Induksi Kerusakan pada Sel Epitel (HeLa) oleh Bakteri Komensal Oral Streptococcus sanguinis - repository civitas UGM

H erm .es P flllaee H oteJ 1 12 srqponmlkjihgfedcbaZYXWVUTSRQPO
1 3 A ,pril 2 0 -1 3
e

Banda Aeeh
P e n e rb it: P S K G F K U n s y ia h

I
I

i
P R O C E E D IN G

!

A C E H S Y IA H K U A L A -D E N T A l
tsrqponmlkjihgfedcbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
(A S y ia h -D M

j

M E E T IN G

III

Ill) P S K G F K U N S Y IA H ,

r

I

I

QPONMLKJIHGFEDCBA

Them e:

In te g r a tio n

o f S c ie n c e s , C lin ic a l S k ills a n d

T e c h n o lo g y

to Im p r o v e

D e n ta l A d v a n c e d

B a n d a A c e h , 1 2 -1 3 A p r il 2 0 1 3

P ro g ra m S tu d i K e d o k te ra n G ig i
fK U N S Y IA H O a ru s s la m

+Banda A c e h

IS B N

978-602 -99096-1-6

P R O C E E D IN G
A C E H S Y IA H K U A lA -D E N T A l
(A S y ia h -D M

M E E T IN G

III

Ill) P S K G F K srqponmlkjihgfedcbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
UNSYIAH~

ISBN 978-602-99096-1-6

9

E d ito r:

11 III U

7 8602 9

1111'

11

9 0 9 6'1 cbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDC
6

V io n a D ia n s a ri, S .S i, M .S i
d rh . A b d ilta h Im ra n N a s u tio n , M .S i
d rg . S u n n a ti, S p .P e rio
d rg . Z a k i M u b a ra k , M S

A la m a t

R e d a k s i:

P ro g ra m S tu d i K e d o k te ra n

G ig i F K U N S Y IA H

J L T g k T a n o h A b e e , D a ru s s a la m - B a n d a A c e h
T e lp ,

D651-7551843

P e n e rb it:
P ro g ra m S tu d i K e d o k te ra n

G ig i

F K U N S Y IA H D a ru s s a la m -8 a n d a

A ceh

DAFTARISIsrqponmlkjihgfedcbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA

Heni Susilowati, Maria Margareta Suryani Hutorno, Puti Lenggogeni
Induksi Kerusakan Pada Sel Epitel (Hela) Oleh Bakteri Kornensal OralZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
S tr e p to c o c c u s S a n g u in is - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ,.- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - cbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCB
I-I 0
Retno Hayati
Penanggulangan Risiko Karies Pada Saat Tumbuh Kernbang Anak

C a r ie s R is k in G r o w in g C h ild ) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

11-19

Saidina Harnzah Daliemunthe
Perawatan Interdisipl in Ortodonti - Periodonsia ----------------------------------------------------

20-26

(M a n a g e m e n t

Taufik Surnarsongko
Retensi Magnet Pada O v e r d e n tu r e

Dukungan

.
Gigi ( M a g n e t

R e te n tio n

on

T o o th

Support

O v e r d e n tu r e ) -----------------------------------------------------------"!.---------------------------------

27 -34

.""
AI. Supartinah
Pengendalian Faktor Risiko Penyebab Karies Pada Anak ( C a r ie s R is k F a c to r C o n tr o llin g

In

C h ild r e n ) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ~ - - - - - -

35

Hanna H. Bachtiar-Iskandar,
Menik Priaminiarti, Bramma Kiswanjaya
Bagaimana Memperoleh Radiograf Yang Baik Di Bidang Kedokteran Gigi ( H o w to G e t a n
E x c e lle n t R a d io g r a p h in D e n tis tr y ) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 36
Farida Soetiarto, Makassari Dewi
Kejadian R e c u r r e n t A p h th a e S to m a titis Pada Penderita Turnor Ovariurn Di Rurnah Sakit Kanker
Dharmais Jakarta Tah un 20 12 --------------------------------------------------------------37-43
Aprillia Adenan
Protesa Prostoperio

Sebagai Splin Periodontal

S p l i n t) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

( P r o s th o - P e r io

P r o s th e s is

As

A

P e r io d o n ta l

-------------------------------------------------------

44- 5 1

Ameta Primasari
Proses Penuaan Terhadap Pertimbangan Perawatan Ortodonti ( C o n s id e r a tio n o f A g e in g P r o c e s s
to O r to d o n tic T r e a tm e n t) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 52-61
Dwi Aji Nugroho
Material Silane Coupling Agent di Kedokteran Gigi ---------~------.-

62-66

Indri Lubis, Ameta Primasari
Peran Densitas Papila Di Pennukaan Dorsal Lidah Terhadap Ambang Pengecapan
(T h e

R o le

o f P a p illa e

D e n s ity

on

D orsal

S u r fa c e

of

Tongue

to " T h e T a s te

T h r e s h o ld

L ite r a tu r e R e v ie w ) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

