Pengaruh pemberian madu hutan terhadap imunoglobulin G dan imunoglobulin M pada hewan uji tikus jantan galur wistar - USD Repository

  PE NGARUH PEMB ERIAN MADU H UT AN T ERH ADAP

  IMUNO GL OBULI N G DAN I MUNO GL OBULI N M PADA HEWAN UJI T I KUS JANTAN GAL UR WISTAR SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)

  Prog Studi Farmasi Oleh :

  Ellen Naomi Nauli S inaga NIM : 088114077

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA

  PE NGARUH PEMB ERIAN MADU H UT AN T ERH ADAP

  IMUNO GL OBULI N G DAN I MUNO GL OBULI N M PADA HEWAN UJI T I KUS JANTAN GAL UR WISTAR SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)

  Prog Studi Farmasi Oleh :

  Ellen Naomi Nauli S inaga NIM : 088114077

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA

  

PERSEMBAHAN

Aku bersyukur kepadaMu oleh karena kejadianku

dahsyat dan ajaib, ajaib apa yang Kau buat dan jiwaku

benar-benar menyadarinya (Mazmur 139 : 14)

  

Tetapi karena kasih karunia Allah aku adalah sebagaimana aku

ada sekarang dan kasih karunia yang dianugerahkan-Nya kepadaku tidak sia-sia ( 1 Korintus 15:10a)

  Karya kecil ini kupersembahkan untuk : Tuhan Yesusku, Papah, Mamah, Kak Ellys, Kak Yeyen, Lia, Kak Gendhe, Kak Beng, Malaikat keciku Renata dan Gabriel, dan Mereka yang membuatku tersenyum

  

PRAKATA

  Puji syukur dan terimakasih penulis panjatkan kepada Tuhan Yesus, atas segala berkat dan anugrah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Pengaruh Pemberian Madu Hutan Terhadap Im unogl obuli n G Dan Imunogl obul in M Pada Hewan Uji Tikus Jantan Galur Wi star

  ” untuk memenuhi syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Dalam penulisan skripsi ini, penulis banyak menemui kendala dan hambatan, namun berkat dukungan, bimbingan, kritik dan saran dari berbagai pihak penulis dapat menyelesaikannya. Oleh sebab itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan banyak terima kasih kepada :

  1. Ibu Yunita Linawati M.Sc, Apt selaku Dosen Pembimbing atas kebijaksanaan, perhatian, dan kesabarannya dalam membimbing penyusunan skripsi ini.

  2. Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt selaku Dosen Penguji yang telah memberikan saran yang menjadikan penulisan skripsi menjadi lebih baik.

  3. Dr. Ag. Yuswanto, SU, Apt, PhD selaku Dosen Penguji atas masukan yang menjadikan penulisan skripsi menjadi lebih baik.

  4. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  5. Ibu CM. Ratna Rini Nastiti, M.Pharm., Apt selaku Ketua Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  6. Pimpinan Laboratorium Pengembangan dan Penelitian Terpadu Universitas Gadjah Mada Yogyakarta yang telah mengijinkan untuk melakukan penelitian khususnya kepada Bapak Sutari dan Ibu Istini atas bimbingan dan bantuannya dalam pengerjaan skripsi ini.

  7. Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta yang membantu dalam penyediaan bahan selama penelitian khususnya Ibu Darwani.

  8. Teman-teman seperjuangan penelitian: Perthy Melati Kasih dan Kartika Sari Senas.

  9. Sahabatku tersayang Liani, Devia, Eureka Gracia Letitia; Mezcovits Team : Matraisa Bara Asi, Rudi Frianto, Wina Gracelia, Fellin Nabella, Ade Satrya, Edward Setiade, Stephani Nurina, Michael Andrean; Bojoners : Adityawarman, Primaboti, Christina Putranti, Wiria Sende, Agatha Novita, Ketut Ary Widiasih, Yohanes Hermawan; Teman seperjuangan praktikum : Jepta Willy, Margaretha Ratih, Ledy Yoanita, Arumsih Kristiningtyas, Elisabeth Primadhani, Deni Utik, Reyneldis Adista; dan Jossi Arizon Purba untuk kebersamaan, canda, tawa, suka dan duka.

  10. Teman-teman angkatan 2008 khususnya FKK A ’08.

  11. PMK Apostolos tempatku bertumbuh dalam Kristus dan tempatku menemukan keluarga baru yang sangat luar biasa.

  12. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu, yang telah membantu dalam kelancaran penyelesaian skripsi ini.

  Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari sempurna. Oleh karena itu, segala kritik dan saran yang membangun sangat penulis harapkan demi sempurnanya skripsi ini. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat dan memberi informasi bagi pembaca.

  Penulis

  DAFTAR ISI

  HALAMAN JUDUL ............................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ........................................................... v PRAKATA ............................................................................................................. vi PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................................. viii DAFTAR ISI .......................................................................................................... ix DAFTAR TABEL ................................................................................................. xii DAFTAS GAMBAR ............................................................................................ xiii DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiv

  INTISARI ............................................................................................................... xv

  

ABSTRACT ........................................................................................................... xvi

  BAB I. PENGANTAR A. Latar Belakang .................................................................................................... 1 1. Permasalahan .................................................................................................. 3 2. Keaslian penelitian.......................................................................................... 3 3. Manfaat penelitian .......................................................................................... 3 a. Manfaat teoritis ......................................................................................... 3 b. Manfaat praktis ......................................................................................... 3 B. Tujuan Penelitian ................................................................................................. 3 1. Tujuan umum ................................................................................................ 3 2. Tujuan khusus ................................................................................................ 4 BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA A. Madu .................................................................................................................... 5 1. Jenis madu .................................................................................................... 5 2. Komposisi madu .......................................................................................... 6

  B.

