Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia dan Aktivitas Epitelisasi Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) Pada Penyembuhan Luka Eksisi.
PROFIL KROMATOGRAFI KANDUNGAN
FITOKIMIA DAN AKTIVITAS EPITELISASI
EKSTRAK ETANOL DAUN BINAHONG
(Anredera scandens (L.) Moq.)
PADA PENYEMBUHAN LUKA EKSISI
Skripsi
I DEWA GEDE PANCA YOGA SUBRATHA
1208505048
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2016
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena
atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia dan Aktivitas Epitelisasi Ekstrak
Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) pada Penyembuhan
Luka Eksisi” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran dan bimbingan
dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:
1.
Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
2.
Ni Made Pitri Susanti, S. Farm., M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan
Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana.
3.
Putu Oka Samirana, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan
di Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
4.
Dewa Ayu Swastini, S. F., M. Farm., Apt. selaku dosen pembimbing II
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan
Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
5.
Dosen penguji (Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt.,
Rini Noviyanti, S. Si., M. Si. Apt., dan Putu Sanna Yustiantara, S. Farm.,
M. Si., Apt.) yang telah memberikan saran dan bimbingan kepada penulis
selama penyelesaian skripsi ini.
iii
6.
drh. Djoko Legowo, M.Kes. yang telah memberikan saran dan bimbingan
kepada penulis dalam pengamatan histopatologi dari jaringan kulit hewan
uji.
7.
Seluruh dosen dan staff pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis
selama penyusunan skripsi ini.
8.
Orang tua kandung yang sangat saya cintai dan hormati, Alm. Dewa
Ketut Subratha dan Alm. Desak Putu Suarni yang telah mengasuh dan
membesarkan penulis, membimbing dan memberi motivasi dalam
penyusunan skripsi ini.
9.
Orang tua angkat yang sangat saya cintai dan hormati, Dewa Nyoman
Subadhi dan Desak Putu Siti yang telah mengasuh dan membesarkan
penulis, membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan skripsi
ini.
10. Kakak kandung saya yaitu Dewa Ayu Sri Iriani Listianingsih, I Dewa
Gede Iriantha Susila Jaya, Dewa Ayu Trisna Yugiarni dan Dewa Ayu Sri
Budiari yang selalu memberi motivasi dan dukungan.
11. Kakak angkat saya yaitu I Dewa Putu Gede Adnyana Susila, Dewa Gede
Indra Kasuma Putra, Dewa Ayu Sri Eka Harwati, serta keluarga besar di
Desa Pejeng Kaja, Kecamatan Tampaksiring, Kabupaten Gianyar yang
selalu memberi motivasi dan dukungan.
12. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2012, khususnya
mahasiswa dari Bahan Alam 2012 yang saya banggakan, khususnya Tim
seperjuangan penulis: Ansyar, Riska, Alan, Surya serta para laboran Kak
Anggi, Kak Pasek dan Mbok Dwi yang banyak membantu dan
memberikan semangat dalam penyusunan skripsi ini.
13. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam
penyusunan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.
Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat
membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis
iv
berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang
memerlukan.
Bukit Jimbaran, Agustus 2016
Penulis
v
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL........................................................................................
i
LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................
ii
KATA PENGANTAR .....................................................................................
iii
DAFTAR ISI ....................................................................................................
vi
DAFTAR TABEL ............................................................................................
x
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................
xv
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH .......................................................
xvi
ABSTRAK ....................................................................................................... xvii
ABSTRACT ..................................................................................................... xviii
BAB I
BAB II
PENDAHULUAN ...........................................................................
1
1.1. Latar Belakang..........................................................................
1
1.2. Rumusan Masalah ....................................................................
4
1.3. Tujuan .......................................................................................
5
1.4. Manfaat .....................................................................................
5
TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................
6
2.1. Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ...............................
6
2.1.1. Deskripsi tanaman ........................................................
7
2.1.2. Kandungan kimia ..........................................................
7
2.1.3. Khasiat dan bioaktivitas ................................................
8
2.2. Ekstrak ......................................................................................
9
2.2.1. Definisi ekstrak ............................................................
9
2.2.2. Metode ekstraksi ..........................................................
10
2.3. Kromatografi Lapis Tipis .........................................................
10
2.4. Spektrodensitometer .................................................................
12
2.5. Anatomi Kulit ...........................................................................
13
2.6. Luka ..........................................................................................
16
2.6.1. Definisi luka .................................................................
16
vi
2.6.2. Fase penyembuhan luka ................................................
16
2.6.3. Proses epitelisasi sebagai mekanisme penyembuhan
luka ...............................................................................
