HUBUNGAN ANTARA PERTUMBUHAN DENGAN KEBERADAAN GEN TAHAN PENYAKIT MAJOR HISTOCOMPATIBILITY COMPLEX (MHC) PADA IKAN MAS (Cyprinus carpio)

  Hubungan ant ar a per t um buhan ..... (Er m a Pr i m anit a Hay uningt y as) HUBUNGAN ANTARA PERTUMBUHAN DENGAN KEBERADAAN GEN TAHAN PENYAKIT MAJOR HISTOCOMPATIBILITY COMPLEX (MHC) PADA IKAN MAS (Cyprinus carpio) Erm a Pr i m ani ta Hayu ni n gt yas, Di di k Ar i yant o, dan Kh air ul Syah pu tr a

  Balai Peneli ti an Pem ul iaan Ikan Jl . Raya 2 Suk am andi , Subang 412 56 E- m ai l : er m a_pr im ani t a@y ahoo.com (Naskah dit er im a: 9 Apr il 2 0 13 ; Diset uj ui publikasi: 1 2 Septem ber 20 13 )

ABST RAK

  Wab ah p enyaki t koi herp es vi rus (KHV) di Ind onesia yang t er jadi sej ak t ahun 2 00 2 m erupakan salah satu faktor yang m em icu kem erosotan produksi ikan m as budidaya. Pem bentukan strain unggul ikan m as tahan KHV dapat m enjadi solusi bagi perm asalahan tersebut. Pem ilihan genotip ikan m as tahan KHV dengan m arka m olekuler gen m ajor hist ocom pat ibilit y com plex class II (MHC- II), k hususnya p ada al el Cy ca DAB 1 *0 5 akan m em bant u d al am kegi at an selek si . Penel it i an i ni bert uj uan unt uk m engetahui k eb er ad aan g en MHC- II p ad a p op ul asi d asar G0 i k an m as st r ai n Raj ad anu d an hubung annya d engan p ertum buhan (bobot). Metod e detek si k eberadaan g en MHC- II p ad a d u a k el om p ok i k an d eng an u k ur an b er b ed a d i l ak u k an d eng an t ek ni k PCR. Hubungan antara pertum buhan ikan m as d engan persentase kem unculan gen MHC- II d i anal i si s d eng an m eng g unak an p r og r am SPSS (St at ist ical Pack a ge f or t he Social Sciences), sehingga diperoleh korelasi di antara keduanya. Hasil penelitian m enunjuk- kan bahwa hubungan antara pertum buhan dengan persentase keberadaan gen MHC- II berkorelasi negatif dengan nilai R = - 0,742. Hal ini m engindikasikan bahwa sem akin cepat pertum buhan populasi ikan m as m aka sem akin sedikit persentase individu yang m em p unyai g en MHC- II pada setiap populasi ikan m as. Sehingga populasi ikan m as yang pertum buhannya lam bat m em iliki tingk at persentase positif MHC- II lebih tinggi (85,71%- 100%) dibandingkan populasi ikan m as yang pertum buhannya cepat (42,86%- 85,7 1%).

  KATA KUNCI: ik an m as, p ertu m bu han , d aya tahan , g en M HC- II, Koi H erp es Virus (KHV) ABST RACT : A correlation between growth character and presence of M ajor Histocom patibility Com plex (M H C) gene as disease resistance m ar k er in com m on carp (Cy pr inus car pio). By: Er m a Prim ani ta H ayu n i ng t yas, D i d i k Ar i yan t o, and Kh ai r u l Syah p u t r a

  The outbr eak of k oi her pes vir us (KHV) disease that has been occur r ing in Indonesia since 2002 was tr igger ing the decline of com m on car p pr oduction. Cr eating of super ior st r ain of com m on car p KHV r esist ant can becom e one of the solution f or this issue. Genot y pes select ion of KHV-r esist ant com m on car p associat ed m olecular m ar k er s with specif ic Cy ca DAB 1*05 allele of m ajor histocom patibility com plex class II (MHC-

  II) gene will assist in selection pr ogr am e. The aim of this study was to det er m ine the pr esence of MHC II gene in base population G0 of Rajadanu com m on car p str ain and it s cor r elation with gr owth (weight) char acter . PCR technique was used to detect t he MHC-II gene pr esence in two dif f er ent weight populations of com m on car p. Cor r elation bet ween gr owt h and pr esence of MHC-II gene was analy zed using SPSS (St at ist ical

  

Package f or the Social Sciences) sof twar e. The r esult showed that t her e was negat ive

cor r elation between gr owth and MHC-II gene per centage with R value was -0.742. This

cor r el at ion indicat ed t hat t h er e wer e low per cent ag e individu h aving MHC-II gene

within f aster gr owth population of com m on car p. So that com m on car p population low

gr owt h (8 5 .7 1 %-1 0 0 %) ha vin g per cen t a ge MHC-II p osit i ve h ig her com pa r ed wi t h

com m on car p wit hin f ast er gr owt h (42.86 %-8 5.7 1%).

  teleo stei m em iliki dua m acam sistem im un yaitu sistem im un yang bersifat bawaan at au alam iah (innat e) dan dapatan (acquir ed). Sistem im un pada ikan mirip dengan sistem im un pada m am alia, m esk ip u n ak ib at p erk em b an g an evolu si m enyeb ab k an ik an m em iliki asp ek im u nitas yang spesif ik (Iriyant o, 200 5).