-

A

67-76

Dinovan Maros Lubis, Maya Hudiyati, Trisnawaty .
Pengaruh Obat Kumur Dengan Variasi Konsentrasi Fluorida Terhadap Kekuatan Tekan ZYXWVUTSRQPONML
R e s in
77 -82
M o d ifie d g l a s s 1 0 n o m e r C e m e n t - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Etria V Utami, Shanty Chairani, Siti Rusdiana Puspa Dewi
Sensitifitas Rasa Dasar Pengecapan Pada Individu Dengan Tingkat Ketahanan Terhadap Pedas
Yang Berbeda -----------------------------------------------------------------------83-89
Aisyah Hanim Harahap, Sondang Pintauli
Peranan Kesehatan Mulut Terhadap Malnutrisi dan Kualitas Hidup Pada Lansia ( R o le o f O r a l
H e a lth to M a ln u tr itio n a n d Q u a lity o f L ife in E ld e r ly - A L ite r a tu r e R e v ie w ) - - - - - - - - - - - - - - - - - - 90-97
Annisa Amalia*, Martha Mozartha, Trisnawaty
Pengaruh Lama Pemaparan Cuka Pempek Terhadap Kekuatan Fleksural Basis Gigi Tiruan Nilon
T ermop lastik ----------------------------------------------:------------:----~--------------------------98-103
Dalili Adlina, Ifwandi, Viona Diansari
Pengaruh Penggodokan Terhadap Stabilitas Warna Elemen Gigi Tiruan Resin Akrilik->- 104-111
Fitri Yunita Batubara, Trimurni Abidin
Peran Casein Phosphopeptide-Amorphous Calcium Phosphate (CPP-ACP) Pada Remineralisasi
Gigi ( T h e R o le O f C a s e in P h o s p h o p e p tid e - A m o r p h o u s C a lc iu m P h o s p h a te ( C P P - A C P ) o n T h e
T o o th R e m in e r a liz a tio n )
--------------------------------------------------------------------112- 1I7
Cut Fauziah, Sri Fitriyani, Viona Diansari
Colour Change of Enamel after Application of A v e r r h o a B ilim b i and 10% Carbamide Peroxide
as Bleaching Agent ----------------------------------------------------------------------------------I 18-126
Herniza Yusdani, Sondang Pintauli
Asupan Kalsium Pada Masa Perkembangan
D e v e lo p m e n t

Gigi Geligi ( C a lc iu m I n ta k e I n P r im a r y

P e r io d ) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

T o o th

127- 134

Ika Devi Adiana, Ameta Primasari
Karakteristik Saliva Pada Anak-Anak Penderita Diabetes ( S a liv a r y C h a r a c te r is tic F o r D ia b e tic
C h ild r e n - L ite r a tu r e R e v ie w ) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - cbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
135- 141
Mely Asmitha JZ, Viona Diansari, Diana Setya Ningsih
Pengaruh Durasi Pcrendaman Resin Akrilik H e a t C u r e d Dalam Air Rebusan Daun Sirih ( P ip e r
b e lle Linn) 25% Terhadap Perubahan Dimensi -------------------------------142-151
Santi Chismirina
Biofilm Mikrobial Rongga Mulut dan Q u o r u m S e n s in g - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

1 5 2 -1 5 9

Sartika Puspita
Ekspresi Nestin Sebagai Petanda Differensiasi Sel Odontoblas ( N e s tin E x p r e s s io n I s A M a r k e r o f
O d o n to b la s t C e lls ) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 160-1-63

Irmi Fitria, Sunnati, Santi Chismirina
Perbandingan Status Periodontal Siswa Smp Yang Tinggal Di Asrama Dan Non-Asrama Di
Lueng Putu Kabupaten Pidie Jaya-------------------------------------------------------------[64-172
Siti Rusdiana Puspa Dewi, Jojor Silaban, Rini Bikarindrasari
.,
Pengaruh rasio ketebalan antaraZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
r e s in m o d ifie d g la s s io n o m e r cement dan resin komposit hibrida
terhadap Kekuatan tekan restorasi s a n d w ic h - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 173-182
Amila Yumna, Vera Yulina, Dbarli Syafriza
Space Maintainer Tipe Crown and Loop: Suatu Perawatan Kasus Tanggal Dini Gigi Sulung
(Laporan Kasus) -----------------------------------------------------------------------------------[83-188

INDDKSI KERUSAKAN PADA SEL EPITEL (HELA) OLEH BAKTERI KOMENSAL
ORAL ZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
S T R E P T O C O C C U S S A N G U IN IS
Heni Susilowati", Maria Margareta

Suryani Hutomo"; Puti Lenggogent"

*Bagian Biologi Mulut Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Gadjah Mada
**Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Duta Wacana Yogyakarta
***Program Studi I1muKedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Gadjah Mada
Sleman, Yogyakarta, Indonesia

ABSTRAK
Bakteri komensal oral S tr e p to c o c c u s s a n g u in is sejauh ini diketahui sebagai spesies yang bertanggungjawab pada kolonisasi awal bakteri pada permukaan gigi. Bakteri ini secara jelas berperan dalam
patogenesis in fe c tiv e e n d o c a r d itis dan dijumpai pada lesi jaringan periodontal; namun perannya dalam
patogenesis infeksi oral masih belum diketahui dengan jelas. Penelitian terhadulu menunjukkan bahwa
S. s a n g u in is mampu menginduksi apoptosis pada sel epitel Hel.a, tetapi mekanisme kematian sel
tersebut belum jelas. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengkaji pengaruh bakteri S. s a n g u in is pada
5
prubahan seluler dan molekuler nukleus sel Hel.a, Sel HeLa (5x10 sel/well) dikultur dalam RPMI
7
1640 semalam sebelum stimulasi. Suspensi bakteri S s a n g u in is (10 sel/ml) ditambahkan pada kultur
HeLa dan diinkubasi selama 24 dan 48 jam dalam medium tanpa antibiotik. Analisis morfologi sel
He La dilakukan dengan menggunakan mikroskop fase kontras dan mikroskop fluoresen setelah
pewamaan nukleus Hoechst 33342. Keutuhan DNA pada kelompok kontrol dan stimulasi bakteri
diamaati setelah elektroforesis gel agarose. Profil DNA setiap sampel diamati menggunakan UV
transiluminator. Doxorubicin (0,5625 mg/ml) digunakan sebagai kontrol positif induksi apoptosis.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa S . s a n g u in is menyebabkan perubahan morfologi sel, ditandai
dengan berkurangnya ukuran sel seperti tampak pada mikroskop fase kontras serta peningkatan
intensitas serapan fluoresen nukelus. Degradasi DNA terjadi pada sel yang terpapar S. s a n g u in is .
Disimpulkan bahwa S. s a n g u in is mampu menginduksi kerusakan pada sel epitel HeLa.
Kata kunci: S tr e p to c o c c u s s a n g u in is , perubahan morfologi sel, kerusakan DNA