17
BAB III METODE PENELITIAN ................................................................
19
3.1. Rancangan Penelitian ...............................................................
19
3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian ....................................................
21
3.3. Hewan Uji .................................................................................
21
3.4. Bahan dan Alat Penelitian ........................................................
22
3.4.1. Bahan tanaman..............................................................
22
3.4.2. Bahan kimia untuk ekstraksi .........................................
22
3.4.3. Bahan kimia untuk uji fitokimia dan penentuan profil
kromatografi kandungan fitokimia ...............................
22
3.4.4. Bahan untuk pembuatan pembawa ekstrak...................
23
3.4.5. Bahan kimia untuk uji aktivitas epitelisasi ..................
23
3.4.6. Alat penelitian...............................................................
23
3.5. Variabel Penelitian ..................................................................
24
3.5.1. Variabel bebas ..............................................................
24
3.5.2. Variabel terikat .............................................................
24
3.5.3. Variabel terkontrol ........................................................
24
3.6. Batasan Operasional Penelitian ...............................................
24
3.7. Prosedur Penelitian ...................................................................
25
3.7.1. Determinasi tumbuhan ..................................................
25
3.7.2. Penyerbukan sampel .....................................................
26
3.7.3. Penetapan susut pengeringan serbuk daun binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ...................................
26
3.7.4. Pembuatan ekstrak etanol daun binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .....................................................
26
3.7.5. Penentapan kadar air ekstrak ........................................
27
3.7.6. Uji fitokimia ekstrak etanol daun binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .....................................................
3.7.7. Penentuan profil kandungan kimia ekstrak etanol
vii
28
daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ...........
29
3.7.8. Pembuatan pembawa ekstrak etanol daun (A. scandens
(L.) Moq.) .....................................................................
31
3.7.9. Uji aktivitas epitelisasi dari ekstrak etanol daun
binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) pada
penyembuhan luka eksisi ..............................................
33
3.8. Analisis Data ..........................................................................
35
3.9. Jadwal Penelitian....................................................................
36
3.10. Skema Penelitian ....................................................................
37
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................
38
4.1. Determinasi Jenis Tanaman ...................................................
38
4.2. Hasil
Penetapan
Kadar Air Serbuk Daun
Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq. ..............................................
40
4.3. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) ...............................................................
40
4.4. Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ..............................................
4.5. Hasil
Uji
Fitokimia Ekstrak Etanol
40
Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ..............................................
41
4.6. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Ekstrak Etanol
Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ..................
43
4.6.1. Profil kromatografi kandungan fitokimia golongan
flavonoid.....................................................................
44
4.6.2. Profil kromatografi kandungan fitokimia golongan
saponin .......................................................................
47
4.6.3. Profil kromatografi kandungan fitokimia golongan
triterpenoid .................................................................
49
4.6.4. Profil kromatografi kandungan fitokimia golongan
tanin ............................................................................
4.7. Uji Aktivitas Epitelisasi Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) pada Penyembuhan Luka
viii
52
Eksisi ......................................................................................
54
4.7.1. Penurunan diameter luka ............................................
56
4.7.2. Hasil pemeriksaan histopatologi jaringan epitel ........
62
KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................
69
5.1
Kesimpulan ...........................................................................
69
5.2
Saran ......................................................................................
70
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................
71
BAB V
ix
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1. Sistem Pelarut yang Digunakan untuk Identifikasi Kandungan
Kimia Tumbuhan...........................................................................
12
Tabel 3.1 Sistem Pelarut yang Digunakan Untuk Profil KLT-Densitometer
30
Tabel 3.2 Jenis Pereaksi Pendeteksi Metabolit Sekunder dan Hasil Positif
yang Dihasilkan .............................................................................
31
Tabel 3.3. Perlakuan dan Hari Pengorbanan Masing-Masing Kelompok
Hewan Uji .....................................................................................
35
Tabel 3.4. Nilai Skoring Histopatologi Jaringan Epitel .................................