  II un tuk m em pro duk si ant ibo di d an m en g- ak t ivasi k arak t er- k arak t er im u n o lo g i yan g t erli b at d al am m en g eli m in asi p arasi t d an bak teri, dan m en etralkan viru s (Su cipt o et al., 2011). Sel- sel fagositik merupakan bagian dari sistem im un yan g t erdiri atas m ono sit (pre- k u so r- p rek u so r m ak ro f ag ), m ak rof ag , d an granu losit (leu kosit granular). Sebag ai salah satu gen yang berfung si m en etralk an virus m aka gen m aj or hist ocom pat ibilit y com plex

  Resp o n s im u n b iasan ya terk ait d eng an ad anya m olek ul MHC class I dan MHC class II. Sel- sel fagositik akan diaktifkan oleh MHC class

  epitel kelenj ar Tim us (Barat awid jaja, 19 91 ; Sub owo, 199 3).

  cells (APC), dan sel T akt if yan g t erdapat pada

  II terdiri atas sel- sel im u nok om peten seperti sel B, m o nosit, m akrof ag, ant igen pr esent ing

  Sist em p er t ah an an sp esi f i k b er f u n g si un tu k m elawan pen yakit yan g m em erluk an r an g san g an t e r l eb i h d ah u l u , sem en t ar a p ert ah an an n o n sp esi f i k b erf u n g si u n t u k p ert ah an an terhad ap p at o gen d an b ersifat perm an en (selalu ada) (Ellis, 1 98 8). Sist em p ert ah an an sp esif ik m em ilik i k em am p u an m engenali benda yang d ian ggap asing bagi dirin ya. Sistem im un spesifik t erd iri atas h u- m oral, selular, dan organ lim foid. MHC class II term asuk sistem im un spesifik yang bersif at adap tif . Mayor Hist ocom pat ibilit y Com plex (MHC) ad alah suatu kelo m pok atau kum pu lan g en yang terletak d alam k ro m o som 6 dan berperan dalam pen gen alan d an p em b erian sinyal di antara sel- sel sistem imun. MHC class

  inducible. Sem ent ara, p ad a um u m nya ik an

  

KEYWO RD S: com m on car p , g row t h, resist an ce, M HC- II , Koi H erp es Vi ru s

(KH V) PENDAHULUAN

  Penan gan an p encegahan yang d ilakuk an terh adap pen yakit infeksi KHV sam p ai saat ini masih meliputi penambahan sistem pertahanan at au sistem im un dari lu ar yang biasa d iseb ut

  salah sat u u paya yang dap at dilaku kan unt uk mencegah serangan KHV dan dapat m enambah sintasan di atas 2 0%. Nam un up aya terseb ut pun m asih ada kendala yang dihadapi, di anta- ranya relatif sulit u ntuk diaplikasik an secara massal.

  et al., 2010). Pem berian vaksin juga m erupakan

  positif pada peningkatan daya tahan tubuh dan sintasan ikan m as (Mud jiut am i et al., 20 07 ). Selain itu, ad a p ula upaya pem eliharaan ik an m as d i p erairan bersalin itas 5 ‰, yang relat if lebih tahan terhad ap serang an KHV (Saput ra

  Cr -yeast yang m am pu m em berikan respo ns

  Penyakit KHV m em ilik i p ola penyebaran yang kon sisten dari ikan sakit yang m asuk ke lingk ung an bud idaya d eng an sif at pen yeb a- ran yang infeksius. Pada sistem kolam air deras d i su n g ai, p en yak it i n i m en yeb ar k e h il ir (bawah ) tet ap i t id ak k e h ulu (bag ian atas), sehingga penyakit m enyebar m elalui aliran air. Pen yak i t KHV t er seb ar d en g an cep at k e seluruh perairan t awar Indo nesia, seh ing ga berbagai upaya dilakuk an unt uk m enangani d an m en ceg ah m ewab ah n ya p en yak i t in i. Mulai dari penggunaan imunostim ulan berupa

  Ikan m as m erupakan salah satu kom oditas an dalan pem bud idaya ikan air t awar. Wab ah penyakit ko i h arp es viru s atau KHV yang ter- j ad i sejak tah un 20 0 2 m eru pak an k en d ala dalam kegiatan bu didaya ikan m as seh ing ga prod uk sinya m en galam i k em ero so tan yang sangat signifik an. Penyakit in feksi p ada ik an i n i d ap at m en yeb ab k an k em at i an m assal sekitar 80%- 95%. KHV m ulai m ewabah di Indo- nesia sejak didatangkannya ikan koi im por dan didistribusikan dari Surabaya ke Blit ar, Jawa Tim ur. Hal ini jug a d ipicu oleh ko ndisi cuaca d en gan cu rah h u jan yan g t in g gi seh in g g a m en unjang penyebaran wabah penyakit lebih cepat (Su nart o, 2005 ).

