Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia dan Aktivitas Angiogenesisi Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens(L) Moq) Pada Penyembuhan Luka Eksisi.
PROFIL KROMATOGRAFI KANDUNGAN FITOKIMIA DAN
AKTIVITAS ANGIOGENESIS EKSTRAK ETANOL DAUN
BINAHONG (Anredera scandens (L.) Moq) PADA
PENYEMBUHAN LUKA EKSISI
Skripsi
KOMANG ALAN ARIADI
1208505045
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2016
i
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena
atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia dan Aktivitas Angiogenesis
dalam
Proses Penyembuhan Luka dari Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq)” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran dan bimbingan
dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:
1. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
2. Ni Made Pitri Susanti, S.Farm., M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan Farmasi,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
3. Putu Oka Samirana, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di
Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
4. Dewa Ayu Swastini, S. F., M. Farm., Apt. selaku dosen pembimbing II
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan
Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
iii
5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis
selama penyusunan skripsi ini.
6. Orang tua kandung yang sangat saya cintai dan hormati, I Ketut Arya dan
Ni made Sukasari yang telah mengasuh dan membesarkan penulis,
membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan skripsi ini.
7. Kakak kandung saya yaitu Ni Kadek Alin Kusumadewi yang selalu
memberi motivasi dan dukungan.
8. Teman dekat saya yaitu Mitsue Oka yang selalu memberi semangat dan
motivasi dalam pengerjaan skripsi ini.
9. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2012, khususnya
mahasiswa dan Bahan Alam 2012 yang saya banggakan, khususnya Tim
seperjuangan penulis: Ansyar, Riska, Panca, Surya serta para laboran Kak
Anggi, Kak Pasek dan Mbok Dwi yang banyak membantu dan
memberikan semangat dalam penyusunan skripsi ini.
10. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan
skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.
Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat
membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis
berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang
memerlukan.
iv
Bukit Jimbaran, 9 Agustus 2016
Penulis
v
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL........................................................................................
i
LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................
ii
KATA PENGANTAR .....................................................................................
iii
DAFTAR ISI ....................................................................................................
vi
DAFTAR TABEL ............................................................................................
x
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................
xvi
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ....................................................... xvii
ABSTRAK ....................................................................................................... xvii
ABSTRACT .....................................................................................................
ix
BAB I.
PENDAHULUAN ...........................................................................
1
1.1 Latar Belakang....................................................................
1
1.2 Rumusan Masalah ..............................................................
4
1.3 Tujuan .................................................................................
4
1.4 Manfaat ...............................................................................
4
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................
5
2.1. Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ...............................
5
2.1.1. Klasifikasi Binahong ....................................................
5
2.1.2. Morfologi Binahong .....................................................
5
2.1.3. Kandungan Kimia Binahong ........................................
6
2.1.4. Khasiat dan Bioaktivitas Binahong ..............................
6
vi
2.2. Ekstrak ......................................................................................
7
2.2.1. Definisi Ekstrak ...........................................................
7
2.2.2. Metode Ekstraksi .........................................................
8
2.2.3. Kromatografi Lapis Tipis ...............................................
9
2.3. Spektrodensitometer .................................................................
11
2.4. Penentuan Profil KLT...............................................................
11
2.5. Kulit ..........................................................................................
12
2.5.1. Anatomi Kulit ..............................................................
13
2.5.2. Fisiologi Kulit ...............................................................
15
2.6. Luka ..........................................................................................
16
2.6.1. Fase Penyembuhan Luka ................................................
16
2.6.2. Angiogenesis ..................................................................
18
BAB III. METODE PENELITIAN ................................................................
19
3.1. Rancangan Penelitian ...............................................................
19
3.2. Tempat dan Waktu Penelitian...................................................
22
3.3. Objek Penelitian .......................................................................
22
3.4. Bahan dan Alat Penelitian ........................................................
23
3.5. Alat Penelitian .........................................................................
24
3.6. Variabel dan Batasan Penelitian ..............................................
25
3.6.1. Variabel Penelitian .......................................................
25
3.6.2. Batasan Operasional .....................................................
25
3.7. Prosedur Penelitian ...................................................................
26
3.7.1. Determinasi Tumbuhan ................................................
26
vii
3.7.2. Pembuatan Serbuk Simplisia ........................................
27
3.7.3. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ...................................
