Perbandingan Efek Berkumur Antara Air Seduhan Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) dan Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Aerob Pada Saliva.

! " #

$

%$
&

'
'

(
)

*

' '

' '

+

'
)*+,

%$
! "#
$
5
6
! " #

&
$
-(./(
.(/0 + 12341

$

'
%$

7

(
' '

! "#

%$ 1
(

7

' 8

(

(

(

$

!

"

#
"

!

"

#
$

% !&

'

#
+

$
"

('

) *

#
#

,

$
$
#

('

#

% ! &

'

,

,
$-

%

.

-./0

-./
,12,

#
7 8

#

1,2

34

54365

,
'

9
,

:

'

;

,

,

,

00%
0 ;

9

::::::::::::::::::::::::0
<

0/5

:::::::::::::::::::::::

0 <

:::::::::::::::::::::::

0=7

6

0.<
0>%

::::::::::::::::::::::/

:::::::::::::::: =

:::::::::::::::::::::: :?

:::::::::::::::::::-

0

::::::::::::::::::::::: @
1

A

:::::::::::::::::::0

/ 6

A

:::::::::::::::::::00

7

:::::::::::::::::::::: 0/

= 7

9

!

. *

6 ::::::::::: 0

::::::::::::::::::::::: 0=

> *

*

-

2

@ ;

9

9

7

::::0@

:::::::::::::

:::::::::::::::::: /

0 *

2

::::::::::::::::::::::::

00 *

2

!

0 9

!

<
<

0/

::::::::::::::::::::

1

0 *
0=

5

::::::::::::::::/
7

9

9

!

<

:/0

:::::::::::::::::: 0

6

0- 7

::::::::::::::::::
6

<
7

>

::::::::::::::::::::::: />

0> 5

0@

1
<

9

0. 1

:::::::::::::::::: =

:::::::::::::::::

::::::::::::::::::::: =
<

::::::::::::::::

>

/0 1

9

/001

:::::::::::::::::::::: @

/0 9

:::::::::::::::::::::=0

/ <
/ 0&

::::::::::::::::::::::=

/

::::::::::::::: =

/ /
/

3

4

4

:::::::::::::::: =/

:::::::::::::::::::: =

/ =

7

/ .<

1

/

.06

/ .

7

::::::::::::::::::::: =
::::::::::::::::::::: =:::::::::::::::::: =+ :::::::::::::::::::: =@

06

#

00B

1

1

6

0 B

1

1

<

%$:: .
' '

! "

$::::::::::::::::::::::::::: ./

0/

B

1

1
<

6
' '

! "#

%$
$::::.=

::::::::::::::::::::.>
/

=0
=

6

:::::::::::::::::>

::::::::::::::::::::::::: >/
:::::::::::::::::::::::::::>/

5

0

*
::::

5
5

/

5
5

9

A

9

A

B
=

5
9

!
2

!

3

<
<

:
:

9
<

@
/0
0

5

1

:::

5

0

!

.

%$::::::::::::::::

5

.0

%$
CD

5

/

::::::::::

!

./

! " #
$:::::::::::::::
.

5

! " #
$
CD
:::::::::::::::::

5

=

5

.

!

.=
$
B

'
1

9

:
1

6
%

$

<
! " #
$ 5
9
1
::::::::::::::

..

A

0

A
A
A

A

<

A
/

6

*
;

:::::::::

00

::::::

0/

::
6

<

= :::::::::

0.
/@

A

=

A

.

A

>

5

6

A

-

5

<

A

/0

1

:::::::::: :

A

/

9

A

//

A

/

A

;

6

/@

::::::::::
::::::::::

'
<

0

(

9

::::::::::

/

:::::::: :

>
@

:::::::::::

=0

::::::::::

=.

:::::::::::

=>

&

.
'

E>

'
::::::::::::
A

.

&
'

E >

'
::::::::::::
A

/

&

.
'

E.

'
::::::::::::
A

&

.=
'

E .

