Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium Dc.) Sumatera Utara Menggunakan Marka RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)

59

Lampiran 1. Deskripsi Pembuatan Larutan Stok
a. CTAB 5 %
Larutan dibuat dengan melarutkan :
- NaCl : 2.0 g
- CTAB : 5.0 G
- Aquades : 100 ml
b. Tris HCl 1 M pH 8.0 (100 ml)
Bahan yang digunakan adalah :
- Tris : 12.114 g
- HCl p.a. : 4.2 ml
- Aquades : 80 ml
- Larutan dibuat dengan mencampurkan bahan kimia di dalam gelas beaker
yang diaduk dengan menggunakan batang pengaduk magnetik di atas hot
plate
- Volume ditepatkan dengan aquades hingga 100 ml
- Larutan disterilisasi dengan autoclave
c. Tris HCl 1 M pH 7.4 (50 m)
Bahan yang digunakan adalah :
- Tris : 6.057 g

- Aquades ditambahkan hingga volume larutan mendekati 50 ml
- Pengaturan Ph dilakukan dengan menambahkan NaOH 2.5 M hingga Ph 7.4
- Volume ditepatkan hingga 50 ml
- Larutan disterilisasi dengan autoclave
d. EDTA O.5 M pH 8.0 (100 ml)

Universitas Sumatera Utara

60

Bahan yang digunakan adalah :
- NaEDTA : 18.612 g
- NaOH : 2.0 g
- Aquades : 80 ml
- Larutan dibuat dengan mencampur bahan kimia dalam gelas beaker dan
diaduk dengan menggunakan batang pengaduk magnetik
- Pengaturan pH dilakukan dengan menambahkan HCl hingga ph 8.0.
- Volume ditepatkan dengan aquades hingga 100 ml
- Larutan disterilisasi dengan autoclave
e. NaCl 5 M pH 7.7 (l00 ml)

Bahan yang digunakan adalah :
- NaCl : 29.22 g
- Aquades ditambahkan hingga larutan mendekati 100 ml dan diaduk dengan
menggunakan batang pengaduk magnetik hingga larut
- Pengaturan PH dilakukan dengan menambahkan NaOH hingga pH 7.7
- Volume ditepatkan dengan aquades hingga 100 ml
- Larutan disterililasasi dengan autoclave
f. Buffer Ekstraksi/CTAB (100 ml)
Bahan yang digunakan adalah :
- CTAB 2 % : 40 ml CTAB 5 %
- NaCl 1,26 M : 25.1 ml NaCl 5 M
- EDTA 20 mM : 4 ml EDTA 0.5 M pH 8.0
- Tris HCl pH 8.0 100 mM : 10 ml Tris HCl 1 M pH 8.0
- Aquades steril : 20.8 ml

Universitas Sumatera Utara

61

g. Buffer TAE 50 X (100 ml)

Bahan yang digunakan adalah :
- Tris : 24.2 ml
- Asam Asetat Glasial : 5.7 ml
- EDTA 0.5 M PH 8.0 : 10 ml
- Aquades ditambahkan hingga olume larutan 100 ml
h. Buffer TAE 1X (500 ml)
Bahan yang digunakan adalah :
- Buffer TAE 50 X : 10 ml
- Aquades : 490 ml
i. Buffer TE (50 ml)
Bahan yang digunakan adalah :
- Tris HCl 1 M PH 8.0 : 0.5 ml
- EDTA 0.5 M PH 8.0 : 0.1 ml
- Aquades : 49..4 ml
- Dimasukkan ke dalam gelas beaker dan diaduk hingga merata
j. Kloroform Isoamilalkohol 24 : 1 (50 ml)
Bahan yang digunakan adalah :
- Kloroform : 48 ml
- Isoamilalkohol : 2 ml
- Dicampur merata

k. Etanol 70 % (100 ml)
- Etanol : 70 ml
- Aquades : 30 ml

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara


Universitas Sumatera Utara

70

Lampiran 7. Hasil skoring 3 primer pada 30 sampel aksesi andaliman
Tabel 7. Hasil skoring dengan primer OPH-06
Skoring OPH-06
Aksesi 1
2
3
4
5
6
7
8
D1
0
0
0
0

