Optimasi metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) densitometri pada penetapan kadar campuran metil salisilat dan eugenol dalam sediaan krim ``X`` - USD Repository

  

OPTIMASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT) –

DENSITOMETRI PADA PENETAPAN KADAR METIL SALISILAT DAN

EUGENOL DALAM SEDIAAN KRIM ‘X’

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Farmasi Oleh:

  Vinsensia Vica Dwi Ediningtyas NIM: 088114176

  

OPTIMASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT) –

DENSITOMETRI PADA PENETAPAN KADAR METIL SALISILAT DAN

EUGENOL DALAM SEDIAAN KRIM ‘X’

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Farmasi Oleh:

  Vinsensia Vica Dwi Ediningtyas NIM: 088114176

HALAMAN PERSEMBAHAN

  Bingkisan kecil yang tak berpita ini aku persembahkan untuk Bapak, Ibu, Mas Yosef Orang-orang yang menyayangiku, dan Almamaterku

  

PRAKATA

  Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan yang Maha Pengasih atas segala berkat dan pendampingan-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Optimasi Metode Kromatografi Lapit Tipis (KLT) - Densitometri Pada Penetapan Kadar Metil Salisilat dan Eugenol Dalam Sediaan Krim ‘X’” dengan baik dan lancar. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu persyaratan memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Farmasi (S.

  Farm).

  Penulis menyadari bahwa selama menuntut ilmu S1 di Fakultas Farmasi dan penyusunan skripsi ini mendapat banyak bantuan, saran, bimbingan, nasihat, kritikan, dan dukungan dari berbagai pihak sehingga segalanya dapat berjalan dengan baik dan lancar. Pada kesempatan ini, penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :

  1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

  2. Bapak Jeffry Julianus, M.Si., selaku Dosen Pembimbing Akademik dan dosen pembimbing skripsi yang telah memberikan masukan, meluangkan waktu untuk diskusi dan selalu mendampingi selama masa studi.

  3. Ibu Christine Patramurti, M.Si., Apt. yang telah meluangkan waktu untuk diskusi, masukan, dan kritikan selama pembuatan skripsi ini.

  5. Ibu Prof. Dr. Sri Noegrohati, Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan saran selama penyusunan skripsi.

  6. Mas Bimo, Pak Parlan, dan Pak Kethul yang telah banyak membantu dan selalu memberikan canda tawa selama penulis melakukan penelitian.

  7. Segenap dosen dan karyawan atas ilmu dan pengalaman yang berharga sehingga berguna dalam proses penyusunan skripsi dan kehidupan sehari- hari.

  8. Seluruh staff laboratorium, keamanan, dan kebersihan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  9. Bapak YB. Sukardi dan Ibu Margareta Sriwidiyati, orang tua tercinta yang telah bekerja keras demi pendidikan penulis dan selalu mendoakan serta memberi semangat sehingga penulis dapat menyelesaikan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  10. Mas Yosef Wismo Eko Subroto, kakak yang paling cuek tapi baik hati dan perhatian yang selalu memberikan dukungan dan masukan.

  11. Vincentkaun Sanggraha M.T. yang selalu ada untuk penulis, memberikan perhatian, selalu mendukung dan menyemangati penulis, terutama ketika rasa jenuh melanda.

  12. Rosita Secoadi dan Dhimas Bayu Kinasih, sahabat sekaligus rekan skripsi yang sangat hebat dan luar biasa.

  13. Keluarga Djuminten : Dju, Satya, Uchan, Aga, Cici, Brian, dan Kak Cos

  14. Kelompok AntiStress : Velly, Novie, Heppy, Ike, Yuni, Paul, Adi, Elisa, dan Sasa atas kebersamaan, kebahagiaan, semangat, dan masukan yang selalu diberikan.

  15. Dian, Anna, Pius, Agnes dan teman-teman kelompok praktikum C atas dukungan, kebersamaan, dan keceriaan selama ini.

  16. Teman-teman angkatan 2008, khususnya kelas C dan FST B, karena bersama kalian penulis belajar, bertumbuh, dan berkembang menjadi lebih baik.

  17. Intan, Tyas, Ines, Monik, Evy, Etha, Lina, dan penghuni kost Palem lainnya, yang selalu menemani, memberikan keceriaan dan mendengarkan segala keluh kesah penulis.

  18. Kelompok KKN 29 : Ratih, Aldo, Intan, Fajar, Steffi, Gita, Valent, dan Helga atas keceriaan dan kebersamaan dari KKN hingga saat ini.

  19. Dhom-dhom, Yenny, Asdo, dan David untuk persahabatan dan kebersamaan yang penulis rasakan dari SMA hingga sekarang.

  20. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu atas segala bantuan dan semangatnya selama masa studi dan penyusunan skripsi ini.

  Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam skripsi ini sehingga segala kritik dan saran dari semua pihak demi perkembangan selanjutnya sangat penulis harapkan. Akhir kata semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak, terutama dalam dunia Kefarmasian.

