Uji Penghambatan Degranulasi Mastosit Tersensitisasi Aktif Oleh Ekstrak Etanol Daun Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa (Scheff) Boerl) Pada Mencit Jantan

LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Ethical clearance

44

Lampiran 2. Surat LIPI

45

Lampiran 3. Bagan alur penelitian
Daun Mahkota Dewa
Dicuci dari pengotor sampai bersih
Ditiriskan
Ditimbang berat basahnya
Daun Mahkota Dewa
Pemeriksaan organoleptis dan
makroskopik
Dirajang dan dikeringkan pada suhu
±40 - 50°C
Ditimbang berat keringnya
Simplisia


Karakterisasi

Skrining fitokimia

1. Makroskopik
2. Mikroskopik
3. Penetapan Kadar
Air
4. Kadar Sari yang
Larut Dalam Air
5. Kadar Sari yang
Larut dalam
Etanol
6. Kadar Abu Total
7. Kadar Abu yang
tidak larut dalam
asam
Senyawa golongan








Alkaloida
Glikosida
Flavanoida
Steroid
Saponin
Tanin

300 gram serbuk simplisia
Dimasukkan dalam wadah
kaca
Ditambahkan etanol 96%
hingga serbuk terendam
Dibiarkan selama 3 jam
Dimasukkan kedalam alat

perkolator
Dituang penyari diatasnya
Ditutup mulut perkolator
selama 24 jam
Dibuka kran perkolator
Dibiarkan tetesan ekstrak
mengalir dengan kecepatan
1 ml/menit
Ditampung perkolat dalam
botol kaca
Dihentikan kran apabila
perkolat terakhir diuapkan
tidak meninggalkan sisa
Dipekatkan dengan rotary
evaporator
Ekstrak kental 69,15 g
Diuji aktivitas
penghambatan
degranulasi
Hasil


46

Lampiran 4. Gambar Tumbuhan Mahkota Dewa

47

Lampiran 5. Gambar Hasil Pemeriksaan Makroskopik

Gambar : Daun mahkota dewa

Gambar : Daun kering mahkota dewa

48

Gambar : Serbuk simplisia daun mahkota dewa

49

Lampiran 6. Gambar Mikroskopik dengan Perbesaran 10 x 40


4
1

2
3

Daun mahkota dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl)
Keterangan :
1. Stomata
2. Hablur Kristal Oksalat bentuk prisma
3. Rambut Penutup
4. Silem

50

Lampiran 7. Gambar rotary evaporator

51


Lampiran 8. Gambar hewan

Gambar : Mencit Jantan

Gambar : Mencit setelah dislokasi

52

Lampiran 9. Gambar alat

Gambar : Pipet mikro 5 – 50 µl/ml

Gambar : Kamar hitung improved Neubauer hemocytometer (Marienfeld)

53

Gambar : Mikroskop

54


Lampiran 10. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Perhitungan Penetapan Kadar Air
Kadar air simplisia =

������ ��� (��)

����� ������ (�)

� ��� %

a. Sampel I
Berat sampel

= 5,054 g

Volume air

= 0,4 ml

Kadar air


=

0,4 ��

5,054 �

� 100 %

= 7,915 %
b. Sampel II
Berat sampel

= 5,080 g

Volume air

= 0,35 ml

Kadar air


=

0,35 ��

5,080 �

� 100 %

= 6,890 %
c. Sampel III
Berat sampel

= 5,029 g

Volume air

= 0,3 ml

Kadar air


=

0,3 ��

5,054 �

� 100 %

= 5,965 %
Kadar air rata-rata

=

����� ��� (������ �+������ ��+������ ���)%

=

7,915+6,890+5,965


3

3

55

= 6,923 %

Perhitungan Penetapan Kadar Sari yang Larut Dalam Air
a. Sampel
I larut dalam air = ������ ���� (��) �
Kadar
sari yang
����� ������ (�)

