Potensi antibakteri fraksi kloroform etanol-asam asetat dari ekstrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri [Aleurites moluccana L. WILLD] terhadap Staphylococcus aureus - USD Repository

  

POTENSI ANTIBAKTERI FRAKSI KLOROFORM- ETANOL-ASAM

ASETAT DARI EKSTRAK ETANOL-ASAM ASETAT KULIT BATANG

KEMIRI [Aleurites moluccana (L.) Willd] TERHADAP Staphylococcus

aureus

  SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)

  Program Studi Ilmu Farmasi Oleh:

  P. Silih Widhiandhisti NIM : 038114069

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

  

Ketika satu pintu tertutup, ada pintu lain

yang terbuka. Namun, kita sering kali

hanya menyesali yang tertutup, sehingga

tak menyadari yang terbuka buat kita!

  (Alexander Graham Bell) Karya ini kupersembahkan untuk:

  Tuhan Yesus & Bunda Maria Bapak dan Ibuku yang terkasih Adikku dan keluarga besar Juga orang-orang yang tersisih dan terlupakan

  INTISARI Di Jawa, kulit batang kemiri ( Aleurites moluccana L. Willd ) digunakan untuk mengobati diare dan disentri. Penelitian ini termasuk penelitian eksperimental murni. Tujuannya untuk mengetahui fraksi aktif dalam ekstrak etanol kulit batang kemiri yang berpotensi sebagai antibakteri terhadap

  Staphylococcus aureus dan identitas fraksi aktif tersebut.

  Ekstraksi kulit batang kemiri dilakukan menggunakan pelarut etanol dengan metode remaserasi. Fraksinasi kulit batang kemiri menggunakan kromatografi kolom dengan pelarut kloroform-etanol-asam asetat. Uji potensi antibakteri dilakukan dengan menggunakan metode difusi sumuran untuk pemilihan fraksi aktif. Fraksi aktif ekstrak serbuk kulit batang kemiri diuji dengan bioautografi kontak untuk mengetahui potensinya terhadap S. aureus. Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dilakukan untuk mengetahui identitas senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri.

  Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi kloroform-etanol-asam asetat (90:5:5) merupakan fraksi aktif. Pada uji KLT diperoleh dugaan bahwa senyawa yang terkandung dalam fraksi aktifnya adalah alkaloid golongan indol. Pada pengujian dengan bioautografi kontak tidak menunjukkan adanya potensi antibakteri dari alkaloid.

  Kata kunci : Aleurites moluccana L. Willd, Staphylococcus aureus, ekstrak etanol, fraksi kloroform-etanol-asam asetat, kromatografi kolom, bioautografi kontak, KLT, alkaloid.

  

ABSTRACT

  In Java, Candelnut (Alleurites moluccana L. Willd) bark is used to cure diarrhea and dysentery. This experiment was pure experimental research. The purpose of this research is know antibacterial potency of chloroform-ethanol- acetic acid fraction from ethanol extract of candelnut bark againts Staphylococcus

  aureus and identity of the active fraction.

  Extraction of candelnut bark was done by remaseration method using ethanol. Fractionation of candelnut bark by Coloum Chromatography using a moving phase chloroform-ethanol-acetic acid. An antibacterial potency test was done by diffusion method to get active fraction. The active fraction of candelnut bark powder extract tested by contact bioautography method to know antibacterial potency againts S. aureus. Thin Layer Chromatography (TLC) method was done to know identity of substance that has antibacterial potency.

  The result shows that chloroform–ethanol–acetic acid (90:5:5) fractions is an active fraction. In TLC test, it is estimated that the active compound is indole alkaloida. Potential testing by using contact bioautography method does not show any antibacterial potency of alkaloid.

  Keywords : candelnut bark (Aleurites moluccana L. Willd), Staphylococcus

  aureus, ethanol extract, chloroform–ethanol–acetic acid fraction,

  Coloum Chromatography, contact bioautography, Thin Layer Chromatography, alkaloid.

  KATA PENGANTAR Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, atas berkat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul POTENSI ANTIBAKTERI FRAKSI KLOROFORM- ETANOL-

  

ASAM ASETAT DARI EKSTRAK ETANOL-ASAM ASETAT KULIT

BATANG KEMIRI [Aleurites moluccana (L.) Willd] TERHADAP

Staphylococcus aureus. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk

  memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) Program Studi Ilmu Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  Skripsi ini dapat berjalan dan diselesaikan dengan baik berkat bantuan, dukungan dan kerjasama dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin menyampaikan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada : 1.

  Ibu Rita Suhadi, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  2. Bapak Ign. Y. Kristio Budiasmoro, M.Si selaku dosen pembimbing yang telah meluangkan waktu untuk memberi bimbingan dan motivasi, terima kasih pak… 3. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku dosen penguji yang telah meluangkan waktu untuk menguji dan memberikan masukan, kritik dan saran kepada penulis.

  4. Ibu Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt selaku dosen penguji yang telah meluangkan waktu untuk menguji dan memberikan masukan, kritik dan saran kepada penulis.

  5. Bapak dan Ibu dosen Fakultas Farmasi yang telah membimbing saya selama saya belejar di Universitas Sanata Dharma.

  6. Segenap karyawan Universitas Sanata Dharma Yogyakarta khususnya karyawan Fakultas Farmasi yang telah membantu saya.

  7. Bapak dan Ibuku terkasih, terima kasih atas segala doa dan dukungan, kesabaran, semangat dan kasih sayang yang tiada habisnya sehingga skripsi ini dapat diselesaikan dengan baik.

