PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI ETIL ASETAT AKAR JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN METODE YEAST ESTROGEN SCREEN ASSAY

  

PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN

FRAKSI ETIL ASETAT AKAR JERUJU (Acanthus ilicifolius)

MENGGUNAKAN METODE YEAST ESTROGEN SCREEN

ASSAY

  

DESSY NUR WULANDARI

1008010052

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

  

2014

  

HALAMAN PERSETUJUAN

PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI

ETIL ASETAT AKAR JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN

METODE YEAST ESTROGEN SCREEN ASSAY

DESSY NUR WULANDARI

  

1008010052

Diperiksa dan disetujui oleh :

Pembimbing I Pembimbing II

   Binar Asrining Dhiani, M.Sc., Apt Susanti, M. Phil., Apt

NIK. 2160392 NIK. 2160386

  HALAMAN PENGESAHAN PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI ETIL ASETAT AKAR JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN

METODE YEAST ESTROGEN SCREEN ASSAY

DESSY NUR WULANDARI

  1008010052 Telah dipertahankan di depan Panitia Ujian Skripsi Pada hari Sabtu 30 Agustus 2014 SUSUNAN PANITIA Ketua Retno Wahyuningrum M.Si., Apt NIK 2160387 Sekretaris Suparman, M.Sc., Apt NIK 2160446 Penguji I Binar Asrining Dhiani, M.Sc., Apt NIK. 2160392 Penguji II Susanti, M.Phil., Apt NIK. 2160386 Mengetahui Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto Dr. Nunuk Aries Nurulita, S.Si., M.Si., Apt NIK 2160217

  

PERNYATAAN

  Yang bertanda tangan dibawah ini, saya : Nama : Dessy Nur Wulandari NIM : 1008010052 Program studi : Farmasi Fakultas/Universitas : Farmasi/Universitas Muhammadiyah Purwokerto

  Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi ini adalah hasil dari proses penelitian saya yang telah dilakukan sesuai dengan prosedur penelitian yang benar dengan arahan dari dosen pembimbing dan bukan hasil penjiplakan dari hasil karya orang lain atau terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan disuatu perguruan tinggi, dan sepanjang pengetahuan penulis juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan orang lain kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

  Demikian pernyataan ini, apabila kelak dikemudian hari terbukti ada unsur penjiplakan, maka saya bersedia mempertanggung jawabkan sesuai dengan ketentuan yang berlaku.

  Purwokerto, Juli 2014 Yang menyatakan, Dessy Nur Wulandari

  

ABSTRAK

  DESSY NUR WULANDARI. Penentuan Aktivitas Estrogenik Fraksi Air dan Fraksi Etil Asetat Akar Jeruju (Acanthus ilicifolius) Menggunakan Metode YES

  assay

  Dibawah bimbingan BINAR ASRINING DHIANI dan SUSANTI

  Latar Belakang: Kekurangan hormon estrogen pada lansia dapat

  mengakibatkan osteoporosis. Efek biologis estrogen diperantarai oleh reseptor estrogen (ER) Fitoestrogen memiliki interaksi yang mirip dengan α dan β. interaksi estrogen dan ER. Kandungan senyawa dari bagian akar jeruju adalah triterpenoid saponin. Triterpenoid saponin dari tanaman lain contohnya ginsenosida dapat beraksi sebagai ligan fungsional untuk mengaktivasi reseptor hormon steroid yang berbeda. Ginsenosida mungkin memediasi beberapa aksi pada kardiovaskular dan sistem endokrin dengan berikatan dengan reseptor estrogen.

  Tujuan Penelitian: Untuk menentukan aktivitas estrogenik dan profil KLT dari

  fraksi air dan etil asetat akar jeruju (Acanthus ilicifolius) dengan metode YES assay .