  J. Ris. Akuakultur Vol. 8 No. 3 Tahun 20 13: 38 3-3 91

  class II (MHC- II), khususnya pada alel Cyca DAB 1 * 0 5 d ij ad ik an seb ag ai p en ciri m o l ek u l er

  d eng an kep adatan 25 ek or/ m

  Hubungan ant ar a per t um buhan ..... (Er m a Pr i m anit a Hay uningt y as)

  Pada ak hir bulan ke- 4 d ilaku kan p an en t erhad ap ik an yang dipelih ara. Selan j ut nya

  Penyiapan Sampel

  . Selam a em pat bulan pem eliharaan , ikan dib eri pakan bu atan ber- bentuk pelet dengan kandungan protein kasar 28 %. Pem berian pak an seb anyak 3% d ari bio- m assa per h ari dan d ilak ukan d ua kali, yaitu p ad a wak tu p ag i (09 .0 0 ) dan sore (16 .0 0). Pen yesu aian j u m lah p ak an yan g d ib erik an dilak ukan dengan cara sam pling b obot rat a- rata setiap dua m in ggu sek ali.

  2

  dengan kepadatan rendah, yaitu 10 ekor/ m

  2

  Pem elih araan pem b esaran d ilak uk an d i kolam tanah ukuran 400 m

  Pemeliharaan Pembesaran

  Pem berian p akan b uat an berbentu k serb uk dengan kandungan protein kasar sebesar 40% d il ak u k an set i ap h ar i secar a a d-sa t i at ion dengan freku ensi d ua k ali. Larva d ipelihara selam a tig a b u lan h ing g a m en capai b o bo t individu rata- rata 10- 15 g.

  2 .

  2

  sebag ai p enanda ik an m as tah an penyakit.

  Benih berum ur tujuh hari dipelihara secara ko m un al d i k olam t anah berdinding t em b ok uk uran 50 m

  Pendederan

  enous feeding) berupa suspen si kun ing telur ayam yang direbu s.

  Ju m lah induk yang dip ijahkan seban yak lim a pasang. Pem ijahan dilakukan pada induk jantan dan betina m atang gonad, dilaku kan penyun- t i k an h o rm o n LH- RH g u n a m em p er cep at pem ijahan , den gan dosis 0 ,3 m L/ kg ind uk betin a d an 0,1 5 m L/ kg in duk jantan. Bob ot induk betina yang digunakan berkisar 2- 3 kg/ ek or, sed ang kan bo bot ind uk jan tan berkisar 1,5- 2 kg. Selan jut nya set iap pasan gan ind uk dim asukkan d alam h apa uku ran 2 m x 2 m x 1,5 m yang dit em p atk an d i k olam t anah , d i- lengkapi aerasi dan substrat yang terbuat dari ijuk sebagai m edia penetasan telur. Dua belas jam setelah p en yun tikan d ilak uk an peng e- cekan pad a m asing- m asing hap a. Jika pada substrat sudah terdapat telur, m aka induk ikan m as d ipin dah kan ke dalam kolam pem elih a- raan induk . Larva dip elihara sam pai hari ke- 7 dengan masa pem anfaatan kuning telur selama tig a hari (endogenous f eeding) dan em pat hari berik utn ya dib erikan pak an tam bah an (exog-

  Pemijahan Pem ij ahan dilak ukan secara sem i bu atan.

  Ukuran besar (404- 890 g) m erepresentasikan kelom pok ik an den gan pertum buh an cep at dan ukuran kecil (44- 196 g) yang merepresen- tasik an k elo m po k ikan den gan pertum buh an lambat.

  Penelitian ini d ilak uk an d i labo rato rium Bal ai Pe n e l i t i an Pe m u l i aan Ik an (BPPI) Su kam and i, Subang, Jawa Barat. Pen elitian ini m engg unakan ik an uji dari t uru nan pertam a in duk ikan m as strain Raj adanu yan g diseb ut po pulasi ik an m as G0. Ik an m as G0 m erup a- kan populasi dasar pem bentuk ikan m as tahan KHV. Ikan m as G0 yang digun akan berum ur tujuh bulan, terdiri atas dua kelom pok ukuran.

  pertum buhan (bobot) pada ikan mas Rajadanu pop ulasi dasar G0.

