Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis paniculata) Dalam Mengendalikan Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophila, Edwarsiella tarda dan Jamur Saprolegnia sp. Secara In Vitro

55

Lampiran 1. Proses Pembuatan Ekstrak Daun Sambiloto

a

b

c

d

e
Gambar 1. a) Daun sambiloto yang telah kering, b) Simplisia daun sambiloto
yang telah di belender, c) Perendaman simplisia selama 48 jam, d)
Penyaringan setelah maserasi dan e) Pemekatan ekstrak dengan
water bath.

Universitas Sumatera Utara

56


Lampiran 2. Data Awal Zona Hambat Ekstrak Daun Sambiloto
a. Aeromonas hydrophila
Pelarut
Konsentrasi

Metanol

Etil asetat

n-heksana

U1

Ulangan
U2
U3

DMSO
0

10
6,15 6,21 6,12
30
7,10 7,05 7,15
40
7,45 7,20 7,18
60
7,51 7,33 7,25
Chloroamphenicol
31,06
DMSO
0
10
9,06 9,15 9,12
30
10,12 9,20 9,15
40
10,21 10,15 9,25
60
11,06 11,15 10,15

Chloroamphenicol
31,06
DMSO
0
10
6,06 7,05 6,25
30
6,25 7,15 8,05
40
7,15 7,40 8,15
60
8,06 8,40 8,35
Chloroamphenicol
31,06


0
18,48
21,3
21,81

22,08
31,06
0
27,33
28,47
29,61
32,34
31,06
0
19,35
21,45
22,68
24,81
31,06

Ratarata
(mm)
0
6,16
7,10

7,27
7,36
31,06
0
9,11
9,49
9,87
10,78
31,06
0
6,45
7,15
7,56
8,27
31,06

b. Edwardsiella tarda
Pelarut

Metanol


Etil asetat

n-heksana

Konsentrasi
DMSO
10
30
40
60
Chloramphenicol
DMSO
10
30
40
60
Chloramphenicol
DMSO
10

30
40
60
Chloramphenicol

U1

8,15
8,35
8,40
8,55

6,05
6,10
8,10
8,25

7,15
8,05
8,15

8,55

Ulangan
U2
U3
0
8,05
8,25
8,27
8,35
25,15
0
6,15
6,05
7,10
11,10
25,15
0
7,10
7,25

9,10
9,35
25,15

8,05
8,20
8,25
8,40

6,10
7,10
7,25
9,15

8,05
8,20
8,35
8,55



0
24,24
24,78
24,90
25,29
25,15
0
18,30
19,23
22,44
28,50
25,15
0
22,29
23,49
25,59
26,43
25,15

Ratarata

(mm)
0
8,08
8,26
8,30
8,43
25,15
0
6,10
6,41
7,48
9,50
25,15
0
7,43
7,83
8,53
8,81
25,15

Universitas Sumatera Utara

57

c. Saprolegnia sp.
Pelarut

Metanol

Etil asetat

n-heksana

Konsentrasi
DMSO
10
30
40
60
Nistatin
DMSO
10
30
40
60
Nistatin
DMSO
10
30
40
60
Nistatin

U1

0
0
0
0

0
0
0
0

0
0
0
0

Ulangan
U2
U3
0
0
0
0
0
9,95
0
0
0
0
0
9,95
0
0
0
0
0
9,95

0
0
0
0

0
0
0
0

0
0
0
0


0
0
0
0
0
9,95
0
0
0
0
0
9,95
0
0
0
0
0
9,95

Ratarata
(mm)
0
0
0
0
0
9,95
0
0
0
0
0
9,95
0
0
0
0
0
9,95

Universitas Sumatera Utara

58

Lampiran 3. Alat Dan Bahan Yang Digunakan

a

b

c

d

e

f

Universitas Sumatera Utara

59

Lampiran 3. Lanjutan

g

h

j

i

k

l

Gambar 2. a) Bunsen, b) Larutan DMSO, c) Water bath, d) H 2 SO 4 dan
BaCl 2 , e) Hot plate, f) Spray, g) Timbangan, h) Pipet mikro, i)
Inkubator, j) Kertas saring, k) Laminar air flow, l) Reagen Vp A,
Vp B, Reagen MR dan Reagen Indol.

Universitas Sumatera Utara

60

Lampiran 4. Analisis Bakteri Edwardsiella tarda

a

b

c

Gambar 3. Analisis Bakteri Edwardsiella tarda, a) MR positif dan VP negatif,
b) Positif Citrat dan c) O/F positif Fermentatif

Universitas Sumatera Utara

61

Lampiran 5. Analisis Bakteri Aeromonas hydrophilla

a

b

c

Gambar 4. Analisis Bakteri Aeromonas hydrophilla, a) Positif Manitol dan
Sorbitol, b) O/F positif Oksidatif dan Fermentatif dan c) Negatif
Citrat