  Metode Penelitian: Jenis penelitian ini adalah eksperimental dengan rancangan randomized block design dengan menguji konsentrasi fraksi air dan fraksi etil

  asetat 50, 100, 200, 400, 800, 1000, 1200, 1600, dan 2000 µg/ml yang terlarut dalam DMSO terhadap aktivitas estrogenik. Aktivitas estrogenik ditandai dengan ekspresi β- galaktosidase pada sel dengan terbentuknya intensitas warna kuning dari oNPG menjadi oNP setelah sel lisis. Intensitas warna kuning diukur absorbansinya menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 400 nm.

  Hasil: Penentuan aktivitas esterogenik menggunakan metode YES assay

  menunjukkan bahwa fraksi air dan etil asetat akar jeruju (Acanthus ilicifolius) mempunyai aktivitas esterogenik yang rendah dibandingkan dengan kontrol positif estradiol dan genistein. Nilai EC

  50 dari fraksi air yang ditentukan dengan

  YES- hERα adalah 1628 µg/ml dan YES-hERβ 671,1 µg/ml dan etil asetat akar jeruju yang ditentukan dengan YES-

  50 nya tidak dapat dihitung, dan

  hERα EC

• 33

  YES-

  50 6,84x10 µg/ml. Dari hasil uji analisis KLT

  hERβ memiliki EC menunjukkan fraksi air akar jeruju mengandung senyawa alkaloid dan flavonoid, serta mengandung senyawa saponin setelah dilakukan reaksi penyabunan dan fraksi etil asetat mengandung senyawa terpenoid, saponin dan alkaloid.

  Kesimpulan: Fraksi air akar jeruju mempunyai aktivitas estrogenik yang rendah

  sedangkan fraksi etil asetat akar jeruju tidak memiliki aktivitas estrogenik. Profil KLT pada fraksi air akar jeruju mengandung senyawa alkaloid dan flavonoid, serta mengandung senyawa saponin setelah dilakukan reaksi penyabunan dan fraksi etil asetat mengandung senyawa terpenoid, saponin dan alkaloid.

  Kata Kunci : Akar jeruju, YES assay, estrogenik

  v

  ABSTRACT

  DESSY NUR WULANDARI. Estrogenic Activity Determination of Water Fraction and Ethyl Acetat Fraction of Sea holly (Acanthus ilicifolius) using method YES assay Under Supervision of BINAR ASRINING DHIANI and SUSANTI Background: Lack of hormone estrogen in the elderly can lead to osteoporosis.

  Biological effects of estrogen mediated by estrogen receptors ((ER) α and β. Phytoestrogens have a similar interaction with ER. Compounds from the roots of sea holly are triterpenoid saponins. Triterpenoid saponins from other plants such as ginsenosida can act as a functional ligand receptor to activate different steroid hormone. Ginsenosida may mediate some of the action on the cardiovascular and endocrine system to bind to estrogen receptors.

  Objective: This research was aimed to determine Estrogenic Activity and TLC

  profile of water fraction and ethyl acetat fraction of sea holly (Acanthus ilicifolius) using method YES assay.

  Methods: The study design was an experimental with randomized block design.

  The concentration used for this research was 50, 100, 200, 400, 800, 1000, 1200, 1600, and 2000 µg/mL dissolved in DMSO on estrogenic activity. Estrogenic activity was determined by expression

  β- galactosidase on cell with the formation of intensity of the yellow color from oNP after cell lysis. The intensity of the yellow color can be measured using its absorbance at 400 nm.

  Result: Estrogenic activity determination using method YES assay indicated that

  water and ethyl acetate fraction of root sea holly (Acanthus ilicifolius) showed a low estrogenic activity compared with the positive control of genistein and estradiol. EC

  50 values of water fraction was determined by YES-hER

  α 1628 µg/ml and YES-hER

  β 671,1 µg/ml and ethyl acetate fraction of sea holly root

• 33

  determined by YES-hER value and EC of YES-hER

  50

  50

  α had no EC β 6,84x10 µg/ml. The TLC analysis test resulted that water fraction of sea holly root contain alkaloids, flavonoids, also saponin after saponification test and ethyl acetate fraction contain terpenoids, saponins and alkaloids.