Berat sampel

= 5,074 g

Berat sari

= 0,263 ml

Kadar sari

=

0,263 ��
5,074 �



= 25,92 %

100

� 100 %

100

� 100 %

100

� 100 %

20

���
��

� ��� %

b. Sampel II
Berat sampel

= 5,053 g

Berat sari

= 0,246 ml

Kadar sari

=

0,246 ��
5,053 �



= 24,34 %

20

c. Sampel III
Berat sampel

= 5,021 g

Berat sari

= 0,250 ml

Kadar sari

=

0,250 ��
5,021 �

= 24,89%
Kadar sari yang larut



20

=

kadar sari (sampel I + sampel II + sampel III) %

=

25,92+24,34+24,89

dalam air rata-rata

3

= 25,05 %

56

3

Penetapan Kadar Sari yang Larut Dalam Etanol
Kadar sari yang larut dalam etanol =

������ ���� (��)

����� ������ (�)



���
��

� ��� %

a. Sampel I
Berat sampel

= 5,030 g

Berat sari

= 0,581 ml

Kadar sari

=

0,581 ��
5,030 �



= 57,75 %

100

� 100 %

100

� 100 %

100

� 100 %

20

b. Sampel II
Berat sampel

= 5,071 g

Berat sari

= 0,479 ml

Kadar sari

=

0,479 ��
5,071 �



= 47,23 %

20

c. Sampel III
Berat sampel

= 5,023 g

Berat sari

= 0,596 ml

Kadar sari

=

0,596 ��
5,023 �

= 59,33%
Kadar sari yang larut



20

=

kadar sari (sampel I + sampel II + sampel III) %

=

57,75+47,23+59,33

dalam air rata-rata

3

= 54,77 %

57

3

Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total
Kadar abu total =

����� ��� (�)

����� ������ (�)

� ��� %

a. Sampel I
Berat sampel

= 2,001 g

Berat abu

= 0,194 g

Kadar abu

=

0,194 �

� 100 %

2,001 �

= 9,69%
b. Sampel II
Berat sampel

= 2,005 g

Berat abu

= 0,149 g

Kadar abu

=

0,149 �

� 100 %

2,005 �

= 7,43%
c. Sampel III
Berat sampel

= 2,004 g

Berat abu

= 0,095

Kadar abu

=

0,095 �

� 100 %

2,004 �

= 4,74%
Kadar abu total rata-rata

=

=

kadar sari (sampel I + sampel II + sampel III) %
3

9,69+7,43+4,74
3

= 7,28%

58

Perhitungan Penetapan Kadar Abu yang Tidak Larut Asam

Kadar abu yang tidak larut dalam asam =

����� ��� (�)

����� ������ (�)

� ��� %

a. Sampel I
Berat sampel

= 2,001 g

Berat abu

= 0,004 g

Kadar abu

=

0,004 �

2,001 �

= 0,19%

� 100 %

Sampel II
Berat sampel

= 2,005 g

Berat abu

= 0,010 g

Kadar abu

=

0,010 �

2,005 �

= 0,49%

� 100 %

b. Sampel III
Berat sampel

= 2,004 g

Berat abu

= 0,006 g

Kadar abu

=

0,006 �

2,004 �

= 0,29%
Kadar abu yang tidak larut

� 100 %
=

kadar sari (sampel I + sampel II + sampel III) %

=

0,19+0,49+0,29

dalam asam rata-rata

3

= 0,32%

59

3

Lampiran 11. Perhitungan Uji Ketahanan Sel (Cell Viability Test) digunakan
Rumus Sebagai Berikut :
% �� = � 1 −
% �� = � 1 −

���
� � 100 %
���

27
� � 100 %
287

= 90,59 %
Dimana :
% VC
= Viable Cell (Sel yang hidup atau tidak terdegranulasi)
UVC
= Unviable Cell (Sel yang terdegranulasi berwarna biru)
TCC
= Total Cell (Jumlah seluruh sel yang ada)

60

Lampiran 12. Gambar Sel Mastosit Pada Pengujian

b
a

Uji Ketahanan Sel (Cell Viability Test) dengan metode trypan blue exclusion
Keterangan : (a) = sel mastosit yang tidak terdegranulasi (tidak berwarna)
(b) = sel mastosit yang terdegranulasi (berwarna biru)

Pengujian dengan menggunakan pewarnaan biru toluidin dengan pembesaran
10x 40
Gambar : Sel mastosit yang tidak terdegranulasi

61

62

Lampiran 14. Hasil SPSS Data Normalitas

Descriptives
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova
Statistic
Hewan 1

df

.134

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

8

.200*

.975

8

.931

*

Hewan 2

.192

8

.200

.852

8

.099

Hewan 3

.290

8

.046

.832

8

.062

8

*

.956

8

.767

*

.914

8

.380

Hewan 4
Hewan 5

.152
.202

.200

8

.200

a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.