27
3.7.4. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .....................................................
28
3.7.5. Penetapan Kadar Air Ekstrak........................................
28
3.7.6. Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun
Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ...................................
29
3.7.7. Penentuan Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia
Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens
(L.) Moq.) .....................................................................
31
3.7.8. Pembuatan Salep Ekstrak Etanol Daun (Anredera
scandens (L.) Moq.)......................................................
3.7.9. Uji
Aktivitas
Penyembuhan
Angiogenesis
Luka
dari
Ektrak
dalam
Etanol
33
Proses
Daun
Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ....................
34
3.8. Analisis Data ............................................................................
36
BAB IV. PEMBAHASAN ..............................................................................
38
4.1. Determinasi Tanaman ...............................................................
38
4.2. Hasil Penetapan Kadar Air Serbuk Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .................................................................
38
4.3. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .................................................................
viii
40
4.4. Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ................................................
41
4.5. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ...............................................
42
4.6. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Ekstrak Etanol
Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ......................
44
4.6.1. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan
Saponin ...........................................................................
45
4.6.2. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan
Triterpenoid ..................................................................
50
4.6.3. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan
Flavonoid .......................................................................
55
4.6.4. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan
Tanin ...............................................................................
60
4.7. Uji Aktivitas Angiogenesis Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) pada Penyembuhan Luka
Eksisi .......................................................................................
65
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN.........................................................
75
5.1. Kesimpulan ................................................................................
75
5.2. Saran ...........................................................................................
76
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................
77
LAMPIRAN .....................................................................................................
82
ix
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1. Sistem Pelarut yang Digunakan untuk Identifikasi Kandungan
Kimia Tumbuhan .............................................................................
10
Tabel 3.1. Sistem Pelarut yang Digunakan untuk Profil KLT-Densitometer ...
32
Tabel 3.2. Jenis Pereaksi Pendeteksi Matabolit Sekunder dan Hasil Positif
yang Dihasilkan ...............................................................................
32
Tabel 3.3. Perlakuan dan Hari Pengorbanan Kelompok Hewan Uji ................
35
Tabel 3.4. Nilai Skoring Angiogensis ..............................................................
36
Tabel 3.5. Jadwal Kegiatan ...............................................................................
38
Tabel 4.1. Hasil Penetapan Kadar Air Serbuk Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) ........................................................................
39
Tabel 4.2. Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.)........................................................
41
Tabel 4.3. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .........................................................................
43
Tabel 4.4. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Saponin.................
46
Tabel 4.5. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Triterpenoid ..........
52
Tabel 4.6. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Flavonoid .............
x
57
Tabel 4.7. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Tanin ....................
62
Tabel 4.8. Ringkasan Uji Mann-Whitney nilai scoring pembentukan
pembuluh darah kapiler pada Uji Aktivitas Angiogenesis Ekstrak
Etanol Daun Binahong (Anredera scadens (L.) Moq.) ...................
xi
73
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1. Tanaman Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.)................
5
Gambar 2.2. Bagian-bagian Kulit..................................................................
13
Gambar 2.3. Histopat Angiogenesis dengan pewarnaan HE.........................
18
Gambar 3.1. Rancangan Penelitian Uji Aktivitas Penyembuhan Luka
Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) ........................................................................................
21
Gambar 3.2. Skema Kerja Penelitian ............................................................
37
Gambar 4.1. Bercak hasil elusi Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Saponin yang dilihat di bawah Sinar Tampak (A), UV 254
nm (B) dan pada UV 366 nm (C) .............................................
46
Gambar 4.2. Densitogram Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Saponin pada Penelitian ini (A), Penelitian Sebelumnya oleh
Kharismawan (2013) (B), dan Penelitian oleh Samirana
(2010) (C). ................................................................................
Gambar 4.3. Perbandingan Spektrum Saponin Penelitian Sebelumnya oleh
Samirana (2010) (A), Spektrum Bercak ke-5 dari Ekstrak
Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) (B),
xii
48
Spektrum Saponin Penelitian Sebelumnya oleh Kharismawan
(2013) .......................................................................................