  

Conclusion: Water fraction of sea holly root has low estrogenic activity whereas

  ethyl acetate fraction of sea holly root has no estrogenic activity. TLC Profile from water fraction of the root of sea holly contain alkaloids, flavonoids, also saponin after saponification test and ethyl acetate fraction of sea holly contain terpenoids, saponins and alkaloids.

  Keywords: Sea holly root, YES assay, estrogenic

  vi

  MOTTO “..

  

Barangsiapa yang bertakwa kepada Allah niscaya Dia akan membukakan jalan keluar

baginya, Dan Dia memberinya rezeki dari arah yang tidak disangka-sangkanya. Dan barangsiapa

bertawakal kepada Allah, niscaya Allah akan mencukupkan (keperluan)nya. Sesungguhnya

Allah melaksanakan urusan-Nya. Sesungguhnya Allah telah mengadakan ketentuan bagi tiap-tiap sesuatu.”

  

QS.(65) : 2 , 3

You’ve got to live like SUCCES is your only option

  vii

  PERSEMBAHAN

  Alhamduli llahirabbil’alamin, ya Allah terima kasih atas segala nikmat dan rahmatMu yang maha agung, dengan ini saya persembahkan skripsi ini untuk

  Bunda (Sutarsih) terima kasih atas limpahan doa dan kasih sayang yang tak terhingga sepanjang masa dan perjuanganmu seorang diri yang selalu memberikan yang terbaik. Bapah yang berada di sisi Allah (Warsono), walaupun telah lama kau tiada aku tau kau selalu menyayangiku dan semoga bapah bahagia melihatku disana

  Kakak ku (Erni), (Danu), (Beni), kakak ipar (Susilo) dan keponakan (Jauza Zia) dan keluargaku yang paling aku sayangi, terimakasih tiada tara atas segala support yang telah diberikan selama ini.

  Untuk sahabat-sahabatku, Linda, Kokom, Dita, Dian, Ardiana terima kasih buat kalian untuk masa-masa kebersamaan selama ini, mendengarkan keluh kesahku, dan tumpangan kosannya yang sering aku berantakin

  Teman-teman farmasi B dan FSOA angkatan 2010 senasib, seperjuangan dan sepenanggungan, terimakasih atas gelak tawa dan solidaritas yang luar biasa sehingga membuat hari semasa kuliah lebih berarti, semoga tak ada lagi duka nestapa di dada tapi suka dan bahagia juga tawa dan canda.

  Teman-teman seperjuanganku, Meisty, Dian, Dina, Ergi, Johari, Titi, Anna, Icha terimakasih atas kerjasama, dan semangatnya selama penelitian hingga pembuatan skripsi ini selesai.

  Semoga Allah SWT membalas jasa budi kalian dikemudian hari dan memberi kemudahan dalam segala hal, amin. viii

PRA KATA

  Puji syukur alhamdulillah penulis panjatkan kehadirat ALLAH SWT atas segala rahmat, hidayah dan karuniaNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul ―PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI ETIL ASETAT AKAR JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN METODE YES ASSAY

  ‖. Skripsi ini disusun untuk memenuhi syarat dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

  Penulis menyadari sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak, penulis tidak dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik. Melalui kesempatan ini dengan segala kerendahan hati, penulis ingin mengucapkan rasa terima kasih kepada :

  1. Drs. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H., selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

  2. Dr Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

  3. Binar Asrining Dhiani, M.Sc.,Apt selaku dosen pembimbing I, yang telah memberikan bimbingan, arahan dan nasehat dalam penyusunan skripsi.

  4. Susanti, M.Phil., Apt selaku dosen pembimbing II, yang telah memberikan bimbingan, arahan dan nasehat dalam penyusunan skripsi.

  5. Seluruh dosen dan Staf Fakultas Farmasi UMP yang telah memberikan ilmunya sehingga dapat membantu penulis dalam menyelesaikan penulisan skripsi ini.