  Com plex (MHC) cla ss II t erh ad ap k arak t er

  Seb ag ai u p aya u n t u k m en an g g u l an g i wabah pen yakit KHV t erh adap ik an m as, Balai Pen elit ian Pem u liaan Ik an Su k am an d i m e- lakukan pem uliaan terhadap ikan m as m elalui p er b ai k an g e n e t i k y ai t u se c ar a se l e k s i pertu m buh an dan seleksi k eberad aan m arka gen etik a MHC class II. Hal ini dilakukan un tuk m em bentu k ikan m as tahan Koi Her pes Vir us (KHV). Penelitian ini bertu juan un tuk m elih at h u b u n g an d aya t ah an i k an m as m e l al u i k eb er ad aan g en Ma j or Hist ocom p at ib ili t y

  MHC m erupakan karakter daya tahan tubuh terhadap pen yak it yan g d apat d idet eksi k e- berad aann ya secara gen otip. Selain karakt er daya t ahan terd apat karak ter pertu m b uh an yang dapat d ilihat secara fenotip, karakter ini j u ga b erp eran p ent in g d alam p enin g k at an p rod u k si secara k ualit atif . Men u rut Fu jaya (2 00 4 ), p ert u m b u h an ad alah p ert am b ah an u k u ran b aik p an j an g m au pu n b o b o t . Per- tu m bu han dipen garuhi oleh f akt or gen etik, horm on, dan lingkungan. Sem entara m enurut Hepper & Prugn in (198 4), pertu m bu han ik an dipen garuhi oleh d ua fak tor, yaitu fakto r in- t ern al yan g m elip u t i g en et ik d an k o n d i si f isio log is ik an , sert a f ak to r ekst ernal yan g b erhu bu ng an d en gan ling ku ng an . Pert um - buhan yang lam bat merupakan salah satu tanda ku alitas gen etik ikan yang m en urun , selain karakter negatif lainnya yaitu tingkat kem atian yang t inggi, kem atangan gon ad usia din i, dan uk uran in dividu yang k ecil.

BAHAN DAN METODE

  dilak ukan selek si ind ividu ikan un tuk m en- dapat kan pop ulasi ikan d eng an ukuran besar dan k elo m pok ik an den gan uk uran kecil. Ke- lom pok ikan ukuran besar m erepresentasikan ikan- ikan dengan pertum buhan cepat sedang- kan kelom pok ukuran kecil m erepresentasikan ik an- ikan dengan p ert um b uhan lam bat. Nilai pertumbuhan diinterpretasikan dengan bobot badan ik an. Jum lah sam pel ikan seb anyak 28 ekor, diam bil secara acak dari m asing- m asing kelom pok sebag ai bahan analisis m olekuler g en MHC d i l ab o rat o ri u m . Bah an an alisis molekuler diambil dari organ sirip pada masing- m asin g sam pel ikan. An alisis labo rat oriu m dilak ukan dengan u lan gan sebanyak em p at kali.

  o

  Program diakhiri den gan final ext ension pada su hu 7 2

  t ension p ada suh u 7 2 o C selam a sat u m enit.

  C) selam a 30 d etik dan ex-

  o

  C; 55

  o

  C; 54,5

  C; 54,4

  C selam a tuj uh m en it dan pen gko n- disian akhir p ada su hu 4

  o

  C; 5 3 ,6

  o

  C; 5 2 ,8

  o

  C; 5 1 ,6

  o

  C; 5 0 ,2

  o

  o

  C; 4 9 ,1

  o

  gen - aktin ikan mas dengan panjang fragmen

  fr eezer . Seb agai ko ntrol int ern al d igu nak an

  C. Hasil PCR dapat langsung dielektroforesis atau disim pan dalam

  o

  C selam a tujuh menit dan peng- kondisian akhir pada suhu 4

  o

  C selam a satu m enit. Program diakhiri dengan final ext ension pada suhu 72

  C selam a 30 det ik dan ext ension p ada suh u 7 2

  C. Hasil PCR dap at langsung dielektroforesis atau disim pan dalam

  annealing p ada su hu 49,1 o

  C selam a 30 detik,

  denat ur asi p ada suh u 9 5 o

  C selam a tiga m en i t , 3 0 sik l u s sel an j u t n ya t erd i ri at as

  denat ur asi awal p ada suh u 9 5 o

  Set elah d ip ero leh su h u yan g o p t im u m un tuk annealing (t em per at ur e m elt ing), PCR dilan jutkan p ada sam pel yang lainnya d engan m engg unak an pro gram PCR sebagai beriku t:

  op tim u m disim p an sebagai ko nt ro l po sitif, baik prod uk PCR m au pun Genom DNA yang t erd et ek si MHC- II d ap at d ij ad ik an k o n t ro l positif.

  fr eezer . Hasil am plifikasi terbaik pada su hu

  o

  o

  Analisis gen M HC

  col um . Spi n col um d i p in d ah k an k e d alam m icr ot ube 1 ,5 m L yang baru. Selanj utnya d i-

  PCR, dan nuclease fr ee wat er sam pai total vo- lum e 25 µL.

  entific). Prim er yang digu nakan ad alah prim er spesifik untuk MHC- II pada alel Cyca-DAB 1*05 (Rakus et al., 20 08). Kom p osisi p ereaksi PCR d i an t aranya ad alah : 1 µ L pr im er f or war d (CTAATGGATACTACTGG), 1 µL pr im er r ever se (ATCGCTGACTGTCTGTT) (Sucipto et al., 2011); 1 µL DNA (450 µg / m L); 12,5 µL kit Mast er m ix

  PCR m ast er Mix (2 X) (Ferm entas, Therm o Sci-

  Am plifikasi DNA sam pel pada m esin PCR dilakukan deng an kit Maxim a Hot St ar t Gr een

