Uji Aktivitas Antikejang Ekstrak Etanol Daun Titanus (Leea aequata L.) Terhadap Ileum Marmut (Cavia cobaya) Terisolasi Secara In Vitro

Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan

53

Universitas Sumatera Utara

`Lampiran 2. Ethical Clearence

54

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 3. Bagan kerja penelitian
1. Pembuatan serbuk simplisia, karakterisasi simplisia dan skrining fitokimia
Daun Titanus
Dicuci dari pengotor sampai bersih
Ditiriskan lalu ditimbang berat basah
Disortasi kering
Ditimbang berat kering
Simplisa
Dihaluskan

Serbuk Simplisia

Skrinning Fitokimia

Karakterisasi Simplisia

- Penetapan kadar air

- Pemeriksaan alkaloid

- Penetapan kadar sari larut air

- Pemeriksaan glikosida

- Penetapan kadar sari

- Pemeriksaan glikosida

larut etanol

antrakuinon

- Penetapan kadar abu

- Pemeriksaan saponin

total

- Pemeriksaan flavonoid

- Penetapan kadar abu
tidak

- Pemeriksaan tanin

larut

55

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 3. (Lanjutan)
2. Pembuatan ekstrak etanol daun titanus (EEDT)
Serbuk simplisia
daun titanus
Dimasukkan dalam sebuah bejana
Ditambahkan sebanyak 75 bagian
etanol 96%
Ditutup
Dibiarkan selama 5 hari terlindung
dari cahaya sambil diaduk
Diperas

Maserat

Ampas
Dicuci

ampas

dengan etanol
96%, disaring
hingga diperoleh
Maserat

100 bagian

Dipindahkan kedalam bejana tertutup
Dibiarkan ditempat sejuk dan terlindung
cahaya selama 2 hari
Dienap tuangkan atau disaring
Maserat
Dipekatkan dengan rotary evaporator pada
suhu tidak lebih dari 40o C

Ekstrak etanol kental

56

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 3. (Lanjutan)
3.Bagan kerja pengukuran kontraksi ileum marmut terisolasi
Marmut
Didislokasi tulang belakang
Preparasi organ

Ekulibrasi selama 45 menit
(diganti larutan tyrode setiap 15 menit)

Tahapan pengujian

Pengujian kontraksi

Pengujian efek

Pengujian efek

seri konsentrasi

relaksasi ekstrak

relaksasi Atropin

Asetilkolin terhadap

etanol daun Titanus

Sulfat pada kontraksi

otot polos ileum

pada kontraksi otot

otot polos ileum

polos ileum melalui

melalui induksi

induksi Asetilkolin

Asetilkolin

57

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 4. Gambar sediaan daun Titanus (Leea aequata L.) di pasaran

Serbuk daun titanus

sediaan daun titanus

58

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 5. Gambar bagian makroskopik tumbuhan dari daun titanus
(Leea aequata L.)

Tumbuhan titanus (Leea aequata L.)

Daun titanus (Leea aequata L.)

59

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 6. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun titanus

Simplisia daun titanus

60

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 7. Gambar hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun
titanus(perbesaran 10x40)

Keterangan :
1. Rambut penutup
2. Rambut kelenjar
3. Kristal kalsium oxalat bentuk jarum
4. Stomata tipe parasitik

(Malinda, 2015).

61

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 8. Data pengujian kontraksi seri konsentrasi asetilkolin
terhadap otot polos ileum

Konsetrasi

% Kontraksi ileum *

Asetilkolin

1

2

3

Rerata

SEM

(M)
1x10-8

1.1111

2.1052

1.1765

1.464267

0.32

3x10-8

8.8889

6.3158

11.7647

8.9898

1.57

1x10-7

16.6667

10.5262

21.1765

16.12313

3.09

3x10-7

22.2222

14.7368

28.2353

21.73143

3.90

1x10-6

28.8889

21.0526

38.8235

29.58833

5.14

3x10-6

43.3333

29.4737

51.7647

41.5239

6.50

1x10-5

66.6667

35.7895

61.1765

54.54423

9.51

3x10-5

82.2222

68.4211

74.1176

74.9203

4.00

1x10-4

82.2222

76.8421

76.4706

78.51163

1.86

3x10-4

94.4444

81.0526

81.1765

85.55783

4.44

1x10-3

93.3333

82.1053

81.1765

85.53837

3.91

3x10-3

100,0000

100,0000

100,000

100,0000

0

Keterangan :
* = %relaksasi dihitung dari titik kontraksi maksimal yang dicapai
oleh pemberian

asetilkolin

62

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 8. (Lanjutan)
2. Hitungan EC80 asetilkolin

Log EC80 =[

80 – Y1
Y2-Y1

x�x2-x1� ]+ x1

Keterangan:
X1 : Log. konsentrasi dengan respons tepat di bawah 80%
X2 : Log. konsentrasi dengan respons tepat di atas 80%
Y1 : %respons tepat di bawah 80%
Y2 : %respons tepat di atas 80%