  6. Seluruh laboran Fakultas Farmasi terutama Mas Mamat, dan Bu Titi terima kasih atas waktu, bantuan dan bimbingannya.

  7. Bundaku tercinta atas jasa- jasanya, kesabaran, do’a, dan tidak pernah lelah dalam mendidik dan memberi cinta yang tulus dan ikhlas kepada penulis semenjak kecil. ix

  8. Kakak-kakakku Erni, Danu, Beni yang telah banyak memberikan dorongan, semangat, kasih sayang dan bantuan baik secara moril maupun materiil demi lancarnya penyusunan skripsi ini.

  9. Sahabat-sahabatku Linda, Kokom, Dita, Dian, dan Ardiana terimakasih atas dukungan serta kebersamaannya selama ini dalam suka maupun duka.

  10. Teman-teman satu angkatan farmasi 2010 B dan FSOA terimakasih atas dukungan serta kebersamaannya selama ini dalam suka maupun duka.

  11. Semua pihak yang telah membantu selama penulis melakukan penelitian dan penulisan skripsi ini hingga selesai yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu, terimakasih atas semua bantuannya.

  Semoga Allah SWT memberikan balasan yang berlipat ganda dan pahala yang sebesar-besarnya kepada semua pihak yang telah membantu penyelesaian skripsi ini.

  Demi perbaikan selanjutnya, penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun guna perbaikan skripsi ini. Akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya di bidang Farmasi.

  Purwokerto, Juli 2014 Penulis x

RIWAYAT HIDUP A.

   IDENTITAS Nama : Dessy Nur Wulandari NIM : 1008010052 Tempat / Tanggal lahir : Banyumas / 9 Desember 1992 Agama : Islam Jenis Kelamin : Perempuan Alamat : Jl. Semingkir 42 RT 04 / RW 07, Kel. Rejasari Kec. Purwokerto Barat Kab. Banyumas B. RIWAYAT PENDIDIKAN 1. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi UMP 2. SMA / Tahun Lulus : SMAN 3 Purwokerto / Tahun 2010 3. SMP / Tahun Lulus : SMPN 2 Purwokerto / Tahun 2007 4. SD / Tahun Lulus : SDN 4 Rejasari / Tahun 2004 5. TK / Tahun Lulus : TK Diponegoro

  xi

  

DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN JUDUL ...................................................................................... ii HALAMAN PERSETUJUAN ...................................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN .........................................................................iii HALAMAN PERNYATAAN ........................................................................ iv ABSTRAK ...................................................................................... ................... v

  ABSTRACT .......................................... ............................................................ vi

  MOTTO......................................................................................................... vii HALAMAN PERSEMBAHAN .............................. ...................................... viii PRA KATA ..................................................... .............................................. ix RIWAYAT HIDUP ........................................................................................ xi DAFTAR ISI ................................................................ ................................... xii DAFTAR TABEL ................................................. ........................................ xiv DAFTAR GAMBAR ................................................................................... xv DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xvii

  BAB I PENDAHULUAN ........................................................................... 1 A. Latar Belakang Masalah ............................................................. 1 B. Perumusan Masalah ...................................................................... . 3 C. Tujuan Penelitian........................................................................... . 3 D. Manfaat Penelitian ....................................................................... 3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................... 4 A. Tanaman Jeruju ........................................................................... 4 B. Uji Hayati untuk Penentuan Aktivitas Estrogenik......................... 8 C. Estrogen ...................................................................................... 9 D. KLT........................................................................................... 10 BAB III METODE PENELITIAN ................................................................ 10 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................. 12 B. Variabel Penelitian ................................................................... 12 C. Definisi Variabel Operasional .................................................... 12 xii

  D. Waktu dan Tempat..................................................................... 13

  E. Bahan dan Alat........................................................................... 14

  F. Cara Penelitian ............ .............................................................. 14

  G. Analisis Hasil ............................... .............................................. 17

  BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........ ................................................ 18 A. Pembuatan Ekstrak Etanol Akar Jeruju ..................................... 18 B. Pembuatan Fraksi Air dan Etil Asetat Akar Jeruju ..................... 18 C. Analisis Kualitatif Fraksi Air dan Fraksi Etil Asetat Acanthus

  ilicifolius dengan Menggunakan KLT ........................................ 19

  D. Penentuan Aktivitas Estrogenik Menggunakan Metode YES assay ......................................................................................... 28

  BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .................................... ..................... 34 A. Kesimpulan ................................................................................ 34 B. Saran........................................................................................... 34 DAFTAR PUSTAKA .................................................................................... 35 LAMPIRAN............................................................... ...................................... 41 xiii

  

DAFTAR TABEL

  Tabel 1. Senyawa kimia yang dilaporkan pada Acanthus ilicifolius .................. 9 Tabel 2. Identifikasi fraksi air akar jeruju dengan KLT ................................ 21 Tabel 3. Identifikasi fraksi etil asetat akar jeruju dengan KLT ........................ 26 xiv

  DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Tanaman Acanthus ilicifolius dengan Bunga ...............................

  4 Gambar 2. Prinsip Metode YES ...................................................................

  8 Gambar 3. Kromatogram Hasil KLT Fraksi Air Di Bawah Pengamatan Sinar UV

  λ 366 nm.......................................................... ................. ...... 20 Gambar 4. Kromatogram KLT fraksi air untuk identifikasi senyawa setelah disemprot peraksi a.Dragendorf untuk identifikasi senyawa alkaloid setelah disemprot pereaksi di bawah pengamatan sinar tampak,

  b. Sitroborat untuk identifikasi senyawa flavonoid setelah disemp rot pereaksi di bawah pengamatan sinar UV λ 366 nm ..... 21

  Gambar 5. Kromatogram KLT Preparatif Fraksi Air Akar Jeruju Di Bawah Pengamatan Sinar UV λ 366 nm .................................................. 22

  Gambar 6. Kromatogram KLT Fraksi Etil Asetat dengan Pengamatan di

  a. Sinar UV λ 366 nm, b. Sinar tampak ....................................... 23 Gambar 7. Kromatogram KLT Fraksi Etil Asetat untuk Identifikasi Senyawa

  Terpenoid Setelah Disemprot Pereaksi Liebermann Burchard Di Bawah Pengamatan

  a. Sinar tampak,

  b. Sinar UV λ 366 nm ................................. ...... ............................ 24

  Gambar 8. Kromatogram KLT Fraksi Etil Asetat untuk Identifikasi Senyawa Alkaloid Setelah Disemprot Pereaksi Dragendrof Di Bawah Pengamatan

  a. Sinar tampak,

  b. Sinar UV λ 254 nm.......................................... ............................................. 25

  Gambar 9. Kromatogram KLT Fraksi Etil Asetat untuk Identifikasi Senyawa Terpenoid Setelah Disemprot Pereaksi Anisaldehid Asam Sulfat Di Bawah Pengamatan

  a. Sinar Tampak, b. Sinar UV λ 366 nm.............................. ..................................... 25

  Gambar 10. Kromatogram Hasil KLT Preparatif Fraksi Etil Asetat Akar Jeruju Sinar

  UV λ 366 nm........................................................................ 27 xv

  Gambar 11. Grafik Hubungan Antara Log Konsentrasi Estradiol dengan Unit β- galaktosidase (Miller Unit) pada YES-hERα dan YES- hERβ .................................................................................. 29

  Gambar 12.

  Grafik hubungan antara log konsentrasi genistein dengan unit β- galaktosidase (Miller Unit) pada YES-hE Rα dan

  YES- hERβ .................................................................................. 30 Gambar 13. Grafik hubungan antara log konsentrasi fraksi air akar jeruju dengan unit β-galaktosidase (miller unit) pada YES-hERα dan

  YES-hE Rβ................................. .... ................................................ 31

  Gambar 14. Grafik hubungan antara log konsentrasi fraksi etil asetat akar jeruju dengan unit β-galaktosidase (miller unit) pada YES-hERα dan YES-hE

  Rβ....................................... .......................................... ... 32 xvi