'
:::::::::::

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ......................................................................................... i
LEMBAR PERSETUJUAN ............................................................................. ii
SURAT PERNYATAAN .................................................................................. iii
ABSTRAK ......................................................................................................... iv
ABTRACT .......................................................................................................... v
PRAKATA ......................................................................................................... vi
DAFTAR ISI...................................................................................................... x
DAFTAR TABEL ............................................................................................. xiv
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xv
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xvi

BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2 Identifikasi Masalah ...................................................................................... 3
1.3 Maksud Penelitian ......................................................................................... 3
1.4 Manfaat Penelitian ........................................................................................ 4
1.5 Kerangka Pemikiran dan Hipotesis ............................................................... 5
1.6 Metode Penelitian ......................................................................................... 8
1.7 Lokasi dan Waktu Penelitian ........................................................................ 8

x

BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2. 1 Saliva.......................................................................................................... 9
2.1.1 Anatomi Kelenjar Saliva ..................................................................... 9
2.1.2 Histologi Kelenjar Saliva .................................................................... 12
2.1.3 Komposisi Saliva ................................................................................ 13
2.1.4

Kapasitas Buffer Saliva dan Regulasi pH .......................................... 14

2.1.5

Fungsi Saliva ...................................................................................... 15

2.1.6

Faktor-faktor yang mempengaruhi Flow dan Komposisi Saliva ....... 19

2.1.7

Saliva Sebagai Sumber Nutrisi Bakteri .............................................. 22

2.1.9

Interaksi Saliva dan Bakteri ............................................................... 23

2.2

Flora Normal ........................................................................................... 25

2.2.1 Flora Normal Rongga Mulut ................................................................. 26
2.2.2 Bakteri Rongga Mulut........................................................................... 27
2.2.3 Pertumbuhan Bakteri Aerob dan Anaerob ............................................ 31
2.2.4 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Kolonisasi Bakteri di Rongga
Mulut .................................................................................................... 32
2.2.5 Dental Biofilm ...................................................................................... 38
2.2.6 Antibakteri ............................................................................................ 41
2.3. Tanaman Sirih ............................................................................................ 42
2.4.

Tanaman Sirih Merah ............................................................................... 43

2.4.1 Kandungan Daun Sirih Merah ............................................................. 45
2.4 Tanaman Sirih Hijau .................................................................................... 47
2.3.5 Kandungan Daun Sirih Hijau ............................................................... 49

xi

BAB III BAHAN DAN METODE PENELITIAN
3.1 Alat dan Bahan Penelitian
3.1.1 Alat Penelitian ...................................................................................... 51
3.1.2 Bahan Penelitian .................................................................................. 54
3.2 Metode Penelitian
3.2.1 Jenis Penelitian...................................................................................... 55
3.2.2 Populasi dan Sampel Penelitian ............................................................ 55
3.2.3 Definisi Operasional Variabel ............................................................... 56
3.2.4 Variabel Penelitian ................................................................................ 58
3.2.5 Prosedur Kerja ...................................................................................... 58
3.2.6 Metode Analisis ................................................................................... 63
3.2.6.1 Hipothesis Statistik ......................................................................... 63
3.2.6.2 Kriteria Uji ...................................................................................... 64

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian ............................................................................................. 65
4.2 Pembahasan Penelitian .................................................................................. 68
4.3 Pengujian Hipotesis Penelitian ..................................................................... 72

BAB V SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan ....................................................................................................... 74
5.2 Saran ............................................................................................................. 74

xii

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 76
LAMPIRAN ....................................................................................................... 80
RIWAYAT HIDUP ........................................................................................... 89

xiii

DAFTAR TABEL

No

Teks

Halaman

Tabel 2.1

Fungsi dari Molekul Saliva dan Perannya dalam
Pembentukan Dental Plak……………………….........

24

Tabel 2.2

Bakteri Gram-Positif di Rongga Mulut…....................