49
Gambar 4.4. Bercak Hasil Elusi Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Triterpenoid yang dilihat di bawah Sinar Tampak (A), UV
254 nm (B) dan pada UV 366 nm (C) ......................................
51
Gambar 4.5. Densitogram Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Triterpenoid pada Penelitian ini (A), pada Penelitian
Sebelumnya oleh Karismawan (2013) (B), dan penelitian
oleh Samirana (2010) (C) .........................................................
53
Gambar 4.6. Perbandingan Spektrum Triterpenoid Penelitian Sebelumnya
oleh Karismawan (2013) (A) dan Spektrum Bercak ke-4 dari
Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) (B) ..................................................................................
54
Gambar 4.7. Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Flavonoid yang dilihat di bawah Sinar
Tampak (A), Sinar UV 254 nm (B) dan pada UV 366 nm (C)
Gambar 4.8. Densitogram Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Flavonoid
pada
Penelitian
xiii
ini
(A),
pada
Penelitian
56
Sebelumnya oleh Kharismawan (2013) (B), dan penelitian
oelh Samirana (2010) (C) .........................................................
58
Gambar 4.9. Perbandingan Spektrum Flavonoid Penelitian Sebelumnya
oleh Samirana (2010) (A) dengan Spektrum Bercak ke-6 dari
Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) (B) ..................................................................................
59
Gambar 4.10. Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Tanin yang dilihat di bawah Sinar
Tampak (A), Sinar UV 254 nm (B), dan pada UV 366 nm (C)
61
Gambar 4.11. Densitogram Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Tanin pada Penelitian ini (A), pada Penelitian Sebelumnya
oleh Kharismawan (2013) (B), dan penelitian oleh Samirana
(2010) .......................................................................................
63
Gambar 4.12. Perbandingan Antara Spektrum Tanin pada Penelitian
Sebelumnya oleh Samirana (2010) (A), Spektrum Tanin pada
Penelitian Sebelumnya oleh Karismawan (2013) (B) dan
Spektrum Bercak ke- 4 dari Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) (C). .........................................
64
Gambar 4.13. Diagram Batang Nilai Rata-rata Scoring Pembentukan
Pembuluh darah kapiler ............................................................
xiv
69
Gambar 4.14. Gambaran Umum Fase Penyembuhan Luka dan Jangka
waktunya...................................................................................
xv
71
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman ................................ 82
Lampiran 2. Surat Keterangan Kelaikan Etik ....................................................... 84
Lampiran 3. Hasil Pengamatan Histopatologi Angiogenesis ................................ 85
Lampiran 4. Hasil Skoring Histopatologi Angiogenesis ...................................... 87
Lampiran 5. Hasil Statistik Histopatologi angiogenesis ...................................... 88
xvi
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH
Ad libitum
: Diberikan tanpa ada yang menghalangi (sesukanya)
Angiogenesis : Pembentukan pembuluh darah kapiler yang baru.
BNF
: Buffer Neutral Formaline
Epitelisasi
: Pembentukan epitel pada permukaan bagian atas kulit.
Fibroblas
: Sel-sel
jaringan
ikat
yang
berfungsi
untuk
membentuk
kartilago, yang pada kulit berperan dalam pembentukan serabut
dan
bahan
dasar
(matriks),
seperti
serabut
kolagen.
HE
: Haemaktosilin dan Eosin
Hipoksia
: Suatu kondisi berkurangnya suplai oksigen ke jaringan sehingga
tidak dapat memenuhi kebutuhan tubuh.
KGF
: Keratinocyte Growth Factor
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
Kolagen
: Protein terbanyak pada serabut jaringan ikat kulit, tulang,
dan kartilago, yang berperan dalam menjaga elastisitas kulit
sehingga menjadikan struktur kulit lebih stabil.
MT
: Masson’s Trichrome
Proliferasi
: Proses
fisiologis
yang
terjadi
hampir
pada
seluruh
jaringan tubuh manusia pada berbagai keadaan sel untuk tumbuh
(cell growth) dan membelah (cell division).