  DAFTAR ISI

  HALAMAN JUDUL .................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................. ii HALAMAN PENGESAHAN ....................................................................... iii HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................... iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................ v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ........... vi PRAKATA ................................................................................................... vii DAFTAR ISI ................................................................................................ x DAFTAR TABEL ........................................................................................ xiv DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xv DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xvii

  INTISARI ..................................................................................................... xix

  

ABSTRACT ................................................................................................... xx

BAB I PENGANTAR ...................................................................................

  1 A. Latar Belakang .......................................................................................

  1 1. Permasalahan ..................................................................................

  3 2. Keaslian Penelitian ..........................................................................

  3 3. Manfaat Penelitian ..........................................................................

  4 B. Tujuan Penelitian ...................................................................................

  4

  B. Metil Salisilat .........................................................................................

  5 C. Eugenol..................................................................................................

  7 D. Kromatografi Lapis Tipis .......................................................................

  8 1. Tinjauan Umum ..............................................................................

  8 2. Fase Diam .......................................................................................

  9 3. Fase Gerak ......................................................................................

  10 4. Penotolan Sampel ............................................................................

  10 5. Pengembangan ................................................................................

  11 6. Deteksi ............................................................................................

  12 7. Penilaian Kromatogram ...................................................................

  13 E. Densitometri ..........................................................................................

  17 F. Analisis Kuantitatif ................................................................................

  17 G. Landasan Teori ......................................................................................

  18 H. Hipotesis ................................................................................................

  19 BAB III METODE PENELITIAN ................................................................

  20 A. Jenis Dan Rancangan Penelitian .............................................................

  20 B. Variabel Penelitian .................................................................................

  20 1. Variabel Bebas ................................................................................

  20 2. Variabel Tergantung ........................................................................

  20 3. Variabel Pengacau Terkendali .........................................................

  21 C. Definisi Operasional ..............................................................................

  21

  F. Tata Cara Penelitian ...............................................................................

  22 1. Pembuatan Fase Gerak ....................................................................

  22 2. Pembuatan Larutan Baku Asam Salisilat .........................................

  23 3. Pembuatan Larutan Baku Eugenol ...................................................

  23

  4. Pembuatan Larutan Baku Campuran Asam Salisilat dan Eugenol ...........................................................................................

  24

  5. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Asam Salisilat dan Eugenol ...........................................................................................

  24 6. Preparasi Sampel .............................................................................

  25 7. Optimasi Metode KLT-Densitometri ...............................................

  25 G. Analisis Hasil .........................................................................................

  27 BAB IV HASIL PEMBAHASAN.................................................................

  29 A. Pembuatan Larutan Baku .......................................................................

  29 B. Preparasi Sampel ....................................................................................

  30 C. Jenis Dan Komposisi Fase Gerak ...........................................................

  31 D. Penentuan Panjang Gelombang Pengamatan Eugenol dan Asam Salisilat ..................................................................................................

  32 E. Optimasi Pemisahan Asam Salisilat dan Eugenol dengan Metode KLT-Densitometri ..................................................................................

  34 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.........................................................

  47 A. Kesimpulan ............................................................................................

  47

  LAMPIRAN .................................................................................................

  52 BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................

  74

  

DAFTAR TABEL

Tabel I. Indeks polaritas pelarut .............................................................

  10 Tabel II. Parameter aplikasi penotolan yang direkomendasikan...............

  11 Tabel III. Komposisi dan jenis fase gerak .................................................

  23 Tabel IV. Nilai R f dan A s pada asam salisilat dan eugenol dengan metode KLT-densitometri pada berbagai jenis dan komposisi fase gerak .................................................................................

  37 Tabel V. Nilai R f , A s , dan R s pada larutan baku campuran asam salisilat dan eugenol dengan tiga seri konsentrasi dan tiga kali replikasi menggunakan fase gerak toluena p.a : etil asetat p.a : metanol p.a (65,2 : 2,4 : 32,4) ...............................................................

  44 Tabel VI. Nilai % KV dari R f asam salisilat dan eugenol, A s puncak asam salisilat dan eugenol, serta R s pada tiga konsentrasi seri larutan baku campuran dengan tiga kali replikasi .................

  44

  ®

  Tabel VII. Nilai R f , A s , dan R s pada larutan sampel dari krim Counterpain tiga kali replikasi menggunakan fase gerak toluena p.a : etil asetat p.a : metanol p.a (65,2 ; 2,4 : 32,4) ...................................

  45 Tabel VIII. Nilai % KV (R f , A s , dan R s ) larutan sampel dari krim

  ® Counterpain pada tiga kali replikasi .........................................

  45

  

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Struktur metil salisilat ............................................................

  16 Gambar 10. Perhitungan Nilai A s ............................................................

  35 Gambar 16. Densitogram hasil elusi menggunakan fase gerak toluena p.a : etil asetat p.a : metanol p.a (65,2 : 2,4 : 32,4) ......................

  35 Gambar 15. Bagian polar dan non polar ....................................................

  33 Gambar 14. Interaksi hidrogen dengan fase diam .......................................

  32 Gambar 13. Spektra pada konsentrasi sedang ............................................

  30 Gambar 12. Auksokrom dan kromofor ....................................................

  27 Gambar 11. Reaksi metil salisilat menjadi asam salisilat dan reaksi eugenol menjadi bentuk garam dan molekul utuh ...................

  s 10 % dari bagian bawah puncak ............