29

Tabel 2.3

Bakteri Gram-Negatif di Rongga Mulut……………...

30

Tabel 2.4

Efek Oksigen Pada Pertumbuhan Bakteri.....................

32

Tabel 2.5

Tahap dan Mekanisme Pembentukan Biofilm sebagai
Target Antibakteri……………………….....................

41

Tabel 2.6

Hasil Skrining Fitokimia Daun Sirih Merah…………

45

Tabel 2.7

Hasil Analisis Komponen Aktif Sirih Hijau…………

49

Tabel 4.1

Rerata jumlah populasi bakteri aerob pada saliva
setelah berkumur menggunakan air, air seduhan daun
sirih merah dan air seduhan daun sirih hijau…………

67

Tabel 4.2

Hasil Uji Tukey HSD Jumlah Populasi Bakteri Aerob
Pada Saliva……………………………………………

xiv

68

DAFTAR GAMBAR

No

Teks

Halaman

Gambar 2.1

Kelenjar Saliva Mayor……………………………………

11

Gambar 2.2

Fungsi saliva dalam proteksi dan lubrikasi………………

16

Gambar 2.3

Ikatan Van der Wall’s……………………….....................

40

Gambar 2.4

Ikatan Hidrogen…………………………………………..

40

Gambar 2.5

Daun Sirih Merah……………………..……………...

44

Gambar 2.6

Tanaman Sirih Hijau……………………………………...

48

Gambar 3.1

Alat Penelitian …………………………….……………..

51

Gambar 3.2

Alat Penelitian……………………………………………

52

Gambar 3.3

Inkubator, Otoklaf, Oven……………………...................

52

Gambar 3.4

Bahan Penelitian………………………………………….

54

Gambar 3.5

Pengenceran Berseri….…………………………………..

60

Gambar 3.6

Metode Pour Plate ………..……….…………………….

61

Gambar 3.7

Metode Pour Plate………………………………………..

62

Gambar 4.1

Jumlah koloni yang terbentuk pada agar nutrien setelah
naracoba berkumur menggunakan air……………………

65

Gambar 4.2

Jumlah koloni yang terbentuk pada agar nutrien setelah
naracoba berkumur menggunakan air seduhan daun sirih
merah…………………………………………………….

66

Jumlah koloni yang terbentuk pada agar nutrien setelah
naracoba berkumur menggunakan air seduhan daun sirih
hijau………………………………………………………

66

Gambar 4.4 Diagram Garis Rerata Jumlah Bakteri Aerob Pada Saliva...

69

Gambar 4.3

xv

DAFTAR LAMPIRAN

No

Teks

Halaman

Lampiran 1

Foto-foto Penelitian…………………………………...

80

Lampiran 2

Jumlah Populasi Bakteri Aerob pada Saliva Setelah
Berkumur dengan Air, Air Seduhan Daun Sirih Merah
(Piper crocatum Ruiz & Pav) dan Air Seduhan Daun
SirihHijau (Piper betle L)……………………………..

Lampiran 3

Jumlah Populasi Bakteri Aerob pada Saliva Setelah
Berkumur menggunakan Air, Air Seduhan Daun Sirih
Merah dan Air Seduhan Daun Sirih Hijau
menggunakan uji One Way ANOVA dan Tukey HSD..

82

83

Lampiran 4

Surat Keputusan Komisi Etik Penelitian……………

86

Lampiran 5

Informed Consent…………………………………..

87

Lampiran 6

Surat Permohonan Ijin Penelitian…………………..

88

xvi

80

81

82

!

"
!

&'

"

#$
%

%

83

!"
"

!"

#$

&# !
" #
+

+

#/ 0

&

#$ %&'

# (
))
* #
- !

%

,
+ $ ,

1 # # &
& 2 !* !
)

,

,

,

.
!

'
#

!

# '( )
32

)

* 4

!)

(
5 6

7

800

7
(9

1

!