0
1
1
0
D2
0
0
0
0
0
1
0
1
D3
0
0
0
0
0
1

0
0
D4
0
1
0
0
1
0
0
1
D5
0
0
0
0
0
1
0
0

D6
0
0
0
0
0
0
0
1
D7
0
0
0
0
1
0
0
0
D8
0

0
0
0
0
1
0
0
D9
0
0
0
0
0
0
0
1
D10
0
0
0

1
1
0
0
0
D11
0
0
0
0
0
1
1
1
D12
0
0
1
1
1

0
0
1
K1
0
0
0
0
0
1
0
0
K2
0
0
0
0
0
1
0
0
K3
0
0
0
1
1
0
0
1
S1
0
0
0
1
0
1
0
0
S2
0
1
0
0
0
1
0
1
S3
0
0
0
0
0
1
0
0
S4
1
1
0
1
1
0
1
1
S5
0
0
0
1
1
0
0
1
S6
0
1
0
1
1
0
0
1
S7
0
0
0
1
1
0
0
1
S8
0
0
0
1
1
0
0
0
S9
0
0
0
1
0
1
0
0
D13
0
1
0
0
0
0
0
0
D14
0
1
0
0
0
0
0
0
D15
0
0
1
1
1
0
0
1
D16
1
0
1
1
1
0
0
1
D17
1
1
1
1
1
0
0
1
D18
0
0
1
1
1
0
0
1

9
0
1
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0

10
1
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

11
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

12
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
0
0
0
0
0
0

13
1
1
1
1
1
0
1
1
0
0
1
0
1
1
0
1
1
1
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0

14
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
1
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

Universitas Sumatera Utara

71

Tabel 8. Hasil skoring dengan primer OPN-03
Skoring OPH-06
Aksesi
1
2
3
4
D1
1
1
1
1
D2
1
1
0
1
D3
0
1
0
1
D4
1
1
0
1
D5
1
1
0
1
D6
D7
1
1
1
1
D8
0
1
1
1
D9
1
1
0
1
D10
0
1
1
1
D11
0
1
0
1
D12
1
1
1
1
K1
1
1
0
1
K2
1
1
0
1
K3
0
1
1
1
S1
0
1
1
0
S2
0
1
0
1
S3
1
1
0
1
S4
1
1
0
1
S5
1
1
0
1
S6
0
1
0
1
S7
1
1
0
1
S8
0
1
0
0
S9
0
1
0
0
D13
0
1
0
0
D14
1
1
0
1
D15
1
1
0
1
D16
0
1
0
0
D17
1
1
0
1
D18
1
1
1
1

5
0
1
1
1
1
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
1
0
0
1
0
1
0
0
0
0
1
0

6
0
1
0
1
1
0
0
0
0
0
1
1
0
0
0
0
0
0
1
0
1
0
1
0
1
1
0
0
0

7
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

Universitas Sumatera Utara

72

Tabel 9. Hasil skoring dengan primer OPC-12
Skoring OPH-06
Aksesi
1
2
3
4
5
6
D1
0
0
0
0
1
0
D2
0
0
0
0
0
0
D3
1
0
1
0
0
0
D4
0
0
0
0
1
1
D5
0
0
0
0
0
0
D6
D7
0
0
0
0
1
1
D8
0
0
0
0
0
0
D9
0
0
1
1
0
1
D10
1
0
1
0
0
0
D11
0
0
0
0
1
0
D12
0
0
0
1
1
1
K1
1
0
0
1
0
0
K2
0
0
0
1
1
1
K3
0
0
0
0
0
0
S1
1
0
0
1
0
0
S2
0
0
0
0
0
0
S3
1
1
1
0
0
0
S4
1
1
0
1
1
0
S5
0
1
0
1
0
1
S6
0
1
0
1
0
0
S7
0
0
1
1
1
0
S8
1
1
0
1
0
1
S9
0
1
0
1
0
0
D13
0
1
0
0
1
0
D14
0
0
0
1
1
1
D15
0
0
0
1
1
1
D16
0
1
1
1
0
0
D17
0
1
1
1
0
0
D18
0
1
0
1
0
0

