Efek Ekstrak Daun Katuk (Sauropus androgynus (L.) Merr), Domperidon, dan Kombinasinya terhadap Ekspresi Gen Prolactin Mencit Balb/c Menyusui.

ABSTRAK

EFEK KOMBINASI EKSTRAK DAUN KATUK (Sauropus androgynus (L.) Merr), DOMPERIDON DAN KOMBINASINYA TERHADAP EKSPRESI

GEN PROLACTIN PADA MENCIT BALB/c MENYUSUI Calvin Erdison, 2015.

Pembimbing 1 : Khie Khiong, dr., S.Si., M.Si., M.Pharm.Sc., PhD., PA(K). Pembimbing 2 : Slyvia Soeng, dr., M.Kes., PA(K).

Latar Belakang Air susu ibu (ASI) merupakan nutrisi utama bayi selama 6 bulan setelah kelahiran dan juga berfungsi sebagai asupan tambahan sampai usia 2 tahun. Penelitian terdahulu menunjukkan bahwa daun katuk dan domperidon dapat berperan sebagai galactogogue, akan tetapi penelitian mengenai kombinasi keduanya dalam meningkatkan ekspresi gen prolactin belum dilakukan

Tujuan Menilai pengaruh daun katuk, domperidon dan kombinasinya terhadap ekspresi gen prolactin mencit menyusui

Metode Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) bersifat komparatif. Hewan coba yang digunakan adalah mencit galur BALB/c betina menyusui berumur 8 minggu yang dibagi menjadi 9 kelompok dengan masing-masing terdiri dari 4 ekor mencit. Kelompok KN (Kontrol Negatif) diberi aquadest, kelompok K1 dan K2 (Katuk dosis I dan dosis II), kelompok D1 dan D2 (Domperidon Dosis I dan dosis II), dan kelompok KD (Kombinasi Katuk - Domperidon) diberi kombinasi ekstrak daun katuk dosis I dan II dan domperidon dosis I dan II selama 12 hari. Data pengamatan dinilai dengan Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) yang dikerjakan dengan elektroforesis. Uji statistic dilakukan dengan metode Analisis Varian (ANAVA) satu arah dan dilanjutkan dengan uji beda rata-rata Tukey HSD (α = 0,005).

Hasil Ekspresi gen prolactin pada Kontrol negatif berbeda sangat bermakna (p=0,00) dengan semua kelompok lainnya. Ekspresi prolactin pada kelompok kombinasi katuk-domperidon (K1D1) berbeda sangat bermakna (p=0,00) dengan kelompok lainnya dimana pada kelompok ini ditunjukkan ekspresi paling kuat dibanding kelompok lainnya

Simpulan : Pemberian kombinasi daun katuk (Sauropus androgynus (L.) Merr.) dan domperidon meningkatkan ekspresi gen prolactin mencit menyusui

ABSTRACT

The Effect of Sweet Leaves Extract, Domperidon, and Their Combination on Prolactin Gene Expression in Breastfeeding BALB/c Mice

Calvin Erdison, 2015

Adviser 1: Khie Khiong, dr., S.Si., M.Si., M.Pharm.Sc., PhD., PA(K). Adviser 2: Slyvia Soeng, dr., M.Kes., PA(K).

Background Breast milk is the main source of babies’ nutrition for the first 6 months and additional nutrition intake until they’re 2 years old. Earlier studies showed that sweet leaves and domperidone can act as galactogogue, but the effect of their combination on increasing the prolactin gene expression has not been studied

Objective To evaluate the effect of sweet leaves, domperidon, and their combination on prolactin gene expression in breastfeeding mice

Method This study is used completely randomized design and was comparative. The experimental objects were 8-weeks old breastfeeding female Balb/c mice and divided in 9 group with 4 mice each group. KN group was given aquadest, K1 and K2 group were given sweet leaves. D1 and D2 group were domperidon. KD group were given the combination of the sweet leaves and domperidon. All treatment were given for 12 days. The observational data were evaluated with RT-PCR. The result were statistically tested with one way ANOVA and Tukey HSD.

Result The prolactin gene Expression in KN group was significantly different from all other groups. The prolactin gene expression in K1D1 group was significantly different from other group, which is the strongest compared with others.

Conclusion The combination of sweet leaves and domperidon increased the prolactin gene expression of breastfeeding mice.