Universitas Sumatera Utara

62

Lampiran 6.Pengujian Antimikroba

a

b

c

Pengujian Antibakteri Terhadap Bakteri Aeromonas hydrophilla Terhadap
Pelarut a) Etil asetat, b) n-Heksana dan c) Metanol Heksana (Kontrol positif
Kloroamfenikol dan kontrol negatif DMSO)

a

b

Universitas Sumatera Utara

63

Lampiran 6. Lanjutan

c

Pengujian Antibakteri Terhadap Bakteri Edwardsiella tarda Terhadap
Pelarut a) Metanol, b) Etil asetat dan c) n-Heksana (Kontrol positif
Kloroamfenikol dan kontrol negatif DMSO)

n-heksana

a

b

c

Pengujian Antijamur Terhadap Jamur Saprolegnia sp. Terhadap Pelarut a)
Metanol, b) n-Heksana dan c) Etil asetat (Kontrol positif Nistatin dan
kontrol negatif DMSO)

Universitas Sumatera Utara

64

Lampiran 7. Data Awal Kematian A. salina Pada Berbagai Konsentrasi
Perlakuan
Kontrol Air Laut
Kontrol DMSO
10 ppm
Metanol
100 ppm
1000 ppm
10 ppm
Etil Asetat 100 ppm
1000 ppm
10 ppm
n-Heksana 100 ppm
1000 ppm

U1
1
1
2
5
8
2
4
7
3
4
7

Ulangan
U2
0
1
3
7
9
3
4
9
2
6
8

U3
0
2
3
4
9
3
5
8
2
6
6

Rata-rata
0,33
1,33
2,66
5,33
8,66
2,33
4,33
8
2,33
5,33
7

Universitas Sumatera Utara

65

Lmpiran 8. Contoh Perhitungan Penentuan LC 50
a. Ekstrak Daun Sambiloto dengan Pelarut Metanol
Pelarut

Konsentrasi
(ppm)
10
Metanol
100
1000

Total
Populasi
30
30
30

Jumlah
Kematian
8
16
27

Persen
Mortalitas
26
53
86

Log
Konsentrasi
1
2
3

Probit
4,36
5,08
6,08

Pada ekstrak dengan konsentrasi 100 ppm.
Persen mortalitas =

=

X 100%

X 100%

= 53%
Kurva hubungan log konsentrasi dengan nilai probit ekstrak Metanol

Dari grafik hubungan antara log konsentrasi (sumbu x) dengan nilai probit
(sumbu y) didapatkan persamaan y = 0,86x + 3,4433 dan R2 = 0,9871. Penentuan
LC 50 (Konsentrasi yang dapat menyebabkan kematian sebesar 50%), maka nilai
probit dengan y = 5 dan x = log konsentrasi adalah sebagai berikut :

Universitas Sumatera Utara

LC 50
(ppm)
64.5

66

Lampiran 8. Lanjutan
y = 0,86x + 3,4533
5 = 0,86x + 3,4533
x = (5 - 3,4533) / 0,86
x = 1,798488
maka LC 50 adalah anti log dari nilai x

anti log 1,798488

LC 50 = 64.5 ppm.
b. Ekstrak Daun Sambiloto dengan Pelarut Etil Asetat
Pelarut
Etil
Asetat

Konsentrasi
(ppm)
10
100
1000

Total
Populasi
30
30
30

Jumlah
Kematian
8
13
24

Persen
Mortalitas
26
43
80

Log
Konsentrasi
1
2
3

Probit
4,36
4,80
5,84

Pada ekstrak dengan konsentrasi 100 ppm.
X 100%

Persen mortalitas =

=

X 100%

= 43%
Kurva hubungan log konsentrasi dengan nilai probit ekstrak Etil Asetat

Universitas Sumatera Utara

LC 50
(ppm)
100

67

Lampiran 8. Lanjutan
Dari grafik hubungan antara log konsentrasi (sumbu x) dengan nilai probit
(sumbu y) didapatkan persamaan y = 0,74x + 3,52 dan R2 = 0,9481. Penentuan
LC 50 (Konsentrasi yang dapat menyebabkan kematian sebesar 50%), maka nilai
probit dengan y = 5 dan x = log konsentrasi adalah sebagai berikut :
y = 0,74x + 3,52
5 = 0,74x + 3,52
x = (5 – 3,52) / 0,74
x=2
maka LC 50 adalah anti log dari nilai x

anti log 2

LC 50 = 100 ppm.
c. Ekstrak Daun Sambiloto dengan Pelarut n-Heksana
Pelarut
nheksana

Konsentrasi
(ppm)
10
100
1000

Total
Populasi
30
30
30

Jumlah
Kematian
7
16
21

Persen
Mortalitas
23
53
70

Log
Konsentrasi
1
2
3

Probit
4,26
5,08
5,52

Pada ekstrak dengan konsentrasi 100 ppm.
X 100%

Persen mortalitas =

=

X 100%

= 53%

Universitas Sumatera Utara

LC 50
(ppm)
118,6

68

Kurva hubungan log konsentrasi dengan nilai probit ekstrak n-heksana

Dari grafik hubungan antara log konsentrasi (sumbu x) dengan nilai probit
(sumbu y) didapatkan persamaan y = 0,63x + 3,6933 dan R2 = 0,9706. Penentuan
LC 50 (Konsentrasi yang dapat menyebabkan kematian sebesar 50%), maka nilai
probit dengan y = 5 dan x = log konsentrasi adalah sebagai berikut :
y = 0,63x + 3,6933
5 = 0,63x + 3,6933
x = (5 – 3,6933) / 0,63
x = 2,0741269
maka LC 50 adalah anti log dari nilai x

anti log 2,0741269

LC 50 = 118,6 ppm.