63

Lampiran 15. Hasil SPSS Data Persen Degranulasi
% Degranulasi
95% Confidence
Interval for Mean

N

Mean

Std.

Std.

Lower

Upper

Deviation

Error

Bound

Bound

Minimum

Maximum

Normal

5

.0000

.00000

.00000

.0000

.0000

.00

.00

Kontrol

5

69.3720

6.83754

3.05784

60.8821

77.8619

58.42

75.00

Uji 100 µg/ml

5

63.1660

6.77403

3.02944

54.7549

71.5771

52.48

71.33

Uji 200 µg/ml

5

57.1960

6.96544

3.11504

48.5473

65.8447

46.53

64.52

Uji 300 µg/ml

5

50.1180

9.54762

4.26982

38.2631

61.9729

34.65

58.78

Uji 400 µg/ml

5

40.9160

12.54986

5.61247

25.3333

56.4987

24.75

55.91

Uji 500 µg/ml

5

29.3400

17.17029

7.67879

8.0203

50.6597

11.79

53.76

Kontrol positif

5

20.9680

12.53380

5.60529

5.4052

36.5308

8.49

34.47

40

41.3845

24.10499

3.81133

33.6754

49.0936

.00

75.00

negatif

Total

ANOVA
% Degranulasi
Sum of Squares
Between Groups
Within Groups
Total

df

Mean Square

19294.056

7

2756.294

3366.911

32

105.216

22660.967

39

64

F
26.197

Sig.
.000

Lampiran 16. Hasil SPSS Data Tukey HSD

Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
% Degranulasi
Tukey HSD
(I) Perlakuan

(J)
Perlakuan

Difference
(I-J)

Normal

95% Confidence Interval

Mean

Upper
Std. Error

Sig.

Lower Bound

Bound

-69.37200*

6.48740

.000

-90.3866

-48.3574

-63.16600*

6.48740

.000

-84.1806

-42.1514

-57.19600*

6.48740

.000

-78.2106

-36.1814

-50.11800*

6.48740

.000

-71.1326

-29.1034

-40.91600*

6.48740

.000

-61.9306

-19.9014

-29.34000*

6.48740

.002

-50.3546

-8.3254

-20.96800

6.48740

.051

-41.9826

.0466

Normal

69.37200*

6.48740

.000

48.3574

90.3866

Uji 100

6.20600

6.48740

.977

-14.8086

27.2206

12.17600

6.48740

.576

-8.8386

33.1906

19.25400

6.48740

.092

-1.7606

40.2686

28.45600*

6.48740

.003

7.4414

49.4706

40.03200*

6.48740

.000

19.0174

61.0466

48.40400*

6.48740

.000

27.3894

69.4186

Normal

63.16600*

6.48740

.000

42.1514

84.1806

Kontrol

-6.20600

6.48740

.977

-27.2206

14.8086

Kontrol
negatif
Uji 100
µg/ml
Uji 200
µg/ml
Uji 300
µg/ml
Uji 400
µg/ml
Uji 500
µg/ml
Kontrol
positif