  Sistem Imun ......................................................................................................... 9 1.

  Respon imun nonspesifik .............................................................................. 9 2. Respon imun spesifik .................................................................................. 10 C. Imunoglobulin .................................................................................................. 11 1.

  Jenis imunoglobulin ................................................................................... 12 2. Pembentukan antibodi ................................................................................ 15 D. Imunomodulator ................................................................................................ 17 E. Enzyme Linked Immunosorbant Assay .............................................................. 18 F. Landasan Teori .................................................................................................. 19 G.

  Hipotesis ............................................................................................................ 20

  BAB III. METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian ........................................................................ 21 B. Variabel dan Definisi Operasional .................................................................... 22

  1. Variabel penelitian ........................................................................................ 22

  2. Definisi operasional ....................................................................................... 22 C. Bahan Penelitian ................................................................................................ 23 D.

  Alat Penelitian ................................................................................................... 24 E. Tata Cara Penelitian .......................................................................................... 24 1.

  Tahap penentuan dosis madu hutan ............................................................. 24 2. Tahap orientasi dosis madu hutan ............................................................... 25 3. Tahap percobaan .......................................................................................... 26 4. Penetapan imunoglobulin G dan imunoglobulin M .................................... 27 F. Analisis Hasil .................................................................................................... 28

  BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Pengukuran Imunoglobulin G dan Imunoglobulin M ...................................... 29 B. Tahap Orientasi Dosis ....................................................................................... 33 1. Pengaruh pemberian madu hutan terhadap imunoglobulin M pada tahap orientasi dosis ............................................................................ 33

  2. Pengaruh pemberian madu hutan terhadap imunoglobulin G pada tahap orientasi dosis ............................................................................ 33

  C.

  Pengaruh Pemberian Madu Hutan Dosis 0,27 mL/200 g BB; 0,54 mL/200 g BB; 1,08 mL/200 g BB terhadap Imunoglobulin M dan Imunoglobulin G ..... 38 1.

  Pengaruh pemberian madu hutan terhadap imunoglobulin M ...................... 38 2. Pengaruh pemberian madu hutan terhadap imunoglobulin G ...................... 40

  BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan ........................................................................................................ 43 B. Saran .................................................................................................................. 43 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 44 LAMPIRAN ........................................................................................................... 47 BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................... 67

  DAFTAR TABEL

  Tabel I. Rata-rata OD ± SD Hasil Pengukuran Imunoglobulin M pada Tahap Orientasi Dosis setelah Pemberian Madu Hutan ................. 33

  Tabel II. Rata-rata OD ± SD Hasil Pengukuran Imunoglobulin G pada Tahap Orientasi Dosis setelah Pemberian Madu Hutan ................. 35

  Tabel III. Rata-rata OD ± SD Hasil Pengukuran Imunoglobulin M setelah Pemberian Madu Hutan ...................................................... 38 Tabel IV. Rata-rata OD ± SD Hasil Pengukuran Imunoglobulin G setelah Pemberian Madu Hutan ...................................................... 40

  DAFTAR GAMBAR

  Gambar 1. Struktur Prototip Ig G : Struktur Rantai dan Ikatan Disulfide........ 13 Gambar 2. Pentamer Imunoglobulin M ............................................................ 14 Gambar 3. Kurva Produksi Antibodi Respon Imun Primer dan Sekunder ...... 16 Gambar 4. Indirect ELISA ................................................................................ 18 Gambar 5. Grafik Rata-rata OD ± SD Hasil Pengukuran Imunoglobulin M pada Tahap Orientasi Dosis setelah Pemberian Madu Hutan ........ 34 Gambar 6. Grafik Rata-rata OD ± SD Hasil Pengukuran Imunoglobulin G pada Tahap Orientasi Dosis setelah Pemberian Madu Hutan ........ 35 Gambar 7. Grafik Rata-rata OD ± SD Hasil Pengukuran Imunoglobulin M setelah Pemberian Madu Hutan ...................................................... 38 Gambar 8. Grafik Rata-rata OD ± SD Hasil Pengukuran Imunoglobulin G setelah Pemberian Madu Hutan ...................................................... 40

  DAFTAR LAMPIRAN

  Lampiran 1. Surat Kelaikan Etik ......................................................................... 48 Lampiran 2. Surat Keterangan Penelitian .......................................................... 49 Lampiran 3. Foto Perbandingan Madu Hutan dan Madu Monoflora.................. 50 Lampiran 4. Komposisi ELISA........................................................................... 51 Lampiran 5. Perhitungan Dosis Madu Tahap Orientasi Dosis ............................ 52 Lampiran 6. Titer Imunoglobulin G Hasil Orientasi Dosis ................................. 53 Lampiran 7. Titer Imunoglobulin M Hasil Orientasi Dosis ................................ 54 Lampiran 8. Pengujian Statistik Imunoglobulin G Hasil Orientasi Dosis .......... 55 Lampiran 9. Pengujian Statistik Imunoglobulin M Hasil Orientasi Dosis.......... 57 Lampiran 10. Perhitungan Dosis Madu Tahap Percobaan .................................... 59 Lampiran 11. Penimbangan Berat Badan Tikus ................................................... 60 Lampiran 12. Titer Imunoglobulin G Tahap Percobaan ....................................... 61 Lampiran 13. Titer Imunoglobulin M Tahap Percobaan ...................................... 62 Lampiran 14. Pengujian Statistik Imunoglobulin G Hasil Percobaan .................. 63 Lampiran 15. Pengujian Statistik Imunoglobuilin M Hasil Percobaan ................ 65

  

INTISARI

  Madu hutan mengandung beberapa senyawa organik, salah satunya flavonoid yang dapat meningkatkan sistem kekebalan tubuh. Flavonoid diketahui memiliki aktivitas sebagai antioksidan dan antibakteri serta berpotensi sebagai imunomodulator. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh pemberian madu hutan terhadap imunoglobulin G dan imunoglobulin M pada hewan uji tikus jantan galur Wistar.

