Uji Antimutagenik Ekstrak Etanol KulitBuah Rotan Jernang (Daemonoropsdraco) Pada Mencit Jantan Yang Diinduksi Siklofosfamid
LAMPIRAN
Lampiran 1.Hasil Identifikasi TumbuhanLampiran 2. Persetujuan Etik Penelitian Kesehatan
Lampiran 3. Rotan Jernang Gambar 7 Pohon Rotan Jernang pada Pohon Rambatan
Keterangan : A : Pohon Rotan Jernang B : Pohon Karet
Gambar 8 Buah Rotan Jernang
Lampiran 3. (lanjutan) Gambar 9 Simplisia kulit buah rotan jernang Gambar 10 Serbuk simplisia kulit buah rotan jernang
Lampiran 4. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik
1
2
3
4
5 Gambar 11 Mikroskopik serbuk simplisia kulit buah rotan jernang perbesaran
10 x 40 Keterangan :
1. Parenkim Mesokarp
2. Hablur kalsium oksalat
3. Sel batu
4. Hablur kalsium oksalat yang terdapat pada parenkim
5. Berkas pengangkut bentuk spiral
Lampiran 5. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia
1. Perhitungan Penetapan Kadar Air
volume air (ml)
% Kadar air =
x 100% berat sampel (g)
a. Berat sampel = 5,0003 g Volume air = 0,3 ml
0,3 ml
% Kadar air = x 100% = 5,99%
5,0003 g
b. Berat sampel = 5,0001 g Volume air = 0,4 ml
0,4 ml
% Kadar air = =
x 100% 7,99% 5,0001 g
c. Berat sampel = 5,0001 g Volume air = 0,3 ml
0,3 ml
% Kadar air = =
x 100% 5,99% 5,0001 g
- 5,99% 7,99% 5,99% % Kadar air rata-rata = = 6,65%
3
Lampiran 5. (Lanjutan)
2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air
berat sari (g) 100
% Kadar sari larut dalam air =
x x 100% berat sampel (g)
20
a. Beratsampel = 5,0003 g Berat sari = 0,1233 g
0,1233 g 100
% Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 12,33%
5,0003 g
20
b. Berat sampel = 5,0002 g Berat sari = 0,1352 g
0,1352 g 100
% Kadar sari larut dalam air = =
x x 100% 13,52% 5,0002 g
20
c. Berat sampel = 5,0002 g Berat sari = 0,1148 g
0,1148 g 100
% Kadar sari larut dalam air = =
x x 100% 11,48% 5,0002 g
20
- 12,33% 13,52% 11,48% % Kadar sari larutdalam air rata-rata =
3 = 12,44%
Lampiran 5.(Lanjutan)
3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol
berat sari (g) 100
% Kadar sari larut dalam etanol =
x x 100% berat sampel (g)
20
a. Berat sampel = 5,0002 g Berat sari = 0,2514 g
0,2514 g 100
% Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 25,13%
5,0002 g
20
b. Beratsampel = 5,0004 g Berat sari = 0,2932 g
0,2932 g 100
% Kadar sari larut dalam etanol = =
x x 100% 29,31% 5,0004 g
20
c. Berat sampel = 5,0004 g Berat sari = 0,2733 g
0,2733 ml 100
% Kadar sari larut dalam etanol = =
x x 100% 27,32% 5,0004 g
20
- 25,13% 29,31% 27,32% % Kadar sari larut dalam etanol rata-rata =
3 = 27,25%
Lampiran 5. (Lanjutan)
4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total
berat abu (g)
% Kadar Abu Total =
x 100% berat sampel (g)
a. Berat sampel = 2,0029 g Beratabu = 0,2102 g
0,2102 g
% Kadar abu total = x 100% = 10,49%
2,0029 g
b. Berat sampel = 2,0048 g Beratabu = 0,1736 g
0,1736 g
% Kadar abu total = =
x 100% 8,65% 2,0048 g
c. Berat sampel = 2,0044 g Beratabu = 0,1824 g
0,1824 g
% Kadar abu total = =
x 100% 9,09% 2,0044 g
- 10,49% 8,65% 9,09% % Kadar abu total rata-rata =
3 = 9,41%
Lampiran 5. (Lanjutan)
5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak LarutAsam
berat abu (g)
% Kadar Abu Tidak LarutAsam =
x 100% berat sampel (g)
a. Berat sampel = 2,0046 g Berat abu = 0,0082 g
0,0082 g
% Kadar abu tidak larut asam = x 100% = 0,40%
2,0046 g
b. Berat sampel = 2,0025 g Beratabu = 0,0078 g
0,0078 g
% Kadar abu tidak larut asam = =
x 100% 0,38% 2,0025 g
c. Berat sampel = 2,0044 g Berat abu = 0,0086 g
0,0086 g
% Kadar abu tidak larut asam = =
x 100% 0,43% 2,0044 g
- 0,40% 0,38% 0,43% % Kadar abu tidak larut asam rata-rata =
3 = 0,4%
Lampiran 6. Bagan Alur Penelitian
Dipisahkan dari tangkainya Dikupas kulit buahnya Dirajang-rajang Ditimbang Dikeringkan dalam lemari pengering Ditimbang Dihaluskan (diblender) Ditimbang
Buah rotan jernang Kulit buah rotan jernang
Berat basah 980 g Berat kering 820 g
Beratserbuk750 g 8.