Kontrol negatif

µg/ml
Uji 200
µg/ml
Uji 300
µg/ml
Uji 400
µg/ml
Uji 500
µg/ml
Kontrol
positif
Uji 100 µg/ml

negatif

65

Uji 200

5.97000

6.48740

.982

-15.0446

26.9846

13.04800

6.48740

.490

-7.9666

34.0626

22.25000*

6.48740

.032

1.2354

43.2646

33.82600*

6.48740

.000

12.8114

54.8406

42.19800*

6.48740

.000

21.1834

63.2126

Normal

57.19600*

6.48740

.000

36.1814

78.2106

Kontrol

-12.17600

6.48740

.576

-33.1906

8.8386

-5.97000

6.48740

.982

-26.9846

15.0446

7.07800

6.48740

.954

-13.9366

28.0926

16.28000

6.48740

.228

-4.7346

37.2946

27.85600*

6.48740

.003

6.8414

48.8706

36.22800*

6.48740

.000

15.2134

57.2426

Normal

50.11800*

6.48740

.000

29.1034

71.1326

Kontrol

-19.25400

6.48740

.092

-40.2686

1.7606

-13.04800

6.48740

.490

-34.0626

7.9666

-7.07800

6.48740

.954

-28.0926

13.9366

9.20200

6.48740

.842

-11.8126

30.2166

20.77800

6.48740

.054

-.2366

41.7926

29.15000*

6.48740

.002

8.1354

50.1646

Normal

40.91600*

6.48740

.000

19.9014

61.9306

Kontrol

*

6.48740

.003

-49.4706

-7.4414

µg/ml
Uji 300
µg/ml
Uji 400
µg/ml
Uji 500
µg/ml
Kontrol
positif
Uji 200 µg/ml

negatif
Uji 100
µg/ml
Uji 300
µg/ml
Uji 400
µg/ml
Uji 500
µg/ml
Kontrol
positif
Uji 300 µg/ml

negatif
Uji 100
µg/ml
Uji 200
µg/ml
Uji 400
µg/ml
Uji 500
µg/ml
Kontrol
positif
Uji 400 µg/ml

-28.45600

negatif

66

-22.25000*

6.48740

.032

-43.2646

-1.2354

-16.28000

6.48740

.228

-37.2946

4.7346

-9.20200

6.48740

.842

-30.2166

11.8126

11.57600

6.48740

.634

-9.4386

32.5906

19.94800

6.48740

.073

-1.0666

40.9626

Normal

29.34000*

6.48740

.002

8.3254

50.3546

Kontrol

*

-40.03200

6.48740

.000

-61.0466

-19.0174

-33.82600*

6.48740

.000

-54.8406

-12.8114

-27.85600*

6.48740

.003

-48.8706

-6.8414

-20.77800

6.48740

.054

-41.7926

.2366

-11.57600

6.48740

.634

-32.5906

9.4386

8.37200

6.48740

.896

-12.6426

29.3866

Normal

20.96800

6.48740

.051

-.0466

41.9826

Kontrol

*

-48.40400

6.48740

.000

-69.4186

-27.3894

-42.19800*

6.48740

.000

-63.2126

-21.1834

-36.22800*

6.48740

.000

-57.2426

-15.2134

-29.15000*

6.48740

.002

-50.1646

-8.1354

-19.94800

6.48740

.073

-40.9626

1.0666

-8.37200

6.48740

.896

-29.3866

12.6426

Uji 100
µg/ml
Uji 200
µg/ml
Uji 300
µg/ml
Uji 500
µg/ml
Kontrol
positif
Uji 500 µg/ml

negatif
Uji 100
µg/ml
Uji 200
µg/ml
Uji 300
µg/ml
Uji 400
µg/ml
Kontrol
positif
Kontrol positif

negatif
Uji 100
µg/ml
Uji 200
µg/ml
Uji 300
µg/ml
Uji 400
µg/ml
Uji 500
µg/ml
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

67

% Degranulasi
a

Tukey HSD
Perlakuan

Subset for alpha = 0.05
N

1

2

3

4

5

Normal

5

.0000

Kontrol positif

5

20.9680

Uji 500 µg/ml

5

29.3400

29.3400

Uji 400 µg/ml

5

40.9160

40.9160

40.9160

Uji 300 µg/ml

5

50.1180

50.1180

50.1180

Uji 200 µg/ml

5

57.1960

57.1960

Uji 100 µg/ml

5

63.1660

Kontrol negatif

5

69.3720

Sig.

20.9680

.051

.073

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

68

.054

.228

.092