  8. Adikku Mayang, terima kasih atas segala doa, dorongan, semangat dan dukungan yang selama ini telah diberikan.

  9. Keluarga besarku, terutama almarhum simbah putri, terima kasih atas restumu di alam sana.

  10. Teman dekat dan curhatku Nia, terimakasih atas pertemanan yang indah ini, aku berharap bisa abadi Ni….

  11. Maria Goretti, terima kasih sudah jadi temanku.

  12. Teman-temanku Essy, Fani, Hani, Endah, Dessy, Tata, yang senantiasa memberiku semangat, dan Wewen

  13. Teman seperjuangan di lab mikro Vian, Rosa, Tina, Nella, Devi, Oca, Titin dll, akhirnya kita lulus.

  DAFTAR ISI Halaman

  HALAMAN JUDUL ............................................................................ i HALAM PERSETUJUAN PEMBIMBING........................................... ii HALAMAN PENGESAHAN .............................................................. iii HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................ iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................ v

  INTISARI ............................................................................................. vi

  ABSTRACT ............................................................................................ vii

  KATA PENGANTAR .......................................................................... viii DAFTAR ISI ......................................................................................... xi DAFTAR TABEL .................................................................................. xv DAFTAR GAMBAR ............................................................................. xvi DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................... xvii

  BAB I. PENGANTAR ........................................................................... 1 A. Latar Belakang ........................................................................ 1 1. Permasalahan .................................................................... 3 2. Keaslian Penelitian ............................................................ 3 3. Manfaat Penelitian ............................................................ 4 B. Tujuan Penelitian ................................................................... 4 BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ................................................... 6

  1. Keterangan Botani ......................................................... 6 2.

  Pertelaan Morfologi ....................................................... 6 3. Kandungan kimia tanaman kemiri ................................ 7 4. Khasiat ........................................................................... 7 B. Alkaloid ................................................................................... 7 C. Staphylococcus aureus ............................................................ 8 D.

  Penyarian ................................................................................. 9 1.

  Cara Penyarian ............................................................... 9 2. Maserasi ........................................................................ 10 E. Metode Pengukuran Potensi Antibakteri ...............................

  12 F. Fraksinasi ...............................................................................

  13 1. Pengendapan ................................................................. 14 2. Ekstraksi pelarut-pelarut ............................................... 14 3. Destilasi ......................................................................... 15 4. Dialisis .......................................................................... 15 5. Elektroforesis ............................................................... 15 6. Kromatografi .............................................................. 16 G. Kromatografi Lapis Tipis ........................................................ 17 H. Bioautografi ............................................................................ 18 I. Landasan Teori ........................................................................ 20 J.

  Hipotesis ................................................................................. 21

  BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ............................................. 22

  B.

  Variabel Penelitian dan Definisi Operasional .........................

  22 1. Variabel Penelitian ......................................................... 22 2. Definisi Operasional ...................................................... 23 C. Bahan dan Alat Penelitian ....................................................... 24 1.

  Bahan ............................................................................. 24 2. Alat ................................................................................. 25 D. Tata Cara Penelitian ................................................................ 25 1.

  Identifikasi Tanaman ..................................................... 25 2. Pengumpulan Bahan ...................................................... 26 3. Pengeringan dan Pembuatan Serbuk ............................. 26 4. Identifikasi Kandungan Senyawa Aktif Kulit Batang

  Kemiri (Aleurites moluccana L. Willd) dengan Uji Tabung ........................................................................... 26 5. Ekstraksi Kulit Batang Kemiri ........................................ 27 6. Preparasi Sampel, Fase diam, dan Fase gerak Kromatografi Kolom .................................................

  7. Fraksinasi Ekstrak Etanol-Asam Asetat dengan Kromatografi Kolom...................................................

  8. Uji Potensi Antibakteri Tiap Fraksi dan Pemilihan Fraksi Aktif.................................................................

  9. Uji Kualitatif Fraksi Aktif dengan Metode KLT .....................................................................................

  28

  29

  30

  30

  10. Uji Potensi Senyawa Aktif Dari Fraksi Aktif Terhadap

  

Staphylococcus aureus dengan Metode Bioautografi

  31 Kontak ............................................................................

  E.

  Analisis Hasil ……………………………………………….. 34

  BAB IV. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN …………….. 36 A. Identifikasi Tanaman ……………………………………….. 36 B. Pengumpulan Bahan ………………………………………... 36 C.

  37 Pengeringan dan Pembuatan Serbuk ………………………...

  D.

  Identifikasi Kandungan Senyawa Aktif Kulit Batang Kemiri (Aleurites moluccana L. Willd) dengan Uji Tabung

  38 ...................................................................................................

  E.

  Ekstraksi Kulit Batang Kemiri ................................................. 39 F. Preparasi Sampel, Fase diam, dan Fase gerak Kromatografi Kolom .....................................................................................

  42 G. Fraksinasi Ekstrak Etanol-Asam Asetat dengan Kromatografi

  43 Kolom ......................................................................................

  H.

  Uji Potensi Antibakteri Tiap Fraksi dan Pemilihan Fraksi

  45 Aktif..........................................................................................

  I. Uji Kualitatif Fraksi Aktif dengan Metode KLT

  48 .................................................................................................. J.

  Uji potensi antibakteri senyawa aktif dari fraksi aktif (fraksi V) terhadap Staphylococcus aureus dengan metode

  BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................... 57 A. Kesimpulan ............................................................................. 57 B. Saran ....................................................................................... 57 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................ 58 LAMPIRAN ........................................................................................... 61 BIOGRAFI PENULIS.............................................................................