ABSTRACT
An oral commensal bacterium S tr e p to c o c c u s s a n g u in is is known as species which is responsible for
early bacterial colonization within dental plaque. This bacterium has been implicated clearly with the
pathogensis of infective endocarditis and some periodontal less ion; however, it's role in the
patogenesis of oral infection still unknown. In previous study it was found that S. s a n g u in is induced
apoptotic cell death on epithelium cell line, HeLa cells, but the mechanism still needs to be clarified.
Therefore, the aim of this study was to investigate the effect of S. s a n g u in is whole cell bacteria to
5
cellular and molecular change of He La cells nuclei. The cells (5x10 cells/well) were cultured in
complete RPMI 1640 medium for overnight before stimulation. S tr e p to c o c c u s s a n g u in is bacterial
7
suspension (10 cells/ml) was added to the culture and incubated for 24 and 48 hours in antibiotic-free
culture medium. HeLa cells morphological
analysis was performed under phase contrast and
fluorescence microscope observation after Hoechst 33342 staining. In order to observe the integrity of
DNA, HeLa whole cell DNA of untreated and bacteria-treated group were isolated addressed for
agarose gel electrophoresis. The DNA profiJ of each sample was observed under UV transilluminator.
An apopotic inducer Doxorubicin (0,5625 mg/ml) was used as a positive control in this study. The
results demonstrated that S. s a n g u in is caused cell morphological change on HeLa cells indicated by
decrease in cell size as shown on phasecontrast microscopy and increased fluorescence intensity of
nucleus. A smear DNA degradation was observed after agarose gel electrophoresis of S. s a n g u in is treated cells. It was concluded that S. s a n g u in is could induce cell damage on HeLa cells.
Keywords: S tr e p to c o c c u s

s a n g u in is ,

cell morphological

llf'..ceh cbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
S Y ia h
K u a la
D e n ta l
M e e tin g
He~m e5
12·13

P ;:;ia c e
.A p ril

H o te l.
2013

83nda

A ceh

change, DNA damage

merupakan mekanisme yang teridentifikasi
PendahuluansrqponmlkjihgfedcbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
Dewasa
dilaporkan
sistemik

adannya
yang

adalah

oleh

terrnasuk

Streptococcus

merupakan

fakultatif

anaerob

berperan

pembentukan
gigi.

berkoloni

pada

sebagai flora normal yang

sebagai

bakteri

koloni

Meskipun

pioner

dalam

bakteri-bakteri

bersifat

komensal

namun bakteri ini juga ditemukan
lesi periodontal, pengaruhnya

yang dipapar
oleh

tersebut.

komensal

kewaspadaan

akan

Pene!itian

v itr o .

Pada

besar

sel

setelah paparan
21A ceh
H e rm e s
1 2 -1 3

kematian sel HeLa in

mengalami

K u a la

P a la c e
A p ril

tersebut

S. s a n g u in is .

S Y ia h

oleh

bahwa S. s a n g u in is

pene!itian
HeLa

bakteri

yang dilakukan

Almrkz menunjukkan
dapat menyebabkan

pentingnya

keberadaan

2013

sebagian
apoptosis

m em brane

level

molekuler

aktivasi

c a sp a se -3 ,

yaitu protein yang berperan vital sebagai
eksekutor

pada

terjadinya

mekanisme

apoptosis.

Bukti-bukti

bahwa

untuk

transduksi

S.

tersebut
s a n g u in is

menyebabkan

apoptosis_

pada sel HeLa, namun mekanisme lengkap
dari

proses

perubahan
DNA

konfirmasi

masih

lebih mendalam,

klarifikasi

perubahan-

yang terjadi pada nukleus

(Hutomo

preparasi).

dkk,

manuskrip

Berdasarkan

permasalahan
apakah

signalingnya

latar

M e e tin g
8anda

A ceh

dan

dalam

belakang

di atas maka perlu diketahui

nukleus dan DNA se! HeLa yang

terpapar

S.

s a n g u in is

perubahan-perubahan
molekuler

yang

menunjukkan
seluler

spesifik

dan

sebagaimana

terjadi pada sel yang mengalarni apoptosis.

Tujuan
pene!itian
iru
adalah
ApoptosiscbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA

D e n ta l
H o te l,

adanya

berpotensi

in fe c tiv e

dan

s h r in k a g e

oral,

sebagai

pada

mengindikasikan

e n d o c a r d itis

tersebut.

oral

seluler

menunjukkan

diantaranya

bakteri

perubahan-perubahan

Pengamatan

3

s a n g u in is

mekanisme
He La

c e ll

memerlukan

S.

pada

Sel

mengindikasikan

terhadap seI-

dan

mengarah

kematian

plak

dalam

terjadi pada

seluler

terjadinya

berupa

Se!4.

dengan S. s a n g u in is

juga

se!

yaitu

pada sebagian

kencenderungan

se! gingiva bel urn diketahui dengan pasti:

Keterlibatan

sel lain

fenomena

yang

b le b b in g .

bakteri gram positif
yang

HeLa

menunjukkan

S tr e p to c o c c u s

s a n g u in is

rongga mulut

bakteri-

pada pasien

imunokompromis'.

jenis

nekrosis juga terhadi

molekuler

e n d o c a r d itis ,

clan neutropenia

kematian

kelompok

yaitu

in fe c tiv e

meskipun

didukung

oral yang sering terlibat

penyebab

pada kematian sel He La,

s a n g u in is .

dalam

viridans,

bakteri komensal

septikemia,

bakteri-

secara dominan

Apoptosis yang diindikasikan
golongan ZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA

oral, misalnya

S tr e p to c o c c u s

ini

sebagai

penyakit

Salah satu bakteri komensal

S tr e p to c o c c u s .