Pemeriksaan Makroskopik 9. Pemeriksaan Mikroskopik
10. Penetapan Kadar Air 11.
Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Air
12. Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Etanol 13.
Penetapan Kadar Abu Total
14. Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam 6.
Pemeriksaan Alkaloid
7. Pemeriksaan Flavonoid 8.
Pemeriksaan Tanin 9. Pemeriksaan Glikosida 10.
Pemeriksaan Saponin 11. Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid
Lampiran 6.(Lanjutan)
Dimasukkan ke dalam wadah Ditambahkan etanol 96% hingga serbuk terendam Dibiarkan selama lima hari terlindung dari cahaya, sambil sesekali diaduk Disaring
Dimaserasi ulang menggunakan etanol 96% Dibiarkan selama duahari terlindung daricahaya, sambil sesekali diaduk
Diuapkan dengan rotavapor(suhu 40
o
C) Diuji aktifitas anti mutagenik Dilakukan skrining fitokimia
Serbuk Simplisia Maserat Ampas
Maserat Ampas Ekstrak kental (62,78 g)
Hasil + Hasil (Alkaloid, Flavonoid, Tanin, Glikosida, Saponin,
Steroid/Triterpeoid)
Lampiran 7. Bagan Pembuatan Preparat/Apusan Sumsum Tulang Femur Mencit
Dibunuh dengan cara dislokasi leher Diambil salah satu tulang femurnya, dan dipotong pada bagian pangkal dan ujungnya Pada salah satu ujung tulang femur, tusukkan jarum syringe yang telah diisi dengan 0,3 ml serum darah sapi, lalu diaspirasi sum-sum tulangkedalammikrotube Disentrifuge dengan kecepatan 1.200 rpm selama 5 menit Dibuang bagian supernatan
Diambil dengan menggunakan mikropipet Ditaruh pada salah satu ujung sisi objek glass, dan dioleskan hingga menyebar menggunakan objek glass yang lain Dibiarkan hingga kering Difiksasi menggunakan methanol selama 10 menit Diwarnai dengan Giemsa-Metanol (20% v/v) selama 30 menit Dicuci dengan air yang mengalir Dikeringkan pada suhu kamar selama satu malam
Mencit Endapan / seluntuk dibuat apusan
Apusuan Sumsum tulang femur mencit
Lampiran 8. Alat-alat Gambar 12 Velocity 18 R Refrigerated Centrifuge Gambar 13 Alat bedah
Lampiran 8(Lanjutan) Gambar 14 Oral sonde dan spuit Gambar 15 Mikroskop Boeco BM-180 dan Lensa
Lampiran 9 Hewan Percobaan Gambar 16 Mencit Jantan Gambar 17 Pengambilan sumsum tulang femur mencit
Lampiran 10. Contoh perhitungan dosis
Contoh perhitungan dosis unuk mencit dengan berat badan 25 g dengan dosis ekstrak etanol kulit buah rotan jernang 5 mg/kg bb Dosis = 5 mg/kg bb 5 mg
= x
2 5 g = , 125 mg 1000 g ,1 g
1 00 mg 1 mg Konsentrasi suspensi ekstrak yang dibuat 0,1% = = = 100 ml 100 ml ml
,125 mg Jumlah obat yang disuntikkan = = , 125 ml 1 mg/ml Digunakan syringe 1 ml dengan skala 100, maka 1 skala = 0,01 ml
,125 ml
Maka suspense yang diberikan = =
12,5 skala ,01 ml
Lampiran 11. Hasil Pengamatan Apusan Menggunakan Mikroskop A B C D
Gambar18 Sel yang Tampak pada Apusan Sumsum Tulang Mencit
Keterangan: A : Sel eritrosit polikromatik bermikronukleus (perbesaran 10x100) B : Sel eritrosit polikromatik tidak bermikronukleus (perbesaran 10x100) C : Sel eritrosit polikromatik bermikronukleus (perbesaran 10x40) D : Sel eritrosit polikromatik tidak bermikronukleus (perbesaran 10x40)
Lampiran 12. Jumlah Sel Mikronukleus Pada SumsumTulang Femur Mencit Tabe l3 Jumlah mikronukleus dalam 200 sel eritrosit polikromatik Kelompok Perlakuan Jumlah sel mikronukleus
55
24
26
25
27
Induksi dengan Siklofosfamid
33 V Suspensi EEKBRJ dosis 15 mg/kg bb,
35
36
34
37
Induksi dengan Siklofosfamid
51 IV Suspensi EEKBRJ dosis 10 mg/kg bb,
53
54
Mencit1 Mencit2 Mencit3 Mencit4 Mencit5
59
Induksi dengan Siklofosfamid
67 III Suspensi EEKBRJ dosis 5 mg/kg bb,
66
64
65
68
Siklofosfamid
20 II Suspensi CMC 1%, Induksi dengan
24
21
20
23
I Suspensi CMC 1%
25
Lampiran 13. Hasil Analisis Statistik Menggunakan SPSS 22 Tabel 4 Uji Deskriptif
Descriptives jumlahmikronukleus N Mean
Std. Deviation Std.