  70

  DAFTAR TABEL Halaman

  39 Tabel I. Hasil uji tabung serbuk kulit batang kemiri .......................... Tabel II. Rerata diameter zona hambat fraksi kloroform-etanol-asam asetat dari ekstrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri terhadap Staphylococcus aureus.............................................

  47 Tabel III. Hasil identifikasi senyawa alkaloid kuaterner fraksi kloroform:etanol:asam asetat (90:5:5) dari ekstrak etanol- asam asetat dengan fase gerak kloroform : etanol : asam asetat (60:20:20)......................................................................

  49 Tabel IV. Hasil identifikasi senyawa alkaloid tersier fraksi kloroform:etanol:asam asetat (90:5:5) dari ekstrak etanol- asam asetat dengan fase gerak kloroform:etanol:asam asetat (60:20:20)...................................................................

  51 Tabel V. Hasil Uji potensi antibakteri fraksi aktif (fraksi V) terhadap

  

Staphylococcus aureus dengan metode Bioautografi

Kontak.....................................................................................

  56

  DAFTAR GAMBAR Halaman

  Gambar 1. Skema penelitian potensi antibakteri fraksi kloroform- etanol-asam asetat dari ekatrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri terhadap Staphylococcus aureus

  34 ................................................................................................ Gambar 2. Kromatogram alkaloid kuaterner fraksi aktif [kloroform : etanol : asam asetat (90 : 5 : 5)] dari ekstrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri (Aleurites moluccana L. Willd).....................................................................................

  50 Gambar 3. Kromatogram alkaloid tersier fraksi aktif [kloroform : etanol : asam asetat (90 : 5 : 5)] dari ekstrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri (Aleurites moluccana L.

  52 Willd)..................................................................................... Gambar 4. Reaksi piridin dengan pereaksi CAS .................................... 53 Gambar 5. Reaksi pembentukan senyawa kompleks oleh alkaloid indol

  54 dengan pereaksi CAS.............................................................

  54 Gambar 6. Struktur gugus amin pada alkaloid tersier dan kuartener .

  DAFTAR LAMPIRAN Halaman

  Lampiran 1. Surat Pengesahan Determinasi …………………………. 61 Lampiran 2. Foto Tanaman Kemiri [Aleurites moluccana (L.) Willd].... 62 Lampiran 3. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Hasil

  Pemisahan Kromatografi Kolom Terhadap

  Staphylococcus aureus Secara Difusi Sumuran

  63 ............................................................................................. Lampiran 4. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Piridin sebagai Kontrol

  Positif Terhadap Staphylococcus aureus Secara Difusi Sumuran .............................................................................

  64 Lampiran 5. Foto Hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Piridin dengan Fase Gerak Kloroform : Etanol : Asam Asetat 65 (60:20:20) ......................................................................... Lampiran 6. Foto Hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Alkaloid

  Tersier dengan Fase Gerak Kloroform : Etanol : Asam Asetat (60:20:20) ..............................................................

  66 Lampiran 7. Foto Hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Alkaloid Kuartener dengan Fase Gerak Kloroform : Etanol : Asam (60:20:20) ...........................................................................

  67 Lampiran 8. Hasil Uji Potensi Antibakteri Alkaloid Tersier Fraksi V [Kloroform : Etanol : Asam Asetat (60:20:20)] Kulit Batang Kemiri dengan Metode Bioautografi Kontak Terhadap Staphylococcus . aureus ....................................

  68 Lampiran 9. Hasil Uji Potensi Antibakteri Alkaloid Kuartener fraksi V [Kloroform : Etanol : Asam Asetat (60:20:20)] Kulit Batang Kemiri Dengan Metode Bioautografi Kontak

  69 Terhadap Staphylococcus aureus .....................................

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Staphylococcus aureus bersifat patogen dan invasif menghasilkan enzim

  koagulase dan pigmen kuning yang bersifat hemolitik. Bakteri ini merupakan patogen utama bagi manusia. Hampir setiap orang mengalami infeksi oleh

  S.aureus di sepanjang hidupnya, bervariasi beratnya (Jawetz et al., 1996). Saat ini, S.aureus merupakan bakteri yang telah resisten terhadap antibiotik golongan

  penisilin (MRSA) karena infeksi nosokomial yang terjadi di rumah sakit (Anonim, 2006).

  Kemiri (Aleurites moluccana L. Willd) merupakan tanaman yang dapat tumbuh di Indonesia. Tanaman ini tergolong dalam familia Euphorbiaceae. Di Jawa, kulit batang kemiri digunakan untuk mengobati diare dan disentri (Anonim, 1995).

  Senyawa alam digunakan sebagai obat atau untuk memproduksi dan menemukan obat baru (Samuelsson, 1999). Berbagai macam khasiat dari kemiri dikarenakan kandungan senyawa-senyawa aktif yang dimilikinya antara lain polifenol, tanin, alkaloid (Arief, 1996). Kandungan senyawa aktif tersebut, ada yang bersifat polar dan non polar (Anonim, 1986).

  Pada penelitian ini dilakukan pengujian potensi antibakteri fraksi kloroform- etanol-asam asetat dari ekstrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri terhadap lanjutan dari penelitian terdahulu (Melinda, 2005) tentang potensi antibakteri fraksi etil asetat dan fraksi etanol kulit batang kemiri terhadap Staphylococcus

  

aureus dan diketahui bahwa fraksi etanol kulit batang kemiri memiliki potensi

antibakteri terhadap S.aureus.