  5 Gambar 2. Pembentukan asam salisilat ...................................................

  16 Gambar 9. Perhitungan Nilai A

  15 Gambar 8. Puncak asimetri ......................................................................

  14 Gambar 7. Ilustrasi pengaruh lintasan ganda (multiple-path effect), longitudinal or axiak diffusion, dan transfer massa .................

  11 Gambar 6. Perhitungan nilai R s pada puncak yang berdekatan .................

  7 Gambar 5. Automatic TLC sampler .........................................................

  7 Gambar 4. Struktur eugenol ....................................................................

  7 Gambar 3. Struktur asam salisilat ............................................................

  40

  Gambar 18. Densitogram hasil elusi larutan baku campuran asam salisilat dan eugenol ............................................................................

  43 Gambar 19. Densitogram hasil elusi larutan sampel ......................................

  43

  

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Certificate of Analysis Baku Asam Salisilat for Synthesis .......

  53 Lampiran 2. Certificate of Analysis Baku Eugenol for R & D .....................

  54 Lampiran 3. Data Penimbangan dan Pengambilan Baku dan Sampel serta Contoh Perhitungan Konsentrasi Baku ...................................

  54 Lampiran 4. Contoh Perhitungan Indeks Polaritas Fase Gerak ....................

  56 Lampiran 5. Sistem KLT-Densitometri yang digunakan .............................

  57 Lampiran 6. Hasil Scanning Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Asam Salisilat dan Eugenol ....................................................

  58 Lampiran 7. Densitogram Hasil Elusi Menggunakan Fase Gerak Metanol p.a. : Air : Asam Asetat Glasial p.a. (40 : 60 : 1) ....................

  59 Lampiran 8. Densitogram Hasil Elusi Menggunakan Fase Gerak Toluena p.a. : Etil Asetat p.a. (95 : 5) ..................................................

  60 Lampiran 9. Densitogram Hasil Elusi Menggunakan Fase Gerak Toluena p.a. : Etil Asetat p.a. : Metanol p.a. (25 : 50 : 25) ...................

  61 Lampiran 10. Densitogram Hasil Elusi Menggunakan Fase Gerak Toluena p.a. : Etil Asetat p.a. : Metanol p.a. (30 : 45 : 25) ...................

  62 Lampiran 11. Densitogram Hasil Elusi Menggunakan Fase Gerak Toluena p.a. : Etil Asetat p.a. : Metanol p.a. (30 : 50 : 20) ...................

  63 Lampiran 12. Densitogram Reprodusibilitas Baku .......................................

  64

  Lampiran 15. Contoh Perhitungan Nilai R s (Resolusi) Puncak Asam Salisilat dan Eugenol .............................................................

  72 Lampiran 16. Contoh Perhitungan Nilai Asymmetry Factor (A a ) Puncak Asam Salisilat dan Eugenol ....................................................

  73

  

INTISARI

  Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan kondisi yang optimal dari pemisahan metil salisilat yang dihidrolisis terlebih dahulu menjadi asam salisilat dan eugenol menggunakan metode KLT-densitometri. Metode KLT-densitometri pada penelitian ini menggunakan fase diam silika gel F 254 dengan beberapa komposisi dan jenis fase gerak, yaitu metanol p.a : air : asam asetat glasial p.a (40:60:1); toluena p.a : etil asetat p.a (95:5); toluena p.a : etil asetat p.a : metanol

  

p.a (25:50:25); toluena p.a : etil asetat p.a : metanol p.a (30:45:25); toluena p.a :

  etil asetat p.a : metanol p.a (30:50:20) dan toluena p.a : etil asetat p.a : metanol

  

p.a (65,2 : 2,4 : 32,4) serta panjang gelombang 288 nm untuk mendeteksi dengan

  densitometer. Parameter pemisahan yang baik, yaitu nilai asymmetry factor (A )

  s

  0,95–1,1; nilai resolusi (R s ) > 1,5; nilai R f 0,2-0,8 dan %KV nilai R f ≤ 2.

  Kondisi optimal metode KLT-densitometri diperoleh dengan menggunakan fase gerak toluena p.a : etil asetat p.a (65,2:2,4:32,4) menghasilkan nilai R f 0,23 untuk asam salisilat dan 0,61 untuk eugenol, nilai A s kedua puncak 1, nilai R s kedua puncak antara 4,35 – 5,20 serta %KV R f 1,361 untuk asam salisilat dan 0,514 untuk eugenol.

  Kata kunci: optimasi, metode KLT-densitometri, metil salisilat, asam salisilat, eugenol

  

ABSTRACT

There are many creams to relieve pain with main component is methyl

salicylate that is an ester and phenolic group can acts as analgesic. Besides that,

there are eugenol that also a phenol group and can act as analgesic. The purpose

of this study to obtain the optimal conditions of separation of methyl salicylate

and eugenol using TLC-densitometry method, in which methyl salicylate first

hydrolyzed into salicylic acid. Therefore, the standard used is salicylic acid and

eugenol.