Spesies

banyak

kasus-kasus

disebabkan

bakteri komensal

oral

semakin

lID

untuk

mengkaji
pada

pengaruh

perubahan

bakteriZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
S
s a n g u in is
HeLa, maka bakteri disiapkan dalam media
seluler

dan

molekuler

BHI dalam konsentrasi 10 8 sel/ml.

pada nukleus sel He La.
2. Kultur sel HeLa
Sel HeLa yang diperoleh dari koleksi

Bahan dan Metode
Penelitian

ini merupakan

eksperimental
cell

mumi

line (HeLa).

koleksi

epithelium

1640

Sel HeLa

merupakan

USA) dengan suplemen

Terpadu

Penelitian
(LPPT)

Gadjah Mada, Y ogyakarta.
mumi

S

LP PT UGM dikultur pada medium RPMI

terhadap

Laboratorium

Pengujian

penelitian

Universitas
Kultur biakan

diperoleh

s a n g u in is

dan

dari Balai

(Sigma-Aldrich,

(FBS),

serum

100

ug/ml streptomisin,
yang

telah

St.

Louis,

10010 fe ta l

lU/ml

b o v in e

penisilin-IOO

dan fungizone. Kultur

mencapai

tingkat

untuk

selanjutnya

80% dipanen

MO,

kepadatan
dikultur

Laboratorium

Kesehatan, Dinas Kesehatan,

kembali pada plat 24 well yang telah diberi

Y ogyakarta.

Kultur

g la s s

dilakukan
Fakultas
Duta

rutin

di Laboratorium
Kedokteran,

Wacana,

s a n g u in is

Mikrobiologi,

Universitas

Yogyakarta.

HeLa serta pengamatan
DNA

S

dilakukan

di

Kristen

Kultur

untuk

c o v e r s lip

fragmentasi nukleus, atau petri diameter· 10
cm untuk ekstraksi DNA. Sel HeLa yang

sel

dikultur

untuk

profil nukleus dan

nukleus

disiapkan

LPPT

Universitas

Gadjah Mada, Yogyakarta

pengamatan

untuk

tiap

Kultur

pengamatan
dalam

kelompok

sel tersebut

fragmentasi
lima

replikasi

dan subkelompok,
diinkubasi

semalam

pada suhu 37°C dalam inkubator kultur sel
dengan tekanan 5% C O 2 •

1. Kultur isolat murni S. s a n g u in is
Biakan

mumi

S

hasil

s a n g u in is

kultur isolat bakteri plak gigi merupakan
koleksi

Balai

Laboratorium

Yogyakarta.

Bakteri

dibiakkan

3. Pengamatan nukleus sel HeLa

Kesehatan

Sel

kembali

kelompok

dikelompokkan

kedalam

kontrol dan perlakuan, masing-

menggunakan

BHI dalam m ic r o a e r o b ic ja r

masmg

lima. Sel He La pada

pada

suhu

37°C.

Untuk

kontrol

dikultur

kontaminasi

maka

medium

dengan

kanamisin

dan

dilengkapi

500

ug/ml,

I m l , eritromisin
5 jlg BA

kloramfenikol
ug/ml,

menghindari

0,5%

dilaksanakan

fungizone.

paparan

bakteri

10

Sebelum
pada

sel

1 2 -1 3

t+c

P a la c e
A p ril

2013

t e ! .

Banda

A ceh

media

kultur

lengkap, sementara itu sel pada kelompok
perlakuan dipapar dengan S s a n g u in is
sel/ml dan diinkubasi
bervariasi
Jam.

3 cbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
I p. c e h 5 Y j a h K u a : -a 0 e n t ;3 i M e e tin g
H e rm e s

dengan

kelompok

10

7

dalam waktu yang

yaitu 24 jam, 36 jam, dan 48

Doxorubicin

(Kalbe

Farma,

Indonesia)
positif.

digunakan

Setelah

kultur

segera

debagai

inkubasi
diaspirasi

kontrol

selesai,
dan

ethidium

bromide.

media

didokumentasikan

digantikan

analisis kualitatif.

Gambaran

hasil

dalam bentuk foto untuk

dengan ZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
p h o s p h a t b u ffe r s a lin e (pBS IX)
dilanjutkan

fiksasi

menggunakan

formalin dan pencucian
Nukleus

sel

10%

dengan PBS IX.

HeLa

diwamai

dengan

33342

(Sigma,

Hasil Penelitian
1. Prom perubaban
sel

HeLa

morfologi nukleus

setelab

paparan

S.

s a n g u in is

menggunakan

Hoechst

Saint Louis,

Missouri,

menit,

kemudian

dengan

PBS

dilakukan
setelah

USA)

dilanjutkan

IX.

nukleus

mikroskop

m o u n tin g

g la s s

Eksperimen

5

pencucian

Pengamatan

pada

g la s s s lid e .

selama

fluoresen
pada

c o v e r s lip

dilakukan

Profil perubahan

morfologi

nukleus

sel HeLa kelompok kontrol dan perlakuan
diamati

menggunakan

pengamatan
dalam

mikroskop.