  Jenis penelitian ini adalah eksperimental murni dengan rancangan acak pola searah. Sebanyak 20 ekor tikus dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu kelompok perlakuan diberikan madu hutan dengan dosis 0,27 ml/200 g BB tikus; 0,54 mL/200 g BB tikus; dan 1,08 ml/200 g BB tikus; serta kelompok kontrol negatif diberikan aquadest 2,5 mL/200 g BB tikus. Pada hari ke-1 dan ke-14 tikus diinduksi peritoneal dengan Staphylococcus epidermidis. Serum diambil pada hari ke-7 untuk pengukuran imunoglobulin M dan pada hari ke- 18 untuk pengukuran imunoglobulin G melalui sinus orbitalis dengan menggunakan metode ELISA tak langsung. Data dianalisis dengan uji one way ANOVA dilanjutkan dengan uji Tukey.

  Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian madu hutan tidak berpengaruh terhadap imunoglobulin G dan imunoglobulin M.

  Kata kunci: Madu hutan, imunomodulator, imunoglobulin G, imunoglobulin

  M

  

ABSTRACT

  Honey forest contains some organic compounds, like flavonoids that can increase the immune system. Flavonoids potentially has antioxidant, antibacterial and immunomodulator. The aim of this research was to evaluate the effect of honey forest to immunoglobulin G and immunoglobulin M on animals test of male rats Wistar strain.

  This research is experimental with one way complete randomized design. Total of 20 rats was divided into 4 groups. Each group was given honey forest with dose of 0,27 ml/200 g BW ; 0,54 mL/200 g BW ; 1,08 ml/200 g BW, and negative control group given aquadest 2,5 mL/200 g BW. On the day 1 and 14, rats were induced peritoneal by Staphylococcus epidermidis. The serum were taken from sinus orbitalis on the day 7 and 18. The immunoglobulin G and immunoglobulin M were measured by indirect ELISA method. Data were analyzed by one way ANOVA test followed by Tukey test.

  The result shows that there is no effect of honey forest to immunoglobulin G and immunoglobulin M

  Key words: Forest honey, immunomodulator, immunoglobulin

  G, immunoglobulin M

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Madu merupakan cairan yang berasal dari nektar tanaman yang diproses

  oleh lebah menjadi madu dan tersimpan dalam sel-sel sarang lebah. Di Indonesia terdapat beberapa jenis madu berdasarkan jenis flora yang menjadi sumber nektarnya, yaitu madu monoflora dan madu poliflora (Suranto, 2007). Madu monoflora merupakan madu yang diperoleh dari satu tumbuhan utama dan mempunyai wangi, warna, dan rasa yang spesifik sesuai dengan sumbernya. Madu poliflora atau yang biasa disebut madu hutan merupakan madu yang berasal dari nektar beberapa jenis tumbuhan bunga, diproduksi oleh lebah-lebah liar dan dianggap memiliki manfaat yang lebih baik dibandingkan madu monoflora.

  Madu telah digunakan sejak zaman kuno sebagai bagian dari obat tradisional. Penggunaan madu dalam beberapa aspek pengobatan mengindikasikan bahwa madu memiliki fungsi sebagai antibakteri, antitumor, antiinflamasi, antivirus, dan antioksidan (Rahadiyani, 2011). Madu mengandung beberapa senyawa organik, yang telah terindentifikasi antara lain seperti polifenol,

  flavonoid, dan glikosida (

  Rostinawati, 2009). Adanya kandungan flavonoid yang terkandung di dalam madu hutan, dapat diperkirakan madu berpotensi sebagai imunomodulator. Imunomodulator merupakan golongan obat yang mampu mempengaruhi sistem imun atau sistem kekebalan tubuh (Sari, 2008). Menurut Krell (cit., Jaya, dkk, 2008) kandungan flavonoid dapat meningkatkan sistem kekebalan tubuh baik seluler maupun humoral, salah satunya imunoglobulin. Imunoglobulin menyediakan perlindungan yang sangat kuat untuk perawatan dan pencegahan infeksi yang disebabkan oleh virus dan bakteri dan juga terhadap jamur (Yaniesa, 2011). Imunoglobulin terdiri dari imunoglobulin M (Ig M), imunoglobulin G (Ig G), imunoglobulin A (Ig A), imunoglobulin E (Ig E), dan imunoglobulin D (Ig D) (Baratawidjaja, 2010). Jika terpapar suatu antigen asing untuk pertama kali, maka tubuh akan meningkatkan respon imun. Dalam respon ini, kelas pertama immunoglobulin yang dihasilkan adalah IgM diikuti oleh IgG (dengan penurunan serentak dalam sintesis IgM) (Kresno, 2010). Imunoglobulin M merupakan antibodi yang paling awal muncul setelah terjadi perangsangan antigen untuk mengikat komplemen (Louise, 2011). Imunoglubulin G merupakan imunoglobulin utama pada serum manusia yang meliputi 75 % dari seluruh imunoglubulin yang dibentuk atas rangsangan antigen dan dapat menembus plasenta dan masuk ke dalam peredaran darah janin sehingga pada bayi yang baru lahir imunoglobulin G yang berasal dari ibu yang akan melindungi bayi dari infeksi. Imunoglobulin G melapisi mikroorganisme sehingga partikel akan lebih mudah difagositosis dan membantu dalam menetralisasi toksin dan virus (Kresno, 2010).

