Uji Aktivitas Koagulan Ekstrak Etanol Daun Kelor (Moringa oleifera Lam.) Secara In Vitro Dan In Vivo
UJI AKTIVITAS KOAGULAN EKSTRAK ETANOL DAUN KELOR
(Moringa oleifera Lam.) SECARA IN VITRO DAN IN VIVO
ABSTRAK
Hemostatis merupakan proses penghentian perdarahan secara spontan pada
pembuluh darah, yang terkait dengan trombosit dan faktor pembekuan darah.
Beberapa gangguan hemostatis dapat menyebabkan meningkatnya waktu
perdarahan dan pembekuan darah, di antaranya adalah koagulopati, hemofilia dan
penyakit Von Willebrand. Pengobatan yang dapat dilakukan adalah dengan
mempersingkat waktu perdarahan dan waktu koagulasi darah yang terkait dengan
faktor pembekuan darah. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas
koagulan ekstrak etanol daun kelor (Moringa oleifera Lam.) secara in vitro
dengan parameter waktu koagulasi darah dan bentuk sel darah yang membeku,
serta in vivo dengan parameter waktu perdarahan.
Percobaan in vitro dilakukan dengan metode Lee-White, terdiri dari 4
kelompok, yaitu kelompok 1 kontrol negatif yaitu darah segar, kelompok 2 darah
dan EDTA 15%, kelompok 3 darah dan ekstrak etanol daun kelor konsentrasi 1%
dosis 100μl, dan kelompok 4 darah, EDTA 15% dan ekstrak etanol daun kelor 1%
dosis 100μl. Selanjutnya dilakukan percobaan in vitro dengan metode Eustrek,
spesimen darah hasil metode Lee-White diambil dan dibuat sediaan hapusan darah
tipis, kemudian diamati di mikroskop dengan perbesaran 10x10 dan 10x100.
Percobaan in vivo dilakukan dengan metode Duke. Perlakuan yang digunakan
terdiri dari 5 kelompok, yaitu kelompok 1 kontrol negatif digunakan CMC-Na
0,5% dosis 1% BB, kelompok 2 kontrol positif digunakan asam traneksamat 10%
dosis 94,5 mg/KgBB, kelompok 3, 4, dan 5 merupakan kelompok uji digunakan
ekstrak etanol daun kelor dengan dosis 100, 150 dan 200 mg/KgBB diberikan
pada tikus jantan yang telah diinduksi dengan heparin 1 jam sebelumnya dengan
konsentrasi 100 IU/ml, dosis 450 IU/KgBB. Data hasil pengukuran dianalisis
dengan menggunakan ANOVA satu arah dan dilanjutkan dengan uji Post Hoc,
yaitu LSD dan Tukey.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun
kelor pada percobaan in vitro mampu membentuk bekuan darah dalam waktu 1.9
± 1,11 menit dan secara signifikan lebih cepat bila dibandingkan dengan waktu
koagulasi darah normal (p > 0,05), selain itu juga mampu membentuk bekuan
darah pada perlakuan darah, EDTA dan ekstrak etanol daun kelor pada menit ke
28,8 ± 5,54 bila dibandingkan dengan perlakuan darah dan EDTA yang tidak
membeku selama 120 menit (p < 0,05). Pengamatan sel darah secara in vitro
menunjukkan adanya perlekatan antara sel yang satu dengan yang lain. Pada
percobaan in vivo, ekstrak etanol daun kelor yang paling baik dalam
mempersingkat waktu perdarahan setelah diinduksi dengan heparin adalah dosis
200 mg/KgBB, yang berbeda signifikan dengan dosis 100, 150 mg/KgBB dan
kontrol negatif (p < 0,05), dan memiliki efek yang sama dengan asam traneksamat
(p > 0,05).
Kata Kunci: daun kelor (Moringa oleifera Lam.), hemostatis, Lee-White, Duke,
Eustrek, waktu koagulasi, waktu perdarahan.
vi
Universitas Sumatera Utara
COAGULANT ACTIVITY TEST OF ETHANOLIC EXTRACT OF
HORSE RADISH LEAVES (Moringa oleifera Lam.) USING
IN VITRO AND IN VIVO METHODS
ABSTRACT
Haemostatis is a spontaneus stop for bleeding process at blood vessels,
related to trombocyte and blood coagulation factors. Some of haemostatis
disorders that could prolonged blood coagulation and bleeding time are
coagulopathy, haemophilia, and Von Willebrand disease. Medication that could be
done is to shortened blood coagulation time and bleeding time that interconnected
with blood coagulation factors. The purpose of this research is to find out
coagulation activity of ethanolic extract of horse radish tree in in vitro with blood
coagulation and morphology of coagulation cells as the parametre, and in vivo
with bleeding time as the parametre.