DAFTAR ISI

JUDUL ………i

LEMBAR PERSETUJUAN……….ii

SURAT PERNYATAAN………...iii

ABSTRAK ………iv

ABSTRACT ………v

KATA PENGANTAR ……….vi

DAFTAR ISI ………..viii

DAFTAR TABEL ………xi

DAFTAR GAMBAR ………..xii

DAFTAR LAMPIRAN ………xiii

BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang... 1

1.2 Identifikasi Masalah... 2

1.3 Maksud dan Tujuan Penelitian... 2

1.4 Manfaat Penelitian... 2

1.5 Kerangka Pemikiran dan Hipotesis... 3

1.5.1 Kerangka Pemikiran... 3

1.5.2 Hipotesis Penelitian... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Anatomi Mammae……….. 5

2.1.1 Sistem Limfatik Mammae……….. 6

2.1.2 Perdarahan Mammae……….. 7

2.1.3 Persarafan Mammae ………7

2.2 Fisiologi Laktasi………. 8

2.2.1 Mekanisme Produksi Air Susu………. 9

2.2.2 Ejeksi Air Susu……… 11

2.3 Hormon Prolactin……….12

2.3.1 Domperidon……… 13

2.4 Sauropus androgynous (L.) Merr………14

2.4.1 Fitokimia Sauropus androgynous (L.) Merr………...15

BAB III BAHAN DAN METODE PENELITIAN 3.1 Alat, Bahan, dan Subjek………. 17

3.1.1 Alat dan Bahan……… 17

3.1.2 Subjek Penelitian………..17

3.2 Tahap Penelitian………. 18

3.4 Metode Penelitian………... 18

3.4.1 Desain Penelitian……… 18

3.4.2 Definisi Konsepsional Variabel……….. 19

3.4.3 Definisi Operasional Variabel……… 19

3.4.4 Perhitungan Jumlah Sampel……… 19

3.5 Prosedur Penelitian……… 20

3.5.1 Proses Ekstraksi Daun Katuk……….. 20

3.5.2 Prosedur Kerja………. 21

3.5.3 Prosedur Pemeriksaan Ekspresi Prolactin………... 22

3.6 Metode Analisis………. 23

3.6.1 Hipotesis Statistik……….. 23

3.6.2 Kriteria Uji………. 23

3.7 Aspek Etik Penelitian……… 23

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil Penelitian……….. 25

4.1.1 Ekspresi Prolactin Kelenjar Hipofisis Mencit... 25

4.1.2 Analisis Statistik………. 27

4.2 Pembahasan……….... 30

4.3 Pengujian Hipotesis Penelitian……….. 31

5.1 Simpulan……… 33

5.2 Saran……….. 33

DAFTAR PUSTAKA……….. 34

LAMPIRAN………... 38

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Klasifikasi Sauropus androgynus (L.) Merr ……… 14 Tabel 4.1 Persentase Ekspresi Prolactin Kelenjar Hipofisis terhadap Ekspresi

HPRT antar Kelompok Perlakuan berdasarkan Pengukuran

Densitometer... 26 Tabel 4.2 Hasil Uji ANOVA Persentase Ekspresi Prolactin antar Kelompok

Perlakuan……….. 27 Tabel 4.3 Hasil Uji Beda Rerata Tukey HSD………... 29

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Anatomi Mammae... .5 Gambar 2.4 Daun dan bunga Sauropus androgynus (L.) Merr... 15 Gambar 4.1. Hasil Elektroforesis Prolactin pada Kelenjar Hipofisis……… 25 Gambar 4.2. Grafik Rerata Persentase Ekspresi Prolactin …….………….. 30

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Perhitungan Dosis Bahan Uji dan Pembanding... 38 Lampiran 2 Dokumentasi... 39 Lampiran 3 SURAT KEPUTUSAN KOMISI ETIK PENELITIAN ……... 44

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Penelitian

Air susu ibu (ASI) merupakan makanan terbaik dalam 6 bulan pertama setelah kelahiran dan makanan tambahan sampai usia 2 tahun yang baik untuk perkembangan dan pertumbuhan bayi. Pemberian ASI dapat membantu bayi dalam mengadaptasi perbedaan dunia intrauterin dan dunia luar dalam periode kritis perkembangan otak, sistem imun, dan pencernaan. ASI mengandung nutrisi, antibodi, hormon, faktor imun, dan antioksidan (Sa’roni dkk., 2004; Soka et al., 2010; Chantry et al., 2011). Manfaat menyusui pada kesehatan bayi terutama dalam hal pencegahan beberapa penyakit, seperti alergi, asma dapat mengurangi faktor risiko DM tipe 1 pada masa kanak-kanak (Hord et al, 2011; Bachour et al., 2012; Goldman, 2012).