80 – 66,6667
=[
x�-5 - (-4,5�] + (-4,5)
82,2222-66,6667

a. Log EC80
Log EC80
EC80

= -4,9285
= 1,1789 x 10-5 M
=[

b.Log EC80
Log EC80
EC80

81,0526-76,8421

x�-4 - (-3,5)�] + (-3,5)

= -3,875
= 1,3335 x 10-5 M
80 – 76,4706
=[
x�-3,5 - (-3)�] + (-3)
81,1765-76,4706

c.Log EC80
Log EC80
EC80

80 – 76,8421

= -3,3749
= 4,2179 x 10-4 M

Rerata EC80 =

1,1789 x 10-5 M+ 1,3335 x 10-5 M+ 4,2179 x 10-4 M
3

= 1,889 x 10-4 M

63

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 9. Data efek relaksasi ekstrak etanol daun titanus pada kontraksi ileum
melalui induksi asetilkolin 1,889x10-4 M
Dosi
% Relaksasi Ileum *

s

Rera

ekst

SEM

ta

rak
(mg/

1

2

3

4

5

6

ml)
0,5
28.3018

23.9130

37.5000

26.4705

38.4615

20.0000

1
84.9056

65.2173

60.7142

35.2941

76.9230

34.2857

1,5
96.2264

78.2608

83.9285

85.2941

102.7581

85.7124

2
111.3207

86.9565

94.6428

105.8823

111.5384

95.7124

2,5
113.2075

104.3478

107.1428

111.7647

115.3846

107.1428

3
115.0943

106.5217

110.7142

111.7647

119.2307

111.4285

3,5
115.0943

106.5217

117.8571

117.6470

119.2307

112.8571

4
115.0943

106.5217

117.8571

117.6470

119.2307

114.2857

29.1

3.03

078

02

59.5

8.57

567

29

88.6

3.68

967

12

101.

4.11

0089

10

109.

1.73

8317

6862

112.

1.75

4590

73

114.

1.91

8680

00

115.

1.87

1061

44

Keterangan :
* = %relaksasi dihitung dari titik kontraksi maksimal yang dicapai oleh pemberian
asetilkolin 1,889x10-4 M

64

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 10. Data efek relaksasi atropin sulfat pada kontraksi ileum melalui
induksi asetilkolin 1,889x10-4 M.

Konsen
trasi
Atropin
Sulfat
(M)

% Relaksasi Ileum *
Rerata

SEM

1

2

3

4

5

6

1x10-8

24.5238

17.6470

27.7777

18,0000

44.1176

35.8974

27.993

4.2484

3x10-8

41.5094

32.3529

44.4444

26,0000

50,0000

46.1538

40.076

3.7164

1x10-7

54.7169

47.0588

75,0000

38,0000

58.8235

53.8461

54.574

5.0564

3x10-7

62.2641

47.0588

83.3333

50,0000

61.7647

56.4102

60.138

5.2692

1x10-6

66.0377

102.9411

87.5000

52,0000

76.4705

76.9230

76.978

7.1383

3x10-6

84.9056

102.9411

113.8888

110,0000

88.2352

133.333

105.55

7.2894

1x10-5

116.981

107.3529

116.6666

116,0000

144.117

133.333

122.40

5.5402

3x10-5

116.981

111.7642

116.6666

116,0000

150,000

133.333

124.12

5.9994

Keterangan :
* = %relaksasi dihitung dari titik kontraksi maksimal yang dicapai
oleh pemberian

asetilkolin 1,889x10-4 M

65

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 11. Data AUC efek relaksasi ekstrak etanol daun Titanus
pada kontraksi
ileum melalui induksi
-4
asetilkolin 1,889 x 10 M
AUC*
Marmut

Total
1

2

3

4

5

6

7

56.6037

90.566

103.7736

112.2641

114.1509

115.0943

115.0943

707.5469

44.5652

71.7391

82.6087

95.6522

105.4348

106.5217

106.5217

613.0434

49.1071

72.3214

89.2857

100.8928

108.9285

114.2857

117.8571

652.6783

30.8823

60.2941

95.5882

108.8235

111.7647

114.7059

117.647

639.7057

57.6923

89.8406

107.1483

113.4615

117.3077

119.2307

119.2307

723.9118

27.1429

59.9991

90.7124

101.4276

109.2857

112.1428

113.5714

614.2819

44.33225

74.12672

94.85282

105.4203

111.1454

113.6635

114.987

658.528

5.254547

5.528915

3.783095

2.91511

1.716339

1.711067

1.888552

19.22928

1

2

3

4

5

6

Rerata

SEM

Keterangan :
* = %relaksasi dihitung dari titik kontraksi maksimal yang dicapai oleh pemberian
asetilkolin 1,889x10-4 M

66

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 12. Data AUC efek relaksasi atropin pada kontraksi ileum melalui
-4
induksi asetilkolin 1,889 x 10 M