UV
: Ultra Violet
VEGF
: Vascular Endothelial Growth Factor
xvii
ABSTRAK
Penyembuhan luka merupakan suatu proses yang kompleks dan saling
berhubungan. Keadaan hipoksia (kekurangan suplai oksigen) dapat menghambat
proses penyembuhan luka. Aspek yang dapat meningkatkan penyembuhan luka
pada keadaan hipoksia adalah angiogenesis. Binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) merupakan salah satu tanaman yang memiliki aktivitas penyembuhan luka.
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui profil kromatografi kandungan
kimia dan aktivitas angiogenesis dari ekstrak etanol daun binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.).
Profil kromatografi kandungan fitokimia ditampilkan secara deskriptif
berupa nilai Rf, kromatogram, dan spektrum dari tiap golongan senyawa. Uji
aktivitas angiogenesis ekstrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) dilakukan pada tikus jantan galur Wistar yang diberikan luka eksisi.
Aktivitas angiogenesis diamati secara histopatologi yang dinilai melalui skoring
pembentukan pembuluh darah kapiler. Data skoring pembentukan pembuluh
darah kapiler dianalisis dengan uji Kruskall Wallis dan uji Mann Whitney masingmasing dengan taraf kepercayaan 95%.
Hasil penentuan profil kromatografi kandungan fitokimia ekstrak etanol
daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) positif mengandung golongan
senyawa saponin pada Rf 0,29 dengan maks 206, golongan senyawa triterpenoid
pada Rf 0,36 dengan maks 210 nm, golongan senyawa flavonoid pada Rf 0,83
dengan maks 340 nm, dan golongan senyawa tanin pada Rf 0,20 dengan maks 250
nm. Ektrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) dengan
konsentrasi 20% memiliki aktivitas angiogenesis secara histopatologi mampu
meningkatkan pembentukan pembuluh darah kapiler pada luka eksisi (p
AKTIVITAS ANGIOGENESIS EKSTRAK ETANOL DAUN
BINAHONG (Anredera scandens (L.) Moq) PADA
PENYEMBUHAN LUKA EKSISI
Skripsi
KOMANG ALAN ARIADI
1208505045
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2016
i
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena
atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia dan Aktivitas Angiogenesis
dalam
Proses Penyembuhan Luka dari Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq)” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran dan bimbingan
dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:
1. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
2. Ni Made Pitri Susanti, S.Farm., M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan Farmasi,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
3. Putu Oka Samirana, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di
Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
4. Dewa Ayu Swastini, S. F., M. Farm., Apt. selaku dosen pembimbing II
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan
Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
iii
5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis
selama penyusunan skripsi ini.
6. Orang tua kandung yang sangat saya cintai dan hormati, I Ketut Arya dan
Ni made Sukasari yang telah mengasuh dan membesarkan penulis,
membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan skripsi ini.
7. Kakak kandung saya yaitu Ni Kadek Alin Kusumadewi yang selalu
memberi motivasi dan dukungan.
8. Teman dekat saya yaitu Mitsue Oka yang selalu memberi semangat dan
motivasi dalam pengerjaan skripsi ini.
9. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2012, khususnya
mahasiswa dan Bahan Alam 2012 yang saya banggakan, khususnya Tim
seperjuangan penulis: Ansyar, Riska, Panca, Surya serta para laboran Kak
Anggi, Kak Pasek dan Mbok Dwi yang banyak membantu dan
memberikan semangat dalam penyusunan skripsi ini.
10. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan
skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.
Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat
membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis
berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang
memerlukan.
iv
Bukit Jimbaran, 9 Agustus 2016
Penulis
v
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL........................................................................................
i
LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................
ii
KATA PENGANTAR .....................................................................................
iii
DAFTAR ISI ....................................................................................................
vi
DAFTAR TABEL ............................................................................................
x
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................
xvi
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ....................................................... xvii
ABSTRAK ....................................................................................................... xvii
ABSTRACT .....................................................................................................
ix
BAB I.
PENDAHULUAN ...........................................................................