Laktasi adalah proses fisiologis produksi dan sekresi air susu yang komplek, membutuhkan faktor fisik, emosional dan hormon yang terdiri dari estrogen, progesteron, oksitosin, prolactin dan insulin. Hormon-hormon tersebut bekerja dalam perkembangan sistem ductus mammae dan stroma melalui aktivitasnya pada metabolisme protein, sehingga membantu pembentukan jaringan ikat serta sel-sel baru (Guyton & Hall, 2010). Prolactin terlibat dalam produksi air susu melalui sistem saraf pusat (The Academy of Breastfeeding Medicine Protocol Committee, 2011: Soca et al., 2011).

Survei di Indonesia melaporkan bahwa 38% ibu berhenti memberikan ASI karena kurangnya produksi ASI itu sendiri. Hal tersebut disebabkan oleh faktor psikologi dan asupan gizi ibu. Untuk mengatasi hal tersebut, beberapa jenis tanaman digunakan secara empiris oleh ibu menyusui untuk meningkatkan produksi ASI. Salah satu tanaman tersebut adalah Sauropus androgynus (L.) Merr, di Indonesia dikenal sebagai katuk. Katuk adalah tanaman semak yang termasuk dalam keluarga Euphorbiaceae. Hasil penelitian Soka et. al terdahulu menunjukkan bahwa infusa oral daun katuk dapat meningkatkan produksi susu

pada tikus. Juga dilaporkan bahwa ekstrak daun katuk dapat meningkatkan produksi ASI ibu sampai dengan 50,47% tanpa mengurangi kualitas ASI itu sendiri (Soka et al., 2011).

Obat-obatan yang dapat meningkatkan produksi air susu adalah domperidon dan metoklopramid. Kedua golongan anti emetik tersebut merupakan antagonis dopamin dan berdasarkan penelitian terdahulu menunjukkan dopamin menghambat tonus sekretori sel yang disebabkan karena pengikatan reseptor D2 pada membran sel lactotrophi, menyebabkan terjadi proses eksositosis (pelepasan) prolactin (Fitzgerald, 2008).

1.2 Identifikasi Masalah

1. Apakah pemberian daun katuk dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c menyusui.

2. Apakah pemberian domperidon dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c menyusui

3. Apakah pemberian kombinasi ekstrak daun katuk dan domperidon meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c menyusui

1.3 Maksud dan Tujuan

1.3.1 Maksud Penelitian

Untuk mengetahui pengaruh herbal dan obat yang dapat meningkatkan ekspresi gen prolactin.

1.3.2 Tujuan Penelitian

Mengetahui peningkatan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c menyusui yang diberi ekstrak daun katuk dan domperidon serta kombinasinya

1.4 Manfaat Karya Tulis Ilmiah

 Manfaat akademik: mendapatkan formula atau dosis yang tepat ekstrak daun katuk dan domperidon (tunggal atau kombinasi) dalam meningkatkan produksi ASI.

 Manfaat praktis: memberikan terapi alternatif yang dapat digunakan dalam mengatasi masalah kurangnya produksi ASI pada ibu menyusui.

1.5 Kerangka Pemikiran dan Hipotesis

1.5.1 Kerangka Pemikiran

Hormon Prolactin di sekresi oleh kelenjar hipofise sebagai respon dan stimulasi saat seorang bayi menyusui. Dopamin menghambat tonus sekretori sel yang disebabkan karena pengikatan reseptor D2 pada membran sel lactotrophi menyebabkan terjadi proses eksositosi prolactin. Galactogogues adalah obat atau senyawa yang dapat digunakan untuk membantu menginisiasi, memelihara, dan meningkatkan produksi ASI. Beberapa obat galactogogues yang tersedia adalah domperidon, metoklorpamid dan herbal. Galactogogues bekerja sebagai antagonis dopamine yang dapat menginduksi pelepasan prolactin ke dalam darah (Crowley et al., 2008; The Academy of Breastfeeding Medicine Protocol Committee, 2011). Galactogogues adalah obat atau senyawa yang dapat digunakan untuk membantu menginisiasi, memelihara, dan meningkatkan produksi ASI. Beberapa obat galactogogues yang tersedia adalah domperidon, metoklorpamid dan herbal.