  Melalui penelitian ini peneliti ingin mengetahui pengaruh dari pemberian madu hutan terhadap immunoglobulin G dan immunoglobulin M sehingga dapat diperoleh informasi mengenai penggunaan madu hutan sebagai imunomodulator untuk meningkatkan kesehatan.

  1. Permasalahan

  Apakah pemberian madu hutan berpengaruh terhadap imunoglobulin G dan imunoglobulin M pada hewan uji tikus jantan galur Wistar?

  2. Keaslian penelitian

  Sejauh yang diketahui penulis, penelitian mengenai pengaruh pemberian madu hutan terhadap imunoglobulin G dan imunoglobulin M pada hewan uji tikus jantan galur Wistar belum pernah dilakukan.

  3. Manfaat penelitian

a. Manfaat teoritis 1.

  Memberikan sumbangan ilmiah bagi ilmu pengetahuan mengenai manfaat madu hutan sebagai imunomodulator.

2. Menambah informasi dalam bidang ilmu kefarmasian tentang efektivitas madu hutan untuk kesehatan.

b. Manfaat praktis

  Memberikan informasi dan menambah wawasan bagi masyarakat mengenai manfaat madu hutan sebagai imunomodulator dalam meningkatkan kesehatan.

B. Tujuan Penelitian

1. Tujuan umum

  Memperoleh informasi mengenai pengaruh pemberian madu hutan pada hewan uji tikus jantan galur Wistar sebagai imunomodulator.

2. Tujuan khusus

  Memperoleh informasi mengenai pengaruh pemberian madu hutan terhadap immunoglobulin G dan immunoglobulin M pada hewan uji tikus jantan galur Wistar.

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Madu Madu adalah cairan yang berasal dari nektar tanaman yang diproses oleh

  lebah pekerja menjadi madu dan tersimpan dalam sel-sel sarang lebah. Berbagai kelebihan madu sebagai makanan bernutrisi tinggi sudah diketahui sejak zaman dahulu (Haryati, 2010).

1. Jenis madu

  Berdasarkan asal cairan yang diambil oleh lebah, madu dibedakan atas tiga jenis yaitu madu nektar, honey dew dan madu buatan. Madu nektar berasal dari cairan nektar baik dari satu macam bunga (monoflora), beberapa macam bunga (polyflora) ataupun dari bagian tanaman selain bunga (extraflora). Honey

  

dew berasal dari cairan manis yang dikeluarkan oleh insekta pengisap tanaman

  yang dikumpulkan dan disimpan oleh lebah di dalam sarangnya, sedangkan madu buatan adalah madu yang berasal dari cairan gula yang dikumpulkan dan disimpan (Suranto, 2004).

  Berdasarkan warnanya, madu dapat dibedakan menjadi beberapa jenis, yaitu jernih (water white), amber, hitam (dark amber), putih (white) (National Honey Board, 2001). Madu amber telah diketahui mempunyai aktivitas bakteriostatik dan bakterisida, baik terhadap bakteri Gram positif maupun Gram negatif (Mulu, Tessema, Derby, 2004). Madu hitam mempunyai rasa pahit dan lainnya (Ismail, 2007) dan madu putih mempunyai rasa yang sangat manis, aroma yang khas, dan after taste yang kuat (Sukartiko, 1986).

  Di Indonesia terdapat beberapa jenis madu berdasarkan jenis flora yang menjadi sumber nektarnya. Madu monoflora merupakan madu yang diperoleh dari satu tumbuhan utama. Madu ini biasanya dinamakan berdasarkan sumber nektarnya, seperti madu kelengkeng, madu rambutan, dan madu randu. Madu monoflora mempunyai wangi, warna, dan rasa yang spesifik sesuai dengan sumbernya, sedangkan jenis yang lain yaitu madu poliflora yang merupakan madu yang berasal dari nektar beberapa jenis tumbuhan bunga. Madu ini biasanya berasal dari hutan yang diproduksi oleh lebah-lebah liar yang bernama Apis

  

dorsata . Madu hutan juga sangat baik untuk kesehatan karena mengandung

  antibiotik alami yang diproduksi oleh lebah-lebah liar. Kualitas madu hutan dianggap lebih baik daripada madu hasil lebah ternak sebab bunga yang dikonsumsi lebah-lebah tersebut tidak mengandung pestisida yang kemungkinan besar ditemukan pada tanaman atau pohon yang sengaja ditanam untuk perternakan lebah (Suranto, 2007).

2. Komposisi madu

  Madu yang baik harus dapat memenuhi ketentuan yang ditetapkan oleh Standar Industri Indonesia (SII) tahun 1977 dan 1985. Kadar yang sesuai dengan standar SII hanya mungkin terdapat pada madu murni, yaitu madu yang belum diberi campuran dengan bahan-bahan lain (Suranto, 2007). Komposisi kimia madu bervariasi tergantung pada sumber tanaman, musim dan metode produksi adalah dua gula utama yang terdapat pada madu secara umum, dengan jumlah sukrosa yang kurang (sekitar 1%), serta disakarida dan oligosakarida yang lain. Di dalam madu juga terdapat kandungan mineral dan garam atau zat lain seperti potassium, zat besi, sulfur, magnesium, kalsium, kalium, khlor dan natrium dan fosfor. Potassium merupakan mineral utama pada madu. Madu mengandung vitamin A, B1, B2, B3, B5, B6, C, D, E, K, beta karoten, flavonoid, asam fenolik, asam urat, asam nikotinat, asam glukonat, antibiotika, enzim pencernaan serta asam amino. Madu memiliki keasaman yang rendah dengan pH sekitar 3,9.