1
1.1 Latar Belakang....................................................................
1
1.2 Rumusan Masalah ..............................................................
4
1.3 Tujuan .................................................................................
4
1.4 Manfaat ...............................................................................
4
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................
5
2.1. Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ...............................
5
2.1.1. Klasifikasi Binahong ....................................................
5
2.1.2. Morfologi Binahong .....................................................
5
2.1.3. Kandungan Kimia Binahong ........................................
6
2.1.4. Khasiat dan Bioaktivitas Binahong ..............................
6
vi
2.2. Ekstrak ......................................................................................
7
2.2.1. Definisi Ekstrak ...........................................................
7
2.2.2. Metode Ekstraksi .........................................................
8
2.2.3. Kromatografi Lapis Tipis ...............................................
9
2.3. Spektrodensitometer .................................................................
11
2.4. Penentuan Profil KLT...............................................................
11
2.5. Kulit ..........................................................................................
12
2.5.1. Anatomi Kulit ..............................................................
13
2.5.2. Fisiologi Kulit ...............................................................
15
2.6. Luka ..........................................................................................
16
2.6.1. Fase Penyembuhan Luka ................................................
16
2.6.2. Angiogenesis ..................................................................
18
BAB III. METODE PENELITIAN ................................................................
19
3.1. Rancangan Penelitian ...............................................................
19
3.2. Tempat dan Waktu Penelitian...................................................
22
3.3. Objek Penelitian .......................................................................
22
3.4. Bahan dan Alat Penelitian ........................................................
23
3.5. Alat Penelitian .........................................................................
24
3.6. Variabel dan Batasan Penelitian ..............................................
25
3.6.1. Variabel Penelitian .......................................................
25
3.6.2. Batasan Operasional .....................................................
25
3.7. Prosedur Penelitian ...................................................................
26
3.7.1. Determinasi Tumbuhan ................................................
26
vii
3.7.2. Pembuatan Serbuk Simplisia ........................................
27
3.7.3. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ...................................
27
3.7.4. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .....................................................
28
3.7.5. Penetapan Kadar Air Ekstrak........................................
28
3.7.6. Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun
Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ...................................
29
3.7.7. Penentuan Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia
Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens
(L.) Moq.) .....................................................................
31
3.7.8. Pembuatan Salep Ekstrak Etanol Daun (Anredera
scandens (L.) Moq.)......................................................
3.7.9. Uji
Aktivitas
Penyembuhan
Angiogenesis
Luka
dari
Ektrak
dalam
Etanol
33
Proses
Daun
Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ....................
34
3.8. Analisis Data ............................................................................
36
BAB IV. PEMBAHASAN ..............................................................................
38
4.1. Determinasi Tanaman ...............................................................
38
4.2. Hasil Penetapan Kadar Air Serbuk Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .................................................................
38
4.3. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .................................................................
viii
40
4.4. Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ................................................
41
4.5. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) ...............................................
42
4.6. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Ekstrak Etanol
Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) ......................
44
4.6.1. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan
Saponin ...........................................................................
45
4.6.2. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan
Triterpenoid ..................................................................
50
4.6.3. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan
Flavonoid .......................................................................
55
4.6.4. Profil Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan
Tanin ...............................................................................
60
4.7. Uji Aktivitas Angiogenesis Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) pada Penyembuhan Luka
Eksisi .......................................................................................
65
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN.........................................................
75
5.1. Kesimpulan ................................................................................
75
5.2. Saran ...........................................................................................
76
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................
77
LAMPIRAN .....................................................................................................
82
ix
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1. Sistem Pelarut yang Digunakan untuk Identifikasi Kandungan
Kimia Tumbuhan .............................................................................
10
Tabel 3.1. Sistem Pelarut yang Digunakan untuk Profil KLT-Densitometer ...
32
Tabel 3.2. Jenis Pereaksi Pendeteksi Matabolit Sekunder dan Hasil Positif
yang Dihasilkan ...............................................................................
32
Tabel 3.3. Perlakuan dan Hari Pengorbanan Kelompok Hewan Uji ................
35
Tabel 3.4. Nilai Skoring Angiogensis ..............................................................