Hasil

morfologi nukleus didapatkan

bentuk

gambaran

mikroskopis

fasekontras seperti tampak pada Gambar 1.

paling

sedikit tiga kali untuk mendapatkan

hasil

yang konsisten.

4. Pengamatan
Sel

profil DNA sel HeLa

He La

yang

dikultur

semalam

pada plat 24 sumuran dipapar dengan 10 7
sel/ml selama 24 jam, 36 jam, dan 48 jam
pada

suhu

37°C.

mg/ml) digunakan
Sel selanjutnya

Doxorubicin

(0,5625

sebagai kontrol positif.
dicuci

dengan

PBS

IX

Tanpaperbku~

0.5625 mc/mI Doxorubicin

10 ' sei/mI

S . s a n g u in is

Gambar I. Gambaran mikrograf fasekontras sel
HeLa tanpa stimulasi mengindikasikan morfologi
nukleus yang normalBA
( A , B). Nukleus sel HeLa
yang terpapar Doxorubicin memberikan kesan
abnormalitas dalam morfologi, ditunjukkan anak
panah hitam CC, D). Sel HeLa yang terpapar S.
s a n g u in is memperlihatkan gambaran nukleus yang
gelap, ditunjukkan anak panah putih (E, F).

untuk kemudian dilakukan ekstraksi DNA
menggunakan
proteinase
sampel

lysis

K. Ekstrak
kemudian

bufer

TE,

eletroforesis
agarosa

buffer,
DNA

RNase,

dari setiap

disuspensikan

selanjutnya

digunakan

agarose

menggunakan

elektroforesis

gel

dengan

D e n ta l
M e e tin g
4lp,ceh cbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
S Y ia h
k u e t s
P a ia c e

A p ril

H o te !,
2013

B a n d a

A ceh

setelah

paparan

perubahan

selama 48 jam. Sel HeLa pada kelompok

iluminator UV setelah pewamaan

r rn e s

mengalami

untuk

dengan

1 2 -1 3

yang

nukleus sel

morfologi

diamati

l+ e

HeLa

1 menunjukkan

dalam

1%. Profil DNA yang diperoleh

dari hasil

Gambar

dan

Doxorubicin

ini tampak lebih besar dari pada sel yang
tidak.

distimulasi.

memberikan

gambaran

Kebanyakan

sel

gelembung dengan

ukuran yang sangat bervariasi.

Fenomena

ini tidak tampak jelas
terpapar

Doxorubicin

pada sel yang
selama

24 Jam.

Gambaran yang berbeda ditunjukkan oleh
sel HeLa yang

nukleus pacta sel HeLa yang dipapar Doxorubicin
(B), serta peningkatan intensitas serapan fluoresen
pada sel HeLa yang dipapar S. s a n g u in is (C). Anak
panah menunjukkan nukleus yang mengalarni
fragmentasi. Perbesaran mikroskopis 200X.

distimulasi

dengan S . ZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
Tampak pada Gambar 2 bahwa Sel
s a n g u in is .
Sel-sel pada kelompok 1111
Hela yang distimulasi dengan Doxorubicin
menunjukkan perubahan ukuran sel, sel
menunjukkan dengan jelas fragmentasi
menjadi lebih kecil dari pada sel normal.
nukleus. Perubahan nukleus pada sel-sel
Hal ini tampak pada kelompok yang
dalam kelornpok ini sangat berbeda apabila
distirnulasi selama 24 jam rnaupun 48 jam,
dibandingkan
dengan
sel-sel
pada
namun yang terakhir menunjukkan kesan
kelornpok yang dipapar S. s a n g u tn ts
kerusakan nukleus yang lebih jelas.
selarna 48 jam .. Sel HeLa yang terpapar S.
Gambaran morfologis dari mikroskop
s a n g u in is rnenunjukkan perubahan berupa
fasekontras tersebut belurn rnenunjukkan
peningkatan
serapan
fluoresen.
perubahan yang terjadi pada nukleus secara
Peningkatan intensitas serapan fluoresen
detail, sehingga diperlukan pengamatan
rnengindikasikan terjadinya perubahan
nukleus setelah pewamaan kromatin DNA
pada DNA karena partikel b is b e n z im id e
menggunakan Hoechst 33342.
Hoechst 33342 berikatan dengan A T - r ic h
Gambaran morfologi nukleus pada sel
r e g io n s pada d o u b le - s tr a n d e d
DNA. SelHeLa dari kelornpok kontrol dan perlakuan
sel
dalam
kelornpok
mi
tidak
lebih
jelas
setelah
pewarnaan
rnemperlihatkan
adanya pernbentukan
menggunakan Hoechst 33342. Gambaran
fragmen-fragmen nukleus.
seI yang tidak distirnulasi, dipapar dengan
Doxorubicin,

atau

menunjukkan

bahwa

S.
set

s a n g u in is

HeLa

dari

2. Profil

kerusakan

DNA

sel

HeLa

setelah papa ran S. s a n g u in is

kelornpok perlakuan mengalami perubahan

Hasil isolasi DNA yang dilakukan

pada rnorfologi nukleus seperti tampak

pada sel HeLa dari kelornpok kontrol dan

pada Gambar 2.

perlakuan
elektroforesis

A
.~~

••

;..

4

,c

..

BA

... -:.' ~

,t;~ ~ fP·

10'

o e I/m I

Profil

DNA

.

elektroforesis agarose tersebut terlihat pada

~

0,5625 mg/mI O o I< o ru b k in

agarosa.

menggunakan

kelompok kontrol dan perlakuan pada hasil

~.,.....