  Kandungan air madu sekitar 17%, dengan aktivitas air antara 0,56-0,62. Selain itu, madu mengandung asam glukonat dan jumlah protein yang kecil serta asam amino (Haryati, 2010).

3. Manfaat Madu

  Madu telah lama digunakan sebagai obat tradisional untuk mengobati penyakit infeksi seperti infeksi pada saluran pernafasan, gastrointestinal, dan luka-luka pada kulit (Mulu et al., 2004). Madu merupakan salah satu sumber makanan yang baik yang dapat meningkatkan stamina tubuh. Selain itu, madu juga dapat digunakan sebagai pengganti gula atau suplementasi nutrisi. Produk lebah ini dapat menyembuhkan berbagai macam penyakit seperti jantung, paru- paru, lambung, sistem pencernaan, influenza, katarak, luka infeksi, dan masih banyak lagi khasiat dari madu. Madu juga banyak digunakan dalam dunia kosmetika, baik dalam bentuk sabun, masker, dan krim pelembut. Madu dapat menjaga kelembaban kulit dan memberi nutrisi yang dibutuhkan.

  Madu mengandung zat antibiotik yang berguna melawan bakteri patogen penyebab penyakit infeksi (Hariyati, 2010). Menurut Winarno (cit., Hariyati, 2010), gula dan mineral dalam madu berfungsi sebagai tonikum bagi jantung. Antioksidan madu diyakini mampu mencegah terjadinya kanker, penyakit jantung, dan penyakit lainnya. Selain itu madu juga dapat membunuh dan mencegah kuman untuk berkembang sehingga madu dipercaya dapat menyembuhkan berbagai macam luka seperti luka bakar, luka infeksi, luka setelah operasi dan lain-lain.

  Madu mengandung flavonoid dan menurut Krell (cit., Jaya, dkk, 2008) kandungan flavonoid dapat meningkatkan sistem kekebalan tubuh baik seluler maupun humoral. Flavonoid merupakan golongan senyawa tanaman yang memiliki aktivitas bilologi yang cukup luas salah satunya adalah sebagai imunostimulator. Aktivitas flavonoid sebagai imunostimulator sangat erat kaitannya dengan aktivitas sebagai antimikroba, antiviral, antioksidan, antiploriferatif, sitotoksik dan antiinflamasi. Mekanisme imunostimulator flavonoid sangat beragam. Middleton dan Kandaswami (cit., Arsani, 2010) melaporkan bahwa flavonoid dapat berefek pada sel T, B, makrofag, NK, basofil, mast, neutrofil, eosinofil, dan platelet. Selain itu beberapa flavonoid berefek pada sistem enzim yg berperan dalam respon imun seperti tirosin kinase, treonin kinase, fosfolipase A2, fosfolipase C, lipooksigenase, dan lain-lain. Enzim tersebut berperan dalam sinyal transduksi dan aktivasi sel sistem imun. Flavonoid dalam tubuh manusia berfungsi sebagai antioksidan untuk mencegah kanker, dengan mengganggu fungsi dari mikroorganisme dari bakteri atau virus. Efek lainnya adalah mencegah alergi karena flavonoid mampu mencegah lepasnya zat utama peyebab alergi, yaitu histamin dan serotonin (Suranto, 2007).

  Konsumsi madu untuk pencegahan penyakit pada manusia adalah 1-2 kali/hari 1 sendok makan, sedangkan untuk menyembuhkan suatu penyakit, dianjurkan untuk minum lebih banyak, yaitu 3-4 kali/hari 1 sendok makan (Suranto, 2007).

B. Sistem Imun

  Sistem imun memiliki fungsi utama melindungi tubuh dari mikroba patogen yang terpapar ke tubuh. Fungsi tersebut melalui dua tingkatan dari respon imun yaitu munculnya respon imun spesifik melawan paparan mikroba patogen dan kontrol infeksi kemudian membentuk memori dari paparan pertama dan respon imun yang cepat pada paparan patogen yang sama (Ahmed, Lanier, Pamer

  

, 2002). Pertahanan tubuh terhadap mikroba patogen diperantarai oleh reaksi awal

  yang disebut respon imun nonspesifik dan respon imun spesifik sebagai respon selanjutnya (Abbas, et al, 2000)

1. Respon imun non-spesifik (Innate immunity)

  Respon imun non-spesifik atau imunitas alami terdiri dari mekanisme yang sudah ada dalam tubuh sebelum terjadinya infeksi yang mampu memberikan respon secara cepat terhadap mikroba dan merupakan reaksi utama melalui cara atau mekanisme yang sama untuk infeksi berulang. Komponen dasar dari respon lapisan epithelial dan substansi antimikroba yang diproduksi pada permukaan epithelial; sel fagosit seperti neutrofil dan makrofag dan sel natural killer (NK); protein darah termasuk sistem komplemen dan mediator inflamasi; protein yang disebut sitokin yang meregulasi dan mengkordinasi banyak dari aktivitas sel

  innate immunity (Abbas et al., 2000) 2.

  Respon imun spesifik (Adaptive immunity) Respon imun spesifik adalah imunitas tubuh yang diperoleh dengan cara beradaptasi atau belajar mengenali secara spesifik berbagai jenis patogen dan mempertahankan memori terhadap patogen tersebut untuk memberikan respon yang cepat terhadap infeksi dimasa mendatang. Adaptasi tersebut terjadi selama respon primer dari sistem imun terhadap berbagai jenis patogen. Respon primer biasanya lambat dan terjadi beberapa hari setelah infeksi awal. Setelah respon membersihkan infeksi, sistem imun akan mempertahankan memori dari berbagai jenis patogen yang menyebabkan infeksi. Apabila tubuh terinfeksi patogen dari jenis yang sama, tubuh tidak harus beradaptasi kembali terhadap patogen tersebut, karena sudah ada memori terhadap patogen tersebut dan terjadi respon yang lebih cepat yaitu respon sekunder yang biasanya terjadi dengan cepat. Memori tersebut memberikan proteksi seumur hidup terhadap patogen tersebut (Hofmeyr, 2000).