36
Tabel 3.5. Jadwal Kegiatan ...............................................................................
38
Tabel 4.1. Hasil Penetapan Kadar Air Serbuk Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) ........................................................................
39
Tabel 4.2. Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.)........................................................
41
Tabel 4.3. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.) .........................................................................
43
Tabel 4.4. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Saponin.................
46
Tabel 4.5. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Triterpenoid ..........
52
Tabel 4.6. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Flavonoid .............
x
57
Tabel 4.7. Hasil Pengamatan Rf dan Warna Bercak pada Penentuan Profil
Kromatografi Kandungan Fitokimia Golongan Tanin ....................
62
Tabel 4.8. Ringkasan Uji Mann-Whitney nilai scoring pembentukan
pembuluh darah kapiler pada Uji Aktivitas Angiogenesis Ekstrak
Etanol Daun Binahong (Anredera scadens (L.) Moq.) ...................
xi
73
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1. Tanaman Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.)................
5
Gambar 2.2. Bagian-bagian Kulit..................................................................
13
Gambar 2.3. Histopat Angiogenesis dengan pewarnaan HE.........................
18
Gambar 3.1. Rancangan Penelitian Uji Aktivitas Penyembuhan Luka
Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) ........................................................................................
21
Gambar 3.2. Skema Kerja Penelitian ............................................................
37
Gambar 4.1. Bercak hasil elusi Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Saponin yang dilihat di bawah Sinar Tampak (A), UV 254
nm (B) dan pada UV 366 nm (C) .............................................
46
Gambar 4.2. Densitogram Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Saponin pada Penelitian ini (A), Penelitian Sebelumnya oleh
Kharismawan (2013) (B), dan Penelitian oleh Samirana
(2010) (C). ................................................................................
Gambar 4.3. Perbandingan Spektrum Saponin Penelitian Sebelumnya oleh
Samirana (2010) (A), Spektrum Bercak ke-5 dari Ekstrak
Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) (B),
xii
48
Spektrum Saponin Penelitian Sebelumnya oleh Kharismawan
(2013) .......................................................................................
49
Gambar 4.4. Bercak Hasil Elusi Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Triterpenoid yang dilihat di bawah Sinar Tampak (A), UV
254 nm (B) dan pada UV 366 nm (C) ......................................
51
Gambar 4.5. Densitogram Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Triterpenoid pada Penelitian ini (A), pada Penelitian
Sebelumnya oleh Karismawan (2013) (B), dan penelitian
oleh Samirana (2010) (C) .........................................................
53
Gambar 4.6. Perbandingan Spektrum Triterpenoid Penelitian Sebelumnya
oleh Karismawan (2013) (A) dan Spektrum Bercak ke-4 dari
Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) (B) ..................................................................................
54
Gambar 4.7. Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Flavonoid yang dilihat di bawah Sinar
Tampak (A), Sinar UV 254 nm (B) dan pada UV 366 nm (C)
Gambar 4.8. Densitogram Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Flavonoid
pada
Penelitian
xiii
ini
(A),
pada
Penelitian
56
Sebelumnya oleh Kharismawan (2013) (B), dan penelitian
oelh Samirana (2010) (C) .........................................................
58
Gambar 4.9. Perbandingan Spektrum Flavonoid Penelitian Sebelumnya
oleh Samirana (2010) (A) dengan Spektrum Bercak ke-6 dari
Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) (B) ..................................................................................
59
Gambar 4.10. Penampak Bercak (Bercak Hasil Elusi) Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi
Golongan Senyawa Tanin yang dilihat di bawah Sinar
Tampak (A), Sinar UV 254 nm (B), dan pada UV 366 nm (C)
61
Gambar 4.11. Densitogram Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera
scandens (L). Moq.) pada Indentifikasi Golongan Senyawa
Tanin pada Penelitian ini (A), pada Penelitian Sebelumnya
oleh Kharismawan (2013) (B), dan penelitian oleh Samirana
(2010) .......................................................................................
63
Gambar 4.12. Perbandingan Antara Spektrum Tanin pada Penelitian
Sebelumnya oleh Samirana (2010) (A), Spektrum Tanin pada
Penelitian Sebelumnya oleh Karismawan (2013) (B) dan
Spektrum Bercak ke- 4 dari Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera scandens (L.) Moq.) (C). .........................................