::;:.:~~.
:;.::~'; :

Tanpaperlakuan

dianalisis

S. s a n g u i n i s

Garnbar 3.

Molekul DNA yang utuh pada sel-sel
Gambar 2.
Morfologi nukleus se\ HeLa
menunjukkan gambaran nukleus normal pada
normal akan tampak sebagai pita DNA
kelompok yang tidak distimulasi (A), fragmentasicbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
S If:..c e h
H e rm e s

12-13

S Y ia h

K u a la

P ;;;a c e
.A p rii

D e n ta l
H o te l,

2013

M e e tin g
Banda

A ceh

yang tajam dengan intensitas kuat setelah
ethidium

Sesuai dengan tujuan dari penelitian

Elektroforesis agarose sampel

ini, hasil eksperimen yang telah dilakukan

pewamaan
bromide.

Pemba'hasan

menggunakan

DNA dari sel HeLa yang dipapar dengan

adalah

Doxorubicin selama 24 jam dan 48 jam

perubahan

menunjukkan

kerusakan DNA sel HeLa akibat paparan S.

DNA

penurunan

disertai

intensitas

dengan

pita

pembentukan

untuk

menganalisis

morfologi

Hasil

s a n g u in is .

profil

nukleus

penelitian

dan

lID

gambaran degradasi DNA di bagian apikal

menunjukkan bahwa S . s a n g u in is dapat

gel. Gambaran kerusakan DNA yang sama

menginduksi terjadinya perubahan pada

dapat diamati juga pada DNA sel HeLa

morfologi nukleus sel epitel He La berupa

berkurangnya
ukuran
nukleus
dari kelompok yang distimulasi dengan S.ZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
s a n g u in is .

Fenomena tersebut tidak tampak

terjadinya

kondensasi
oleh

kromatin
serapan

dan
yang

pada DNA genomik dari kelompok sel

diindikasikan

fluoresen

yang tidak distimulasi.QPONMLKJIHGFEDCBA

terhadap partikel bisbenzimide H33342.6
Analisis perubahan DNA menggunakan
elektroforesis

memperlihatkan

adannya

degradasi DNA pada sel HeLa setelah
paparan

S.

s a n g u in is .

Penelitian

sebelurnnya menunjukkan bahwa bakteri
ini mampu menginduksi kematian sel dan
aktivasi kaspase-3 pada sel HeLa setelah
paparan

selama

48

Jam.

Penelitian-

penelitian sebelumnya telah membuktikan
bahwa bakteri ini menyebabkan kematian
sel epitel HeLa, namun bukti-bukti belum

a b c d e fg

cukup

kuat

untuk

menjelaskan

jenis

kematian
sel
yang
ditimbulkannya,
Gambar
3. Hasil elektroforesis
agarosa
untuk
marker DNA lOO bp (a), DNA sel HeLa dari
meskipun fakta riset telah mengarah pada
kelompok kontrol inkubasi 24 jam (b) dan 48 jam
(c) menunjukkan adanya DNA yang utuh, tidak
terjadinya
apoptosis
(data
tidak
mengalami kerusakan. Sel HeLa dari kelompok
yang terpapar Doxorubicin (d, e) atau S. s a n g u in is cbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
dipublikasikan). Hasil penelitian ini telah
(f, g) memperlihatkan degradasi DNA (ditunjukkan
menambahkan inventarisasi
fenomena
dengan anak panah) baik pada inkubasi 24 jam
maupun 48 jam.
yang berhubungan dengan karakterisasi

61f:..ceh

S Y ia h

K u a !a

D e n ta l

i+e r rn e s P a ia c e
H o te l,
12~13
A p fl!
2013

M e e tin g
Banda

Aceh

kematian sel epitel HeLa yang diinduksi

mengakibatkan

s a n g u in is .
oleh S.ZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA

(H2AX)

dan

Sebagian

berakhir

dengan

besar

kematian

sel

yang

fosforilasi h is to n e
aktivasi

2AX

kaspase-3

fragmentasi

yang

DNA. I I

ditimbulkan oleh bakteri adalah apoptosis,

Fragmentasi nukleus merupakan gambaran

seperti

morfologis

pada

sel-sel

S tr e p to c o c c u s

sel

molekul DNA kedalam fragmen-fragmen

nukleus,

mekanisme

diklasifikasikan

(PCD),

nekrosis.9

mengindikasikan

Berdasarkan perubahan

kedalam

apoptosis, a p o p to s is - lik e p r o g r a m m e d c e ll
d e a th

yang

fragmentasi DNA yaitu proses pemotongan

morfologi

kematian

terpapar

dan L is te r ia

p n e u m o n ia e

m o n o c y to g e n e s .': 8

pada

yang

PCD,

n e c r o s is - lik e

Apoptosis

dan

berukuran

180- hingga

selanjutnya

dapat

200-bp,

yang

mengakibatkan

fragmentasi kedalam ukuran molekul yang
lebih kecil disebut DNA ladder.12

dikarakterisasikan

Hasil penelitian ini mengindikasikan

sebagai kematian sel yang ditandai dengan

mekanisme kematian

perubahan morfologi nukleus, diantaranya

pada sel HeLa yang disebabkan oleh S.

berupa

s a n g u in is ,

kondensasi

kromatin

dan

fragmentasi nukleus.1O

yaitu

sel yang spesifik

kematian

sel

yaJ?g

melibatkan mekanisme n u c le a r s h r in k a g e ,

Penelitian ini menunjukkan bahwa

perubahan

morfologi

nukleus

yang

bagian dari karakter mekanisme kematian

permanen. Profil perubahan nukleus yang

sel HeLa yang diinduksi oleh S. s a n g u in is

hampir sama terjadi pada sel epitel h u m a n

adalah

c h o la n g io c e llu la r

pengurangan

( n u c le a r

s h r in k a g e )

ukuran
dan

nukelus
kondensasi

(HuCCTI)

yang

kromatin, yang diindikasikan oleh adanya

in te r m e d ily s in ,

peningkatan intensitas serapan fluoresen

S.