  TLC-densitometric method in this study using silica gel F stationary 254

phase with a mobile phase composition and type, is methanol p.a : water : glacial

acetic acid p.a (40 : 60 : 1); toluene p.a : ethyl acetate p.a (95 : 5); toluene p.a :

ethyl acetate p.a : methanol p.a (25 : 50 : 25); toluene p.a : ethyl acetate p.a :

methanol p.a (30 : 45 : 25); toluene p.a : ethyl acetate p.a : methanol p.a (30 : 50 :

20); and toluene p.a : ethyl acetate p.a : methanol p.a (65,2 : 2,4 : 32,4) and 288

nm wavelength to detect with the densitometer. Good separation parameters is the

asymmetry factor (A s ) between 0,95 to 1,1; the resolution (R s ) > 1,5; R f values

between 0,2-0,8 and % CV of R f value of salicylic acid and eugenol

  ≤ 2. Optimal conditions of the TLC-densitometric method for analyzing

methyl salicylate and eugenol in ‘X’ cream obtained in this study using silica gel

  

F 254 stationary phase and mobile phase toluene p.a : ethyl acetate p.a : methanol

p.a (65,2 : 2,4 : 32,4). Optimal conditions resulted in the value of R f 0,23 for

salicylic acid and 0,61 for eugenol, the peak value of A s 1, the value of R s two

peaks between 4,35 to 5,20 and % CV R 1,361 for salicylic acid and 0,514 for

f eugenol .

  

Keywords : optimization, TLC-densitometric method, methyl salicylate, salicylic

acid, eugenol

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Aktivitas yang tinggi dari masyarakat menyebabkan timbulnya rasa nyeri

  pada otot dan sendi. Nyeri merupakan rasa sensorik tidak nyaman yang berhubungan dengan kerusakan atau adanya potensi untuk terjadinya kerusakan jaringan (Ibrahim, 2011).

  Banyak obat yang beredar untuk mengurangi rasa nyeri yang biasanya . berupa krim dan digunakan secara topikal Krim topikal ini biasanya digunakan untuk pengobatan awal kaku di leher, tegang, dan sakit otot. Salah satu krim yang banyak digunakan oleh masyarakat memiliki komponen utama metil salisilat sebesar 102 mg/g yang merupakan golongan fenol. Selain metil salisilat, terdapat golongan fenol yang juga bertindak sebagai analgesik yaitu eugenol sebanyak 13,2 mg/g.

  Metil salisilat merupakan komponen pada beberapa tanaman seperti

  

Ambyoma variegatum , A. Hebraeum, dan Lawsonia inermis yang banyak

  digunakan untuk anestetik lokal, des infektan dalam pasta gigi, mouthwash, dan pemberi rasa (Ameen and Olantuji, 2009). Metil salisilat merupakan golongan ester yang dengan adanya penambahan asam atau basa dapat terhidrolisis menjadi asam salisilat. Eugenol merupakan komponen utama dari minyak cengkeh (70- peranan penting sebagai bahan dasar pembuatan produk dalam industri farmasi. Selain itu, eugenol dapat diproses menjadi isoeugenol, eugenol asetat, dan vanilin yang dapat digunakan sebagai bahan baku dalam industri parfum dan makanan (Harnani, 2010).

  Atas dasar penjelasan di atas, perlu dilakukan penelitian untuk menetapkan kadar metil salisilat dan eugenol dalam sediaan krim ‘X’ untuk menjamin mutu dan khasiat dalam sediaan tersebut. Penetapan kadar dapat menggunakan beberapa metode yaitu Kromatografi Gas (KG), Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT), dan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Dalam penelitian ini digunakan metode KLT-densitometri karena metode ini memberikan fleksibilitas yang lebih besar dalam memilih fase gerak dan pelarut, memiliki berbagai macam teknik untuk optimasi pemisahan, apabila terjadi kesalahan dapat dihentikan kapan saja, semua komponen dalam sampel dapat dideteksi (Gandjar dan Rohman, 2007), serta dapat dilakukan pemisahan dan kuantifikasi analit secara bersamaan. Selain itu, metode KLT-densitometri ini mudah dalam penggunaannya sehingga dengan cara yang sederhana diharapkan dapat memisahkan campuran metil salisilat dan eugenol. Penetapan kadar dilakukan secara tidak langsung karena metil salisilat yang merupakan ester dihidrolisis terlebih dahulu menjadi asam salisilat. Hal ini dilakukan karena adanya penggunaan basa untuk memecah basis krim yang juga dapat menghidrolisis metil salisilat. Selain itu dikarenakan tidak tersedianya baku metil salisilat sehingga salisilat yang terhidrolisis (Gearin and Grabowski, 1969) sehingga kadar asam salisilat hasil hidrolisis akan ekivalen dengan kadar metil salisilat di dalam sampel krim.

  Sebelum dilakukan penetapan kadar, perlu dilakukan optimasi untuk memperoleh sistem yang optimal. Optimasi yang akan dilakukan adalah optimasi jenis dan komposisi fase gerak yang akan digunakan dalam sistem KLT- densitometri supaya dapat dihasilkan pemisahan yang baik dari campuran eugenol dan asam salisilat (hasil hidrolisis metil salisilat pada sampel) dengan nilai

  

asymmetry factor (A s ) pada rentang 0,95 – 1,1, nilai R s >1,5, nilai R f antara 0,2 –

  0,8 , dan %KV ≤ 2.