(9

(9

84

" 0 ! # 7 :

" 0 ! # 7 :
5
# *

)

)

?
7 6
A 0#
B
A
1

)
#

)

@

+

0#

;

&! < " 0 ! # 7 :

$=' = #
" ! :

#" ! :

?

!

0
1 : /

$4' =

+

))
$4,='

*
(

+

32

5 6

7

)

* 4

800

$>'
$>'
,

$>'

,

,

,

,
,

$>'

,

,

,
> 1

))

*

##+ )*

!

!

!

7

85

! "
1 : /
&#
=

)

!0

C

#" ! :

+
#)
8# #

+

0#
*

+
0!

# # &# #
D C

#0! /

86

87

88

!" #
%&
(

'

$
# !

'

)

*

)

/0*

)

/

*

*

)

/

*

*

)

*
*

#
3

$

,)

-.

+

-)

".

$

+

")

1.

$

+

1)

.

$

/
4

+

'

0#'

2

4* 4

+

89

)4 '

.

Flora di rongga mulut pada dasarnya memiliki hubungan yang harmonis
dengan

dan terdiri dari beragam organisme, termasuk bakteri, fungi,

mycoplasma, protozoa, dan virus yang dapat ditemui dari waktu ke waktu. Bakteri
merupakan grup utama dari mikroorganisme di rongga mulut dan dapat dibagi
menjadi bakteri aerob atau anaerob fakultatif, berdasarkan kebutuhan oksigen dari
bakteri tersebut.1
Kemampuan bakteri untuk melekat di rongga mulut merupakan prasyarat
terjadinya kolonisasi. Bakteri tidak berkolonisasi pada permukaan email yang
bersih, tetapi berinteraksi dengan lapisan yang mengandung material pada
permukaan gigi yang disebut dengan pelikel. Pembentukan pelikel terjadi dalam
hitungan detik pada email yang bersih dan mencapai ketebalan maksimum dalam
waktu 90#120 menit. Pembentukan pelikel akan berlanjut menjadi pembentukan
biofilm, contoh dari biofilm adalah dental plak yang merupakan penyebab
terjadinya karies.1,2,3
Karies merupakan kerusakan yang terjadi secara lokal pada jaringan gigi
yang disebabkan karena ferementasi karbohidrat oleh bakteri.1 Faktor utama
penyebab karies adalah: faktor

(gigi dan saliva), makanan (karbohidrat),

waktu, dan bakteri dalam plak.1,2

1

2

Bakteri yang terdapat di dalam plak dapat diturunkan jumlahnya secara
mekanis atau secara kimiawi yaitu dengan menggunakan agen antibakteri,
penggunaan fluoride, dan tanaman obat alami. Salah satu dari tanaman obat alami
adalah daun sirih yang memiliki kemapuan sebagai antiseptik, antioksidan dan
fungisida, juga memiliki sifat menahan pendarahan, membantu penyembuhan
luka, obat saluran cerna, dan dapat menguatkan gigi. Daun sirih terdiri dari
berbagai jenis diantaranya adalah sirih hijau, sirih merah, sirih hitam, sirih kuning,
dan sirih perak. Pada penelitian yang dilakukan oleh Nalina T, sirih hijau
diketahui dapat menurunkan jumlah bakteri Streptococcus mutans yang diketahui
merupakan bakteri utama penyebab karies. Sementara itu, pada penelitian yang
dilakukan oleh Farida J diketahui bahwa sirih merah memiliki aktifitas antibakteri
terhadap bakteri gram positif dan gram negatif.3,4,5,6
Sirih hijau (
dalam famili

Linn.) adalah salah satu tanaman yang termasuk ke
. Tanaman ini tumbuh subur di sepanjang Asia tropis

hingga Afrika Timur dan menyebar hampir di seluruh wilayah Indonesia. Di Asia
tenggara, sirih merupakan salah satu di antara sekian banyak tanaman yang dapat
mengontrol karies dan penyakit periodontal.6
Daun sirih hijau menunjukan aktifitas antibakteri terhadap