Hoecst 33342. Kontrol positif Doxorubicin

dalam

menunjukkan tipikal perubahan morfologis

hospes.':'

berupa framentasi nukleus pada sel HeLa.

bahwa

Doxorubicin

in te r m e d iu s

merupakan

antrasiklin

yang

antibiotik

potensial

untuk

dan

c a r c in o m a

c e lls

distimulasi

dengan

toksin yang diproduksi oleh

in te r m e d iu s

sebagai komponen vital

mekanisme

mvasmya

Menarik
antara

untuk

S.

ke

sel

diperhatikan

s a n g u in is

dan

S.

terdapat kesamaan dalarn sifat

kemampuannya

menimbulkan

pengobatan penyakit kanker atas dasar

kematian

kemampuannya

merupakan spesies komensal oral yang

aposptosis

untuk

pada

menginduksi

sel-sel

kanker.

Doxorubicin berikatan dengan molekulmolekul basa DNA
71A ceh
H e rm e s

12-13

S Y ia h

K u a ia

P a ia c e
A p ril

untuk

2013

sel

epitel.

Keduanya

ditemukan dalam plak gigi dan abses
periodontal

2, 3, 14

namun jugadikaitkan

erat dengan infeksi-infeksi organ dalarn
selanjutnyacbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA

D e n ta l
H o te l,

pada

M e e tin g
Banda

A ceh

manus la

seperti

in fe c tiv e

ini

abses

hepar,

e n d o c a r d itis . 3, 15

menunjukkan

tersebut

virulen. Perubahan habitat
dan ZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA

kedua

spesies

mempunyai

kesamaan

dalam

menimbulkan

nukleus

memungkinkan

Hasil penelitian

bahwa

kemampuannya
kerusakan

otak

yaitu berupa

sebagai

s h r in k a g e

dan smear DNA degradation.

Apakah

fenomena- fenomena

perubahan

spesies

patogenik.

s a n g u in is

sifat

komensal

bakteri
menjadi

Fungsi-fungsi

mekanisme

homeostasis

pembentukan

n u c le a r

S.

dinding

dalam

bakteri

sel,

seperti

sintesis

asam

amino dan asam nukleat, serta proses untuk

I3

tersebut

bertahan dalam kondisi anaerob merupakan

merupakan karakteristik kematian sel epitel

faktor-faktor yang menyebabkan timbulnya

yang

sifat virulen pada S . s a n g u in is terhadap sel

disebabkan

yang

protein-protein

kedua

yang

yaitu

hospes.'

Adanya bukti bahwa S . s a n g u in is

ini belum

mampu

mengiduksi

tanpa

c a s p a s e I3,

sementara

pada

terlibat

inisiasi

nukleus

HeLa,

ini

aktivasi

caspase.

HuCCTI

spesies

dalam

menginduksi

in te r m e d iu s

merupakan

saat

perbedaan

apoptosis

golongan

Selain adanya kesamaan-

tersebut,

mempunyai

oral

sampai

dapat dijelaskan.
kesamaan

bakteri

komensal

s tr e p to c o c c u s

pertanyaan

oleh

maka

kematian

masih perlu dipelajari lebih lanjut.

sel

penyakit

s a n g u in is

dipertimbangkan

berkaitan

kemungkinan-kernungkinan
dalam

dengan

mekanisme

kerusakan
oleh

epitel

jaringan

kedua

hasil

penelitian

bahwa:

lID dapat

S tr e p to c o c c u s

menginduksi kerusakan pada sel

HeLa ditandai

kromatin

pada

dengan

nukleus

kondensasi

serta

degradasi

DNA.

spesies

Berdasarkan hasil terse but maka pada

tersebut.
S tr e p to c o c c u s

merupakan

memang

penelitian

selanjutnya

oral,

namun

mengukur

frekuensi

beberapa

kondisi

yang

s a n g u in is

flora

keberadaannya

normal

dalam

patologis seperti periodontitis dan in fe c tiv e
menunjukkan

e n d o c a r d itis

bahwa

h

H e rm e s

S Y

i a

h

K

li

a i a

P a la c e
A p ril

0

H o te !.
2013

e n t a i

f"l1 e e tin
A ceh

g

disarankan
kondensasi
oleh

s tu d y

untuk
nukleus

S tr e p to c o c c u s

serta dilakukannya

dan d o s e - d e p e n d e n t

pada

Banda

disebabkan

s a n g u in is ,

kondisi tertentu bakteri ini dapat bersifat

12·13

mekanismenya

itu cbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
S . s a n g u in is
Kesimpulan dan Saran

untuk

e

meskipun

aktivasi

disimpulkan

8 I BA
ft. C

lID

kemungkinan

suatu

pada sel HeLa. Perbedaan tersebut penting

disebabkan

penelitan

keterlibatan S . s a n g u in is dalam patogenesis

Dari

yang

hasil

pada sel epitel

mengindikasikan

ekspresi c a s p a s e - S

terlibat

dan DNA

ireversibel

S tr e p to c o c c u s

melibatkan

terbukti meningkatkan

yang

kerusakan

tim e - c o r s e

untuk mengukur

frekuensi

kondensasi

nukleus

resolving
and
nonresolving
bacterial
pneumonia. A m J R e s p ir C r it C a r e M e d
2000; 161: 2043-2050.

yang

disebabkan oleh ZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
S tr e p to c o c c u s s a n g u in is .
6.