Daun katuk (S. androgynus) merupakan tanaman herbal yang banyak digunakan di Indonesia. Salah satu kandungan dalam daun katuk adalah papaverin. Papaverin berfungsi menghambat phosphodiesterase10A (PDE10A) yang merupakan enzim yang mendegradasi cAMP (cyclic Adenosine monophosphatase) dan downregulate cAMP / PKA (protein Kinase A) signaling serta mengontrol sinyal dopaminergik yang akan meningkatkan fosforilasi cAMP-dependent dengan mengaktifkan sinyal cAMP / PKA sehingga menginhibisi reseptor D2 dopamin. PDE10A terutama mengatur fosforilasi DARPP-32i

(reseptor Dompamin D1 yang berhubungan dengan phosphoprotein), sehingga menghambat PP-1 dan mempengaruhi sinyal dopaminergik. Efek papaverin menginhibisi reseptor dopamin D-2 akan menginduksi pelepasan Prolactin ke dalam darah (Soka et al., 2011).

Domperidon adalah obat antagonis dopamin dan berdasarkan penelitian terdahulu menunjukkan dopamin menghambat tonus sekretori sel yang disebabkan karena pengikatan reseptor D2 pada membran sel lactotrophi, menyebabkan terjadi proses eksositosi prolactin (The Academy of Breastfeeding Medicine Protocol Committee, 2011).

1.5.2 Hipotesis

1. Pemberian ekstrak daun katuk dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

2. Pemberian domperidon dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

3. Pemberian kombinasi ekstrak daun katuk dan domperidon meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

BAB V

SIMPULAN DAN SARAN

5.1 Simpulan

1. Pemberian ekstrak daun katuk dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

2. Pemberian domperidon dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

3. Pemberian kombinasi ekstrak daun katuk dan domperidon meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

5.2 Saran

 Penelitian lebih lanjut mengenai dosis efektif, dosis toksik, dan efek samping pemberian kombinasi daun katuk (Sauropus androgynous (L.) Merr.), domperidon dan kombinasinya.

 Penelitian dilanjutkan hingga tahap uji klinik untuk mengetahui dosis efektif untuk meningkatkan produksi ASI ibu menyusui tanpa efek samping.

DAFTAR PUSTAKA

Amstrong, W.E., and Hatton, G.L. 2006. The Puzzle of Pulsatile Oxytocin Secretion During Lactation : some new pieces. 2006. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 291:R26-R28

AVMA Guidelines on Euthanasia. 2007. American Veterinary Medical Association. 1-36.

Bachour, P., Yawafi, R., Jaber, F., Choueiri, E., and Razzak, Z.A. 2012. Effects of

Smoking, Mother’s Age, Body Mass Index, and parity number on lipid, protein,

and secretory immunoglobulin A concentrations of human milk. 2012.

Breastfeeding Medicine vol 7 (3) ; 179-188.

Betzold, C.M. 2010. Galactagogues. Journal of Midwifery and Women’s Health, 49(2), pp. 151-154.

Blackburn, S.T. 2013. Maternal, Fetal, & Neonatal Physiology 4: Maternal, Fetal, & Neonatal Physiology (4 ed.). Maryland: Elsevier Saunders. (2013). Indonesia Demographic And Health Survey 2012.

Canadian Medical Association. 2002. Domperidone. Drugs of choice. Retrieved December 4, 2002, from http://www.cma.ca/cma/common/displayPage.do ?pageId=/staticContent/HTML/N0/l2/drugs/synopses/Domperidone.htm

[Accessed 20 January 2015].

Chantry, C.J., Wiedeman, J., Buehring, G., Peerson, J.M., Hayfron, K., K’Aluoch, O. et al. 2011. Effect of Fresh Heat Treatment on Antimicrobial Activity of Breastmilk. Breasrfeeding Medicine. 2011; 6 (3) : 111-6.

Crowley, W.R., Parker, S.L., Amstrong, W.E., Wang, W., Grosvenor, C.E. 1991. Excitatory and Inhibitory Dopaminergic Regulation of Oxytocin Secretion in the Lactating Rat : Evidence for Respectetive Mediation by D-1 and D-2

Goldman, A.S. 2012. Evolution of Immune Functions of the Mammary Gland and Protection of the Infant. Breastfeeding Medicine. 2012. 7 (3): 132-42.

