Uji Total Plate Count TPC Pemeriksaan Bacillus cereus

Tabel 1. Jumlah sampel pada tiap kecamatan No Kecamatan Jumlah sampel 1. Cijeruk 5 2. Caringin 7 3. Jasinga 7 4. Kelapa Nunggal 5 5. Lebak Wangi 3 6. Nanggung 5 7. Parung 5 8. Sukajaya 5 9. Sukamanah 4 10. Tenjolaya 2 Total sample 48

b. Uji Total Plate Count TPC

• Disiapkan cawan petri steril dan diberi kode sesuai sampel yang diambil, dibuat duplo. • Secara aseptis sampel susu bubuk ditimbang sebanyak 20 gram. • Dicampur dengan pengencer BPW sebanyak 180 ml, dihomogenkan. • Larutan tersebut dibuat pengenceran mulai dari 10 -1 sampai 10 -3 . • Diambil 1 ml dari tiap-tiap pengenceran, dimasukan kedalam cawan petri steril. • Masing-masing cawan petri tersebut dituangkan 15-20 ml plate count agar suhu 40-50°C. • Cawan ditutup dan dihomogenkan secara perlahan dengan membentuk angka delapan, didiamkan beberapa saat hingga agar memadat. • Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 35-37°C selama 18-24 jam Lukman et al. 2007. • Seluruh koloni yang tumbuh diamati dan dihitung dengan cara seperti dibawah ini : Jumlah koloni per ml = Jumlah koloni per cawan x encer Faktorpeng 1

c. Pemeriksaan Bacillus cereus

• Disiapkan cawan petri yang telah diisi media manitol egg yolk polymyxine agar, dibuat duplo dan diberi kode sesuai sampel yang diambil. • Secara aseptis sampel susu bubuk ditimbang sebanyak 20 gram. • Dicampur dengan pengencer BPW sebanyak 180 ml, dihomogenkan. • Larutan di heat shock dengan waterbath pada suhu 75°C selama 20 menit. • Setelah dikeluarkan dari waterbath larutan didiamkan atau didinginkan sebentar. • Dibuat pengenceran mulai dari 10 sampai 10 -3 dari larutan tersebut. • Diambil 0,1 ml dari tiap-tiap pengencer dan dimasukan ke dalam cawan petri yang telah disiapkan. diratakan dengan menggunakan “hockey stick” . • Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 30°C selama 24 -48 jam. • Diamati koloni yang diduga B.cereus, yaitu koloni yang berwarna merah jambu dengan zona presipitasi disekelilingnya, kemudian dihitung cawan yang memiliki jumlah 15-150 koloni. • Diisolasi 5 atau lebih koloni yang diduga B.cereus ke nutrient agar miring, diinkubasi selama 24 jam pada suhu 30°C. • Koloni yang tumbuh dikonfirmasi dengan uji biokimiawi dan pewarnaan Gram Rhodehamel dan Harmon 1998.

d. Uji Konfirmasi