,

, beberapa koloni awal pada plak,
dan menghambat perlekatan
membuat lingkungan yang tidak kondusif untuk

secara tidak langsung dengan
6

Jenis sirih yang lain yaitu sirih merah (
digunakan sebagai tanaman hias, tanaman ini termasuk di dalam famili

). Selain

3

dengan penampakan daun yang berwarna merah keperakan dan mengkilap saat
terkena cahaya. Sirih merah berdasarkan kekerabatannya, satu genus dengan daun
sirih hijau (

Linn). Sirih merah merupakan salah satu tanaman obat

potensial yang diketahui secara empiris memiliki khasiat untuk menyembuhkan
berbagai jenis penyakit.5,7
Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan di atas, peneliti merasa
teratarik untuk meneliti perbedaan efek berkumur dengan menggunakan
seduhan daun sirih merah (
sirih hijau (

air

Ruiz & Pav) ) dan air seduhan daun

L) terhadap koloni bakteri aerob yang terdapat di dalam

saliva.

Berdasarkan latar belakang penelitian yang telah diuraikan diatas maka dapat
dibuat identifikasi masalah berupa:
#

Apakah terdapat perbedaan jumlah populasi bakteri aerob antara individu
yang berkumur menggunakan air, air seduhan daun sirih merah (
Ruiz & Pav) dan air seduhan daun sirih hijau (

#

L)?

Apakah terdapat perbedaan efektifitas air seduhan daun sirih merah (
Ruiz & Pav) dan air seduhan daun sirih hijau (
dalam menurunkan jumlah populasi bakteri aerob pada saliva.

Maksud penelitian ini adalah :

L)

4

#

Mengetahui perbedaan jumlah populasi bakteri aerob antara individu yang
berkumur menggunakan air, air seduhan daun sirih merah (
Ruiz & Pav) dan air seduhan daun sirih hijau (

#

L)

Mengetahui perbedaan pengaruh berkumur air seduhan daun sirih merah
(

Ruiz & Pav) dan hijau (

L) terhadap

pertumbuhan bakteri aerob dalam saliva.

!
Manfaat ilmiah dari penelitian ini adalah sebagai landasan penelitian lain
mengenai efektifitas air seduhan daun sirih merah (
dan air seduhan daun sirih hijau (

Ruiz & Pav)

L) dalam menurunkan pertumbuhan

populasi bakteri aerob pada saliva.

Manfaat praktis dari penelitian ini adalah untuk memberi informasi kepada
masyarakat mengenai pengaruh air seduhan daun sirih merah (
Ruiz & Pav) dan daun sirih hijau (

L) sebagai bahan alternatif

antikaries yang efektif, murah dan mudah didapat terhadap kesehatan gigi dan
rongga mulut.

5

"#

"

!

#

$%

!

Rongga mulut memiliki mikroflora alami dengan hubungan yang harmonis
antara mirkoflora dengan

Lingkungan yang berbeda dalam rongga mulut

akan mendukung perkembangan mikroflora secara berbeda dalam segi kualitas
maupun kuantitas. Bakteri di rongga mulut dapat dikelompokan menjadi : bakteri
gram positif dan gram negatif, serta bakteri anerob atau anaerob fakultatif
tergantung kebutuhan oksigennya.1,2
Rongga mulut menyediakan lingkungan yang bersahabat sekaligus berbahaya
bagi pertumbuhan bakteri. Bakteri yang baru berkoloni di permukaan gigi
didominasi oleh bakteri aerob dan fakultatif anaerob seperti

