Isolasi Khamir dari Nira, Tuak dan Laru Asal Pulau Nias dan Uji Kemampuannya dalam Memproduksi Bioetanol dari Limbah

39

LAMPIRAN

Lampiran 1: Komposisi dan Penyiapan Media Pengkayaan (Enrichment
Media), Komposisi Media Sakarifikasi

a. Komposisi media pengkayaan (enrichment media) (Sniegowski et al., 2002)
yang telah dimodifikasi yaitu Yeast Extract 0,3%, Malt Extract 0,5%, Pepton
0,5%, Sukrosa 0,5%, Glukosa 0,5%, Etanol (v/v) 7,6%, Kloramfenikol 200 µg
dan HCl 1 M 1 ml, dilarutkan dalam 1000 ml akuades hingga homogen dan
disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit.
b. Komposisi media sakarifikasi (Eshaq et al., 2011) yaitu tepung Limbah 3, Urea
0,3 g/l, (NH4)2SO4 1,3 g/l, KH2PO4 2 g/l, CaCl2 0,3 g/l, MgSO4.7H2O 0,3g/l,
Protease peptone 1,0 g/l, FeSO4.7H2O 5 mg/l, MnSO4.7H2O 1,6 mg/l,
ZnSO4.7H2O 1,6 mg/l, dan COCl2 2 mg/l dilarutkan dalam 1000 ml akuades
hingga homogen dan disterilisasi menggunakaan autoklafpada suhu 121o C
selama 15 menit.

Universitas Sumatera Utara

40

Lampiran 2. Alur Kerja Penelitian

Isolasi Khamir dari Nira, Tuak dan
Laru Asal Pulau Nias

Karakterisasi Morfologi dan
Mikroskopis
u

Uji Penapisan Isolat Khamir Terhadap
Etanol
u

Pembuatan Tepung Limbah

Sakarifikasi Enzimatis Menggunakan
Aspergillus niger

Peremajaan Isolat Khamir

Pembuatan Starter

Penyiapan Medium Fermentasi

Produksi Bioetanol

Universitas Sumatera Utara

41

Lampiran 3. Foto Hasil Penelitian

Inkubasi Hari Ke-1 Isolasi Khamir dari
Laru dalam Media Pengkayaan

Inkubasi Hari Ke-14 Isolasi Khamir dari
Laru dalam Media Pengkayaan

Inkubasi Hari Ke-5 Isolat PN1 dalam
Medium Fermentasi Mengandung Limbah
Kentang

Inkubasi Hari Ke-5 Isolat PN2 dalam
Medium Fermentasi Mengandung Limbah
Kentang

Inkubasi Hari Ke-5 Isolat PN1 dalam
Medium Fermentasi Mengandung Limbah
Talas

Inkubasi Hari Ke-5 Isolat PN2 dalam
Medium Fermentasi Mengandung Limbah
Talas

Universitas Sumatera Utara

42

Lampiran 4. Data Uji Penapisan Khamir Terhadap Etanol

Kode Isolat
PN1
PN2
PN3
PN4
PN5
PN6
PN7

0%
7,537
7,276
7,371
7,217
6,86
7,214
6,462

Jumlah Koloni (Log CFU/ml)
5%
10%
7,324
7,068
7,155
7,107
7,004
6,079
6,913
5,954
5,477
0
7,212
6,29
6,361
6,29

15%
6,886

6,806
5
5
0
0
5,477

Universitas Sumatera Utara

43

Lampiran 5. Kurva Standar Glukosa

1,4
Nilai Absorbansi

1,2
1
0,8
0,6

y = 0,0013x + 0,0045
R² = 0,9967

0,4
0,2
0
0

200

400
600
800
1000
Konsentrasi Gula Reduksi (ppm)

1200

Universitas Sumatera Utara

44

Lampiran 6. Data Pertumbuhan PN1 dan PN2 Selama Fermentasi

Jenis Isolat
dan Limbah
PN1
(Kentang)
PN1
(Singkong)
PN1
(Talas)
PN2
(Kentang)
PN2
(Singkong)
PN2
(Talas)

Hari Ke-1

7,264

Jumlah Koloni (Log CFU/ml)
Hari Ke-2
Hari Ke-3
Hari Ke-4
7,367
7,411
7,382

Hari Ke-5
7,324

7,193

7,264

7,392

7,372

7,336

7,551

7,576

7,614

7,646

7,582

7,139

7,283

7,338

7,311

7,294

7,049

7,064

7,17

7,178

7,123

7,389

7,462

7,569

7,507

7,421

Universitas Sumatera Utara