  1. Permasalahan

  Bagaimanakah kondisi optimal dalam pemisahan metil salisilat dan eugenol pada krim ‘X’ menggunakan metode KLT-densitometri?

  2. Keaslian Penelitian

  Sejauh yang peneliti ketahui, optimasi metode KLT-densitometri untuk penetapan kadar metil salisilat dan eugenol dalam sediaan krim ‘X’ belum pernah dilakukan. Penelitian terdahulu terkait penelitian yaitu Densitometric

  

Determination of Betamethasone Dipropionate and Salicylic Acid in Lotions, and

Validation of the Method oleh Wulandari dan Indrayanto (2000) menggunakan

  fase gerak etanol : toluena : kloroform : asam asetat glasial (6 : 2 : 14 : 0,5) dan

  

Quantitive HPTLC Analysis of the Eugenol Content Leaf Powder and a Capsule

  Penelitian lain menggunakan metode spektrofotometri yaitu Determination of

  

Benzoic Acid and Salicylic Acid in Commercial Benzoic and Salicylic Acid

Ointments by Spectrophotometric Method oleh Ahmad and Vaid (2009).

3. Manfaat penelitian

  a. Manfaat praktis. Penelitian ini dapat memberikan informasi mengenai sistem yang optimal untuk validasi dan penetapan kadar campuran metil salisilat dan eugenol dalam sediaan krim ‘X’.

  b. Manfaat metodologis. Penelitian ini dapat dijadikan salah satu acuan untuk melakukan validasi metode dan penetapan kadar metil salisilat dan eugenol

  .

  dalam sediaan krim ‘X’

B. Tujuan Penelitian

  Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan kondisi optimal dari pemisahan metil salisilat dan eugenol pada krim ‘X’ menggunakan metode KLT- densitometri yang menghasilkan nilai asymmetry factor (A s ) antara 0,95 – 1,1 , nilai R f antara 0,2 – 0,8 , nilai R s >

  1,5 dan %KV ≤ 2.

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Krim Krim adalah sediaan setengah padat berupa emulsi yang mengandung bahan obat terlarut dan terdiri dari tidak lebih dari 60% air (Syamsuni, 2006). Sediaan krim diaplikasikan pada kulit dan mukus membran untuk tujuan melindungi, terapi, atau mencegah penyakit (The Department of Health, 2010b) . Krim diformulasi sebagai emulsi minyak dalam air atau air dalam

  minyak. Saat ini krim lebih diarahkan untuk produk minyak dalam air atau dispersi mikrokristal asam-asam lemak atau alkohol berantai panjang dalam air yang dapat dicuci dengan tujuan estetika dan untuk penggunaan kosmetika (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995). Stabilitas krim akan rusak apabila terjadi perubahan suhu dan komposisi. Pengenceran krim dilakukan bila sesuai dengan pengenceran yang cocok dan dilakukan secara aseptis. Penggunaan krim yang telah diencerkan harus dalam waktu satu bulan (Syamsuni, 2006).

B. Metil salisilat

  Metil salisilat terdiri dari tidak kurang 99,0% b/b dan tidak lebih dari 100,5 % b/b metil 2-hidroksibenzoat, tidak berwarna atau kuning terang, sangat larut dalam air, larut dalam alkohol, minyak lemak dan minyak esensial (The Department of Health, 2010a). Nilai dalam etanol sekitar 570 maks pada λ 238 nm dan 280 maks 306 nm (Clarke, 1971). Metil salisilat memiliki titik pada λ

  o

  didih 221

  C, nilai log (koefisien partisi oktanol-air) 2,55 (Rhodia, 2011),

  o -7 water solubility 7400 mg/L pada suhu 30

  C, dan konstanta Henry 9,3 x 10

  3

  atm m / mol (Toxnet, 1994) Metil salisilat merupakan komponen utama minyak wintergreen, yang merupakan minyak dengan harum alami. Metil salisilat dapat diperoleh dari destilasi daun Gaultheria procumbens Lime atau dari kulit kayu Betula lenta. Biasanya metil salisilat digunakan sebagai analgesik, counterirritant¸ pestisida dan parfum (Environmental Protection Agency, 2005).

  Metil salisilat dapat dibentuk menjadi asam salisilat dengan penambahan NaOH yang disebut dengan reaksi saponifikasi. Prosedur umum dengan merefluks metil salisilat dalam 6M NaOH hingga campuran menjadi homogen dan membentuk garam natrium salisilat yang larut dalam air. Kemudian dilanjutkan dengan pengasaman untuk membentuk asam salisilat (Newton, 2011). Tiap 1 molekul asam salisilat yang terbentuk akan ekivalen dengan 1 molekul metil salisilat (Gearin and Grabowski, 1969).