In in vitro using Lee-White methods, the treatments are divided in 4
groups. First group is fresh blood as negative control group, second group is blood
and EDTA 15% group, third group is blood and ethanolic extract of horse radish
leaves (Moringa oleifera Lam.) 1% dose 100 μl group, and fourth group is blood,
EDTA 15% and ethanolic extract of horse radish leaves 1% dose 100 μl group.
Next, in vitro using Eustrek methods, blood speciment from Lee-White methods
was taken, wipe blood preparation was made and examined under the microscope
with 10 x 10 and 10 x 100 zoom times. In in vivo using Duke methods, there are 5
groups. First group is CMC-Sodium 0.5% dose 1% B/W as negative control
group, second group is tranexamic acid 10% dose 94.5 mg/KgBB as positive
control group, third, fourth and fifth group used ethanolic extract of horse radish
leaves in various doses, 100, 150 and 200 mg/KgBB as test group, were given to
male rat that were induced with Heparin concentration 100 IU/ml dose 450
IU/KgBB an hour before. Data from both methods are analyzed with one way
ANOVA and continued with Post Hoc test, are LSD and Tukey.
Result of this research shows that ethanolic extract of horse radish leaves
(Moringa oleifera Lam.) can shortened blood coagulation time in in vitro in
minute 1.9 ± 1.11 and significantly different if it is compared with normal
coagulation time (p < 0.05). Besides, it can form blood clot in blood, EDTA and
ethanolic extract of horse radish leaves group in minute 28.8 ± 5.54 if it is
compared with blood and EDTA that did not form any clot in 120 minutes (p <
0.05). In vitro examination of blood cell shows that there is a presence of adhesion
between one cell and another. In in vivo, the best dose that could shortened
bleeding time induced by heparin, 2 hours after treatment is 200 mg/KgBB that
significantly different with dose 100, 150 mg/kgBB and negative control group (p
< 0.05), and has the same effect with tranexamid acid (p > 0.05).
Keyword: horse radish leaves (Moringa oleifera Lam.), haemostatis, Lee-White,
Duke, Eustrek, coagulation time, bleeding time.
vii
Universitas Sumatera Utara
(Moringa oleifera Lam.) SECARA IN VITRO DAN IN VIVO
ABSTRAK
Hemostatis merupakan proses penghentian perdarahan secara spontan pada
pembuluh darah, yang terkait dengan trombosit dan faktor pembekuan darah.
Beberapa gangguan hemostatis dapat menyebabkan meningkatnya waktu
perdarahan dan pembekuan darah, di antaranya adalah koagulopati, hemofilia dan
penyakit Von Willebrand. Pengobatan yang dapat dilakukan adalah dengan
mempersingkat waktu perdarahan dan waktu koagulasi darah yang terkait dengan
faktor pembekuan darah. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas
koagulan ekstrak etanol daun kelor (Moringa oleifera Lam.) secara in vitro
dengan parameter waktu koagulasi darah dan bentuk sel darah yang membeku,
serta in vivo dengan parameter waktu perdarahan.
Percobaan in vitro dilakukan dengan metode Lee-White, terdiri dari 4
kelompok, yaitu kelompok 1 kontrol negatif yaitu darah segar, kelompok 2 darah
dan EDTA 15%, kelompok 3 darah dan ekstrak etanol daun kelor konsentrasi 1%
dosis 100μl, dan kelompok 4 darah, EDTA 15% dan ekstrak etanol daun kelor 1%
dosis 100μl. Selanjutnya dilakukan percobaan in vitro dengan metode Eustrek,
spesimen darah hasil metode Lee-White diambil dan dibuat sediaan hapusan darah
tipis, kemudian diamati di mikroskop dengan perbesaran 10x10 dan 10x100.