  Amplifikasi DNA

  sent r ifuge p ada kecep atan 8.000 rp m selam a satu m enit.

  tam bah kan 20 0 µL elut ion buffer AL, d iink u- b asi sat u m en it p ada su h u ru an g d an d i-

  bersinggu ngan d eng an cairan bag ian bawah

  Pada tah ap awal PCR d ilakuk an opt im asi suhu annealing terlebih dahulu m enggunakan

  spin colum secara hati- h at i j an gan sam pai

  ditambah 500 µL Buffer AW1 dan di- sent r ifuge pada kecepatan 8.000 rpm selama satu menit, bagian bawah t ube d ibuang. Spin colum d i- pindahkan pada t ube yang baru, 500 µL buffer AW2 ditam bah kan dan sent r ifuge p ada kece- patan 10 .000 rp m selam a tig a m enit . Bagian bawah t ube dib uan g d en g an cara m elepas

  col um d ip in d ah k an p ad a t ub e yan g b ar u ,

  C selam a tig a j am . Setelah d i- inkubasi, sam pel di- vor t ex kem bali selam a 15 d et ik , lalu d it am b ah k an 2 00 µ L buff er AL di- vor t ex, dit am b ah 200 µL etanol absolut e (96%- 100%), kemudian di- sentrifuge 13.000 rpm selam a dua m enit. Larutan tersebut dipindah- kan k e dalam m ini spin colum , di- sent r ifuge 6.000 - 8.000 rp m selam a satu m enit , cairan pada bag ian bawah spin colum d ibuang. Spin

  o

  Ekst rak si DNA d ilaku k an m en g gu n akan m etod e ek straksi DNeasy Bloo d & Tissue Kits (Qiag en). Sirip ikan m as seban yak 5- 10 m g dihancurkan, ditam bahkan 180 buffer ATL, 20 m L pr ot einase K dan di- vor t ex, serta diinkubasi pada suh u 5 6

  Ek straksi D NA

  Secara um um , analisis gen MHC dilakukan m elalu i t ig a t ah ap an , yait u ek st rak si DNA sam pel, am plifikasi dalam m esin PCR, dan elek t ro f o r esis d al am m ed i a ag ar o sa g el , berikut ad alah t ahapan nya:

  Optimasi Suhu Annealing

  t her m ocycler gr adient (Esco ) d eng an p eng a-

  C; 4 8 ,2

  o

  o

  C; 4 7 ,6

  o

  C; 4 7 ,2

  o

  C (p ada m esin PCR dihasilkan suhu annealing m u l ai d ar i 4 7

  o

  C- 55

  C selam a 30 detik, annealing pada suhu kisaran 47

  turan suhu secara otom atis pada kisaran 47

  o

  C selam a tiga menit, 30 siklus selanjutnya terdiri at as denat ur asi p ada suh u 9 5

  o

  C. Sam pel yang digunakan ad alah sam p el g en o m DNA yan g sam a d an r unning pad a m esin PCR secara b ersam aan. Pro gram PCR terdiri atas denat ur asi awal p ada suh u 9 5

  o

  55

  C-

  o

  J. Ris. Akuakultur Vol. 8 No. 3 Tahun 20 13: 38 3-3 91

  30 0 b p, p rim er yan g digun akan adalah F: 5 ’- CCC TGG CCC CCA GCA CAA TG- 3 ’ d an R: 5 ’- TCT GCG CAG TTG AGT CGG CG- 3’ . Prim er - akt in d id esain d ari dat a b ase d i genebank den gan n om or aksesi M24 113.1 . Kon trol po- sitif - aktin d iperoleh d ari hasil am p lif ikasi terhadap genom DNA ikan mas dengan kualitas dan kuantitas yang m em adai.

HASIL DAN BAHASAN

  Elektroforesis dilaku kan pad a g el agaro sa dengan konsentrasi sebesar 1,5% dalam buffer 1x TBE. Sebanyak 5 µL (pad a su m ur kecil) d an 10 µL (pada sum ur besar) pro duk PCR yang su dah terdapat loding dye d i d alam nya, d i- m asukkan ke dalam sumuran agarosa. Deretan produk PCR yang sudah di- loading di- r unning bersam aan dengan leader m ar ker ukuran 100 bp seban yak 4 µ L. Elektrofo resis d ilakuk an dengan m enggunakan arus listrik 80 V selam a 35 m enit . Setelah di- st aining m engg unak an

  1

  Ban d b er u k u r an 3 0 0 b p m u n cu l p ad a

  sam pel nomor 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, serta pada kont rol po sit if, hasil ini m enunj ukk an bahwa gen MHC- II pad a alel Cyca DAB-1*05 terdeteksi p ada tiap sam p el terseb ut. Seb a- liknya p ada sam pel no m or 3, 12 dan ko ntrol negat if, band sam a sekali t idak m u ncu l, hasil in i m en u n j u k k an b ah wa g en MHC- II t id ak terdapat pada sampel tersebut. Konfirmasi dari ketid akm u ncu lan gen MHC- II p ada beb erapa individu ikan m as, telah dilakukan PCR dengan

  Gambar 1. Optim asi suhu annealing PCR, m enggunakan prim er Cyca-DAB 1*05 pada m esin t her m ocycler gr adient

  

Figur e 1. Tem per at ur e m elt ing PCR opt im ized, using Cyca-DAB 1*05 pr im er by

t her m ocycler gr adient m achine 3,000 bp M

  Suhu ( o

  C) 50 0 bp 30 0 bp 10 0 bp

  2

  Berd asarkan hasil deteksi keberadaan gen MHC- II p ada ikan m as, diperoleh hasil am p li- fikasi p ada 300 bp pada ind ividu ikan m as.