35
Tabel 3.5. Jadwal Kegiatan Penelitian ...........................................................
36
Tabel 4.1. Hasil Penetapan Kadar Air Serbuk Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq) .......................................................................
39
Tabel 4.2. Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq) ......................................................
41
Tabel 4.3. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq) .......................................................................
42
Tabel 4.4. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Flavonoid ...........
45
Tabel 4.5. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Saponin ..............
48
Tabel 4.6. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Triterpenoid .......
51
Tabel 4.7. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Tanin ..................
54
Tabel 4.8. Ringkasan Uji Bonferoni Persentase Penurunan Diameter Luka
pada Uji Aktivitas Epitelisasi Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scadens (L.) Moq.) .......................................................
x
60
Tabel 4.9. Ringkasan Uji Mann-Whitney Nilai Scoring Pembentukan
Jaringan Epitel pada Uji Aktivitas Epitelisasi Ekstrak Etanol
Daun Binahong (Anredera scadens (L.) Moq.) ............................
xi
65
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1
(a) Tanaman Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.)
(b) Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ...............
6
Gambar 2.2
Anatomi Kulit ...........................................................................
13
Gambar 2.3
Histopat Jaringan Epitel dari Sebuah Luka yang terbentuk
sempurna (76-100%) dengan Pewarnaaan Haematoksilin
Eosin .........................................................................................
Gambar 3.1
Rancangan
Penelitian
18
Uji Aktivitas Epitelisasi Ekstrak
Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ..........
20
Gambar 3.2
Skema Umum Penelitian ..........................................................
37
Gambar 4.1
Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Flavonoid yang dilihat di bawah Sinar
UV 254 nm (a), UV 366 nm (b) dan pada Sinar Tampak (c) ...
Gambar 4.2
44
Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Saponin yang dilihat di bawah Sinar UV
254 nm (a), UV 366 nm (b) dan pada Sinar Tampak (c) ..........
Gambar 4.3
48
Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Triterpenoid yang dilihat di bawah Sinar
UV 254 nm (a), UV 366 nm (b) dan pada Sinar Tampak (c) ...
Gambar 4.4
50
Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Tanin yang dilihat di bawah Sinar UV
254 nm (a), UV 366 nm (b) dan pada Sinar Tampak (c) ..........
Gambar 4.5
Gambaran Histopatologi Jaringan Kulit Tikus Normal (A)
dan Jaringan Kulit Tikus dengan Model Luka Eksisi (B)
xii
53
dengan Pembesaran 200X di bawah mikroskop dengan
pewarnaan Hematoksilin-Eosin ................................................
55
Gambar 4.6
Diagram Persentase Penurunan Diameter Luka .......................
57
Gambar 4.7
Proses Pembentukkan Jaringan Neoepidermis .........................
59
Gambar 4.8
Diagram Batang Nilai Rata-rata Scoring Pembentukan
Jaringan Epitel ..........................................................................
xiii
62
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1.
Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman ........................
77
Lampiran 2.
Surat Keterangan Kelaikan Etik ...............................................
79
Lampiran 3.
Hasil Persentase Penurunan Diameter Luka.............................
80
Lampiran 4.
Hasil Pengamatan Visual dari Luka Hewan Uji .......................
82
Lampiran 5.
Hasil Statistik Persentase Penurunan Diameter Luka ..............
83
Lampiran 6.
Hasil Statistik Histopatologi Jaringan Epitel ............................
89
xiv
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH
Angiogenesis
: Pembentukan pembuluh kapiler darah yang baru.
BNF
: Buffer Neutral Formaline
ED50
: Effective dose50
EGF
: Epidermal Growth Factor
Epitelisasi
: Pembentukan epitel pada permukaan bagian atas kulit.
Fibroblas
: Sel-sel jaringan ikat yang berfungsi untuk membentuk
kartilago, yang pada kulit berperan dalam pembentukan
serabut dan bahan dasar (matriks), seperti serabut
kolagen.
FGF
: Fibroblast Growth Factor
GMCSF
: Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor
HE
: Haematoksilin dan Eosin
IL-1
: Interleukin 1
KGF
: Keratinocyte Growth Factor
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
Kolagen
: Protein terbanyak pada serabut jaringan ikat kulit, tulang,
dan kartilago, yang berperan dalam menjaga elastisitas
kulit sehingga menjadikan struktur kulit lebih stabil.