  _{O C OCH 3 C} O _{O C O OH} H O NaOH/H O _{2 o}

  3 _OH 100 C _{OH OH} asam salisilat metil salisilat

  Gambar 2. Pembentukan asam salisilat (Newton, 2011)

  Asam salisilat sukar larut dalam air dan mudah larut dalam alkohol (The

  o

  Department of Health, 2010a), memiliki titik didih 211

  C, tekanan uap 3,19

  o

  mmHg, water solubility 3808 mg/L pada suhu 25

  C, pH 3,8, nilai log 2,26

• 9

  3

  (Vijon, 2008) dan konstanta Henry 1,52 x 10 atm m / mol (RSC, 2012). Asam salisilat memiliki nilai 300 nm dalam 0,5 N NaOH sebesar 260 pada λ maks dan dalam 0,1 N asam maks 302 nm (Clarke, 1971). sulfat sebesar 259 pada λ

  O C OH OH Gambar 3. Struktur asam salisilat

C. Eugenol

  Nama lain dari eugenol adalah 2-metoksi-4(prop-2-enil)fenol. Eugenol memiliki kelarutan dalam alkohol (70% v/v), asam asetat glasial dengan alkohol, minyak lemak dan metilklorida. Akan tetapi, tidak dapat larut dalam air dan gliserol. Eugenol tidak berwarna atau berwarna kuning pucat, berbentuk cairan, menjadi gelap apabila terpapar oleh cahaya dan berbau daun yang kuat (The

  o

  Department of Health, 2010c). Eugenol memiliki titik didih 248

  C, nilai 2,7,

  o

  tekanan uap 1 mmHg pada suhu 78,4 C (TCI America, 2008), konstanta Henry 2

• 6 3 o

  x 10 atm m /mol pada suhu 25

  C, dan water solubility 0,0398 mol/L (National Toxicology Program, 2012) Nilai eugenol dalam etanol sebesar 406 dengan

  

maks maks 282 nm serta dalam 0,1 N N aOH sebesar 552

  λ 231,5 nm dan 193 pada λ maks maks 296 nm (Clarke, 1971). pada λ 246 nm dan 262 pada λ

  Eugenol merupakan komponen utama dari minyak cengkeh yaitu sebesar 70-80% yang bersifat sebagai anestetik lokal, karminatif, stimulan, antiseptik, antipasmodik, analgesik, antiemetik dan penambah aroma. Oleh sebab itu, eugenol dapat digunakan dalam pembuatan sabun, detergen, pasta gigi, parfum dan produk farmasi. Penggunaan eugenol dalam produk farmasi di antaranya balsam untuk mengurangi rasa nyeri, obat sakit gigi, dan bahan campuran untuk menambal gigi (Nurdjannah, 2004).

D. Kromatografi Lapis Tipis

1. Tinjauan Umum

  kromatografi, di mana pemisahan dapat dilihat dari bercak-bercak yang ditimbulkan (Braithwaite and Smith, 1999). Dalam pelaksanaannya, KLT lebih murah, lebih mudah, dan peralatannya lebih sederhana dibandingkan dengan kromatografi kolom. Keuntungan lainnya adalah sebagai berikut : a. KLT banyak digunakan untuk tujuan analisis.

  b. Pemisahan analit dapat diidentifikasi dengan menggunakan pereaksi warna, fluoresensi, atau radiasi menggunakan sinar UV.

  c. Elusi dapat dilakukan dengan cara menaik, menurun atau elusi 2 dimensi.

  d. Analit yang ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak sehingga ketepatan penentuan kadar akan lebih baik (Gandjar dan Rohman , 2007).

2. Fase diam

  Fase diam KLT terdiri atas lapisan tipis adsorbent, seperti silika gel atau bubuk selulosa, yang melapisi material penyokong seperti plat gelas atau plastic

  

foil. Ketebalan adsorbent yang disarankan berada antara 150-250 µm (Jeffery,

  Bassett, Mendham, and Denney, 1989). Sedangkan, ukuran partikel adsorbent yang disarankan adalah 10-25 µ m. Adsorbent yang sering digunakan adalah silika gel dengan gipsum sebagai pengikat yang umum digunakan. Sebelum digunakan,

  o

• plat silika gel perlu diaktifkan terlebih dahulu di dalam oven dengan suhu 120

  o

  150 C untuk menghilangkan air yang ada pada permukaan silika. Jika temperatur

  3. Fase gerak

  Fase gerak dalam KLT dapat menggunakan pustaka atau dengan mencoba-coba. Fase gerak yang paling sederhana jika menggunakan 2 pelarut organik karena daya elusi dapat diatur sehingga pemisahan akan optimal. Beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam memilih fase gerak :

  a. Kemurnian fase gerak harus sangat tinggi karena KLT merupakan metode yang sensitif.

  b. Harga R f solut terletak antara 0,2-0,8 supaya pemisahan maksimal.

  Oleh karena itu, kemampuan fase gerak untuk mengelusi harus diatur.

  c. Apabila fase diam yang digunakan bersifat polar, maka polaritas dari fase gerak akan menentukan nilai R f . Misalnya penambahan dietil eter yang sifatnya sedikit polar ditambahkan ke dalam metil benzil yang bersifat non polar akan menyebabkan harga R f meningkat secara signifikan (Gandjar dan Rohman, 2007).

  Tabel I. Indeks polaritas pelarut (Byers, 2003) Solven Indeks Polaritas Kelarutan dalam Air %

  Toluena 2,4 0,051 Etil Asetat 4,4 8,7 Metanol 5,1 100 Asam Asetat 6,2 100 Air 9,0 100

  4. Penotolan sampel

  Pemisahan yang optimal pada metode KLT dapat diperoleh jika akan ditotolkan lebih dari 15µL karena dapat menyebabkan terjadinya pelebaran bercak dan puncak ganda (Adamovics, 1997).