  Kulit batang kemiri mengandung senyawa tanin (Duke, 1999). Walaupun demikian, menurut penelitian terdahulu (Melinda, 2005) diduga fraksi aktif dari fraksi etanol dan fraksi etil asetat kulit batang kemiri yang berpotensi sebagai antibakteri adalah alkaloid golongan piridin-piperidin dengan KHM fraksi etil asetat 10 mg/ml. Alkaloid merupakan senyawa yang bersifat non polar, larut

  a dalam etanol (Anonim, 1986 ), oleh sebab itu, digunakan pelarut etanol.

  Biasanya alkaloid diperoleh dengan cara maserasi (Robinson, 1995). Kromatografi kolom digunakan untuk fraksinasi ekstrak etanol-asam asetat yang didapat. Ada 3 macam fase gerak yang digunakan yakni kloroform-etanol (95:5) (Cordell, 1981), kloroform-etanol-asam asetat (90:8:2) dan kloroform-etanol-asam asetat (90:5:5) yang didapat dari orientasi. Digunakan 3 macam fase gerak dengan perbandingan yang berbeda-beda bertujuan agar jumlah senyawa yang terkandung dalam tiap fraksi menjadi lebih sedikit sehingga dapat diketahui fase gerak yang lebih optimal untuk menyari senyawa antibakteri terhadap S.aureus.

  Metode yang digunakan untuk uji potensi antibakteri adalah metode difusi sumuran. Sedangkan metode yang digunakan untuk uji senyawa aktif dari fraksi aktif hasil pemisahan pada KLT digunakan metode bioautografi kontak. Pembanding yang digunakan adalah piridin hasil sintesis karena menurut ekstrak etanol kulit batang kemiri yang berpotensi sebagai antibakteri terhadap S.aureus adalah alkaloid golongan piridin-piperidin.

  Berdasarkan keterangan di atas, maka dapatlah dilakukan penelitian untuk mengetahui beberapa fraksi aktif dalam fraksi kloroform-etanol-asam asetat hasil kromatografi kolom dari ekstrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri yang berperan sebagai antibakteri terhadap S.aureus.

  1. Permasalahan a.

  Apakah fraksi kloroform : etanol (95:5), fraksi kloroform : etanol : asam asetat (90:8:2), dan fraksi kloroform : etanol : asam asetat (90:5:5) dari ekstrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri mempunyai potensi antibakteri terhadap S.aureus? b.

  Fraksi mana yang terdapat dalam ekstrak etanol-asam asetat serbuk kulit batang kemiri yang aktif terhadap S.aureus? c.

  Identitas senyawa apakah yang terdapat dalam fraksi aktif antibakteri

  S.aureus secara KLT? d.

  Apakah dengan metode bioautografi kontak alkaloid yang terdapat dalam fraksi aktif mempunyai potensi antibakteri terhadap S.aureus?

  2. Keaslian Penelitian

  Sejauh penelusuran dan informasi yang diperoleh penulis, penelitian mengenai potensi antibakteri fraksi kloroform-etanol-asam asetat dari ekstrak pernah dilakukan di Universitas Sanata Dharma.

3. Manfaat Penelitian

  a. Manfaat Praktis : Memberikan informasi kepada masyarakat tentang fraksi manfaat kulit batang kemiri yang berkhasiat untuk alternatif pengobatan tradisional sebagai antibakteri terhadap S.aureus.

  b. Manfaat Teoritis : Menambah informasi untuk mengembangkan ilmu pengetahuan khususnya di bidang kesehatan tentang senyawa aktif dalam kulit batang kemiri yang berpotensi sebagai antibakteri terhadap S.aureus yang diharapkan dapat dijadikan acuan untuk penelitian selanjutnya.

B. Tujuan Penelitian

  Tujuan penelitian ini adalah : a.

  Mengetahui apakah fraksi kloroform : etanol (95:5), fraksi kloroform : etanol : asam asetat (90:8:2), dan fraksi kloroform : etanol : asam asetat (90:5:5) dari ekstrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri mempunyai potensi antibakteri terhadap S.aureus.

  b.

  Mengetahui fraksi mana yang terdapat dalam ekstrak etanol-asam asetat kulit batang kemiri yang aktif terhadap S.aureus.

  c.

  Mengetahui identitas senyawa apakah yang terdapat dalam fraksi aktif d.

  Mengetahui apakah dengan metode bioautografi kontak alkaloid yang terdapat dalam fraksi aktif mempunyai potensi antibakteri terhadap S.aureus.

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Deskripsi Tanaman

  1. Keterangan Botani

  Kemiri (Aleurites moluccana L. Willd) termasuk dalam suku

  Euphorbiaceae dengan sinonim Aleurites triloba Forst. Di Sumatra, kemiri

  disebut kereh, kumili, hambiri, kembiri, gambiri, buwa, kare, buwah keras, buwah tondeh, buwa hare, dudulaa, sapiri; masyarakat Jawa biasa menyebut kemiri dengan nama kemiri, muncang, derekan, pidekan; di Nusatenggara disebut derekan, kamere, kawilu; di Sulawesi disebut bintalo, dan di Maluku disebut kamili, buah kareh, kemiling, saketa (Anonim, 1995).

