Penetapan Kadar Klopidogrel dalam Sediaan Tablet secara Spektrofotometri Sinar Tampak
Lampiran 1. Data Pengukuran Operating Time Kalium Permanganat dengan
Penambahan Klopidogrel Bisulfat
Waktu (menit) Absorbansi 2 0,391 3 0,387 4 0,394 5 0,379 6 0,376 7 0,371 8 0,368 9 0,366 10 0,364 11 0,360
12 0,356 13 0,352 14 0,352 15 0,349 16 0,346 17 0,346 18 0,342 19 0,339 20 0,340 21 0,335 22 0,334 23 0,330 24 0,328 25 0,331 26 0,328 27 0,324 28 0,322 29 0,324 30 0,321 31 0,321 32 0,318 33 0,323 34 0,318 35 0,313 36 0,315 37 0,311 38 0,309 39 0,307 40 0,307 41 0,310 42 0,307 43 0,303 44 0,302 45 0,302
Lampiran 2. Perhitungan Persamaan Regresi Kalium Permanganat dengan
Penambahan Klopidogrel Bisulfat Konsentrasi Absorbansi
2
2 No
X Y
XY (X) (Y) 1 0,748 0.559504
2 5 0,679 25 0,461041 3,395
3 10 0,607 100 0,386449 6,07
4 15 0,545 225 0,297025 8,175
5 20 0,470 400 0,2209 9,4
6 25 0,403 625 0,162409 10,075
7 30 0,342 900 0,116964 10,26
8 35 0,275 1225 0,075625 9,625
2
2
= = ƩX ƩY
ƩX = 140 ƩY = 4,069 ƩXY = 57 3500 2,261917 x y � = 17,5 � = 0,5086
ΣXY-(ΣX)(ΣY)/ n a =
2
2
- ( / n ΣX ΣX) 57 - (140)(4,069) / 8
=
2
3500 - (140) / 8
- 14,2075 =
1050 = -0,01353 b = y
� – a . x� = 0,5086 - (-0,01353)(17,5) = 0,7454 Persamaan Kurva Kalibrasi : y = -0,01353x + 0,7454
ΣXY-(ΣX)(ΣY)/ n r =
2
2
2
2
- ( / n - ( / n ��ΣX ΣX) ��ΣY ΣY) �
57-(140)(4,069)/ 8 r =
2
2
/ 8 / 8 ��3500- (140) ��2,261917- (4,069) �
= -0,9998
Lampiran 3. Contoh Perhitungan Penimbangan Sampel
Berat 20 tablet = 4,6650 gram Tiap tablet salut selaput mengandung klopidogrel bisulfat setara dengan 75 mg klopidogrel base Mr Klopidogrel Bisulfat = 419,9 Mr Klopidogrel = 321,8
419,9
Kandungan Klopidogrel Bisulfat dalam tablet = × 75 = 97,86 mg
321,8
Dibuat larutan uji dengan konsentrasi 20 µg/ml Ditimbang serbuk setara dengan 50 mg klopidogrel bisulfat, maka berat sampel yang ditimbang adalah
50 mg Berat penimbangan sampel= × 4665,0 mg = 119,1 mg 20 × 97,86 mg
Sampel yang telah ditimbang dimasukkan ke dalam labu ukur 50 ml, lalu dilarutkan dengan pelarut HCl 0,1 N dan dicukupkan sampai garis tanda dengan HCl 0,1N 50 mg 50.000 µg
Kadar Larutan Uji = = = 1000 µg/ml 50 ml 50 ml Kemudian dipipet 2,5 ml larutan uji, lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml dan dicukupkan sampai garis tanda dengan HCl 0,1N
2,5 ml × 1000 µg Kadar Larutan Uji = = 100 µg/ml 25 ml
Kemudian dipipet 5,0 ml larutan uji, lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml dan ditambahkan 2,5 ml KMnO 0,05%, lalu didiamkan selama 20 menit dan
4 dicukupkan dengan HCl 0,1N hingga batas tanda.
