nilai
LC50 terkecil diantara ekstrak lainnya yaitu
648.15 ppm. Semakin kecil nilai LC50 dari
suatu sampel maka semakin tinggi
bioaktivitasnya. Sedangkan berdasarkan nilai
LC50 nya ekstrak etanol 96% memiliki
bioaktivitas terendah diantara ekstrak lainnya
dengan nilai LC50 sebesar 978.85 ppm.
Tabel 4 LC50 ekstrak benalu jeruk
Sampel
LC50 (ppm)
Etanol 96%
Etanol 70%
Etanol 30%
Air

978.85
864.60
648.15
699.92

Tabel 5 Tingkat toksisitas suatu ekstrak
(Meyer 1982)
Nilai LC50
Tingkat Toksisitas
≤ 30 ppm
≤ 1000 ppm
> 1000 ppm

Sangat toksik
Toksik
Tidak toksik

10

Rendahnya aktivitas bioaktif terhadap larva
udang menunjukkan bahwa kandungan
senyawa metabolit sekunder yang terkandung
dalam ekstrak sedikit, sehingga LC50 menjadi
besar dan menyebabkan berkurangnya
bioaktivitas. Hasil uji toksisitas juga
menunjukkan bahwa ekstrak etanol 96%,
etanol 70%, etanol 30%, dan air dapat
dikatakan toksik karena LC50 dari keempat
ekstrak ini masih berada di bawah 1000 ppm
(Tabel 5).
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Ekstraksi benalu jeruk, uji potensi
antidiabetes terhadap ekstrak benalu jeruk dan
uji toksisitas dengan metode BSLT telah
berhasil dilakukan. Ekstrak benalu jeruk
dengan
variasi
konsentrasi
pelarut
menghasilkan rendemen tertinggi pada etanol
96% sebesar 66.23%. Dua pelarut dengan
persentase inhibisi α-glukosidase di atas 50%
adalah etanol 70% dan etanol 96% dengan
nilai rata-rata inhibisi α-glukosidase sebesar
75.88% dan 71.22% pada konsentrasi 250
ppm. Hasil analisis secara in vitro untuk
aktivitas antioksidan menunjukkan bahwa
ekstrak etanol 70% merupakan ekstrak yang
paling aktif karena memiliki nilai IC50 paling
kecil yaitu 65.15 ppm.
Hal tersebut menunjukkan kandungan
senyawa dalam ekstrak etanol 96% dan 70%
memliki
potensi
antidiabetes
mela