7
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
0
1
1
0
1
0
1
1
1
1
1
0
1
0
0
0
1
0

8
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
1
0
1
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
0
1
1
0

9
0
0
1
0
0
0
0
0
1
0
1
1
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0

10
0
0
0
1
0
1
1
0
0
0
0
0
1
1
1
1
1
0
0
0
0
1
0
0
0
0
1
1
0

11
0
0
1
0
0
0
0
0
1
0
0
1
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1

Universitas Sumatera Utara

73

Lampiran 8. Ukuran pola pita 3 primer (base pairs)
Tabel 10. Ukuran pola pita dengan primer OPH-06
Primer OPH-06
Aksesi
1
2
3
D1
1044
927
486
D2
1029
731
173
D3
1338
375
180
D4
2397
1156
892
D5
1007
187
D6
899
D7
1182
863
752
D8
1007
180
D9
856
D10
1375
1173
835
D11
1097
1014
759
D12
1338
1191
985
K1
1051
180
K2
1014
194
62
K3
1338
1173
842
S1
1038
797
518
S2
2387
1088
789
S3
1038
161
S4
2768
2072
1358
S5
1327
1070
700
S6
2000
1344
1130
S7
1427
1232
828
S8
1964
1399
1209
S9
1427
1028
220
D13
2000
1327
1146
D14
2000
1327
1146
D15
2109
1455
1244
D16
2425
2072
1358
D17
2443
2072
1372
D18
2072
1372
1209

4
173

5

759

201

649

465

381
856

201

397
80

132

1163

936

878

707

634

205

700
707
851
1197
1186
843

835
963

6

180

820

828

Universitas Sumatera Utara

74

Tabel 11. Ukuran pola pita dengan primer OPN-03
Primer OPN-03
Aksesi
1
2
3
D1
1682
1374
945
D2
1646
1349
930
D3
1387
961
795
D4
1612
1374
938
D5
1727
1364
930
D6
D7
1579
1337
1055
D8
1337
1055
930
D9
1693
1364
930
D10
1313
1039
900
D11
1279
892
D12
1762
1442
953
K1
1658
1352
907
K2
1693
1316
907
K3
1236
885
664
S1
1236
885
S2
1215
847
88
S3
1642
1304
907
S4
1874
1547
1000
S5
1727
1389
945
S6
1697
1042
S7
1927
1596
1053
S8
1697
S9
1324
817
622
D13
1697
D14
1658
1316
907
D15
1658
1282
877
D16
1697
D17
1802
1531
1000
D18
1838
1563
1180

4

5

780

635

795
790
922

592
636
-

790
636

649

801
649
827

602

622
595
801
1021

Universitas Sumatera Utara

75

Tabel 12. Ukuran pola pita dengan primer OPC-12
Primer OPC-12
Aksesi
1
2
3
D1
1000
535
D2
573
D3
2167
1709
683
D4
1000
801
647
D5
676
D6
D7
1044
821
676
D8
647
245
D9
1465
1121
800
D10
2038
1669
661
D11
1165
647
D12
1465
1157
816
K1
2019
1592
325
K2
1465
1121
808
K3
647
215
S1
2000
1594
393
S2
676
235
S3
2000
1836
1610
S4
1957
626
333
S5
1936
1517
626
S6
1894
1482
647
S7
1711
1127
990
S8
2069
1887
1599
S9
1915
1430
D13
1805
1162
657
D14
1482
1098
824
D15
1500
1145
849
D16
1945
1818
1530
D17
1926
1818
1515
D18
1908
1546
196