  Respon imun spesifik mencakup rangkaian interaksi seluler yang diekspresikan dengan penyebaran produk-produk spesifik (Kresno, 2010).

  Ada dua tipe respon imun spesifik yaitu imunitas humoral dan seluler yang diperantarai oleh komponen yang berbeda dari sistem imun dan berfungsi oleh molekul dalam darah yang disebut antibodi yang diproduksi oleh sel limfosit B dan imunitas seluler yang dimediasi oleh limfosit T (Abbas et al., 2000).

  Respon imun adaptive (spesifik) dibagi ke dalam 3 fase yaitu pengenalan antigen, aktivasi limfosit, dan fase efektor (Abbas et al., 2000).

  Respon imun spesifik dapat bersifat pasif atau aktif. Imunitas pasif adalah imunitas yang dihasilkan dari pemberian antibodi atau produk dari sistem imun lain misalnya limfosit aktif yang telah dibentuk sebelumnya pada tubuh individu yang lain. Imunitas aktif adalah imunitas yang diinduksi oleh terpaparnya antigen ke dalam tubuh individu sehingga individu tersebut akan membentuk antibodi atau produk sistem imun lain untuk menetralkan antigen tersebut.

  Paparan antigen dapat berasal dari infeksi klinik, imunisasi dengan agen infeksi, misalnya vaksin dan transplatasi sel asing (Nairn, 2005).

C. Imunoglobulin

  Imunoglobulin atau antibodi adalah suatu glikoprotein yang diproduksi oleh sel B sebagai respon terhadap terpaparnya tubuh oleh molekul asing (imunogen). Antibodi berikatan secara spesifik dengan antigen. Antibodi didistribusikan ke semua cairan biologis tubuh dan ditemukan pada permukaan sejumlah kecil dari beberapa jenis sel. Semua jenis antibodi ditandai dengan karakteristik struktur dasar yang sama, yaitu memiliki struktur inti yang terdiri dari dua rantai ringan (berat kira-kira 24 kD) dan dua rantai ringan (berat kira-kira 55-70 kD) (Abbas et al., 2000).

  Imunoglobulin atau antibodi adalah sekelompok glikoprotein yang terdapat dalam serum atau cairan tubuh pada hampir semua mamalia.

  Imunoglobulin termasuk dalam glikoprotein yang mempunyai struktur dasar sama, terdiri dari 82-96% polipeptida dan 4-18% karbohidrat (Akib, 2008).

  Imunoglobulin dibentuk oleh sel plasma yang berasal dari proliferasi sel B yang terjadi setelah kontak dengan antigen (Baratawidjaja, 2010). Molekul ini disintesis oleh sel B dalam dua bentuk yang berbeda, yaitu sebagai reseptor permukaan dan sebagai antibodi yang disekresikan ke dalam cairan ekstraseluler (Kresno, 2010).

1. Jenis imunoglobulin

  Pada manusia dikenal lima kelas imunoglobulin. Tiap kelas mempunyai perbedaan sifat fisik, tetapi pada semua kelas terdapat tempat ikatan antigen spesifik dan aktivitas biologi berlainan (Akib, 2008). Ada dua jenis rantai ringan (kappa dan lambda) yang terdiri atas 230 asam amino serta lima jenis rantai berat yang tergantung pada kelima jenis immunoglobulin, yaitu IgM, IgG, IgE, IgA, dan IgD. Rantai berat terdiri atas 450-600 asam amino, sehingga berat dan panjang rantai berat tersebut adalah dua kali rantai ringan. Molekul imunoglobulin mempunyai rumus bangun yang heterogen, meskipun hanya terdiri atas empat unit polipeptida dasar (Baratawidjaja, 2010). a) Imunoglobulin G

  

Gambar 1. Struktur Prototip Ig G: Struktur Rantai dan Ikatan Disulfide (Baratawidjaja,

2010)

  Imunoglobulin G adalah imunoglobulin yang paling banyak dalam tubuh, berada di intravaskuler dan ekstravaskular dan memiliki waktu paro relatif lama (23 hari) (Bellanti, 1993). Dalam serum orang dewasa normal, imunoglobulin G merupakan 75% dari total imunoglobulin dan dijumpai dalam bentuk monomer.

  Imunoglobulin G merupakan imunoglobulin utama yang dibentuk atas rangsangan antigen, menembus plasenta dan masuk ke dalam peredaran darah janin, sehingga pada bayi yang baru lahir imunoglobulin G yang berasal dari ibu akan melindungi bayi dari infeksi. Dari semua kelas imunoglobulin, imunoglobulin G paling mudah berdifusi ke dalam jaringan ekstravaskuler dan melakukan aktivitas antibodi di jaringan. Imunoglobulin G melapisi mikroorganisme, sehingga partikel akan lebih mudah difagositosis dan membantu dalam menetralisasi toksin dan virus (Kresno, 2010). b) Imunoglobulin M

  Gambar 2. Pentamer Imunoglobulin M (Louise, 2011)

  Imunoglobulin M merupakan sebuah pentamer sehingga imunoglobulin M merupakan imunoglobulin berukuran paling besar. Imunoglobulin M terdapat di intravaskuler dan merupakan 10% dari imunoglobulin total dalam serum (Kresno, 2010). Imunoglobulin M merupakan antibodi yang paling awal muncul setelah terjadi perangsangan antigen untuk mengikat komplemen (Louise, 2011).