PDGF
: Platelet Derived Growth Factor
Proliferasi
: Proses fisiologis yang terjadi hampir pada seluruh
jaringan tubuh manusia pada berbagai keadaan sel untuk
tumbuh (cell growth) dan membelah (cell division).
ppm
: part per million
Rf
: Retention factor
TGFβ
: Transforming Growth Factor β
TNFα
: Tumor necrosis factor α
TNFβ
: Tumor necrosis factor β
UV
: Ultra Violet
VEGF
: Vascular Endothelial Growth Factor
xv
ABSTRAK
Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) merupakan salah satu tanaman
yang memiliki aktivitas penyembuhan luka. Tujuan penelitian ini adalah untuk
mengetahui profil kromatografi kandungan fitokimia dan aktivitas epitelisasi dari
ekstrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.).
Profil kromatografi kandungan fitokimia ditampilkan secara deskriptif
berupa nilai Rf, kromatogram, dan spektrum dari tiap golongan senyawa. Uji
aktivitas epitelisasi ekstrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.)
dilakukan pada tikus jantan galur Wistar yang diberikan luka eksisi. Aktivitas
epitelisasi diamati secara visual dengan pengukuran diameter luka dan
pengamatan histopatologi yang dinilai melalui skoring pembentukan jaringan
epitel. Data persentase penurunan diameter luka dianalisis dengan uji Anova satu
arah dan Uji Bonferoni sedangkan data skoring pembentukan jaringan epitel
dianalisis dengan uji Kruskall Wallis dan uji Mann Whitney masing-masing
dengan taraf kepercayaan 95%.
Hasil penentuan profil kromatografi kandungan fitokimia ekstrak etanol
daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) positif mengandung golongan
senyawa flavonoid pada Rf 0,81 dengan λmaks 340 nm, golongan senyawa saponin
pada Rf 0,32 dengan λmaks 206 nm, golongan senyawa triterpenoid pada Rf 0,38
dengan λmaks 210 nm, dan golongan senyawa tanin pada Rf 0,19 dengan λmaks 250
nm. Ekstrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) memiliki
aktivitas epitelisasi secara visual melalui persentase penurunan diameter luka
(p
FITOKIMIA DAN AKTIVITAS EPITELISASI
EKSTRAK ETANOL DAUN BINAHONG
(Anredera scandens (L.) Moq.)
PADA PENYEMBUHAN LUKA EKSISI
Skripsi
I DEWA GEDE PANCA YOGA SUBRATHA
1208505048
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2016
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena
atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia dan Aktivitas Epitelisasi Ekstrak
Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) pada Penyembuhan
Luka Eksisi” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran dan bimbingan
dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:
1.
Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
2.
Ni Made Pitri Susanti, S. Farm., M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan
Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana.
3.
Putu Oka Samirana, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan
di Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
4.
Dewa Ayu Swastini, S. F., M. Farm., Apt. selaku dosen pembimbing II
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan
Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
5.
Dosen penguji (Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt.,
Rini Noviyanti, S. Si., M. Si. Apt., dan Putu Sanna Yustiantara, S. Farm.,
M. Si., Apt.) yang telah memberikan saran dan bimbingan kepada penulis
selama penyelesaian skripsi ini.
iii
6.
drh. Djoko Legowo, M.Kes. yang telah memberikan saran dan bimbingan
kepada penulis dalam pengamatan histopatologi dari jaringan kulit hewan
uji.
7.
Seluruh dosen dan staff pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis
selama penyusunan skripsi ini.
8.
Orang tua kandung yang sangat saya cintai dan hormati, Alm. Dewa
Ketut Subratha dan Alm. Desak Putu Suarni yang telah mengasuh dan
membesarkan penulis, membimbing dan memberi motivasi dalam
penyusunan skripsi ini.
9.
Orang tua angkat yang sangat saya cintai dan hormati, Dewa Nyoman
Subadhi dan Desak Putu Siti yang telah mengasuh dan membesarkan
penulis, membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan skripsi
ini.
10. Kakak kandung saya yaitu Dewa Ayu Sri Iriani Listianingsih, I Dewa
Gede Iriantha Susila Jaya, Dewa Ayu Trisna Yugiarni dan Dewa Ayu Sri
Budiari yang selalu memberi motivasi dan dukungan.