Guyton & Hall, J.E. 2010. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. 12th ed. Philadelphia(PA): Saunders-Elsevier.

Hord, N.G., Ghannam, J.S., Garg, H.K., Berens, P.D., Bryan, N.S. 2011. Nitrate and Nitrite Content of Human, Formula, Bovine, and Soy Milks: Implications for

Dietary Nitrite and Nitrate Recommendations. Breastfeeding Medicine. 2011. 6

(6): 393-9.

Kemas Ali Hanafiah. 2000. Rancangan Percobaan. Teori dan Aplikasi. PT. Raja Grafindo Persada. Jakarta. 6-7.

Merr L. The Characteristics of Katuk Leaf (Sauporous androgynus). www.sgu.ac.id/library/garuda/swf/FT/2012/Lavinia.swf [Accessed 20 January 2015].

Mescher, A.L. 2013. Junqueira's Basic Histology. 13th ed. New York(NY): McGraw-Hill.

Moore, K. L., Aqur, A.M. & Dalley, A.F. 2013. Clinically Oriented Anatomy. 7th ed. Philadelphia (PA): Lippincott Williams and Wilkins.

Neville, M.C. 1998. Milk Secretion: An Overview. [Online] Available at: http://mammary.nih.gov/reviews/lactation/Neville001/ [Accessed 3 May 2015]. Parker S.L., Crowley W.R. 1992. Activation of Central D-1 Dopamine Receptors

Stimulates Oxytocin Release in The Lacatating Rat : Evidence of Hypothalamus

Paraventricular and Supraoptic Nuclei. Neuroendocrynology

1992;56(3):385-92.

Petrus, A.J.A. 2013. Sauropus androgynus (L.) Merrill - A Potentially Nutritive Functional Leafy-Vegetable. Asian journal of chemistry, 25(17), pp 9425-9433. Renfrew, M.J., Lang, S., Woolridge, M. 2000. Oxytocin for Promoting Successful

Riggio, E., Quattrone, P. & Nava, M. 2000. Anatomical Study of The Breast

Superficial Fascial System: The Inframammary Fold Unit. European Journal of

Plastic Surgery, 23(6), pp. 310-315.

Sa’roni, Sadjimin T., Sja’bani M., Zulaela. 2004. Effectiveness of the Sauropus androgynus (L.) Merr Leaf Extract in Increasing Mother’s Breast Milk

Production. Media Litbang Kesehatan. Vol. XIV No. 3. Hal. 20-4.

Sherwood, L. 2007. Human Physiology: From Cells to Systems. 6th ed. Belmont: Thomson Brooks/cole.

Smith, H.S., Cox, L.R. & Smith, B.R. 2012. Dopamine Receptor Antagonists. Annals of Palliative Medicine, 1(2).

Soka S., Alam H., Stefiani, Boenjamin N., Tan W.A., Suhartono M.T. 2010. Effect of Sauropus Androgynus Leaf Extract on the Expression of Prolactin and Oxytocin

Genes in Lactating BALB/c Mice. J Nutrigenet Nutrigenomic 2010: 3: 31-6.

Soka S., Wiludjaja J., Marcella. 2011. The Expression of Prolactin and Oxytocin

Genes in Lactating BALB/c Mice Supplemented with Mature Sauropus

androgynus Leaf Extracts. 2011 . IPCBEE vol 9 ; 291-295

Standring, S. 2008. Gray's Anatomy: The Anatomical Basis for Clinical Practice. 40th ed. London: Elsevier Churchill-Livingstone.

The Academy of Breastfeeding Medicine Protocol Committee. 2011. ABM Clinical Protocol #9 : Use of Galactogogue in Initiating or Augmenting the Rate of

Maternal Milk Secretion (First Revision January 2011). Breastfeeding

Medicine 2011 6(1) : 41-50

The Academy of Breastfeeding Medicine. 2011. ABM Protocol #9: Use of galactogogues in initiating or augmenting maternal milk supply. [Online] Available at : http://www.bfmed.org/Media/Files/Protocols/Protocol%209% 20-20English%201st%20Rev.%20Jan%202011.pdf [Accessed 7 August 2014].