  3

  4

  5

  6

  7

  8 9 1 0 1 1 1 2 47 47,2 47,6 48,2 49,1 50,2 51,6 52,8 53,6 54,4 54,8

  55 Hubungan ant ar a per t um buhan ..... (Er m a Pr i m anit a Hay uningt y as)

  Kem unculan gen MHC- II p ada b eberapa in di- vidu ditunjukkan pada Gam bar 2.

  o C.

  et hidium br om ide, selanj utn ya divisu alisasi-

  o

  kan m engg unakan gel do c UV t ran silim in a- tor.

  Analisis Data

  Dat a dianalisis m eng gunakan analisis ko- relasi untuk m elihat hubungan antara pertum - bu han (bob ot) den gan frekuen si kem u nculan g en MHC p ad a m asin g - m asi n g k elo m p o k uk uran ik an. An alisis dat a d ilakuk an d eng an m eng gunakan sof t war e pro gram SPSS (St at is-

  t ical Pr oduct and Ser vice Solut ions).

  Sebagai t ahap an awal dari k egiatan pen e- litian dilakukan optim asi suhu annealing pada PCR MHC- II unt uk m eng hasilk an am p lif ikasi pada 300 bp. Op tim asi su hu dilakuk an m ulai dari 4 7

  o

  C sam p ai 5 5

  C. Hasil yan g d iperoleh dari o ptim asi annealing yang dilaku kan yaitu dapat mengamplifikasi pada suhu 47

  Elek t rof oresis

  o

  C sampai 52,8

  o

  C; dan diperoleh band p alin g t ebal pada su hu annealing 4 9,1

  o

  C (Gam bar 1). Hasil ini berbeda den gan penelitian sebelum nya yang dilak ukan oleh Sucipto et al. (20 11), d eng an m en g g u n ak an p r i m e r yan g s am a Cy ca -

  DAB1 * 05 d an uru t an seq uence yan g sam a

  m em iliki suhu annealing un tuk dap at m en g- am p lifik asi adalah pada suhu 55 m engg unakan prim er - aktin p ada seluruh sampel uji dan hasilnya terlihat pada Gam bar 3.

  Jika am plifik asi - aktin m enghasilkan pita DNA p ada 300 bp m aka g eno m DNA dari ik an yang negatif MHC- II terbu kti genom dalam keadaan baik sehingga dapat dipastikan bahwa ketidakm unculan gen MHC- II bukan dikarena- kan atau kualitas dan jumlah genom DNA yang tidak mem adai.

  8 9 1 0 1 1 1 2 (+ ) (-)

  7

  6

  5

  4

  3

  2

  1

  M

  3,000 bp 50 0 bp 30 0 bp 10 0 bp

  Figur e 3. Am plificat ion of com m on car p -actin as inter nal contr ol by PCR (1-

12 = sam ple, (+) = posit ive cont r ol, (-) = negat ive cont r ol)

  Gambar 3. Amplifikasi gen - aktin ikan m as sebagai kontrol internal dengan PCR (1- 12 = sampel, (+ ) = kontrol positif, (- ) = kontrol negatif)

  7

  Persentase p ositif MHC- II yang diperoleh dari tiap po pulasi b erdasarkan bo bo t rat a- ratanya d ivisualisasikan pada Gam bar 4 . Pada populasi 1- 4 diinterpretasikan sebagai kelom - po k ikan yang pertum b uhannya lam b at. Pada popu lasi 5- 8 m eru pakan k elom pok ikan yang pertum buh ann ya cepat.

  6

  

5

  4

  3

  2

  1

  3,000 bp 1,000 bp 50 0 bp 30 0 bp 10 0 bp M

  

Figur e 2. Am plificat ion of MHC-II gene by PCR using Cyca DAB-1*05 pr im er (M =

m ar ker ; 1-2 & 4-11 = det ect ed as positive MHC-II; 3 & 12 = det ect ed as negat ive MHC-II; (+) = posit ive cont r ol; (-) = negat ive cont r ol)

  MHC- II; 3 & 12 = sampel yang negatif MHC- II; (+ ) = kontrol positif; (- ) = kontrol negatif)