  2. Pertelaan Morfologi

  Pohon dengan tinggi 25-30 m, batang tegak, berkayu, permukaan banyak lentisel, percabangan simpodial, pada batang sebelah atas terdapat tonjolan bekas melekatnya tangkai daun, coklat. Daun tunggal, berseling, lonjong, tepi rata, bergelombang, ujung runcing, pangkal tumpul, pertulangan menyirip, permukaan atas licin, bawah halus, panjang 18-25 cm, lebar 7-11 cm, tangkai silindris, panjang 10-15 cm, hijau. Bunga majemuk, bentuk malai, berkelamin dua, diujung cabang, tangkai silindris, panjang 2-3, 5 cm, hijau kecoklatan, kelopak lonjong, permukaan bersisik rapat, hijau, benang sari jumlah 5-8 buah, tangkai sari bulat, merah, kepala sari bentuk kerucut, merah, putik

  ± 7 cm, lebar ± 6,5 cm, masih muda hijau setelah tua coklat, berkeriput. Biji bulat, berkulit keras, berusuk atau beralur, diameter ± 3,5 cm, berdaging, berminyak, putih kecoklatan. Akar tunggang, coklat (Hutapea dkk, 1993).

  3. Kandungan kimia tanaman kemiri

  Kulit batang kemiri mengandung senyawa tanin (Duke, 1999). Fraksi etanol dan fraksi etil asetat kulit batang kemiri mengandung alkaloid piridin– piperidin (Melinda, 2005). Kulit batang kemiri mengandung senyawa acetylalueritolic acid (Kardono dkk, 2003).

  4. Khasiat

  Di Jawa, kulit batang kemiri digunakan untuk mengobati diare dan disentri (Duke, 1999). Kulit batang kemiri dapat digunakan untuk obat berak darah, sariawan dan mencret (Anonim, 1986

  

b

).

B. Alkaloid

  Alkaloid merupakan metabolit sekunder yang memiliki satu atau lebih atom nitrogen di dalam strukturnya dan biasanya atom ini terdapat dalam cincin heterosiklik. Pasangan elektron bebas pada atom nitrogen menyebabkan alkaloid bersifat basa. Kerana sifat basanya, alkaloid dapat bereaksi dengan asam mineral membentuk garam yang larut dalam air dan berbentuk alkaloid bebas oleh adanya basa kuat. Alkaloid memiliki aktivitas fisiologi tertentu dan banyak digunakan

  Biasanya alkaloid diperoleh dengan cara maserasi menggunakan air yang telah diasamkan sehingga akan melarutkan garam alkaloid, atau dengan membasakan bagian tumbuhan (misal dengan natrium karbonat), kemudian alkaloid bebas diekstraksi dengan pelarut organik seperti kloroform, eter, dll (Robinson, 1995).

  Alkaloid berbentuk kristal padat tanwarna, namun ada pula yang berupa cairan (efedrin, koniin, dan spartein berupa cairan pada suhu kamar) dan alkaloid yang berwarna pun langka (berberina dan serpentine berwarna kuning) (Robinson, 1995). Alkaloid berasa pahit dan sukar larut dalam air tetapi larut dalam pelarut organik yang non polar yang tidak campur dengan air seperti kloroform, eter, dll.

  Garam alkaloid larut dalam air tetapi tidak larut dalam pelarut organik (Mursyidi, 1990).

C. Staphylococcus aureus

  

Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif, anaerob fakultatif

  yang tidak membentuk spora, tidak bergerak, dinding selnya mengandung peptidoglikan dan asam teikoat. Selnya berbentuk bola dengan diameter kira-kira 1 μm tersusun berkelompok menyerupai buah anggur. S.aureus tumbuh paling

  o o

  cepat pada suhu 37

  C. S.aureus relatif tahan terhadap panas (50 C selama 30 menit) dan tahan terhadap 9% natrium klorida, tetapi dapat dihambat oleh zat kimia tertentu seperti 3% heksaklorofen (Jawetz et al., 1996).

  

S.aureus yang bersifat patogen dan invasif menghasilkan katalase, enzim dalam folikel rambut menimbulkan nekrosis jaringan (faktor dermonekrotik) (Jawetz et al., 1996).

D. Penyarian

1. Cara Penyarian

  Secara umum, cara penyarian dibedakan menjadi dua, yakni dengan pemanasan dan dengan cara dingin. Penyarian dengan pemanasan terdiri dari infundasi dan penyarian berkesinambungan. Sedangkan penyarian dengan cara dingin meliputi perkolasi dan maserasi.

  Infundasi digunakan untuk menyari bahan nabati seperti glikosida, dll. Infundasi dilakukan dengan cara mencampur serbuk simplisia dengan air

  o

  dalam panci, kemudian dipanaskan pada suhu 90 C selama 5 menit. Sediaan cair yang didapat disebut infus. Penyarian dengan cara seperti ini akan didapat infus yang tidak stabil dan mudah ditumbuhi kapang. Karena itu,

  a penyimpanannya tidak boleh lebih dari 24 jam (Anonim, 1986 ).

  Penyarian berkesinambungan disebut juga Soxhletasi, menggunakan alat yang disebut “Soxhlet”. Pada prinsipnya, cairan penyari dipanaskan hingga mendidih, uap akan naik ke atas dan mengembun karena adanya pendingin balik. Embun turun dan melalui serbuk simplisia dan menyari zat-zat yang dapat larut didalamnya. Proses ini terjadi berulang. Untuk senyawa yang rusak pada pemanasan biasa, dapat digunakan destilasi uap. Destilasi uap dapat menyari senyawa yang memiliki titik didih tinggi pada tekanan normal

  Perkolasi merupakan suatu cara penyarian dengan cara mengalirkan cairan penyari melalui serbuk simplisia. Serbuk simplisia ditempatkan pada suatu bejana silinder dengan pada bagian bawah bejana terdapat suatu sekat yang berpori. Cairan penyari dialirkan melalui serbuk simplisia dan akan melarutkan zat aktif sampai keadaan jenuh. Cairan penyari dapat mengalir karena adanya gaya berat dan cairan diatasnya dikurangi gaya kapiler yang cenderung menahannya. Alat yang digunakan disebut perkolator. Serbuk simplisia yang akan diperkolasi tidak langsung dimasukkan dalam perkolator, tetapi dimaserasi terlebih dahulu pada tempat tertutup. Ini penting untuk bahan

  a yang mudah mengembang bila terkena air (Anonim, 1986 ).