5 ml × 100 µg Kadar Larutan Uji = = 20 µg/ml 25 ml
Lampiran 4. Perhitungan Statistik kadar Klopidogrel Bisulfat dalam Tablet
Klopidogrel Generik Dexa Medica
2 No Kadar (X) (%) � �) X-X (X-X
1 98,77 0,2 0,04 2 98,68 0,11 0,0121 3 99,34 0,77 0,5929 4 97,59 -0,98 0,9604 5 97,63 -0,94 0,8836 6 99,39 0,82 0,6724
X � = 98,57 Ʃ = 3,1614
2
3,1614 ∑ (X-X�)
SD = � = � = 0,7952 n-1
5 Jika tara f kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01 ; n = 6, dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,0321 Data ditolak jika t hitung tabel atau t hitung tabel
≥ t ≤ - t �
X-X t = SD
⁄ √n t hitung 1 : 0,2 / 0,3246 = 0,6161 t hitung 2 : 0,11 / 0,3246 = 0,3389 t hitung 3 : 0,77 / 0,3246 = 2,3722 t hitung 4 : -0,98 / 0,3246 = -3,0191 t hitung 5 : -0,94 / 0,3246 = -2,8959 t hitung 6 : 0,82 / 0,3246 = 2,5262 (semua data diterima) Jadi kadar sebenarnya terletak diantara : µ = X � ± t × SD /
√n
⁄ α� ; dk �1-1 2 ±
= 98,57 (4,3021 × 0,7952 / √6)
± 1,40)% = (98,57
Lampiran 5. Perhitungan Statistik kadar Klopidogrel Bisulfat dalam Tablet
Klopidogrel Generik PT Hexpharm Jaya
2 No Kadar (X) (%) � �) X-X (X-X
1 99,93 0,67 0,4489 2 99,31 0,05 0,0025 3 99,23 -0,03 0,0009 4 99,26 0,00 0,000 5 98,86 -0,40 0,16 6 98,97 -0,29 0,0841
X � = 99,26 Ʃ = 0,6964
2
0,6964 ∑ (X-X�)
SD = � = � = 0,3732 n-1
5 Jika tara f kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01 ; n = 6, dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,0321 Data ditolak jika t hitung tabel atau t hitung tabel
≥ t ≤ - t �
X-X t = SD
⁄ √n t hitung 1 : 0,67 / 0,1524 = 4,3963 (data ditolak) t hitung 2 : 0,05 / 0,1524 = 0,3281 t hitung 3 : -0,03 / 0,1524 = 0,1969 t hitung 4 : 0 / 0,1524 = 0,0000 t hitung 5 : -0,4 / 0,1524 = -2,6247 t hitung 6 : -0,29 / 0,1524 = -1,9029 Karena t hitung 1 tabel maka data ditolak, selanjutnya dilakukan pengujian
≥ t terhadap data yang dianggap tidak menyimpang
2 No Kadar (X) (%) X-X � (X-X �)
1 99,31 0,18 0,0324 2 99,23 0,1 0,01 3 99,26 0,13 0,0169 4 98,86 -0,27 0,0729 5 98,97 -0,16 0,0256
X � = 99,13 Ʃ = 0,1578
2
0,1578 ∑ (X-X�)
SD = � = = 0,1986 � n-1
4 Jika tara f kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01 ; n = 5, dk = 4, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,6040 Data ditolak jika t hitung tabel atau t hitung tabel
≥ t ≤ - t �
X-X t = SD
⁄ √n t hitung 1 : 0,18 / 0,0888 = 2,0270 t hitung 2 : 0,1 / 0,0888 = 1,1261 t hitung 3 : 0,13 / 0,0888 = 1,4640 t hitung 4 : -0,27 / 0,0888 = -3,0405 t hitung 5 : -0,16 / 0,0888 = -1,0818 (semua data diterima) Jadi kadar sebenarnya terletak diantara : µ = X � ± t × SD /