Error 95% Confidence Interval for Mean Minimum Maximum Lower Bound
Upper Bound Kontrol Normal
5 21,6000 1,81659 ,81240 19,3444 23,8556 20,00 24,00 penginduksi 5 66,0000 1,58114 ,70711 64,0368 67,9632 64,00 68,00 EEKBRJ 5 mg/kg bb 5 54,4000 2,96648 1,32665 50,7166 58,0834 51,00 59,00
EEKBRJ 10 mg/kg bb 5 35,0000 1,58114 ,70711 33,0368 36,9632 33,00 37,00 EEKBRJ 15 mg/kg bb 5 25,4000 1,14018 ,50990 23,9843 26,8157 24,00 27,00
Total 25 40,4800 17,52170 3,50434 33,2474 47,7126 20,00 68,00
Tabel 5. Uji ANAVA satu arah (one way ANOVA)
ANOVA
jumlahmikronukleus Sum of Squares df Mean Square F Sig.Between Groups 7294,640 4 1823,660 495,560 ,000 Within Groups 73,600 20 3,680 Total 7368,240
24
Lampiran 13. (lanjutan) Tabel 6 Uji Normalitas
Tests of Normality a Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk perlakuan
- * Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Jumlahmikronukleus Kontrol Normal ,229 * 5 ,200 ,867 5 ,254 Penginduksi ,136 5 ,200 ,987 5 ,967 *
EEKBRJ 5 mg/kg ,220 5 ,200 ,956 5 ,777 bb
- * EEKBRJ 10 ,136
5 ,200 ,987 5 ,967 mg/kg bb
- * EEKBRJ 15 ,237
5 ,200 ,961 5 ,814 mg/kg bb
- . This is a lower bound of the true significance.
Lampiran 13. (lanjutan) Tabel 7 Uji Post Hoc Tuckey
1,21326 ,000 40,7695 48,0305 EEKBRJ 5 mg/kg bb 11,60000
- * 1,21326 ,000 7,9695 15,2305 EEKBRJ 10 mg/kg bb 31,00000 *
1,21326 ,037 ,1695 7,4305 Penginduksi -40,60000
- * 1,21326 ,000 -44,2305 -36,9695 EEKBRJ 5 mg/kg bb -29,00000 *
1,21326 ,000 -23,0305 -15,7695 EEKBRJ 15 mg/kg bb 9,60000
- * 1,21326 ,000 5,9695 13,2305 EEKBRJ 15 mg/kg BB Kontrol Normal 3,80000 *
1,21326 ,000 9,7695 17,0305 Pengiduksi -31,00000
- * 1,21326 ,000 -34,6305 -27,3695 EEKBRJ 5 mg/kg bb -19,40000 *
1,21326 ,000 15,7695 23,0305 EEKBRJ 15 mg/kg bb 29,00000
- * 1,21326 ,000 25,3695 32,6305 EEKBRJ 10 mg/kg BB Kontrol Normal 13,40000 *
1,21326 ,000 29,1695 36,4305 Penginduksi -11,60000
- * 1,21326 ,000 -15,2305 -7,9695 EEKBRJ 10 mg/kg bb 19,40000 *
1,21326 ,000 27,3695 34,6305 EEKBRJ 15 mg/kg bb 40,60000
- * 1,21326 ,000 36,9695 44,2305 EEKBRJ 5 mg/kg BB Kontrol Normal 32,80000 *
1,21326 ,000 -17,0305 -9,7695 EEKBRJ 15 mg/kg BB -3,80000
- * 1,21326 ,037 -7,4305 -,1695 Penginduksi Kontrol Normal 44,40000 *
Multiple Comparisons Dependent Variable: jumlahmikronukleus Tukey HSD
Penginduksi -44,40000 * 1,21326 ,000 -48,0305 -40,7695 EEKBRJ 5 mg/kg bb -32,80000
- * 1,21326 ,000 -36,4305 -29,1695 EEKBRJ 10 mg/kg bb -13,40000 *
Upper Bound Kontrol Normal
95% Confidence Interval Lower Bound
Error Sig.
(I-J) Std.
(I) perlakuan (J) perlakuan Mean Difference
1,21326 ,000 -32,6305 -25,3695 EEKBRJ 10 mg/kg bb -9,60000
- * 1,21326 ,000 -13,2305 -5,9695 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.