11. Kakak angkat saya yaitu I Dewa Putu Gede Adnyana Susila, Dewa Gede
Indra Kasuma Putra, Dewa Ayu Sri Eka Harwati, serta keluarga besar di
Desa Pejeng Kaja, Kecamatan Tampaksiring, Kabupaten Gianyar yang
selalu memberi motivasi dan dukungan.
12. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2012, khususnya
mahasiswa dari Bahan Alam 2012 yang saya banggakan, khususnya Tim
seperjuangan penulis: Ansyar, Riska, Alan, Surya serta para laboran Kak
Anggi, Kak Pasek dan Mbok Dwi yang banyak membantu dan
memberikan semangat dalam penyusunan skripsi ini.
13. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam
penyusunan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.
Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat
membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis
iv
berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang
memerlukan.
Bukit Jimbaran, Agustus 2016
Penulis
v
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL........................................................................................
i
LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................
ii
KATA PENGANTAR .....................................................................................
iii
DAFTAR ISI ....................................................................................................
vi
DAFTAR TABEL ............................................................................................
x
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................
xv
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH .......................................................
xvi
ABSTRAK ....................................................................................................... xvii
ABSTRACT ..................................................................................................... xviii
BAB I
BAB II
PENDAHULUAN ...........................................................................
1
1.1. Latar Belakang..........................................................................
1
1.2. Rumusan Masalah ....................................................................
4
1.3. Tujuan .......................................................................................
5
1.4. Manfaat .....................................................................................
5
TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................
6
2.1. Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ...............................
6
2.1.1. Deskripsi tanaman ........................................................
7
2.1.2. Kandungan kimia ..........................................................
7
2.1.3. Khasiat dan bioaktivitas ................................................
8
2.2. Ekstrak ......................................................................................
9
2.2.1. Definisi ekstrak ............................................................
9
2.2.2. Metode ekstraksi ..........................................................
10
2.3. Kromatografi Lapis Tipis .........................................................
10
2.4. Spektrodensitometer .................................................................
12
2.5. Anatomi Kulit ...........................................................................
13
2.6. Luka ..........................................................................................
16
2.6.1. Definisi luka .................................................................
16
vi
2.6.2. Fase penyembuhan luka ................................................
16
2.6.3. Proses epitelisasi sebagai mekanisme penyembuhan
luka ...............................................................................
17
BAB III METODE PENELITIAN ................................................................
19
3.1. Rancangan Penelitian ...............................................................
19
3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian ....................................................
21
3.3. Hewan Uji .................................................................................
21
3.4. Bahan dan Alat Penelitian ........................................................
22
3.4.1. Bahan tanaman..............................................................
22
3.4.2. Bahan kimia untuk ekstraksi .........................................
22
3.4.3. Bahan kimia untuk uji fitokimia dan penentuan profil
kromatografi kandungan fitokimia ...............................
22
3.4.4. Bahan untuk pembuatan pembawa ekstrak...................
23
3.4.5. Bahan kimia untuk uji aktivitas epitelisasi ..................
23
3.4.6. Alat penelitian...............................................................
23
3.5. Variabel Penelitian ..................................................................
24
3.5.1. Variabel bebas ..............................................................
24
3.5.2. Variabel terikat .............................................................
24
3.5.3. Variabel terkontrol ........................................................
24
3.6. Batasan Operasional Penelitian ...............................................
24
3.7. Prosedur Penelitian ...................................................................
25
3.7.1. Determinasi tumbuhan ..................................................
25
3.7.2. Penyerbukan sampel .....................................................
26
3.7.3. Penetapan susut pengeringan serbuk daun binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ...................................
26
3.7.4. Pembuatan ekstrak etanol daun binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .....................................................
26
3.7.5. Penentapan kadar air ekstrak ........................................
27
3.7.6. Uji fitokimia ekstrak etanol daun binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .....................................................
3.7.7. Penentuan profil kandungan kimia ekstrak etanol
vii
28
daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ...........
29
3.7.8. Pembuatan pembawa ekstrak etanol daun (A. scandens
(L.) Moq.) .....................................................................
31
3.7.9. Uji aktivitas epitelisasi dari ekstrak etanol daun
binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) pada
penyembuhan luka eksisi ..............................................