√n
⁄ α� ; dk �1-1 2
= 99,13 ± (4,6040 × 0,1986 / √5)
± 0,41)% = (99,13
Lampiran 6. Perhitungan Statistik kadar Klopidogrel Bisulfat dalam Tablet Vaclo
(Dexa Medica)
2 No Kadar (X) (%) � �) X-X (X-X
1 101,18 -0,33 0,1089 2 101,11 -0,4 0,16 3 101,95 0,44 0,1936 4 101,38 -0,13 0,0169 5 100,99 -0,52 0,2704 6 102,47 0,96 0,9216
X � = 101,51 Ʃ = 1,6714
2
1,6714 ∑ (X-X�)
SD = � = � = 0,5782 n-1
5 Jika tara f kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01 ; n = 6, dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,0321 Data ditolak jika t hitung tabel atau t hitung tabel
≥ t ≤ - t �
X-X t = SD
⁄ √n t hitung 1 : -0,33 / 0,2360 = -1,3983 t hitung 2 : -0,4 / 0,2360 = -1,6949 t hitung 3 : 0,44 / 0,2360 = 1,8644 t hitung 4 : -0,13 / 0,2360 = -0,5508 t hitung 5 : -0,52 / 0,2360 = -2,2034 t hitung 6 : 0,96 / 0,2360 = 4,0678 (data ditolak) Karena t hitung 6 tabel maka data ditolak, selanjutnya dilakukan pengujian
≥ t terhadap data yang dianggap tidak menyimpang
2 No Kadar (X) (%) X-X � (X-X �)
1 101,18 -0,14 0,0196 2 101,11 -0,21 0,0441 3 101,95 0,63 0,3969 4 101,38 0,06 0,0036 5 100,99 -0,33 0,1089
X � = 101,32 Ʃ = 0,5731
2
0,5731 ∑ (X-X�)
SD = � = = 0,3785 � n-1
4 Jika tara f kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01 ; n = 5, dk = 4, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,6040 Data ditolak jika t hitung tabel atau t hitung tabel
≥ t ≤ - t �
X-X t = SD
⁄ √n t hitung 1 : -0,14 / 0,1693 = -0,8269 t hitung 2 : -0,21 / 0,1693 = -1,2404 t hitung 3 : 0,63 / 0,1693 = 3,7212 t hitung 4 : 0,06 / 0,1693 = 0,3544 t hitung 5 : -0,33 / 0,1693 = -1,9492 (semua data diterima) Jadi kadar sebenarnya terletak diantara : µ = X � ± t × SD /
√n
⁄ α� ; dk �1-1 2
= 101,32 ± (4,6040 × 0,3785 / √5)
= (101,32 ± 0,78)%
Lampiran 7. Perhitungan Statistik kadar Klopidogrel Bisulfat dalam Tablet
Plavos (Soho)
2 No Kadar (X) (%) � �) X-X (X-X
1 101,36 0,41 0,1681 2 101,78 0,83 0,6889 3 101,31 0,36 0,1296 4 99,18 -1,77 3,1329 5 100,38 -0,57 0,3249 6 101,68 0,73 0,5329
X � = 100,95 Ʃ = 4,9773
2
4,9773 ∑ (X-X�)
SD = � = � = 0,9977 n-1
5 Jika taraf kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01 ; n = 6, dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,0321 Data ditolak jika t hitung tabel atau t hitung tabel
≥ t ≤ - t �
X-X t = SD
⁄ √n t hitung 1 : 0,41 / 0,4073 = 1,0066 t hitung 2 : 0,83 / 0,4073 = 2,0378 t hitung 3 : 0,36 / 0,4073 = 0,8839 t hitung 4 : -1,77 / 0,4073 = -4,3457 (data ditolak) t hitung 5 : -0,57 / 0,4073 = -1,3995 t hitung 6 : 0,73 / 0,4073 = 1,7923 Karena t hitung 4 tabel maka data ditolak, selanjutnya dilakukan pengujian