  DAB-1*05 (M = m arker; 1- 2 & 4- 11 = sam pel yang terdeteksi positif

  Gambar 2. Amplifikasi gen MHC- II dengan m etode PCR menggunakan primer Cyca

  Ji k a d i l i h at se car a d esk r i p t i f t er l i h at perbedaan yang m en colo k b ahwa p ersentase MHC- II p ad a kelo m p ok ikan yang p ertu m - buhannya lam bat m em iliki tingkat persentase po sit if MHC leb ih tin ggi (8 5,7 1%- 1 00%) d i- b an d in g k an k elo m p o k ik an yan g p ert u m -

  8 9 1 0 1 1 1 2 (+ ) (-) J. Ris. Akuakultur Vol. 8 No. 3 Tahun 20 13: 38 3-3 91

  Hubungan ant ar a per t um buhan ..... (Er m a Pr i m anit a Hay uningt y as) 7 0 0 6 0 0

  ) % MHC

  C H 5 0 0 Bobot rata- rata

   M % 4 0 0

  / g ( C

  3 0 0 H M % 2 0 0 / g

  1 0 0

  1

  2

  3

  

4

  5

  6

  7

  8 Populasi (Populat ion)

  Gambar 4. Hubungan antara bobot rata- rata dengan persentase MHC- II pada masing- masing populasi

  

Figur e 4. Cor r elat ion bet ween gr owt h (weight ) and MHC-II

per cent age in each populat ions

  buhannya cepat (42,86%- 85,71%). Rendahnya akan m engurangi respons im u n. Hal t ersebut persentase keberadaan MHC class II pada ikan diakibat kan kin erj a resp ons im un yang ter- m as yang m em iliki pert um b uhan yang cep at h am b at o leh t in g g in ya ak t ivit as g en p er- dipen garu hi oleh f akto r g enetik . Fakto r g e- tu m bu han (Barat awidjaj a, 199 1). Hub ung an netik terseb ut dip icu dari keg agalan dalam antara pertum buhan dengan keberadaan MHC- aktivasi sel efektor T yang dapat m em unculkan

  II diperkuat m elalui analisis korelasi d i antara gen MHC class II. Sem ent ara respo ns sel T keduanya (Tabel 1 ). berg antung pada in terleu kin. Gangguan pada

  Berd asark an hasil an alisis k orelasi m e- m ak rofag un tuk m em p rodu ksi interleu kin- 1, n u n j u k k an ad an ya k o relasi n eg at if an t ara kurangnya kerja sama di antara subset- subset sel T dan produksi interleukin- 2 yang menurun bo bot rata- rata per p opu lasi yang m ewakili

  Tabel 1. Hasil analisis korelasi antara pertum buhan dan persentase MHC- II dengan program SPSS 16

  

Table 1. Result of cor r elat ion level analysis bet ween gr owt h (weight ) and MHC-II per cent age

by SPSS 16 soft war e Bo b o t rat a-rat a M H C

  Aver a g e of weig h t

  Nilai korelasi

  Bo b o t rat a-rat a

• 1 - 0.742

  Aver a g e of weig h t Pear son cor r elat ion (R)

  Nilai signifikan / Sig. (2-t ailed) 0.035 N

  8

  8 Nilai korelasi

• 0.742

  1 M H C-II ( MH C-II )

  Pear son cor r elat ion (R)

  Nilai signifikan / Sig. (2-t ailed) 0.035

  N

  8

  8

• ^*

  Ni lai korel asi berbeda nyat a pad a t ingkat keper cayaan 0,05 (Cor r elat ion i s signif i cant at t he 0.05

  level (2-t ai led))

  J. Ris. Akuakultur Vol. 8 No. 3 Tahun 20 13: 38 3-3 91 6 0 0

  ) 5 0 0

  (g t ta h

  4 0 0 ra ig

• e w

  ta f 3 0 0 ra t o o e g b

  2 0 0 a o r

  B e v A 1 0 0

  4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 MHC- II (MHC-II)

  Gambar 5. Skem a sebaran pertum buhan populasi ikan m as ter- hadap persentase gen MHC- II

  

Figur e 5. Scat t er plot t he gr owt h of car p populat ions r egar ding

of MHC-II gene per cent age

  p er t u m b u h an d en g an p er sen t ase MHC- II m em iliki persentase MHC- II yang lebih sedikit sebesar - 74,2%. Ko relasi negat if ini m en g- sedangk an populasi ik an yang pertu m buhan- indikasikan bahwa sem akin tinggi bobot rata- nya lam bat m em ilik i persentase MHC- II leb ih rata ikan m ak a sem akin sedik it p ersen tase banyak h ing ga m en cap ai 100 %. g en MHC- II yan g t er d et ek si p ad a set i ap

KESIMPULAN DAN SARAN

  po pu lasi. Besarn ya peng aruh p ertu m b uh an terhadap kem uncu lan g en MHC- II dit entu kan Hub un gan an tara p ertu m b uh an d en gan oleh nilai korelasi yaitu R = - 0,742 atau - 74,2% g en MHC- II m em ilik i k orelasi yan g negatif dengan tingkat ketelitian P< 0,05 atau m em iliki dengan nilai korelasi R = - 74,2%. Semakin cepat hu bun gan ko relasi yan g b erb eda nyata. Hal pertum buhan populasi ikan m as m aka sem akin ini menandakan bahwa pertum buhan ikan mas sedik it persent ase in dividu yang m em p unyai