. dan

Bakteri rongga mulut dapat menggunakan nutrien endogen untuk
pertumbuhan serperti protein pada saliva di mana saliva memainkan peranan
penting dalam regulasi pertumbuhan dan aktifitas metabolik dari mikroflora
rongga mulut. Di dalam Saliva terkandung banyak bakteri (hampir 108 per
milliliter) yang berasal dari gigi dan permukaan mukosa oral sebagai hasil dari
abrasi mekanikal yang disebabkan akibat kegiatan berbicara, mengunyah dan
menelan. 1,3,8
Saliva membantu untuk mempertahankan pH di rongga mulut pada 6,74#7,25
dan suhu antara 35#360C, yang merupakan suhu dan pH optimal bagi
perkembangan banyak organisme. Saliva mengandung glikoprotein dan protein

6

yang berperan sebagai sumber utama karbohidrat, peptida, dan asam amino bagi
pertumbuhan mikroba yang perlekatannya difasilitas oleh pelikel saliva.3,8
Pelikel terdiri dari
dari GCF (
produk mikroba seperi enzim

lemak, komponen
sisa#sisa dinding bakteri yang telah mati, dan
dan glukan. Komposisi dari

pelikel mendapat perhatian khusus karena perannya dalam menentukan komposisi
mikroflora awal.3
Pembentukan pelikel diikuti oleh perlekatan tunggal bakteri dalam waktu 0#24
jam, yang kemudian dilanjutkan dengan pembentukan mikrokoloni dalam waktu
4#24 jam. Dalam waktu 1#7 hari terjadi pertambahan jenis spesies bakteri seiring
dengan pertumbuhan mikrokoloni, dan dalam waktu 1 minggu akan terjadi
pembentukan biofilm.3
Biofilm merupakan komunitas satu atau lebih bakteri yang kompleks dan
fungsional, terbungkus dalam matriks eksopolisakarida dan melekat pada
permukaan keras. Dental plak merupakan contoh dari biofilm yang memiliki
fungsi sebagai komunitas microbial dan merupakan salah satu dari beberapa
faktor penyebab terjadinya karies. Oleh karena itu, pembentukan plak harus
dicegah dengan cara pembersihan secara mekanis yaitu menyikat gigi atau secara
kimia yaitu dengan menggunakan antibakteri, penggunaan fluoride dan tanaman
obat alami yaitu daun sirih.1,3
Daun sirih diketahui dapat menghambat perlekatan dari koloni awal plak.
Selain itu, daun sirih dapat menurunkan aktifitas enzim

yang

bertanggung jawab dalam mensintesis polimer lengket dari sukrosa yang

7

digunakan untuk perlekatan bakteri ke permukaan gigi. Daun sirih memiliki
kandungan: minyak atsiri yang terdiri dari betphenol, kavikol, seskuiterpen,
hidroksikavikol, cavibetol, estragol, eugenol, karvakrol, asam lemak (asam stearik
dan asam palmitik), dan

(hidroksi ester dari asam

stearik, palmitik, dan myristik). Terdapat beberapa jenis sirh di antaranya: sirih
hitam, sirih hijau, sirih kuning, sirih merah, dan sirih perak.6,7
Sirih hijau (

L) merupakan tanaman terna, tumbuh merambat atau

menjalar, memiliki batang berwarna cokelat kehijauan, berbentuk bulat, berkerut
dan beruas yang merupakan tempat keluarnya akar. Kandungan minyak atsiri
(terpenoid dan fenol) dalam sirih dapat melawan bakteri gram positif dan gram
negatif.7
Jenis lainnya yaitu sirih merah yang berdasarkan kekerabatannya, satu genus
dengan sirih hijau (

L). Sirih merah (

) lebih

banyak dikenal sebagai tanaman hias dan tumbuh merambat di pohon atau pagar..
Tanaman ini memiliki kemampuan sebagai antiseptik, antioksidan, dan fungisida,
obat saluran cerna dan dapat menguatkan gigi. Tanaman sirih merah diketahui
memiliki kandungan alkaloid, saponin, tannin dan flavonoid.4,8,9

"

$%
Hipothesis pada penelitian ini adalah:

#

Terdapat perbedaan jumlah populasi bakteri aerob pada saliva antara individu

yang berkumur dengan menggunakan air, air seduhan daun sirih merah (
Ruiz & Pav) dan air seduhan daun sirih hijau !