  Apabila antigen masuk ke dalam tubuh, sintesis imunoglobulin M mendahului imunoglobulin G hingga mencapai puncaknya kemudian menurun lebih cepat dari kadar imunoglobulin G (Bellanti, 1993).

  c) Imunoglobulin A

  Imunoglobulin A terdapat dalam tiga bentuk yaitu suatu monomer, suatu dimer (didalamnya suatu rantai J mengikat dua monomer), dan suatu dimer dengan satu potongan sekretorik. Imunoglobulin A ditemukan dalam konsentrasi tinggi di dalam sekresi dan di dalam serum imunoglobulin A muncul dalam bentuk dimer dengan waktu paruh 5 hari. Imunoglobulin A menempati dan melindungi jaringan selaput lendir, air ludah, air mata, dan kolostrum dengan menghalangi bakteri, virus, dan toksin agar tidak melekat pada sel-sel inang (Louise, 2011).

  d) Imunoglobulin D

  Imunoglobulin D merupakan 1% dari total imunoglobulin dan merupakan komponen permukaan sel B dan pertanda dari diferensiasi sel B yang lebih matang. Dalam serum, imunoglobulin D ditemukan dengan kadar yang sangat rendah karena imunoglobulin D tidak dilepas sel plasma dan sangat rentan terhadap degradasi oleh proses proteolitik. Imunoglobulin D diduga dapat mencegah terjadinya toleransi imun akan tetapi mekanismenya belum jelas (Baratawidjaja, 2010).

  e) Imunoglobulin E

  Imunoglobulin E dibentuk oleh sel plasma dalam selaput lendir saluran napas dan cerna. Pada alergi, kadar imunoglobulin E yang tinggi ditemukan pada infeksi cacing, skistosomiasis, penyakit hidatid, trikinosis, dam diduga berperan dalam imunitas parasit (Baratawidjaja, 2010).

2. Pembentukan antibodi

  Tahap awal pembentukan antibodi adalah fagositosis antigen oleh sel fagosit terutama makrofag yang akan menjadi antigen presenting cell (APC) dan akan menyajikan antigen tersebut kepada sel T helper. Sel T helper yang teraktivasi akan menstimulasi sel B. Sel B membawa imunoglobulin permukaan yang spesifik terhadap antigen dan dirangsang untuk berploriferasi dan berdiferensiasi sel plasma yang membentuk protein antibodi spesifik atau

  2005). Respon pembentukan antibodi dibedakan menjadi dua yaitu respon primer dan respon sekunder.

  

Gambar 3. Kurva Produksi Antibodi Respon Imun Primer dan Sekunder (Sheehan, 1997)

1.

  Respon primer Bila antigen terpapar pada tubuh pertama kali akan menimbulkan respon imun primer. Pada respon imun primer sel B immature distimulasi oleh antigen untuk berproliferasi dan berdiferensiasi menjadi antibody-secreting cells yang akan memproduksi antibodi spesifik terhadap antigen tersebut dan juga menjadi sel B memori yang hidup dalam jangka waktu yang lama. Respon imun primer timbul setelah 5-10 hari setelah terpapar antigen, ditandai dengan munculnya imunoglobulin M sehingga produksi imunoglobulin M lebih besar dari Ig G dan dapat diinduksi oleh semua imunogen (Kresno, 2010).

  Ketika individu terpapar imunogen untuk pertama kali terjadilah respon imun primer yang ditandai dengan munculnya imunoglobulin M beberapa hari setelah pemaparan. Saat antara pemaparan imunogen dan munculnya puncaknya setelah kira-kira 7 hari. Selama 6-7 hari setelah pemaparan, imunoglobulin G mulai dapat dideteksi dalam serum, sedangkan imunoglobulin M mulai berkurang sebelum kadar imunoglobulin G mencapai puncaknya, yaitu 10- 14 hari setelah pemaparan imunogen (Kresno, 2010).

2. Respon sekunder

  Bila terjadi pemaparan kedua dari imunogen yang sama, akan timbul respon imun sekunder. Pada respon imun sekunder, sel B memori di stimulasi oleh imunogen yang sama dan akan menyebabkan sel B berploriferasi dan berdiferensiasi dengan cepat dan memproduksi antibodi spesifik yang lebih banyak jumlahnya dari pada respon imun primer. Respon imun sekunder timbul 1- 3 hari setelah paparan imunogen, ditandai dengan meningkatnya produksi imunoglobulin G sehingga imunoglobulin G lebih banyak dari imunoglobulin M dan hanya dapat diinduksi oleh imunogen yang sama (Abbas et al., 2000).

D. Imunomodulator

  Imunomodulator merupakan senyawa yang mampu mempengaruhi sistem imun atau sistem kekebalan tubuh. Berdasarkan efek yang ditimbulkannya, imunomodulator terbagi menjadi imunostimulan dan imunosupresan (Sari, 2008).

  Imunostimulan adalah bahan yang dapat meningkatkan sistem imun dengan cara menginduksi atau meningkatkan aktivitas dari komponen- komponennya. Imunostimulan dikategorikan dalam dua bagian yaitu imunostimulan spesifik dan imunostimulan tak spesifik. Imunostimulan spesifik imun, seperti vaksin dan beberapa antigen, sedangkan imunostimulan non spesifik adalah zat yang beraksi tidak hanya pada satu antigenik spesifik untuk menambah respon imun dari antigen lain atau dapat meningkatkan komponen dari sistem imun tanpa sifat antigenik spesifik, seperti adjuvan (Sari, 2008).