4

5

349
235

158

245

-

562
325

126

562
119
723

543

6

-

257

196
227
103
341

79

677
708

409

212

219
416

219

257
424
697

Universitas Sumatera Utara

76

Lampiran 9. Faktorial Koordinat
Tabel 13. Faktorial analisis (PCoA)
Unit

Axis 1

Axis 2

Axis 3

Axis 4

Axis 5

0.3362123519

-0.1305688590

4,39E+12

-8,68E+12

7,29E+12

2

0.1376503239

-0.2476267890

5,44E+12

0.11455087683

-8,15E+12

3

0.3094111475

3,68E+12

0.0499282621

4,84E+12

-0.2767422756

4

1,34E+12

-0.1624651948

7,65E+12

-0.1231940998

0.16071306514

5

0.2928508247

-0.1054665933

0.18412326308

3,52E+12

-6,83E+12

6

-0.390176303

-0.5144853177

-0.3109243722

0.26306133570

-8,42E+12

7

0.1729956058

1,39E+12

-1,83E+12

-0.1497824058

0.26011731622

8

0.3791159890

1,27E+12

-0.2162080816

-5,07E+12

-1,85E+12

9

-0.1745307504

-0.0412006091

4,39E+12

0.27672861312

0.1756200635

10

-8,51E+11

0.17499525077

0.0130353951

-0.1337375851

-0.2053155776

11

0.2274215139

-0.2602977069

-0.1112231568

-2,11E+12

-8,29E+11

12

-0.1881556113

-4,91E+12

0.20925998566

-2,60E+12

0.0530938622

13

0.2052205518

9,10E+12

0.26749800308

0.26062503593

-0.118867272

14

0.2124011668

5,99E+12

1,34E+12

7,24E+12

0.3043983650

15

-0.121951297

-5,95E+12

-0.2821977702

-0.1263379894

-0.008886190

16

0.2012546238

0.31405871883

-0.2833060605

0.22314092044

3,86E+12

17

0.2001142204

-0.1682954850

-0.24927636111

-1,37E+12

-4,42E+10

18

0.2506373298

0.15056332359

-8,02E+12

0.13171574945

-4,59E+12

19

-0.1715223531

-5,95E+12

0.10271401396

-0.1842159893

-0.2179552990

20

-0.2093617015

3,74E+12

0.18754125928

-0.0138428272

-4,75E+12

21

-0.2489936210

0.0121411141

-0.0822318730

-0.1751939599

-7,44E+12

22

-0.1694453088

-6,95E+12

0.13151633729

-6,62E+11

-1,60E+12

23

-4,52E+12

0.3354453626

-0.1380148540

-6,88E+12

0.11688422528

24

-7,31E+12

0.2385018962

0.10668303244

9,43E+12

-0.1851104724

25

2,52E+12

-4,53E+12

-3,09E+12

-0.4361263862

-4,60E+11

26

-2,60E+12

-1,67E+12

0.41735422710

-1,71E+12

0.1015126659

27

-0.2670617508

-3,48E+12

0.16419594473

7,70E+12

0.1989369700

28

-0.3831983699

0.2788171137

-0.2309758512

5,10E+12

2,57E+12

29

-0.2138660232

0.1131548140

-5,18E+12

-6,25E+12

1,42E+12

30

-0.2728099388

9,55E+12

1,98E+12

4,77E+12

-5,62E+12

Tabel 14. Nilai Factorial coordinates
Axis
Eigenvalue
1
0.05046
2
0.03108
3
0.03027
4
0.02231
5
0.01793