  Etanol dipertimbangkan sebagai penyari karena: lebih selektif, kapang dan kuman sulit tumbuh dalam etanol 20% keatas, tidak beracun, netral, absorbsinya baik, etanol dapat bercampur dengan air pada segala perbandingan, panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit.

  Kekurangannya, etanol mahal harganya. Etanol dapat melarutkan alkaloid

  a basa (Anonim,1986 ).

2. Maserasi

  Maserasi adalah cara penyarian yang sederhana yakni dengan merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Dinding sel serbuk akan ditembus cairan penyari, cairan penyari akan sampai pada rongga yang berisi zat aktif dan melarutkannya. Karena adanya perbedaan konsentrasi di dalam dan di luar kesetimbangan konsentrasi di dalam dan di luar sel. Cara penyarian ini digunakan untuk zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mudah mengembang.

  Keuntungan cara penyarian ini adalah pengerjaan dan peralatan yang sederhana dan mudah untuk dilakukan. Sedangkan kerugiannya adalah pengerjaan yang lama serta penyarian yang kurang sempurna. Pada maserasi, diperlukan pengadukan untuk meratakan konsentrasi larutan di luar butir simplisia sehingga derajat perbedaan konsentrasi di dalam dan di luar sel tetap terjaga.

  Maserasi dapat dimodifikasi menjadi :

  a. Digesti dengan menggunakan pemanasan lemah 40-50

  o

  C untuk simplisia yang tahan terhadap pemanasan.

  b. Maserasi dengan mesin pengaduk, dilakukan untuk mempersingkat waktu ekstraksi yakni 6-24 jam dengan adanya mesin pengaduk yang berputar terus menerus.

  c. Remaserasi, dengan membagi cairan penyari menjadi 2 bagian. Serbuk simplisia dimaserasi dengan cairan penyari pertama, dan setelah dienaptuangkan dan diperas, ampas dimaserasi dengan cairan penyari kedua.

  d. Maserasi melingkar, dengan cairan penyari dapat bergerak dan menyebar, penyari akan mengalir kembali secara berkesinambungan melalui simplisia dan melarutkan zat aktif. e. Maserasi melingkar bertingkat dilakukan karena maserasi melingkar tidak dapat dilakukan secara sempurna karena pemindahan massa berhenti bila

  a keseimbangan telah terjadi (Anonim, 1986 ).

E. Metode Pengukuran Potensi Antibakteri

  Metode pengukuran antibakteri dapat dibedakan menjadi 2 yaitu: 1.

  Metode dilusi Ada dua macam cara yaitu dilusi cair dan dilusi padat. Pada prinsipnya antibiotik diencerkan sehingga diperoleh beberapa macam kadar. Pada dilusi cair, tiap-tiap kadar sampel obat ditambahkan pada suspensi kuman dalam media. Pada dilusi padat setiap kadar obat dicampur dengan media agar kemudian ditanami kuman. Pengamatannya adalah ada tidaknya pertumbuhan kuman atau bila mungkin tingkat kesuburan kuman. Metode dilusi ini dapat digunakan untuk menentukan KHM dan KBM (Anonim, 1993).

2. Metode difusi

  Merupakan salah satu metode yang digunakan untuk mengukur potensi antibakteri berdasarkan pengamatan luas zona jernih yang terbentuk di sekitar tempat penginokulasian obat karena berdifusinya obat (Jawetz et al., 1996).

  Dilakukan dengan cara menempatkan obat pada media padat yang telah ditanami dengan biakan bakteri. Metode difusi ada beberapa cara : a.

  Cara Kirby Bauer Metode ini dilakukan dengan mengoleskan permukaan media agar dengan kertas samir yang mengandung antibakteri diatasnya, diinkubasikan pada 37 °C selama 18-24 jam. Hasilnya dibaca berupa zona radikal dan irradikal. Zona radikal adalah suatu daerah di sekitar kertas samir (disk) yang tidak ditemukan sama sekali pertumbuhan bakteri. Sedangkan zona irradikal adalah suatu daerah sekitar

  disk yang pertumbuhan bakteri dihambat tetapi tidak dimatikan (Anonim, 1993).

  b.

  Cara sumuran Penyiapan dilakukan seperti cara Kirby Bauer. Setelah biakan siap, dibuat sumuran dengan diameter tertentu dan tegak lurus terhadap permukaan media, ke dalam sumuran ini diteteskan larutan uji lalu diinkubasi selama 24-48 jam pada suhu 37 °C. Hasilnya dibaca sama seperti cara Kirby Bauer (Anonim, 1993).

  c.

  Cara pour plate Suspensi bakteri yang telah memenuhi standar konsentrasi bakteri

  8

  (10 CFU/ml) diambil 1 ose dan dimasukkan ke dalam 4 ml media agar base 1,5% yang mempunyai suhu 50 °C. Setelah suspensi kuman tersebut homogen, dituang pada media agar Mueller Hinton, ditunggu sebentar agar membeku, disk diletakkan di atas media, diinkubasi selama 15-20 jam pada suhu 37

  °C, dibaca hasilnya sesuai cara Kirby Bauer (Anonim, 1993).