"

8

#

Terdapat perbedaan efektifitas air seduhan daun sirih merah (

Ruiz & Pav) dan air seduhan daun sirih hijau (

L) dalam menurunkan

jumlah populasi bakteri aerob pada saliva.

&

%
Penelitian ini merupakan penelitian yang bersifat kuasi eksperimental

labolatorik in vivo. Naracoba yang digunakan sebanyak: 20 orang
Hasil penelitian ditabulasi dan dianalisis menggunakan uji ANOVA satu arah
dilanjutkan dengan uji Tukey # $ dengan derajat kemaknaan ("
) > = 0,05. Kemaknaan ditentukan berdasarkan nilai

≤ 0,05. Analisis

data menggunakan program komputer.

' %

(

Lokasi Penelitian : Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran
Universitas Kristen Maranatha.
Waktu penelitian : bulan November#Desember 2012

!

"

!

74

75

"
!

#

!
!

"

!

!
"

# $ %

& ' ( )

* + ,
- #
.
/ 0)1
2

(

3

4 5!
% 6

0 , 7
-

4 +

"

/

$

3

!! 8

#
"

!
# #

#
" /

%

%
/

+
&
!

7

! $

9 / -

6

+

1

!
? @

;

:
#
#

"

-

'

? @

454

;/

& %

9

&
7

%

$ &

.
-

9

(

(

-

$

3

3

3

:
-*
+ A,( #

$#
*
C

$
# "

,

!
>

(

()
$

$
!

B

9

'
(& -

"

/
!+

#

4
(
:

!
%

&

$
9 >
%

1
5

= %

-

"

!

*
8 $

$ : /
!

*

:
&
+
%
%
= 4! 5 4!

8 ?=@
767

7

5!

!
5

$-

$
-A
+
% / % 0 &

.

&

$
#

1

777
7

$

:

%

+ B

%

,

>

5
+

/

'

,'

4 7

*

/
)
4 5!

$
'
(

9 +," 3

*
8

0

=

.

)
3

8 4

2
485

1

! 8=

<
$
4 5=

< 11 6

= $

>>

>

+
# )
- $(

! -

>

*

+ - , 0
8

-

(

8

8 !8! !8=

(9

-9
3 8

1

!

5

2

+

43 8? @

45
$
3

(9 /
? @
5 !

'
4
2

$

$

3

4
B

4 9
<
7
*
9
/

<

9

/
B

7

(

'
$ +
8 ? @
5 !
$

2

B

(

%

>9
& #
' - :
>

6 "

#
#
/
=

2
10

<

+
$

'
#
9 /
1(

!

B

3

9

!4
? @ ! 584

=

'

& 6
.

C

<

4

<

/

8

4

0

"

3
)

43

3

,
? @ 4
4

#

5

( >

787
7

! '

*

' $

-

D

8 5
8 $
(

%
B

!
B

= "

? @

- 9
1
6

>

/ $$
/ % 0 ===
< B

#"

B

=

& '
5

>

3 (

/

7

# :

%
4 5

%

*&" "

7D

00

C

!
48 48!5=

%
, * % " +

#

1 -

4

? @

58

&

#

7

$

B

!

+*

- $ B

3

& */

!

9

==

< 9

B
"

=

!

54

+

%

*

#

1

= ? @4

8 <

-

= ( /
8
4 :
&

!

/
B -

*

! 9

&

)

%

$

( B

4E8

B # 1-



%
#

7

&!
-

/
4?=@ == 5 ==!

C

# 7 8

9

"

$ ;
% # F<

= ?
%
-

$ : B +

(

<

"

/

'#

-

$
8

'

+

+

+

!

+
B

3

)

@

%
@ 4 54

?

3
3

(

&
!

!

B

#

#

(& -

"