Ucapan Terima Kasih
Penelitian ini dilaksanakan
Masyarakat
UGM

Fakultas

Tahun

2012

atas Dana

Kedokteran
dengan

Gigi
kontrak

7.

Ucapan terima kasih ditujukan kepada Dr.
Katsuhiko Hirota, Hirohiko Okamura, dan
Hiromichi Yumoto dari The University

of
8.

Tokushima
tentang

untuk

riset.

Rumbiwati

komunikasi

Kepada

juga

Tri

diucapkan

personal

Yuliati

dan

terima

Browne KA, Blink E, Sutton VR, Froelich
Jans DA, Trapani
l A . Cytosolic
delivery of granzyme B by bacterial toxins:
evidence that endosomal
disruption, in
addition to transmembrane pore formation,
is an important function of perforin. M o l
C e ll B io i 1999; 19: 8604-8615.
Carrero JA, Calderon B, Unanue ER.
Listeriolysin
0
from
Listeria
monocytogenes
is
a
Iymphocyte
apoptogenic molecule. J I m m o n o l 2 0 0 4 ;
172: 4866-4874.

C l,

Nomor No.BA4 4 1 5 f K G I P P / 2 0 1 2 .

penelitian

Wu l , Apontes P, Song L, Liang P, Yang L,
Li F. Molecular mechanism of upregulation
of survivin transcription
by the AT-rich
DNA-binding
ligand.
Hoechst33342:
evidence for survivin involvement in drug
resistance. N u c le ic A c id s R e s 2007; 35(7):
2390-2402.

kasih
9.

Unal-Cevik I, Kilinc M, Can A, GursoyOzdemir Y, Dalkara T. Apoptotic and
necrotic
death
mechanisms
are
penelitian di LPPT UGM.
concomitantly activated in the same cell
after cerebral ischemia. S tr o k e 2004; 35:
2189-2194.
DAFTAR PUST AKA
10. Salvesen GS and Dixit VM. Caspases:
1. Bruckner L, Gigliotti F. Viridans group
intracellular signalling by proteolysis. C - e ll
streptococcal
infections among children
1997; 91: 443-446.
with cancer and the importance of emerging
11. Chen T, Guo X, Liu X, et al. A strategy in
antibiotic resistance. S e m in P e d ia tr I n fe c t
the design of micellar shape for cancer
D is 2006; 17: 153-160.
therapy. A d v H e a lth c M a te r 2012; 1: 2142. Colombo AV, Silva CM, Haffajee A,
224.
Colombo AP. Identification of oral bacteria
12. Gordon WC, Casey DM, Lukiw WJ, Bazan
associated with crevicular epithelial cells
NG. DNA damage and repair in lightfrom chronic periodontitis lesions. J M e d
induced photoreceptor degeneration, I n v e s t
M i c r o b i o l . 2006; 55: 609-615.
V is u a l S c i 2002; 43: 3511-3521.
3. Paik S, Senty L, Das S, NoecbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
re , Munro CL,
13. Susilowati H, Okamura H, Hirota K, dkk.
Kitten
T. Identification
of virulence
The
molecular
mechanisms
for
determinants
for
endocarditis
in
Streptococcus intermedius intermedilysinStreptococcus
sanguuus
by
signatureinduced
cell
death
in
human
tagged mutagenesis. I n fe c t I m m u n 2005; 73:
cholangiocellular carcinoma cells. Naskah
6064-6074.
dipresentasikan
pada International
Joint
4. Almrkz FAE. Induction of epithelial cell
Symposium
Frontier
in
Biomedical
seath by the suspension of Sterptocossus
Science:
From Genes to Applications
sanguinis isolated from dental plaque. In
2008.
P r o s id in g
I n te r n a tio n a l
J o in t
vitro study on HeLa cells. U n p u b lis h e d
S y m p o s iu m
F r o n tie r
in
B io m e d ic a l
th e s is . Master Program of Dental Science,
S c ie n c e s : F r o m G e n e s to A p p lic a tio n s ;
24Universitas Gadjah Mada. 2011.
25 November 2008; Yogyakarta, Fakultas
5. Kazzaz JA, Horowitz S, Xu J, dkk.
Kedokteran UGM; 2008. p. 24-25.
Differential
patterns
of apoptosis
In

atas bantuannya dalam teknis pelaksanaan

91A ceh
H e rm e s

12· 13

S Y i"h

K u a la

P a la c e
A p ril

D e n ta l
H o te l,

2013

M e e tin g
Banda

A ceh

14. Jan F, Hafiz AM, Gupta S, Meidl J,
AlIaqaband S. Brain abscesses in a patient
J . ZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
with a patent foramen ovale: a case report.BA
M e d C a s e R e p 2009; 25: 392-399.
15. Nagamune H, Ohnishi C, Katsuura A, dkk.
Intermedilysin, a novel cytotoxin specific
for human cells, secreted by S tr e p to c o c c u s
in te r m e d iu s UNS46 isolated from a human
liver abscess. I n fe c t I m m u n 1996; 64: 30933100.

10QPONMLKJIHGFEDCBA
I cbaZYXWVUTSRQPONMLKJIHGFEDCBA
A ce
h
S Y i a h
{u
c 1c
Den
t a I M e e t
H e rm e s
1 2 -1 3

P a ia c e
A p ril

l+ o
2013

t e

! .

Banda

i r,

A ceh

g