Universitas Sumatera Utara

69

Lampiran 9. Hasil Uji Antijamur Saprolegnia sp.

a

b

c

Hasil pengujian antijamur Saprolegnia sp. terhadap a) ekstrak methanol, b)
ekstrak etil asetat dan c) ekstrak n-Heksana

Universitas Sumatera Utara

70

Lampiran 10. Hasil pengujian antibakteri

a

b

Hasil pengujian antibakteri a) Aeromonas hydrophila (kiri), Edwardsiella
tarda (kanan) dan b) kontrol positif Chloramphenicol (Kiri) dan kontrol
negatif DMSO (Kanan)

Universitas Sumatera Utara

71

Lampiran 11. Uji BSLT Menggunakan Artemia salina

a

b

c

Pengujian BSLT Artemia salina a) Kista A. salina (kiri), Wadah penetasan
(kanan), b) Pengukuran air 5 ml (kiri), Pemasukan A. salina (kanan) dan
c) Setelah pengamatan selama 24 jam

Universitas Sumatera Utara

72

Lampiran 12. Tabel Probit Menurut Vilchez dkk (2001)
Persentase
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
99

0
3,72
4,16
4,48
4,75
5,00
5,25
5,52
5,84
6,28
0
7,33

1
2,67
3,77
4,19
4,50
4,77
5,03
5,28
5,55
5,88
6,34
0,1
7,37

2
2,95
3,82
4,23
4,53
4,80
5,05
5,31
5,58
5,92
6,41
0,2
7,41

3
3,12
3,87
4,26
4,56
4,82
5,08
5,33
5,61
5,95
6,48
0,3
7,46

Probit
4
5
3,25 3,36
3,92 3,96
4,29 4,33
4,59 4,61
4,85 4,87
5,10 5,13
5,36 5,39
5,64 5,67
5,99 6,04
6,55 6,64
0,4
0,5
7,51 7,58

6
3,45
4,01
4,36
4,64
4,90
5,15
5,41
5,71
6,08
6,75
0,6
7,67

7
3,52
4,05
4,39
4,67
4,92
5,18
5,44
5,74
6,13
6,88
0,7
7,75

8
3,59
4,08
4,44
4,69
4,95
5,20
5,47
5,77
6,18
7,05
0,8
7,88

9
3,66
4,12
4,45
4,72
4,97
5,23
5,50
5,81
6,23
7,33
0,9
8,09

Universitas Sumatera Utara

Dokumen yang terkait

Uji Daya Hambat Ekstrak Kulit Batang Rhizophora MUCRONATA Terhadap Pertumbuhan Bakteri Aeromonas HYDROPHILA, Streptococcus AGALACTIAE Dan Jamur Saprolegnia SP. Secara In Vitro

9 60 98

Aktivitas Antimikroba Ekstrak Biji Teratai (Nymphaea pubescens L) Terhadap Bakteri Aeromonas hydrophila, Streptococcus agalactiae dan Jamur Saprolegnia sp.

0 48 97

Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis paniculata) Dalam Mengendalikan Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophila, Edwarsiella tarda dan Jamur Saprolegnia sp. Secara In Vitro

4 24 73

Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis paniculata) Dalam Mengendalikan Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophila, Edwarsiella tarda dan Jamur Saprolegnia sp. Secara In Vitro

0 1 17

Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis paniculata) Dalam Mengendalikan Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophila, Edwarsiella tarda dan Jamur Saprolegnia sp. Secara In Vitro

0 0 2

Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis paniculata) Dalam Mengendalikan Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophila, Edwarsiella tarda dan Jamur Saprolegnia sp. Secara In Vitro

0 0 4

Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis paniculata) Dalam Mengendalikan Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophila, Edwarsiella tarda dan Jamur Saprolegnia sp. Secara In Vitro

0 2 6

Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis paniculata) Dalam Mengendalikan Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophila, Edwarsiella tarda dan Jamur Saprolegnia sp. Secara In Vitro

0 0 3

EFEKTIVITAS EKSTRAK SAMBILOTO (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Aeromonas hydrophila GPl-04 SECARA IN VITRO

0 0 15

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Bakteri Aeromonas hydrophila 2.1.1 Klasifikasi Aeromonas hydrophila - EFEKTIVITAS EKSTRAK SAMBILOTO (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Aeromonas hydrophila GPl-04 SECARA IN VITRO - repository

0 0 15