Viabilitas Dan Kemampuan Bakteri Penghasil Biosurfaktan Terimobilisasidalam Mendegradasi Pestisida Berbahan Aktifkarbofuran

48
LAMPIRAN

Lampiran 1. Diagram Alir Penelitian
Isolat Bakteri

Karakterisasi
Bakteri

Imobilisasi Bakteri

Imobilisasi Dengan
Alginat

Imobilisasi dengan
Polyurethane

Uji Viabilitas
Bakteri

Uji Kemampuan Bakteri

Terenkapsulasi Dalam
Mendegradasi Pestisida

Pengamatan Penempelan Bakteri pada
Matriks Pembawa dengan Scanning
Electron Microscope (SEM)

Hasil

Universitas Sumatera Utara

49

Lampiran 2. Persiapan Kultur Bakteri dan Pemeriksaan Kemurnian Kultur
Isolat Bakteri

Ditumbuhkan pada media NA (Nutrient Agar)
Diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 28-30oC
Hasil
Diinokulasikan ke dalam media NB (Nutrient Broth)

Diinkubasi 2 x 24 jam pada incubator shaker padadengan
kecepatan 120 rpm pada suhu ambient
Hasil

Karakterisasi

Pewarnaan Gram

Morfologi

•
•
•
•
•
•

Bentuk Koloni
Warna koloni
Tepi Koloni

Elevasi Koloni
Bentuk Sel
Penataan Sel

Hasil

Universitas Sumatera Utara

50
Lampiran 3. Pembuatan Suspensi Sel Bakteri
Isolat Bakteri

Ditumbuhkan pada media NB (Nutrient Broth)
Diinkubasi selama 2 x 24 jam pada incubator shaker, 120 rpm
Disentrifuse dengan kecepatan 6000 x g selama 20 menit,
suhu 4oC

Pellet

Supernatan

Dilarutkan dengan PBS (absorbansi 1 pada panjang
gelombang 600 nm setara 109 CFU/ ml)

Suspensi Sel
(109 CFU/ml)
Lampiran 4. Imobilisasi dengan Menggunakan PolyurethaneFoam(PUF)
Polyurhetane A

Dicampur dengan larutan Polyurhetane B 1 : 1
Dihomogenkan dengan cara mengaduk hingga berbentuk busa
Didiamkan selama 15 menit hingga mengembang dan mengeras
PUF

Dipotong membentuk kubus dengan ukuran 0,5 cm x 05 cm x 0,5 cm
Ditimbang seberat 2 gram
Dimasukkan ke dalam erlemneyer 250 ml
Disterilisasi menggunakan autoclaft
9

Ditambahkan 100 ml suspensi bakteri (10 CFU/ml)

Di guncang pada orbital shaker selama 6 jam
Disaring
PUF + Bakteri

Universitas Sumatera Utara

51

Lampiran 5. Imobilisasi dengan Menggunakan Alginat
SuspensiBakteri
Dicampurkan dengan 50 ml alginat 3% (b/v)dengan
perbandingan 1 : 1
Diteteskan pada CaCl2 0,1 M menggunakan syringe sambil
dilakukan pengadukan dengan kecepatan putaran 150-200
rpm
Disaring dengan menggunakan kertas saring steril
Beads Alginat +
Bakteri

DibilasdenganmenggunakanNaCl 0,85 %
Disaring dengan menggunakan kertas saring steril
Dicuci dengan menggunakan air destilasi streril
Beads Alginat +
Bakteri
Lampiran 6. Uji Viabilitas Bakteri Setelah Imobilisasi

Universitas Sumatera Utara

52

Lampiran 7. Uji AktifitasBiosurfaktanMetodeDrop Collapsing Test (J ain et
al., 1991) yang Dimodifikasi

Universitas Sumatera Utara

53

Lampiran 8. Uji Kemampuan Bakteri Terimobilisasi Dalam Mendegradasi
Pestisida Secara In Vitro

Universitas Sumatera Utara

54
Lampiran 9. Pengamatan Penempelan Bakteri Pada Bahan Penyalut
Foam Polyurethane
+ Bakteri

Beads Alginat
+ Bakteri

dibersihkan dengan cara merendam sampel dalam larutan
caccodylate buffer kurang lebih 2 jam, diagitasi dalam ultrasonic
cleaner selama 5 menit
diprefiksasi dengan merendam dalam larutan glutaraldehyde 2,5%
selama 2 hari
difiksasi dalam tannic acid 2% selama 6 jam. Setalah itu cuci
dengan caccodylate buffer selama 5 menit sebanyak 4 kali ulangan
dalah dehidrasi dengan perendaman pada alkohol 50% selama 5
menit 4 kali pengulangan, 70% selama 20 menit, 80% selama 20

menit
alkohol
95% selama
20 menit
alkohol
dikeringkan
dengan
merendam
dalamdan
tertterakhir
butanol pada
selama
10 menit
sebanyak 2 kali pengulangan
dibekukan dalam freezer sampai beku
divakum dalam vacum drier hingga mengering
dicoating

Diamati dengan Scanning Electron Microscope (SEM)
Hasil

Universitas Sumatera Utara

55

Lampiran 10. Konsentrasi Residu Karbofuran Selama 15 Hari Masa
Inkubasi
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Perlakuan
Kontol (-)
P.aeruginosa
(Kontrol +)

P.aeruginosa Strain
M111 (Kontrol +)
P.aeruginosa
(Alginat)
P.aeruginosa Strain
M111 (Alginat)
P.aeruginosa (PUF)
P.aeruginosa Strain
M111 (PUF)

Hari ke-0
41,86
41,86

Konsentrasi Residu (mg/kg)
Hari ke-5
Hari ke-10 Hari ke-15
39,31
37,46
18,71

1,46
1,14
0,00

41,86

1,67

1,30

0,00

41,86

0,00

0,00

0,00

41,86

0,00

0,00

0,00

41,86
41,86

1,53
1,19

1,53
1,19

1,17
0,00

Universitas Sumatera Utara

56

Lampiran 11 Lembaran Hasil Uji Residu Pestisida

Universitas Sumatera Utara

57

Universitas Sumatera Utara

58

Universitas Sumatera Utara

59

Universitas Sumatera Utara

60

Universitas Sumatera Utara

61

Universitas Sumatera Utara

62

Universitas Sumatera Utara

63

Universitas Sumatera Utara

64

Universitas Sumatera Utara

65

Universitas Sumatera Utara

66

Universitas Sumatera Utara

67

Universitas Sumatera Utara

68

Universitas Sumatera Utara

69

Universitas Sumatera Utara

70

Universitas Sumatera Utara

71

Universitas Sumatera Utara

72

Universitas Sumatera Utara

73

Universitas Sumatera Utara