  Tabel II. Parameter aplikasi penotolan yang direkomendasikan (Adamovics, 1997) Diameter Bercak Konsentrasi Sampel Tujuan Jumlah Sampel (µg) (mm) (%)

  2 mm untuk volume 0,1-1(plat KLT-KT) Densitometer 0,02-0,2 sampel 0,5 µL 1-10 (konvensional)

  3 mm untuk volume Identifikasi 0,1-1 1-20 sampel 1 µL

  4 mm untuk volume Uji kemurnian 5 100 sampel 2 µL

  Reprodusibilitas aplikasi penotolan secara manual dapat diperoleh apabila sampel yang ditotolkan paling sedikit 0,5 µL. Jika volume yang akan ditotolkan lebih dari 2-10 µL maka penotolan harus dilakukan secara bertahap dengan dilakukan pengeringan antar totolan (Adamovics, 1997).

  

Gambar 5. Automatic TLC sampler (Sherma, 2002)

5. Pengembangan

  Plat yang telah ditotol dimasukkan ke dalam bejana yang telah dijenuhi pengembangan secara menaik (ascending) dan secara menurun (descending). Namun, cara yang paling popular adalah cara pengembangan secara menaik (Gandjar dan Rohman, 2007).

6. Deteksi

  Pada umumnya bercak pada KLT merupakan bercak yang tidak berwarna sehingga untuk mendeteksinya dapat dilakukan secara fisika, kimia, dan biologi.

  Secara fisika yang biasa digunakan adalah dengan flouresensi di bawah sinar ultraviolet yang akan membuat bercak terlihat jelas. Namun, jika senyawa tidak dapat berfluoresensi, fase diam perlu diberi indikator supaya dapat berfluoresensi sehingga bercak akan kelihatan hitam (Gandjar dan Rohman, 2007).

  Deteksi bercak juga dapat menggunakan cara kimia yaitu dengan cara :

  a. Menyemprot plat dengan reagen yang akan bereaksi dengan analit sehingga bercak yang muncul akan berwarna.

  b. Plat dilihat di bawah lampu UV dengan panjang gelombang 254 atau 366 nm untuk menampakkan solut sebagai bercak yang gelap.

  c. Plat disemprot dengan asam sulfat pekat atau asam nitrat pekat dan dipanaskan supaya analit organik teroksidasi sehingga akan muncul bercak coklat hingga kehitaman.

  d. Plat dipaparkan dengan uap iodium pada chamber tertutup.

  e. Plat discanning dengan densitometer, di mana analit yang mampu menyerap cahaya akan menghasilkan kromatogram-kromatogram (Gandjar

7. Penilaian Kromatogram

  Pada KLT hasil yang diperoleh diterangkan dengan nilai R (retardation

  f

factor ) yang merupakan parameter fundamental karena menggambarkan posisi

bercak pada kromatogram (Lepri and Cincinelli, 2002).

  (1) Beberapa variabel dapat mempengaruhi nilai R , di antaranya komposisi pelarut,

  f

  suhu, ukuran chamber, dan lapisan sorbent (Braithwaite and Smith, 1999). Nilai R f memiliki nilai maksimum adalah 1 yang diperoleh ketika perbandingan antara distribusi (D) dan faktor retensi (k’) sama dengan nol yang berarti solut dan fase gerak memiliki kecepatan migrasi yang sama. Sedangkan, nilai minimum R f adalah 0 yang berarti solut berada pada titik penotolan atau dengan kata lain tertahan pada fase diam (Gandjar dan Rohman, 2007). Dalam analisis kuantitaif dengan metode KLT, nilai R f berada antara 0,2 dan 0,8 (Prus and Kowalska, 2003).

  Resolusi (R s ) menggambarkan pemisahan antar puncak yang berdekatan. Puncak yang overlapping memiliki nilai resolusi yang kecil. Pemisahan antar puncak yang berdekatan apabila memiliki nilai R s > 1,5. Cara perhitungan nilai R s sebagai berikut :

  (2) t

  1 dan t 2 merupakan waktu retensi antara puncak pertama dan puncak kedua,

  

Gambar 6. Perhitungan nilai R pada puncak yang berdekatan (Snyder, Kirkland, and

_s

Glaich, 2010)

  Selama pemisahan krmatografi, kromatogram akan memiliki bentuk yang simetris atau dikenal dengan bentuk Gaussian. Namun, terkadang akan terjadi pelebaran puncak karena solut-solut akan bermigrasi ke fase diam sehingga akan membentuk puncak yang asimetri. Prinsip yang mendasari bentuk dan pelebaran puncak sebagai berikut :

  a. Proses pemindahan solut dari fase gerak ke fase diam (sorpsi) dan sebaliknya (desorpsi) yang terjadi terus menerus dapat menyebabkan pelebaran puncak.

  b. Pengaruh lintasan ganda (multiple-path effect) yang menyebabkan solut memiliki perjalanan yang sedikit berbeda dalam melewati fase diam sehingga puncak melebar secara simetris.

  c. Solut akan berdifusi di dalam fase gerak dengan arah yang sama dan berlawanan dengan aliran fase gerak (longitudinal or axiak diffusion) sehingga akan terjadi pelebaran puncak secara simetris.

  d. Transfer massa antara fase diam dan fase gerak yang tidak terjadi terikat sedikit pada fase diam dibanding pada fase gerak akan menghasilkan puncak yang asimetris (Gandjar dan Rohman, 2007).