  (bobot) m em berikan kontribusi sebesar - 74,2% gen MHC- II p ad a setiap po pu lasi t ersebu t. terhadap persen tase ketid akm unculan MHC-

  Sehing ga p op ulasi ikan m as yang p ertu m -

  II. Keberadaan MHC- II pada ikan m as u kuran buhannya lam bat m em iliki tingkat persentase d ewasa d ik aren ak an ad anya resp on s im u n p o sit if MHC- II leb ih t in g g i (85 ,7 1 %- 1 0 0 %) spesifik yang sem purna pada ikan dewasa dan diban ding kan po pulasi ikan m as yang per- hal ini tidak ditem ukan pada ikan m uda. Selain tum buhannya cepat (42,86%- 85,71%). itu, ikan m uda hanya bergantung pada respons selu ler n o n - sp esif ik u n t u k b ert ah an d ari

DAFTAR ACUAN

  seran gan m ikroba (Ellis, 1988; Suherm anto et Baratawidjaja, K.G. 1991. Im unologi dasar. Edisi

  al., 2011). Menurut Ottova et al. (2005), MHC- II

  kedua. Fakultas Kedokteran Universitas In- m erup akan respo ns im un sp esifik pen gik at donesia Press. Jakarta, 222 hlm . peptida yang dihasilkan o leh degradasi dari protein lain.

  Ellis, A.E. 1988. General principles of fish vac- cinations. Academ ic Press. London, p. 1- Sebaran titik ko relasi ant ara pertum buhan 19. dengan MHC- II d apat d ilihat pada Gam b ar 5.

  Fujaya, Y. 2004. Fisiologi ikan. Rineka citra. Pada Gam bar 5 terlihat jelas sebaran popu lasi Jakarta, 179 hlm. yang pertum buh an cepat b erada di atas se- dang kan po pu lasi yan g pert um bu han yang Herper, B. & Prugnin, Y. 1984. Com m ercial fish lam bat b erku m pu l d i b awah d an m end ekati f arm in g , wit h t h e sp ecial ref eren ce t o persentase MHC- II tertinggi. Dari gambar skema fish culture in Israel. Jhon Wiley and sons. seb ar an t i t i k , l eb ih m en u n j u k k an b ah w a

  New York, Chichster, Brisbane, Toronto, p op ulasi ik an yang p ert u m b uh ann ya cepat 271 pp. Iriyanto, A. 2005. Patologi ikan teleostei. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta, 256 hlm. Mudjiutam i, E., Ciptoroso, Zainun, Z., Sumarjo,

  & Rahm at. 2007. Pem anfaatan Im unosti- m ulan untuk pengendalian penyakit pada ikan mas. J. Budidaya Air Tawar , 4(1): 1- 9. Ottova, E., Simkova, A., Martin, J- F., de Bellocq, J.G., Gelnar, M., Allienne, J- F., & Morand, S.

  Tawar , hlm. 12- 19.

  Jakarta, hlm. 31- 40.

  pengelolaan dan pengendalian penyak it KHV. Pu sat Ri set Per ik an an Bu d id aya.

  Sunarto, A. 2005. Epidem ologi penyakit koi herpes virus (KHV) di Indo nesia. Dalam Supriyadi, H. & Priono, B. (Eds.) St r at egi

  Aer om onas Hydr ophila. J. Kelaut an, 4(2): 49- 56.

  Pem b er i an t o t al f en o l t er i p an g p asi r (Holot hur ia scabr a) untuk m eningkatkan leukosit dan diferensial leukosit Iikan m as (Cypr inus car pio) yan g d iin feksi bakteri

  Suherm anto, A., Andayani, S., & Maftuch. 2011.

  Muharam , C. 2011. Produksi calon induk ikan m as tahan penyakit. J. Budidaya Air

  2005. Evolution and tans- spesies polymor- phism of MHC class IIb genes in cyprinid fish. Fish and Shellfish Im m unology, 18: 199- 222. Rakus, K.L., Wiegertjes, G.F., Adamek, M., Bekh,

  Bandung, 232 hlm . Sucipto, A., Yanti, D.H., Djajanurdjasa, A., &

  Su b o w o . 1 9 9 3 . Im u n o b i o l o g i . An g k as a.

  Teknologi Akuakultur . Pusat Riset Perikanan Budidaya. Jakarta, hlm. 79- 86.

  Saputra, A., Praseno, O., Sudrajat, A., & Prasetio, A.B. 2010. Pertum buhan beberapa strain ikan m as yang dipelihara pada tam bak ber- salinitas rendah. Pr osiding For um Inovasi

  Shellfish Im munology, 24: 734- 744.

  V., Stet, R.J.M., & Irnazarow, I. 2008. Appli- cation of PCR- RF- SSCP to study m ajor his- tocom patibility class II B polym orphism in com m on carp (Cypr inus car pio L.). Fish &

  Hubungan ant ar a per t um buhan ..... (Er m a Pr i m anit a Hay uningt y as)