  Imunosupresan merupakan senyawa (obat atau nutrisi) yang bekerja dengan menekan respon imun. Obat imunosupresi digunakan pada pasien yang akan menjalani transplantasi dan penyakit autoimun karena kemampuannya dalam menekan respon imun (Baratawidjaja, 2010).

E. Enzyme Linked Immunosorbant Assay

  ELISA adalah suatu teknik deteksi dengan metode serologis yang berdasarkan atas reaksi spesifik antara antigen dan antibodi, mempunyai sensitivitas dan spesifisitas yang tinggi dengan menggunakan enzim sebagai indikator.

  

Gambar 4. Indirect ELISA (Amrita University, 2012) Beberapa metode telah dikembangkan dalam ELISA. Pemilihan metode tergantung sifat sampel, kemampuan reagen, presisi, akurasi ( Kresno, 2010).

  Salah satu metode ELISA adalah ELISA tak langsung (indirect ELISA). Prinsip dasar dari ELISA tak langsung adalah bahwa suatu antibodi dapat mengenali suatu epitop dari antigen tertentu secara spesifik, yang kemudian divisualisasikan dengan cara penambahan konjugat (antibodi kedua yang dikonjugasikan dengan enzim misalnya alkalin fosfatase). Selanjutnya ditambah substrat tertentu yang sesuai sehingga akan terbentuk warna yang dapat diukur menggunakan metode kolorimetri. Pengukuran serapan warna yang terbentuk pada ELISA dapat dilakukan pada ELISA reader pada panjang gelombang tertentu tergantung enzim dan substrat kromogenik yang digunakan (Amri, 2008). Kelebihan teknik ELISA adalah cukup sensitif, reagen mempunyai waktu paruh yang panjang, dapat menggunakan spektrofotometer dan yang paling penting tidak mengandung bahaya radioaktif (Kresno, 2010).

F. Landasan Teori

  Madu hutan merupakan salah satu jenis madu yang berasal dari beberapa jenis nektar tumbuhan dan diproduksi oleh lebah liar bernama Apis dorsata. Madu hutan dianggap memiliki kualitas yang lebih baik dibandingkan madu monoflora karena tidak mengandung pestisida yang kemungkinan ditemukan pada madu monoflora. Madu memiliki kandungan yang diduga dapat meningkatkan sistem imun, yaitu flavonoid. Kandungan flavonoid ini diduga berpotensi sebagai sistem kekebalan tubuh, baik respon imun nonspesifik maupun respon imun spesifik, salah satunya imunoglobulin. Ketika molekul asing masuk ke dalam tubuh, sel B akan membentuk imunoglobulin sebagai respon pertahanan tubuh dan akan berikatan secara spesifik dengan molekul asing tersebut. Imunoglobulin yang pertama kali terbentuk adalah imunoglobulin M diikuti dengan imunoglobulin G. Adanya kandungan flavonoid yang terdapat dalam madu, diperkirakan madu hutan dapat mempengaruhi sistem imun, khususnya imunoglobulin G dan imunoglobulin M.

H. Hipotesis

  Pemberian madu hutan dapat mempengaruhi imunoglobulin G dan imunoglobulin M pada hewan uji tikus jantan galur Wistar.

BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan

  rancangan acak pola searah. Eksperimental murni karena dilakukan dengan memberikan perlakuan terhadap kelompok perlakuan dan hasilnya dibandingkan dengan kelompok kontrol yang tidak diberikan perlakuan. Rancangan acak yaitu sampel yang digunakan ditetapkan dengan pengacakan agar setiap sampel memperoleh kesempatan yang sama untuk dapat masuk ke dalam kelompok perlakuan dan kelompok kontrol. Pola searah ditunjukkan dengan adanya perlakuan yang sama pada kelompok perlakuan. Penelitian menggunakan subjek

  

uji tikus jantan galur Wistar yang diperoleh dari Unit Praklinik Laboratorium

  Penelitian dan Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Kriteria inklusi yaitu tikus jantan, berat badan lebih kurang 100-300 g, berumur 2-3 bulan, bergalur Wistar. Kriteria drop out adalah tikus yang mati selama perlakuan. Penelitian dilakukan di Unit Praklinik dan Unit III Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.

B. Variabel dan Definisi Operasional

  1. Variabel penelitian a.

  Variabel utama 1)

  Variabel bebas : dosis madu hutan 2)

  Variabel tergantung : kadar imunoglobulin G dan imunoglobulin M b. Variabel pengacau

  1) Variabel pengacau terkendali : jenis makanan, variasi genetik, jenis kelamin, berat badan dan umur, galur tikus.

  2) Variabel pengacau tak terkendali : kondisi psikologis dan patofisiologis.

  2. Definisi operasional a.

  Madu hutan atau madu poliflora merupakan madu yang diproduksi oleh lebah liar dari tumbuh-tumbuhan obat yang ada di hutan (Suranto, 2007).

  Madu yang digunakan merupakan madu hutan yang diperoleh dari salah satu distributor madu di kota Yogyakarta yaitu Madu Pramuka.

  b.

  Imunoglobulin G merupakan imunoglobulin yang paling banyak di dalam serum darah dan berperan dalam menetralkan toksin dan kuman patogen yang berbahaya (Tizard 2004).

  c.

  Imunoglobulin M merupakan imunoglobulin yang pertama kali muncul setelah terjadi perangsangan antigen untuk mengikat komplemen (Louise, 2011). Menurut Herscowitz (cit., Rachmandani, 2008), imunoglobulin M berperan penting dalam pertahanan terhadap bakteri dan virus. Selain itu mudah dideteksi karna metode assay imunoglobulin M mempunyai sensitivitas besar d. Penetapan imunoglobulin G dan imunoglobulin M dilakukan dengan menggunakan metode ELISA (Ausubel et al., 1995). Prinsip dasar dari