  

Gambar 7. Ilustrasi pengaruh a). lintasan ganda (multiple-path effect) b). longitudinal or

axiak diffusion c). transfer massa (Braithwaite and Smith, 1999).

  Hasil kromatogram yang diperoleh diharapkan memiliki bentuk yang simetris atau memiliki bentuk Gaussian (A s /T f = 1). Akan tetapi, bentuk puncak yang terjadi biasanya memiliki bentuk yang asimetris, seperti fronting atau tailing. Puncak yang asimetris tersebut dapat dikarakterisasi dengan menggunakan

  

asymmetry factor (A s ) yang dihitung 10% dari bagian bawah puncak (Snyder,

  Kirkland, and Glaich, 2010). Syarat nilai A s yang baik adalah berada pada rentang 0,95 dan 1,1.

  

Gambar 8. Puncak asimetri a). fronting b). tailing (Braithwaite and Smith, 1999).

  (3)

  

Gambar 9. Perhitungan Nilai A 10 % dari bagian bawah puncak (Snyder, Kirkland, dan

_s

Glaich, 2010).

  Presisi (keseksamaan) adalah ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil uji individual yang diukur melalui penyebaran hasil individual dari rata-rata apabila prosedur diterapkan secara berulang pada sampel- sampel yang diambil dari campuran yang homogen. Kriteria presisi diperoleh apabila metode memliki simpangan baku relatif atau koefisien v ariasi ≤ 2 % (Harmita, 2004). Simpangan baku relatif atau koefisien variansi (KV) adalah sebagai berikut :

E. Densitometri

  Densitometri merupakan kuantifikasi secara langsung pada KLT dengan tujuan mendapatkan akurasi, preparasi dan sensitivitas yang optimal (Cimpan, 2004). Adanya interaksi radiasi elektromagnetik dengan bercak yang ada pada KLT adalah dasar dari densitometri (Gandjar dan Rohman, 2007).

  Densitometer memiliki kemampuan untuk mengukur jarak migrasi dengan akurat dan memeriksa spektra UV-Vis pada bercak secara in situ (Cimpan, 2004). Densitometer mengukur perbedaan absorbansi atau sinyal fluoresensi antara bercak dan plat dan pengukuran sinyal dari seri standar hingga sampel yang diidentifikasi. Densitometer dengan komputer modern bisa menghasilkan kurva kalibrasi yang menguhubungkan antara absorbansi atau fluoresensi dengan besar atau konsentrasi standar dan menetapkan kadar yang tidak diketahui dengan interplasi otomatis dari kurva. Pada densitometer terdapat 2 lampu, yaitu tungsten atau lampu halogen yang digunakan untuk membaca panjang gelombang antara 400-800 nm (absorpsi visibel) dan lampu deuterium untuk membaca panjang gelombang antara 190-450 (absorpsi ultraviolet) (Sherma, 2002).

F. Analisis Kuantitatif

  Penyiapan sampel dan proses kromatografi dalam analisis kuantitatif harus dalam keadaan stabil, sehingga beberapa syarat yang harus dipenuhi : a. Senyawa yang dianalisis harus telah diketahui dan terpisah dari b. Standar yang digunakan harus telah diketahui dan memiliki kemurnian yang tinggi.

  c. Prosedur kalibrasi harus digunakan (Gandjar dan Rohman, 2007). Kuantifikasi pada kromatografi planar, seperti KLT dan kromatografi kertas dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu : a. Metode in situ, yaitu mengukur bercak pada plat dengan menggunakan densitometer yang akan menghasilkan kromatogram.

  b. Mengkerok bercak senyawa yang akan dianalisis pada plat dan dimasukkan ke dalam tabung. Setelah itu, ditambahkan pelarut yang dapat melarutkan senyawa tersebut dan dilakukan sentrifugasi. Supernatan yang terbentuk diambil dan dianalisis dengan teknik kuantitatif, seperti spektrometri ultraviolet, visibel atau fluoresensi atau dengan kromatografi gas atau cair (Jeffery et al., 1989).

G. Landasan Teori

  Sediaan krim ‘X’ dengan komponen utama metil salisilat yang merupakan golongan fenol banyak digunakan oleh masyarakat untuk mengatasi nyeri otot. Selain metil salisilat, terdapat pula komponen lain yang termasuk golongan fenol yaitu eugenol dan juga bertindak sebagai analgesik.

  Metil salisilat dan eugenol merupakan bahan alam yang memiliki efek farmakologis sebagai analgesik. Metil salisilat merupakan golongan ester untuk memecah matriks krim ‘X’. Metil salisilat merupakan komponen utama minyak wintergreen sedangkan eugenol merupakan komponen utama dalam minyak cengkeh.