AUC*
Marmut

Total
1

2

3

4

5

6

7

33.0166

48.11315

58.4905

64.1509

75.47165

100.9434

116.9811

497.1673

24.99995

39.70585

47.0588

74.99995

102.9411

105.1470

109.5586

504.4113

36.11105

59.7222

79.16665

85.41665

100.6944

115.2777

116.6666

593.0553

22.0000

32.0000

44.0000

51.0000

81.0000

113.0000

116.0000

459.0000

47.0588

54.41175

60.2941

69.1176

82.35285

116.1764

147.0588

576.4703

41.0256

49.99995

55.12815

66.6666

105.1282

133.3333

133.3333

584.6151

27.19773

38.99216

48.16834

57.44752

73.74333

91.75742

101.0442

438.3507

3.87431

4.101204

5.082658

4.680845

5.328101

4.582553

5.748007

22.8700

1

2

3

4

5

6

Rerata

SEM

Keterangan :
* = %relaksasi dihitung dari titik kontraksi maksimal yang dicapai oleh pemberian
asetilkolin 1,889x10-4 M

67

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 13.Hasil uji korelasi efek relaksasi ekstrak etanol daun Titanus pada
kontraksi ileum melalui induksi asetilkolin 1,889 x 10-4 M
Correlations

Dosis
Dosis

Pearson Correlation

Relaksasi
1

Sig. (2-tailed)

Relaksasi

.891

**

.003

N

8

8

Pearson Correlation

**

1

.891

Sig. (2-tailed)

.003

N

8

8

**. Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).

68

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 14. Hasil uji-t independen nilai %relaksasi ekstrak etanol daun Titanus
2,5 mg/ml dengan nilai %relaksasi atropin sulfat 1 x 10-5M
terhadap kontraksi otot polos ileum oleh asetilkolin 1,889 x 10-4
M
Descriptives
%relaksasi
Sampel

Ach+EEDT

Statistic
Mean

Std. Error

105.420283 2.9151098

95% Confidence Interval Lower Bound
for Mean

Upper Bound

97.926755
112.913812

5% Trimmed Mean

105.516220

Median

105.125550

Variance

50.987

Std. Deviation

7.1405315

Minimum

95.6522

Maximum

113.4615

Range

17.8093

Interquartile Range

12.9808

Skewness
Kurtosis

-.172

.845

-1.864

1.741

Ach+Atropi

Mean

113.979633 4.5825526

n

95% Confidence Interval Lower Bound

102.199807

for Mean

125.759460

Upper Bound

5% Trimmed Mean

113.628665

Median

114.138850

Variance

125.999

Std. Deviation

11.2249156

Minimum

100.9434

Maximum

133.3333

Range

32.3899

Interquartile Range

16.3695

Skewness
Kurtosis

.924

.845

1.479

1.741

69

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 14. (lanjutan)
Tests of Normality
%relaksasi

a

Kolmogorov-Smirnov
Statistic
Sampel

Df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

Ach+EEDT

.212

6

.200

*

Ach+Atropin

.256

6

.200

*

Df

Sig.

.918

6

.489

.924

6

.532

a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.

Group Statistics
%relaksasi
Sampel

N

Mean

Std. Deviation

Std. Error Mean

Ach+EEDT

6

105.420283

7.1405315

2.9151098

Ach+Atropin

6

113.979633

11.2249156

4.5825526

Independent Samples Test
Levene's
Test for
Equality
of
Variance
s

t-test for Equality of Means
95% Confidence

Sig.
(2-

Mean

tailed Differenc

Samp

Equal

el

variance
s

T

df

)

Interval of the

Differenc

Difference

F

Sig.

.22

.64

-

1

8

1.57

8.559350

2 20.660760

6

0

3

- 5.431174

- 3.843288

10

.146

e

Std. Error

e

Lower

- 5.431174

Upper
- 3.542060
3

assume
d
Equal
variance
s not

-

8.47

1.57

7

.152

6

8.559350

2 20.961988

0

3

3

assume
d

70

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 15. Gambar alat organ bath

A

B

71

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 15. Lanjutan

C

D
Keterangan:
A = empat set organ bath volume 50,0 ml

C = transduser isometrik

B = termostat

D = computer

72

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 16. Gambar pola kontraksi dan relaksasi ileum marmut terisolasi
Gambar a. Pola kontraksi otot polos organ ileum terisolasi yang dikontraksi
dengan pemberian seri konsentrasi asetilkolin (10-8 – 3 x 10-3 M).

Gambar b. Pola relaksasi setelah pemberian seri konsentrasi ekstrak etanol daun
Titanus pada otot polos ileum terisolasi yang dikontraksi dengan
asetilkolin 1,889 x 10-5M.

73

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 16. (Lanjutan)
Gambar c.Pola relaksasi setelah pemberian seri konsentrasi atropin sulfat pada
otot polos ileum terisolasi yang dikontraksi dengan asetilkolin 1,889
x10-4 M.

Gambar d. Pola setelah pemberian Dimetil sulfoksida (DMSO) 0,2 % pada otot
polos ileum terisolasi yang dikontraksi dengan asetilkolin 1,889 x 10-5M.

74

Universitas Sumatera Utara