F. Fraksinasi

  Fraksinasi merupakan salah satu proses untuk memisahkan campuran komponen seperti ekstrak dari organisme hidup yang dipisahkan dalam beberapa kelompok dengan sifat fisikokimia yang sama. Proses ini dapat dilakukan dalam

  1. Pengendapan Pengendapan terjadi ketika konsentrasi bahan dalam larutan melebihi kelarutan maksimumnya. Campuran dapat diendapkan dengan berbagai metode.

  Pengendapan dapat digunakan untuk memindahkan bahan penting atau memindahkan material yang tidak diinginkan dan mempertahankan bahan yang penting dalam larutan. Metode yang paling sederhana adalah dengan menurunkan temperatur larutan. Komponen yang kurang larut dapat diendapkan dan dipisahkan dengan sentrifugasi atau filtrasi. Cara lainnya yaitu dengan mengubah polaritas pelarut dengan menambahkan pelarut yang dapat bercampur dengan polaritas yang berbeda. Salting out juga merupakan salah satu cara fraksinasi dengan pengendapan yaitu dengan menambahkan ekstrak berair dengan larutan elektrolit yang sangat larut air sehingga bahan non-ionik akan terendapkan (Houghton, 1988).

  2. Ekstraksi pelarut-pelarut Ketika cairan ditambahkan pada ekstrak yang dilarutkan pada cairan lain yang tidak saling campur, akan terbentuk dua lapisan. Masing-masing komponen dalam campuran akan terlarut pada masing-masing fase lapisan dan kemudian konsentrasinya mencapai titik keseimbangan. Pelarut yang mudah menguap tidak boleh digojog dengan cairan panas atau hangat. Ini akan meningkatkan tekanan uap yang dapat menyebabkan tutup corong terdorong dan isinya tersemprot keluar. Beberapa fase organik sangat mudah membentuk emulsi dengan larutan yang mengandung air contohnya pelarut kloroform dan diklorometan. Sehingga sebaiknya campuran digojog dengan lembut. Cara fraksinasi ini menggunakan corong pisah (Houghton, 1988).

  3. Destilasi Metode ini digunakan untuk memisahkan campuran komponen volatile.

  Cara ini dilakukan secara ekstensif dalam industri, namun penggunaannya terbatas untuk fraksinasi ekstrak tanaman dan hanya dapat dipakai untuk minyak volatile (minyak esensial). Alat yang digunakan adalah destilator (Houghton, 1988).

  4. Dialisis Metode dialisis digunakan untuk pemisahan komponen dalam suatu campuran berdasarkan ukuran molekulnya. Bagian yang penting dari prosedur ini adalah membran semipermeabel yang tipis yang mengandung polimer dengan pori-pori tertentu yang memberikan jalan untuk molekul kecil (massa molekul < 1000 dalton). Molekul dengan ukuran yang lebih besar tidak mungkin dapat lewat. Tekanan osmotik yang mendekati molekul berukuran kecil dalam suatu campuran mampu melewati membran sedangkan molekul yang lebih besar tertinggal (Houghton, 1988).

  5. Elektroforesis Elektroforesis digunakan sebagai metode analisis suatu campuran dalam jumlah kecil yang mengandung molekul bermuatan terutama protein, peptida dan asam amino. Elektroforesis merupakan suatu metode pemisahan substansi dari suatu campuran yang mengandung energi listrik. Dibawah pengaruh energi listrik, masing-masing molekul akan bergerak dengan kecepatan berbeda-beda

  6. Kromatografi Kromatografi merupakan teknik yang digunakan pada fraksinasi ekstrak untuk isolasi banyak senyawa alam. Kromatografi terdiri dari dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam biasanya berupa padatan. Proses kromatografi terjadi akibat adanya kesetimbangan dinamik zat terlarut pada dua fase.

  Kromatografi dibagi menjadi dua yaitu adsorpsi dan partisi. Adsorpsi merupakan distribusi senyawa diantara permukaan padat dan cairan. Partisi merupakan distribusi senyawa diantara dua cairan yang tidak saling campur.

  Kromatografi kolom merupakan teknik yang paling tua. Kromatografi kolom merupakan bentuk kromatografi cair yang digunakan untuk memisahkan campuran dalam jumlah besar. Sebuah tabung diisi dengan fase diam padat, sampel diletakkan di bagian atas kolom (tabung kaca atau plastik) dan fase gerak dialirkan ke bawah melewati kolom. Biasanya fase diam dibuat dalam bentuk suspensi dan dimasukkan ke dalam kolom. Campuran senyawa (cuplikan) dialirkan di atas fase diam dan fase gerak dibiarkan mengalir karena adanya pengaruh gaya gravitasi atau karena adanya tekanan rendah, melewati cuplikan dan fase diam dan membawa serta senyawa yang larut didalamnya. Dengan demikian, senyawa dalam cuplikan dapat dipisahkan dan dikumpulkan sebagai fraksi (Gritter, 1991).

  Pemilihan fase diam pada kromatografi kolom bergantung pada sifat/ polaritas dan tingkat keaktifan fase diam. Gugus hidroksi pada permukaan polar berfungsi untuk menarik molekul senyawa dari cuplikan yang kompleks karena air atau pelarut berproton seperti alkohol atau amina, fase diam dikatakan tidak aktif, maka harus dilakukan pengaktifan dengan pemanasan untuk menghilangkan air. Fase diam yang paling sering digunakan adalah alumina dan silika gel, merupakan fase diam yang paling berguna dan mudah didapat. Pemilihan fase gerak merupakan hal yang penting karena harus dapat menentukan pelarut yang sesuai untuk dapat menghasilkan pemisahan yang diinginkan (Gritter, 1991).

G. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

  KLT merupakan salah satu metode yang digunakan untuk memisahkan komponen-kompenen. Pada dasarnya, KLT menggunakan dua fase, yaitu fase diam (stationary) dan fase gerak (mobil). Fase diam berupa zat padat, sedangkan fase gerak berupa zat cair. Karena itu, KLT dikenal sebagai kromatografi serapan (absorption chromatography). Pada kromatografi, senyawa yang dipisahkan akan terdistribusi diantara fase gerak dan fase diam (Sastrohamidjojo, 1985).

  KLT digunakan untuk tujuan kualitatif, kuantitatif, atau preparatif. Secara kualitatif, KLT digunakan untuk melihat ada atau tidaknya suatu senyawa di dalam cuplikan. Pada kromatogram KLT dikenal istilah faktor retardasi (Rf) yang didefinisikan :

  Jarak rambat bercak Rf = (Mulja dan Suharman, 1995).

  Jarak rambat eluen Secara kuantitatif, KLT digunakan untuk melihat jumlah masing-masing komponen dalam campuran. Sedangkan secara preparatif, KLT digunakan untuk memperoleh senyawa dalam jumlah yang memadai (miligram sampai gram) Pemilihan fase diam didasarkan pada polaritasnya. Fase diam yang banyak digunakan adalah silika gel. Silika gel G merupakan silika gel yang dicampur dengan CaSO lebih kurang 13%. CaSO berfungsi sebagai perekat gypsum pada

  4

  

4

  pelat. Pemilihan fase gerak didasarkan pada polaritas sampel, untuk sampel non polar, dipilih fase gerak yang non polar dan sebaliknya (Mulja dan Suharman, 1995).

H. Bioautografi

  Merupakan salah satu cara yang digunakan untuk mendeteksi aktivitas antibakteri suatu senyawa dengan kromatogram hasil pemisahan senyawa uji pada KLT. Caranya dengan menempelkan kromatogram hasil pemisahan pada KLT pada media agar dalam cawan petri yang telah diinokulasikan bakteri yang akan

  o

  diuji. Setelah itu, dilakukan inkubasi selama 15-20 jam pada 37

  C. Senyawa pada kromatogram akan berdifusi ke dalam media agar dan akan tampak zona jernih di sekitar kromatogram jika senyawa tersebut memiliki daya antibakteri sedangkan daerah yang jauh dari bercak akan tampak keruh (Zweig dan Whitaker, 1971).

  Bioautografi merupakan metode universal untuk mengetahui antibiotik yang belum diketahui komponennya (Stahl, 1969). Metode ini membutuhkan waktu 6-16 jam tergantung dari pertumbuhan mikroorganisme. Deteksi kimia dengan reaksi warna spesifik digunakan sebagai pembanding hasil bioautografi sehingga kedua metode diatas saling melengkapi (Stahl, 1969).

  Bioautografi dibagi dalam tiga kategori, yakni bioautografi kontak, antimikrobia berdifusi dari plat yang diinokulasikan ke media agar. Kromatogram diinokulasikan pada media agar dan didiamkan beberapa menit atau jam untuk memberi kesempatan untuk berdifusi. Kromatogram diangkat dan media agar diinkubasikan. Zona hambat akan tampak pada permukaan media agar di sekitar bercak kromatogram. Kerugian metode ini adalah kesulitan dalam menyempurnakan kontak antara agar dan plat kromatogram dan kemampuan penyerapan pada permukaan media agar (Choma, 2005).

  Pada metode bioautografi immersi dan bioautografi langsung dibutuhkan larutan tetrazolium yang digunakan untuk mendeteksi zona hambat. Daerah yang ditumbuhi oleh organisme akan berwarna merah sedangkan daerah hambatan akan berwarna jernih. Bioautografi langsung dilakukan dengan mencelupkan atau menyemprot suspensi bakteri yang dicampur dengan larutan tetrazolium. Kemudian plat diinkubasi. Cara ini yang paling rumit dan alat yang digunakan lebih mahal dibandingkan bioautografi kontak (Choma, 2005).

  Pada bioautografi immersi kromatogram ditutup dengan agar yang masih cair. Setelah agar memadat kemudian diinkubasi. Kekurangan dari bioautografi

  

immersi yaitu adanya pengenceran antibakteri pada lapisan agar selama agar

  masih berbentuk cair sehingga zona hambat yang terjadi dapat menyebar (Choma, 2005).

  Selain larutan tetrazolium, dapat juga digunakan larutan 2,3,5- trifeniltetrazolium klorida dan larutan 2,6-diklorofenol indofenol setelah 4 jam diinkubasi. Kemudian media tersebut diinkubasi lagi selama 30 menit. Zona hambat akan berwarna biru (Zweig dan Whitaker, 1971 ; Wagman dan Weinstein, 1973).

I. Landasan Teori

  Kulit batang kemiri digunakan untuk mengobati diare dan disentri (Anonim, 1995). Salah satu senyawa kimia yang terkandung dalam kemiri adalah alkaloid (Arief,1996). Alkaloid dapat tersari dalam etanol dan memiliki aktivitas fisiologi sebagai antibakteri terhadap S.aureus (Melinda, 2005) dengan S.aureus merupakan bakteri flora normal dalam hidung manusia (Jawetz et al., 1996). Saat ini, S.aureus merupakan jenis bakteri yang sudah resisten terhadap antibiotik golongan penisilin [MRSA (Methicilin-Resistant Staphylococcus aureus)].

  Bakteri ini merupakan patogen utama bagi manusia. Piridin-piperidin merupakan golongan alkaloid yang mempunyai aktivitas antibakteri yang kuat maupun lemah ( Roberts, 1998).