11 Gambar 5. Diagram Alir Penelitian Ketahanan Panas Isolat E. Sakazakii
Asal Susu Formula dan Makanan Bayi
1. Pemilahan Cepat Isolat Tahan Panas
Tahapan pemilahan cepat isolat tahan panas meliputi persiapan inokulum, persiapan menstruum pemanas, pengujian ketahanan panas untuk pemilahan isolat, serta pencawanan
dan perhitungan koloni. Penjelasan untuk tiap tahapan adalah sebagai berikut,
a. Persiapan inokulum
Delapan isolat E. sakazakii ditumbuhkan ke dalam media BHIB Brain Heart Infusion Broth dan diinkubasi selama 16 jam pada suhu 37
C untuk memperoleh kultur yang berada pada fase stasioner. Pada fase ini jumlah koloni diperkirakan sebesar 10
9
CFUml. Sel yang berada pada fase stasioner lebih resisten terhadap berbagai jenis stresstekanan termasuk stress terhadap panas Jay 2000, oleh karena itu inokulasi pada
menstruum pemanas dilakukan dengan menggunakan kultur yang telah mencapai fase stasioner.
b. Persiapan
Menstruum Pemanas
Menstruum pemanas yang dipilih untuk tahapan pemilahan cepat isolat ini adalah Tryptose Soy Broth Iversen et al. 2004 TSB dipersiapkan sesuai dengan instruksi
pembuatan yang tertera pada kemasan. Media ini dipersiapkan sebanyak 9 ml pada erlenmeyer 50 ml untuk tiap isolat E.sakazakii yang diuji. Selanjutnya dilakukan
sterilisasi media TSB. Analisis
penurunan jumlah
mikroba S
Isolat Enterobacter sakazakii Asal Susu Formula dan Makanan Bayi
• Analisis Nilai D
• Analisis Nilai Z
• Perhitungan Nilai D
72
• Perhitungan Nilai D
70
• Pemilahan cepat Isolat Tahan Panas
Isolat tahan panas terpilih
Kajian Ketahanan Panas Isolat Pemilahan Cepat
12
c. Pengujian Ketahanan Panas Untuk Pemilahan Isolat
Pemilahan cepat isolat dilakukan dengan cara menginokulasikan kultur E. sakazakii yang telah mencapai fase stasioner ke dalam menstruum pemanas TSB.
Jumlah kultur E.sakazakii yang diinokulasikan ke dalam menstruum pemanas adalah sebesar 10
8
CFUml. Menstruum pemanas yang digunakan terlebih dahulu dipanaskan hingga mencapai suhu 54
C pada waterbath shaker, setelah penunjuk suhu pada waterbath shaker terbaca konstan kultur E. sakazakii diinokulasikan ke dalam
menstruum pemanas. Pemanasan berlangsung selama 32 menit. Beberapa erlenmeyer yang digunakan pada tahapan pemilahan cepat isolat ini dilengkapi dengan termometer
untuk memonitor suhu selama pemanasan berlangsung. Setelah pemanasan selesai dilakukan pendinginan pada air mengalir untuk mencegah terjadinya pemanasan
lanjutan.
d. Pencawanan dan Perhitungan koloni BAM 2001