64
Gambar 4.13. Diagram Batang Nilai Rata-rata Scoring Pembentukan
Pembuluh darah kapiler ............................................................
xiv
69
Gambar 4.14. Gambaran Umum Fase Penyembuhan Luka dan Jangka
waktunya...................................................................................
xv
71
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman ................................ 82
Lampiran 2. Surat Keterangan Kelaikan Etik ....................................................... 84
Lampiran 3. Hasil Pengamatan Histopatologi Angiogenesis ................................ 85
Lampiran 4. Hasil Skoring Histopatologi Angiogenesis ...................................... 87
Lampiran 5. Hasil Statistik Histopatologi angiogenesis ...................................... 88
xvi
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH
Ad libitum
: Diberikan tanpa ada yang menghalangi (sesukanya)
Angiogenesis : Pembentukan pembuluh darah kapiler yang baru.
BNF
: Buffer Neutral Formaline
Epitelisasi
: Pembentukan epitel pada permukaan bagian atas kulit.
Fibroblas
: Sel-sel
jaringan
ikat
yang
berfungsi
untuk
membentuk
kartilago, yang pada kulit berperan dalam pembentukan serabut
dan
bahan
dasar
(matriks),
seperti
serabut
kolagen.
HE
: Haemaktosilin dan Eosin
Hipoksia
: Suatu kondisi berkurangnya suplai oksigen ke jaringan sehingga
tidak dapat memenuhi kebutuhan tubuh.
KGF
: Keratinocyte Growth Factor
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
Kolagen
: Protein terbanyak pada serabut jaringan ikat kulit, tulang,
dan kartilago, yang berperan dalam menjaga elastisitas kulit
sehingga menjadikan struktur kulit lebih stabil.
MT
: Masson’s Trichrome
Proliferasi
: Proses
fisiologis
yang
terjadi
hampir
pada
seluruh
jaringan tubuh manusia pada berbagai keadaan sel untuk tumbuh
(cell growth) dan membelah (cell division).
UV
: Ultra Violet
VEGF
: Vascular Endothelial Growth Factor
xvii
ABSTRAK
Penyembuhan luka merupakan suatu proses yang kompleks dan saling
berhubungan. Keadaan hipoksia (kekurangan suplai oksigen) dapat menghambat
proses penyembuhan luka. Aspek yang dapat meningkatkan penyembuhan luka
pada keadaan hipoksia adalah angiogenesis. Binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) merupakan salah satu tanaman yang memiliki aktivitas penyembuhan luka.
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui profil kromatografi kandungan
kimia dan aktivitas angiogenesis dari ekstrak etanol daun binahong (Anredera
scandens (L.) Moq.).
Profil kromatografi kandungan fitokimia ditampilkan secara deskriptif
berupa nilai Rf, kromatogram, dan spektrum dari tiap golongan senyawa. Uji
aktivitas angiogenesis ekstrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.)
Moq.) dilakukan pada tikus jantan galur Wistar yang diberikan luka eksisi.
Aktivitas angiogenesis diamati secara histopatologi yang dinilai melalui skoring
pembentukan pembuluh darah kapiler. Data skoring pembentukan pembuluh
darah kapiler dianalisis dengan uji Kruskall Wallis dan uji Mann Whitney masingmasing dengan taraf kepercayaan 95%.
Hasil penentuan profil kromatografi kandungan fitokimia ekstrak etanol
daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) positif mengandung golongan
senyawa saponin pada Rf 0,29 dengan maks 206, golongan senyawa triterpenoid
pada Rf 0,36 dengan maks 210 nm, golongan senyawa flavonoid pada Rf 0,83
dengan maks 340 nm, dan golongan senyawa tanin pada Rf 0,20 dengan maks 250
nm. Ektrak etanol daun binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) dengan
konsentrasi 20% memiliki aktivitas angiogenesis secara histopatologi mampu
meningkatkan pembentukan pembuluh darah kapiler pada luka eksisi (p