≤ -t terhadap data yang dianggap tidak menyimpang
2 No Kadar (X) (%) X-X � (X-X �)
1 101,36 0,06 0,0036 2 101,78 0,48 0,2304 3 101,31 0,01 0,0001 4 100,38 -0,92 0,8464 5 101,68 0,38 0,1444
X � = 101,30 Ʃ = 1,2249
2
1,2249 ∑ (X-X�)
SD = � = = 0,5534 � n-1
4 Jika taraf kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01 ; n = 5, dk = 4, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,6040 Data ditolak jika t hitung tabel atau t hitung tabel
≥ t ≤ - t �
X-X t = SD
⁄ √n t hitung 1 : 0,06 / 0,2259 = 0,2656 t hitung 2 : 0,48 / 0,2259 = 2,1248 t hitung 3 : 0,01 / 0,2259 = 0,0443 t hitung 4 : -0,92 / 0,2259 = -4,0726 t hitung 5 : 0,38 / 0,2259 = 1,6822 (semua data diterima) Jadi kadar sebenarnya terletak diantara : µ = X � ± t × SD /
√n
⁄ α� ; dk �1-1 2
= 101,30 ± (4,6040 × 0,5534 / √5)
±
= (101,30 1,14)%
Lampiran 8. Perhitungan Statistik kadar Klopidogrel Bisulfat dalam Tablet
Pidovix (Lapi)
2 No Kadar (X) (%) � �) X-X (X-X
1 99,37 -0,67 0,4489 2 99,16 -0,88 0,7744 3 101,21 1,17 1,3689 4 98,86 -1,18 1,3924 5 100,33 0,29 0,0841 6 101,33 1,29 1,6641
X � = 100,04 Ʃ = 5,7328
2
5,7328 ∑ (X-X�)
SD = � = � = 1,0708 n-1
5 Jika tara f kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01 ; n = 6, dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,0321 Data ditolak jika t hitung tabel atau t hitung tabel
≥ t ≤ - t �
X-X t = SD
⁄ √n t hitung 1 : -0,67 / 0,4372 = 1,5325 t hitung 2 : -0,88 / 0,4372 = 2,0128 t hitung 3 : 1,17 / 0,4372 = 2,6761 t hitung 4 : -1,18 / 0,4372 = -2,6990 t hitung 5 : -0,29 / 0,4372 = -0,6633 t hitung 6 : 1,29 / 0,4372 = 2,9509 (semua data diterima) Jadi kadar sebenarnya terletak diantara : µ = X � ± t × SD /
√n
⁄ α� ; dk �1-1 2 ±
= 100,04 (4,3021 × 1,0708 / √6)
± 1,88)% = (100,04
Lampiran 9. Data Kadar Klopidogrel dalam Sediaan Tablet Nama Sediaan Penimbangan (mg) Setara (mg)
Medica) 126,8 50,48 0,469 20,191 20,429 101,18 127,8 50,88 0,467 20,350 20,576 101,11 126,3 50,28 0,468 20,111 20,503 101,95 127,0 50,56 0,468 20,223 20,503 101,38 127,5 50,76 0,468 20,303 20,503 100,99 126,1 50,20 0,467 20,080 20,576 102,47
102,4 53,11 0,457 21,245 21,316 100,32 102,8 53,32 0,453 21,328 21,611 101,33 Kadar Rata-Rata (%) Standard Deviasi Kadar Sebenarnya (%) 100,04 1,0708 100,04
101,6 52,70 0,462 21,079 20,946 99,37 97,5 50,57 0,474 20,228 20,059 99,16 99,4 51,56 0,463 20,622 20,872 101,21 97,8 50,73 0,474 20,290 20,059 98,86
1,14 Pidovix (Lapi)