Wan, E.W.X., Davey, K., Madhu, P.S., Hartmann, P.E., Simmer, K., and Ilett, K.F. 2008. Dose-effect study of domperidone as a galactagogue in preterm mothers with insufficient milk supply, and its transfer into milk. Br J Clin

Pharmacol. 2008 August; 66(2): 283

http://previews.123rf.com/images/dole/dole1105/dole110500055/9639247-Edible-sweet-leaf-bush-sauropus-androgynus--Stock-Photo.jpg

(reseptor Dompamin D1 yang berhubungan dengan phosphoprotein), sehingga menghambat PP-1 dan mempengaruhi sinyal dopaminergik. Efek papaverin menginhibisi reseptor dopamin D-2 akan menginduksi pelepasan Prolactin ke dalam darah (Soka et al., 2011).

Domperidon adalah obat antagonis dopamin dan berdasarkan penelitian terdahulu menunjukkan dopamin menghambat tonus sekretori sel yang disebabkan karena pengikatan reseptor D2 pada membran sel lactotrophi, menyebabkan terjadi proses eksositosi prolactin (The Academy of Breastfeeding Medicine Protocol Committee, 2011).

1.5.2 Hipotesis

1. Pemberian ekstrak daun katuk dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

2. Pemberian domperidon dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

3. Pemberian kombinasi ekstrak daun katuk dan domperidon meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

BAB V

SIMPULAN DAN SARAN

5.1 Simpulan

1. Pemberian ekstrak daun katuk dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

2. Pemberian domperidon dosis tunggal meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

3. Pemberian kombinasi ekstrak daun katuk dan domperidon meningkatkan ekspresi gen prolactin pada mencit BALB/c

5.2 Saran

 Penelitian lebih lanjut mengenai dosis efektif, dosis toksik, dan efek samping pemberian kombinasi daun katuk (Sauropus androgynous (L.) Merr.), domperidon dan kombinasinya.

 Penelitian dilanjutkan hingga tahap uji klinik untuk mengetahui dosis efektif untuk meningkatkan produksi ASI ibu menyusui tanpa efek samping.

DAFTAR PUSTAKA

Amstrong, W.E., and Hatton, G.L. 2006. The Puzzle of Pulsatile Oxytocin Secretion During Lactation : some new pieces. 2006. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 291:R26-R28

AVMA Guidelines on Euthanasia. 2007. American Veterinary Medical Association. 1-36.

Bachour, P., Yawafi, R., Jaber, F., Choueiri, E., and Razzak, Z.A. 2012. Effects of Smoking, Mother’s Age, Body Mass Index, and parity number on lipid, protein, and secretory immunoglobulin A concentrations of human milk. 2012. Breastfeeding Medicine vol 7 (3) ; 179-188.

Betzold, C.M. 2010. Galactagogues. Journal of Midwifery and Women’s Health, 49(2), pp. 151-154.

Blackburn, S.T. 2013. Maternal, Fetal, & Neonatal Physiology 4: Maternal, Fetal, & Neonatal Physiology (4 ed.). Maryland: Elsevier Saunders. (2013). Indonesia Demographic And Health Survey 2012.

Canadian Medical Association. 2002. Domperidone. Drugs of choice. Retrieved

December 4, 2002, from http://www.cma.ca/cma/common/displayPage.do

?pageId=/staticContent/HTML/N0/l2/drugs/synopses/Domperidone.htm [Accessed 20 January 2015].

Chantry, C.J., Wiedeman, J., Buehring, G., Peerson, J.M., Hayfron, K., K’Aluoch, O. et al. 2011. Effect of Fresh Heat Treatment on Antimicrobial Activity of Breastmilk. Breasrfeeding Medicine. 2011; 6 (3) : 111-6.

Crowley, W.R., Parker, S.L., Amstrong, W.E., Wang, W., Grosvenor, C.E. 1991. Excitatory and Inhibitory Dopaminergic Regulation of Oxytocin Secretion in the Lactating Rat : Evidence for Respectetive Mediation by D-1 and D-2 Dopamine Receptor Subtypes. Neuroendocrinology. 1991;53(5):493-02.

Goldman, A.S. 2012. Evolution of Immune Functions of the Mammary Gland and Protection of the Infant. Breastfeeding Medicine. 2012. 7 (3): 132-42.

Guyton & Hall, J.E. 2010. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. 12th ed. Philadelphia(PA): Saunders-Elsevier.