Inertia%
19.74
12.16
11.84
8.73
7.01

Universitas Sumatera Utara

77

Lampiran 10. Data .ARB
@DARwin 5.0 – ARB
30

30

57

1

34

0.135853159412245

2

32

0.04179416759316

3

37

0.18044076209408

4

41

0.103910907085965

5

32

0.069316943517951

6

39

0.487550446813494

7

41

0.181803378628321

8

36

0.147607581802304

9

39

0.179116219853173

10

37

0.183195601542284

11

34

0.127304735324597

12

33

0.041392997144877

13

35

0.137232188299194

14

43

0.160170985227662

15

58

0.208754401617218

16

38

0.240719889516776

17

36

0.14651006525652

18

45

0.234583121751093

19

53

0.184660209857784

20

52

0.10917441173434

21

47

0.119815903464756

22

40

0.076524907034596

23

38

0.175946777149891

24

46

0.294320423455378

25

47

0.308755525106673

26

35

0.162767811700806

27

33

0.078607002855123

28

31

0.155391879008313

29

31

0.029793306176872

30

54

0.15399429156064

31

54

0.101897964331616

32

44

0.121268548502836

33

40

0.049093822062394

34

42

0.059672492516435

35

49

0.104074017193083

36

42

0.046074411508333

37

49

0.087917324798259

38

46

0.048724689326577

39

55

0.081153839596115

40

52

0.030983132940927

Universitas Sumatera Utara

78

41

48

0.062400409704204

42

43

0.028702979429972

43

44

0.010186148388343

44

45

0.014504466639912

45

48

0.02799877891438

46

51

0.060999676104283

47

53

0.042701673110506

48

50

0.033874308308847

49

50

0.01891178084266

50

51

0.024861844444029

51

57

0.051828643439484

52

55

0.055245978609983

53

57

0.033176890690831

54

56

0.028485431638959

55

56

56

58

0.028135972582022

57

58

0.001328153921008

1,07E+10

Tree_Parameters
Bootstraps
1000
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53

26
54
44
40
42
49
42
49
46
55
52
48
43
44
45
48
51
53
50
50
51
57
55
57

63
68
54
37
37
28
34
24
28
34
29
6
3
3
1
10
28
1
6
0
0
10
10

Universitas Sumatera Utara

79

54
56
57

56
58
58

10
1
0

End_Bootstraps
Colors
30
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30

16711935
3315455
3315455
13153535
9869055
13120200
13120200
16711935
13107350
65535
9868950
14474460
16711680
13137920
16762880
16777120
25600
38400
51200
65280
16776960
16766720
16766720
11184640
10380
25800
255
220
3289800
3302655

End_Colors
Settings
0

0

1

1

0

0

0

0

1

0

End_Settings
End_Parameters
Tree construction: UnWeighted Neighbor-Joining
Tree constructed from: new_30andaliman_kodearea_H6_N3_C12.dis

Universitas Sumatera Utara

80

30 selected units on 30
Bootstrap analysis: 1000
Average 'edge' distance between bootstrapped trees: 0.8057
5-percentile: 0.6667
95-percentile: 0.9259
---------------------------Dissimilarity calculated from data file:
new_30andaliman_kodearea_H6_N3_C12.var (type:'single')
User selection Units: 30/30 and Variables: 32/32
Dissimilarity index: Presence / Absence - Dice
Missing data options:
Integer code for missing data = 999
Pairwise variable deletion - Remove variables with missing data for the current
unit pair (70 % of valid data required for each unit pair)
1000 bootstraps
---------------------------Imported Single data...

Universitas Sumatera Utara

Dokumen yang terkait

Analisis Penanda RAPD (Random Amplifield Polymorphic DNA ) Untuk Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.) Sumatera Utara

5 27 73

Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium Dc.) Sumatera Utara Menggunakan Marka RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)

4 29 82

Analisis Penanda RAPD (Random Amplifield Polymorphic DNA ) Untuk Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.) Sumatera Utara

0 0 11

Analisis Penanda RAPD (Random Amplifield Polymorphic DNA ) Untuk Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.) Sumatera Utara

0 0 2

Analisis Penanda RAPD (Random Amplifield Polymorphic DNA ) Untuk Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.) Sumatera Utara

0 0 4

Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium Dc.) Sumatera Utara Menggunakan Marka RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)

0 1 13

Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium Dc.) Sumatera Utara Menggunakan Marka RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)

0 0 2

Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium Dc.) Sumatera Utara Menggunakan Marka RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)

0 0 3

Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium Dc.) Sumatera Utara Menggunakan Marka RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)

0 2 8

Analisis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium Dc.) Sumatera Utara Menggunakan Marka RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)

0 0 3