Kadar Rata-Rata (%) Standard Deviasi Kadar Sebenarnya (%) 100,95 0,5853 101,30 ±
130,5 51,30 0,464 20,519 20,798 101,36 127,2 50,00 0,470 20,000 20,355 101,78 130,1 51,14 0,465 20,456 20,724 101,31 131,0 51,49 0,469 20,597 20,429 99,18 129,9 51,06 0,468 20,425 20,503 100,38 128,7 50,59 0,467 20,236 20,576 101,68
0,78 Plavos (Soho)
Kadar Rata-Rata (%) Standard Deviasi Kadar Sebenarnya (%) 101,51 0,3785 101,32 ±
0,41 Vaclo (Dexa
Absorbansi
Kons.Kadar Rata-Rata (%) Standard Deviasi Kadar Sebenarnya (%) 99,26 0,1986 99,13 ±
108,3 51,42 0,469 20,570 20,429 99,31 108,0 51,28 0,470 20,513 20,355 99,23 106,0 50,33 0,475 20,133 19,985 99,26 108,4 51,47 0,470 20,589 20,355 98,86 107,5 51,04 0,472 20,418 20,207 98,97
(PT Hexpharm Jaya) 105,3 50,00 0,475 20,000 19,985 99,93
1,40 Clopidogrel Generik
Kadar Rata-Rata (%) Standard Deviasi Kadar Sebenarnya (%) 98,57 0,7952 98,57 ±
(Dexa Medica) 119,6 50,21 0,477 20,084 19,837 98,77 120,6 50,63 0,475 20,252 19,985 98,68 119,8 50,29 0,475 20,118 19,985 99,34 121,5 51,01 0,476 20,403 19,911 97,59 121,0 50,80 0,477 20,319 19,837 97,63 119,3 50,08 0,476 20,034 19,911 99,39
Teoritis (µg/ml) Kons. Perolehan (µg/ml) Kadar (%) Clopidogrel Generik
± 1,88
Lampiran 10. Perhitungan Persentase (%) Perolehan Kembali
Berat 20 tablet = 4665,0 mg Berat 1 tablet = 233,25 mg Kandungan Zat Berkhasiat = 97,86 mg
Perolehan 80%
80 = × 50 mg = 40 mg
100 Analit 70%
70 = × 40 mg = 28 mg
100 Serbuk yang ditimbang setara dengan 28 mg 28 mg
= × 4665,0 mg = 66,7 mg 20 × 97,86 mg Baku 30%
30 = × 40 mg = 12 mg
100
Perolehan 100%
100 = × 50 mg = 50 mg
100 Analit 70%
70 = × 50 mg = 35 mg
100 Serbuk yang ditimbang setara dengan 35 mg 35 mg
= × 4665,0 mg = 83,4 mg 20 × 97,86 mg Baku 30%
30 = × 50 mg = 15 mg
100
Perolehan 120%
= 120 100
× 50 mg = 60 mg Analit 70%
=
70 100
× 60 mg = 42 mg Serbuk yang ditimbang setara dengan 42 mg
= 42 mg 20 × 97,86 mg
× 4665,0 mg = 100,1 mg Baku 30%
=
30 100
× 60 mg = 18 mg
Lampiran 11. Data Hasil Uji Validasi Metode dengan Parameter Akurasi, Presisi,
Analit (µg/ml)
Rata-Rata (% Recovery) Relatif Standar Deviasi Batas Deteksi (LOD) Batas Kuantitasi (LOQ)
0,521 0,422 16,585 23,902 7,200 101,63 8 0,520 0,423 16,659 23,829 7,200 99,58 9 0,518 0,420 16,807 24,050 7,200 100,60
7 120
0,554 0,473 14,146 20,133 6,000 99,78 5 0,553 0,472 14,220 20,207 6,000 99,78 6 0,555 0,473 14,072 20,133 6,000 101,02
4 100
3 0,596 0,530 11,042 15,920 4,800 101,63
80 0,595 0,531 11,116 15,846 4,800 98,54 2 0,597 0,532 10,968 15,772 4,800 100,08
1
Setelah Penambahan
Batas Deteksi (LOD), dan Batas Kuantitasi (LOQ) pada Tablet Klopidogrel Generik (PT Dexa Medica)