Hord, N.G., Ghannam, J.S., Garg, H.K., Berens, P.D., Bryan, N.S. 2011. Nitrate and Nitrite Content of Human, Formula, Bovine, and Soy Milks: Implications for Dietary Nitrite and Nitrate Recommendations. Breastfeeding Medicine. 2011. 6 (6): 393-9.

Kemas Ali Hanafiah. 2000. Rancangan Percobaan. Teori dan Aplikasi. PT. Raja Grafindo Persada. Jakarta. 6-7.

Merr L. The Characteristics of Katuk Leaf (Sauporous androgynus).

www.sgu.ac.id/library/garuda/swf/FT/2012/Lavinia.swf [Accessed 20 January 2015].

Mescher, A.L. 2013. Junqueira's Basic Histology. 13th ed. New York(NY):

McGraw-Hill.

Moore, K. L., Aqur, A.M. & Dalley, A.F. 2013. Clinically Oriented Anatomy. 7th ed. Philadelphia (PA): Lippincott Williams and Wilkins.

Neville, M.C. 1998. Milk Secretion: An Overview. [Online] Available at:

http://mammary.nih.gov/reviews/lactation/Neville001/ [Accessed 3 May 2015]. Parker S.L., Crowley W.R. 1992. Activation of Central D-1 Dopamine Receptors

Stimulates Oxytocin Release in The Lacatating Rat : Evidence of Hypothalamus Paraventricular and Supraoptic Nuclei. Neuroendocrynology 1992;56(3):385-92.

Petrus, A.J.A. 2013. Sauropus androgynus (L.) Merrill - A Potentially Nutritive Functional Leafy-Vegetable. Asian journal of chemistry, 25(17), pp 9425-9433. Renfrew, M.J., Lang, S., Woolridge, M. 2000. Oxytocin for Promoting Successful

Riggio, E., Quattrone, P. & Nava, M. 2000. Anatomical Study of The Breast Superficial Fascial System: The Inframammary Fold Unit. European Journal of Plastic Surgery, 23(6), pp. 310-315.

Sa’roni, Sadjimin T., Sja’bani M., Zulaela. 2004. Effectiveness of the Sauropus androgynus (L.) Merr Leaf Extract in Increasing Mother’s Breast Milk Production. Media Litbang Kesehatan. Vol. XIV No. 3. Hal. 20-4.

Sherwood, L. 2007. Human Physiology: From Cells to Systems. 6th ed. Belmont: Thomson Brooks/cole.

Smith, H.S., Cox, L.R. & Smith, B.R. 2012. Dopamine Receptor Antagonists. Annals of Palliative Medicine, 1(2).

Soka S., Alam H., Stefiani, Boenjamin N., Tan W.A., Suhartono M.T. 2010. Effect of Sauropus Androgynus Leaf Extract on the Expression of Prolactin and Oxytocin Genes in Lactating BALB/c Mice. J Nutrigenet Nutrigenomic 2010: 3: 31-6. Soka S., Wiludjaja J., Marcella. 2011. The Expression of Prolactin and Oxytocin

Genes in Lactating BALB/c Mice Supplemented with Mature Sauropus androgynus Leaf Extracts. 2011 . IPCBEE vol 9 ; 291-295

Standring, S. 2008. Gray's Anatomy: The Anatomical Basis for Clinical Practice. 40th ed. London: Elsevier Churchill-Livingstone.

The Academy of Breastfeeding Medicine Protocol Committee. 2011. ABM Clinical Protocol #9 : Use of Galactogogue in Initiating or Augmenting the Rate of Maternal Milk Secretion (First Revision January 2011). Breastfeeding Medicine 2011 6(1) : 41-50

The Academy of Breastfeeding Medicine. 2011. ABM Protocol #9: Use of

galactogogues in initiating or augmenting maternal milk supply. [Online] Available at : http://www.bfmed.org/Media/Files/Protocols/Protocol%209% 20-20English%201st%20Rev.%20Jan%202011.pdf [Accessed 7 August 2014].

Wan, E.W.X., Davey, K., Madhu, P.S., Hartmann, P.E., Simmer, K., and Ilett, K.F. 2008. Dose-effect study of domperidone as a galactagogue in preterm mothers with insufficient milk supply, and its transfer into milk. Br J Clin Pharmacol. 2008 August; 66(2): 283

http://previews.123rf.com/images/dole/dole1105/dole110500055/9639247-Edible-sweet-leaf-bush-sauropus-androgynus--Stock-Photo.jpg