33
3.8. Analisis Data ..........................................................................
35
3.9. Jadwal Penelitian....................................................................
36
3.10. Skema Penelitian ....................................................................
37
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................
38
4.1. Determinasi Jenis Tanaman ...................................................
38
4.2. Hasil
Penetapan
Kadar Air Serbuk Daun
Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq. ..............................................
40
4.3. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) ...............................................................
40
4.4. Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ..............................................
4.5. Hasil
Uji
Fitokimia Ekstrak Etanol
40
Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ..............................................
41
4.6. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Ekstrak Etanol
Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ..................
43
4.6.1. Profil kromatografi kandungan fitokimia golongan
flavonoid.....................................................................
44
4.6.2. Profil kromatografi kandungan fitokimia golongan
saponin .......................................................................
47
4.6.3. Profil kromatografi kandungan fitokimia golongan
triterpenoid .................................................................
49
4.6.4. Profil kromatografi kandungan fitokimia golongan
tanin ............................................................................
4.7. Uji Aktivitas Epitelisasi Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) pada Penyembuhan Luka
viii
52
Eksisi ......................................................................................
54
4.7.1. Penurunan diameter luka ............................................
56
4.7.2. Hasil pemeriksaan histopatologi jaringan epitel ........
62
KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................
69
5.1
Kesimpulan ...........................................................................
69
5.2
Saran ......................................................................................
70
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................
71
BAB V
ix
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1. Sistem Pelarut yang Digunakan untuk Identifikasi Kandungan
Kimia Tumbuhan...........................................................................
12
Tabel 3.1 Sistem Pelarut yang Digunakan Untuk Profil KLT-Densitometer
30
Tabel 3.2 Jenis Pereaksi Pendeteksi Metabolit Sekunder dan Hasil Positif
yang Dihasilkan .............................................................................
31
Tabel 3.3. Perlakuan dan Hari Pengorbanan Masing-Masing Kelompok
Hewan Uji .....................................................................................
35
Tabel 3.4. Nilai Skoring Histopatologi Jaringan Epitel .................................
35
Tabel 3.5. Jadwal Kegiatan Penelitian ...........................................................
36
Tabel 4.1. Hasil Penetapan Kadar Air Serbuk Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq) .......................................................................
39
Tabel 4.2. Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq) ......................................................
41
Tabel 4.3. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq) .......................................................................
42
Tabel 4.4. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Flavonoid ...........
45
Tabel 4.5. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Saponin ..............
48
Tabel 4.6. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Triterpenoid .......
51
Tabel 4.7. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Tanin ..................
54
Tabel 4.8. Ringkasan Uji Bonferoni Persentase Penurunan Diameter Luka
pada Uji Aktivitas Epitelisasi Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scadens (L.) Moq.) .......................................................
x
60
Tabel 4.9. Ringkasan Uji Mann-Whitney Nilai Scoring Pembentukan
Jaringan Epitel pada Uji Aktivitas Epitelisasi Ekstrak Etanol
Daun Binahong (Anredera scadens (L.) Moq.) ............................
xi
65
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1
(a) Tanaman Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.)
(b) Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ...............
6
Gambar 2.2
Anatomi Kulit ...........................................................................
13
Gambar 2.3
Histopat Jaringan Epitel dari Sebuah Luka yang terbentuk
sempurna (76-100%) dengan Pewarnaaan Haematoksilin
Eosin .........................................................................................
Gambar 3.1
Rancangan
Penelitian
18
Uji Aktivitas Epitelisasi Ekstrak
Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ..........
20
Gambar 3.2
Skema Umum Penelitian ..........................................................
37
Gambar 4.1
Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Flavonoid yang dilihat di bawah Sinar
UV 254 nm (a), UV 366 nm (b) dan pada Sinar Tampak (c) ...
Gambar 4.2
44
Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Saponin yang dilihat di bawah Sinar UV
254 nm (a), UV 366 nm (b) dan pada Sinar Tampak (c) ..........
Gambar 4.3
48
Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Triterpenoid yang dilihat di bawah Sinar
UV 254 nm (a), UV 366 nm (b) dan pada Sinar Tampak (c) ...
Gambar 4.4
50
Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Tanin yang dilihat di bawah Sinar UV
254 nm (a), UV 366 nm (b) dan pada Sinar Tampak (c) ..........