Analit (µg/ml)
Sebelum Penambahan
Penambahan Analit
Analit Setelah
Sebelum Penambahan
Persen perolehan (%)
Analit yang ditambahkan (µg/ml)
(%) Absorbansi Konsentrasi
No Konsentrasi
: 100,29 % : 1,02 % : 0,842 µg/ml : 2,809 µg/ml
Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Persamaan Regresi : y = -0,01353x + 0,7454 Konsentrasi Absorbansi
2 No Yi Y-Yi (Y-Yi)
(X) (Y) 1 0,748 0,7454 0,0036 0,00001296 2 5 0,679 0,6778 -0,0031 0,00000961
3 10 0,607 0,6101 0,0012 0,00000144
4 15 0,545 0,5424 0,0025 0,00000625
5 20 0,470 0,4748 -0,0048 0,00002304
6 25 0,403 0,4072 -0,0042 0,00001764
7 30 0,342 0,3395 0,0025 0,00000625
8 35 0,275 0,2719 0,0031 0,00000961 0,0000868
2
Σ(Y-Yi) Sy
� =� x n-2
0,0000868 = �
6 = 0,0038 3 × Sy/x LOD =
� � Slope 3 × 0,0038
= � �
- 0,01353 = 0,842 µg/ml 10 × Sy/x
LOQ = � �
Slope 10 × 0,0038 =
� �
- 0,01353 = 2,809 µg/ml
Lampiran 13. Nilai Distribusi t
Lampiran 14. Surat Sertifikasi Bahan Baku POM
Lampiran 15. Surat Sertifikasi Bahan Baku Pabrik Klopidogrel Bisulfat (PT
Soho Industri Farmasi)
Lampiran 16. Tablet Klopidogrel yang Digunakan Gambar 5. Tablet Klopidogrel Generik Gambar 6. Tablet Klopidogrel Merek Dagang
Lampiran 17. Data Spesifikasi Sampel 1.
Tablet Clopidogrel
Komposisi : Tiap kaplet salut selaput mengandung clopidogrel bisulfat 97,9 mg setara dengan clopidogrel basa 75 mg
No. Batch : 429011 Produsen : PT Hexpharm Jaya No. Pendaftaran : GKL 1008516509A1 Tanggal Kadaluarsa : September 2014 2.
Tablet Clopidogrel
Komposisi : Tiap tablet salut selaput mengandung klopidogrel bisulfat setara dengan klopidogrel basa 75 mg No. Batch : 4307152 Produsen : PT Dexa Medica No. Pendaftaran : GKL 0905044017A1 Tanggal Kadaluarsa : Juli 14
® 3.
Pidovix
Komposisi : Tiap tablet salut selaput mengandung 98 mg clopidogrel bisulfate (setara dengan 75 mg clopidogrel basa)
No. Batch : P8022 Produsen : PT Lapi Laboratories No. Pendaftaran : DKL 0913315117A1 Tanggal Kadaluarsa : Juni 15
® 4.
Plavos
Komposisi : Tiap tablet salut selaput mengandung clopidogrel bisulfate yang setara dengan clopidogrel 75 mg No. Batch : 12L0280 Produsen : PT Soho Industri Farmasi No. Pendaftaran : DKL 1024227717A1 Tanggal Kadaluarsa : Desember 14
® 5.
Vaclo
Komposisi : Tiap tablet salut selaput mengandung clopidogrel bisulfate setara dengan clopidogrel 75 mg No. Batch : 4310240 Produsen : PT Dexa Medica No. Pendaftaran : DKL 0834607717A1 Tanggal Kadaluarsa : Oktober 14
Lampiran 18. Alat Spektrofotometer UV-Visibel Gambar 7. Spektrofotometer UV-Visibel