Percobaan in vivo dilakukan dengan metode Duke. Perlakuan yang digunakan
terdiri dari 5 kelompok, yaitu kelompok 1 kontrol negatif digunakan CMC-Na
0,5% dosis 1% BB, kelompok 2 kontrol positif digunakan asam traneksamat 10%
dosis 94,5 mg/KgBB, kelompok 3, 4, dan 5 merupakan kelompok uji digunakan
ekstrak etanol daun kelor dengan dosis 100, 150 dan 200 mg/KgBB diberikan
pada tikus jantan yang telah diinduksi dengan heparin 1 jam sebelumnya dengan
konsentrasi 100 IU/ml, dosis 450 IU/KgBB. Data hasil pengukuran dianalisis
dengan menggunakan ANOVA satu arah dan dilanjutkan dengan uji Post Hoc,
yaitu LSD dan Tukey.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun
kelor pada percobaan in vitro mampu membentuk bekuan darah dalam waktu 1.9
± 1,11 menit dan secara signifikan lebih cepat bila dibandingkan dengan waktu
koagulasi darah normal (p > 0,05), selain itu juga mampu membentuk bekuan
darah pada perlakuan darah, EDTA dan ekstrak etanol daun kelor pada menit ke
28,8 ± 5,54 bila dibandingkan dengan perlakuan darah dan EDTA yang tidak
membeku selama 120 menit (p < 0,05). Pengamatan sel darah secara in vitro
menunjukkan adanya perlekatan antara sel yang satu dengan yang lain. Pada
percobaan in vivo, ekstrak etanol daun kelor yang paling baik dalam
mempersingkat waktu perdarahan setelah diinduksi dengan heparin adalah dosis
200 mg/KgBB, yang berbeda signifikan dengan dosis 100, 150 mg/KgBB dan
kontrol negatif (p < 0,05), dan memiliki efek yang sama dengan asam traneksamat
(p > 0,05).
Kata Kunci: daun kelor (Moringa oleifera Lam.), hemostatis, Lee-White, Duke,
Eustrek, waktu koagulasi, waktu perdarahan.
vi
Universitas Sumatera Utara
COAGULANT ACTIVITY TEST OF ETHANOLIC EXTRACT OF
HORSE RADISH LEAVES (Moringa oleifera Lam.) USING
IN VITRO AND IN VIVO METHODS
ABSTRACT
Haemostatis is a spontaneus stop for bleeding process at blood vessels,
related to trombocyte and blood coagulation factors. Some of haemostatis
disorders that could prolonged blood coagulation and bleeding time are
coagulopathy, haemophilia, and Von Willebrand disease. Medication that could be
done is to shortened blood coagulation time and bleeding time that interconnected
with blood coagulation factors. The purpose of this research is to find out
coagulation activity of ethanolic extract of horse radish tree in in vitro with blood
coagulation and morphology of coagulation cells as the parametre, and in vivo
with bleeding time as the parametre.
In in vitro using Lee-White methods, the treatments are divided in 4
groups. First group is fresh blood as negative control group, second group is blood
and EDTA 15% group, third group is blood and ethanolic extract of horse radish
leaves (Moringa oleifera Lam.) 1% dose 100 μl group, and fourth group is blood,
EDTA 15% and ethanolic extract of horse radish leaves 1% dose 100 μl group.
Next, in vitro using Eustrek methods, blood speciment from Lee-White methods
was taken, wipe blood preparation was made and examined under the microscope
with 10 x 10 and 10 x 100 zoom times. In in vivo using Duke methods, there are 5
groups. First group is CMC-Sodium 0.5% dose 1% B/W as negative control
group, second group is tranexamic acid 10% dose 94.5 mg/KgBB as positive
control group, third, fourth and fifth group used ethanolic extract of horse radish
leaves in various doses, 100, 150 and 200 mg/KgBB as test group, were given to
male rat that were induced with Heparin concentration 100 IU/ml dose 450
IU/KgBB an hour before. Data from both methods are analyzed with one way
ANOVA and continued with Post Hoc test, are LSD and Tukey.
Result of this research shows that ethanolic extract of horse radish leaves
(Moringa oleifera Lam.) can shortened blood coagulation time in in vitro in
minute 1.9 ± 1.11 and significantly different if it is compared with normal
coagulation time (p < 0.05). Besides, it can form blood clot in blood, EDTA and
ethanolic extract of horse radish leaves group in minute 28.8 ± 5.54 if it is
compared with blood and EDTA that did not form any clot in 120 minutes (p <
0.05). In vitro examination of blood cell shows that there is a presence of adhesion
between one cell and another. In in vivo, the best dose that could shortened
bleeding time induced by heparin, 2 hours after treatment is 200 mg/KgBB that
significantly different with dose 100, 150 mg/kgBB and negative control group (p
< 0.05), and has the same effect with tranexamid acid (p > 0.05).
Keyword: horse radish leaves (Moringa oleifera Lam.), haemostatis, Lee-White,
Duke, Eustrek, coagulation time, bleeding time.
vii
Universitas Sumatera Utara