Gambar 4.5
Gambaran Histopatologi Jaringan Kulit Tikus Normal (A)
dan Jaringan Kulit Tikus dengan Model Luka Eksisi (B)
xii
53
dengan Pembesaran 200X di bawah mikroskop dengan
pewarnaan Hematoksilin-Eosin ................................................
55
Gambar 4.6
Diagram Persentase Penurunan Diameter Luka .......................
57
Gambar 4.7
Proses Pembentukkan Jaringan Neoepidermis .........................
59
Gambar 4.8
Diagram Batang Nilai Rata-rata Scoring Pembentukan
Jaringan Epitel ..........................................................................
xiii
62
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1.
Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman ........................
77
Lampiran 2.
Surat Keterangan Kelaikan Etik ...............................................
79
Lampiran 3.
Hasil Persentase Penurunan Diameter Luka.............................
80
Lampiran 4.
Hasil Pengamatan Visual dari Luka Hewan Uji .......................
82
Lampiran 5.
Hasil Statistik Persentase Penurunan Diameter Luka ..............
83
Lampiran 6.
Hasil Statistik Histopatologi Jaringan Epitel ............................
89
xiv
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH
Angiogenesis
: Pembentukan pembuluh kapiler darah yang baru.
BNF
: Buffer Neutral Formaline
ED50
: Effective dose50
EGF
: Epidermal Growth Factor
Epitelisasi
: Pembentukan epitel pada permukaan bagian atas kulit.
Fibroblas
: Sel-sel jaringan ikat yang berfungsi untuk membentuk
kartilago, yang pada kulit berperan dalam pembentukan
serabut dan bahan dasar (matriks), seperti serabut
kolagen.
FGF
: Fibroblast Growth Factor
GMCSF
: Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor
HE
: Haematoksilin dan Eosin
IL-1
: Interleukin 1
KGF
: Keratinocyte Growth Factor
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
Kolagen
: Protein terbanyak pada serabut jaringan ikat kulit, tulang,
dan kartilago, yang berperan dalam menjaga elastisitas
kulit sehingga menjadikan struktur kulit lebih stabil.
PDGF
: Platelet Derived Growth Factor
Proliferasi
: Proses fisiologis yang terjadi hampir pada seluruh
jaringan tubuh manusia pada berbagai keadaan sel untuk
tumbuh (cell growth) dan membelah (cell division).
ppm
: part per million
Rf
: Retention factor
TGFβ
: Transforming Growth Factor β
TNFα
: Tumor necrosis factor α
TNFβ
: Tumor necrosis factor β
UV
: Ultra Violet
VEGF
: Vascular Endothelial Growth Factor
xv
ABSTRAK
Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) merupakan salah satu tanaman
yang memiliki aktivitas penyembuhan luka. Tujuan penelitian ini adalah untuk
mengetahui profil kromatografi kandungan fitokimia dan aktivitas epitelisasi dari
ekstrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.).
Profil kromatografi kandungan fitokimia ditampilkan secara deskriptif
berupa nilai Rf, kromatogram, dan spektrum dari tiap golongan senyawa. Uji
aktivitas epitelisasi ekstrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.)
dilakukan pada tikus jantan galur Wistar yang diberikan luka eksisi. Aktivitas
epitelisasi diamati secara visual dengan pengukuran diameter luka dan
pengamatan histopatologi yang dinilai melalui skoring pembentukan jaringan
epitel. Data persentase penurunan diameter luka dianalisis dengan uji Anova satu
arah dan Uji Bonferoni sedangkan data skoring pembentukan jaringan epitel
dianalisis dengan uji Kruskall Wallis dan uji Mann Whitney masing-masing
dengan taraf kepercayaan 95%.
Hasil penentuan profil kromatografi kandungan fitokimia ekstrak etanol
daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) positif mengandung golongan
senyawa flavonoid pada Rf 0,81 dengan λmaks 340 nm, golongan senyawa saponin
pada Rf 0,32 dengan λmaks 206 nm, golongan senyawa triterpenoid pada Rf 0,38
dengan λmaks 210 nm, dan golongan senyawa tanin pada Rf 0,19 dengan λmaks 250
nm. Ekstrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) memiliki
aktivitas epitelisasi secara visual melalui persentase penurunan diameter luka
(p