Ekspresi mRNA mammaglobin pada darah penderita kanker payudara dengan metastase di Kotamadya Medan

  EKPRESI m-RNA MAMMAGLOBIN PADA DARAH PENDERITA KANKER PAYUDARA DENGAN METASTASE DI KOTAMADYA MEDAN TESIS OLEH SURJADI RIMBUN 087008004/BM PROGRAM MAGISTER ILMU BIOMEDIK FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2013

  EKPRESI m-RNA MAMMAGLOBIN PADA DARAH PENDERITA KANKER PAYUDARA DENGAN METASTASE DI KOTAMADYA MEDAN TESIS Diajukan untuk melengkapi persyaratan memperoleh Gelar Magister Biomedik Dalam Program Studi Magister Ilmu Biomedik Pada Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara Oleh SURJADI RIMBUN 087008004/BM PROGRAM MAGISTER ILMU BIOMEDIK FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2013

  Judul Penelitian : Ekspresi mRNA mammaglobin pada darah penderita kanker payudara dengan metastase di Kotamadya Medan Nama Mahasiswa : Surjadi Rimbun Nomor Pokok : 087008004/BM Program Studi : Studi Biomedik Menyetujui Komisi Pembimbing

dr. Yahwardiah Siregar Ph.D

Ketua

dr. Emir T. Pasaribu SpB-Onk

Anggota

  Ketua Program Studi Dekan Fakultas Kedokteran USU (dr. Yawardiah S. Ph.D) (Prof.dr. Gontar A. Siregar SpPD-KGEH)

  Telah diuji pada Tanggal : Maret 2013 PANITIA PENGUJI TESIS Ketua : dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D Anggota : 1. dr. Emir T. Pasaribu, Sp.B.Onk (K)

2. Prof. dr. Azmi S.Kar, Sp.PD. KHOM 3. dr. Sry Suryani Widjaja, M.Kes

  

Abstrak

Kanker payudara adalah salah satu masalah utama pada wanita di seluruh dunia.

  Meskipun reseksi kuratif jelas, penyebaran metatasis selanjutnya menjadi masalah klinis utama pada sekitar 30% dari semua pasien kanker payudara. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menilai keandalan klinis m-RNA mammaglobin sebagai penanda sirkulasi sel kanker pada pasien kanker payudara dan untuk mempelajari relevansi ekspresinya dalam darah. Untuk menentukan baik potensi dan batas-batas penanda untuk tujuan diagnostik, darah yang positif dianalisa dalam kaitannya dengan karakteristik klinis dan patologis. Penelitian ini dilakukan terhadap 29 pasien kanker payudara yang dibagi menjadi dua kelompok yaitu 13 pasien kanker payudara dengan metastase dan 16 pasien kanker payudara tanpa metastase. 28 pasien kanker payudara adalah jenis karsinoma duktal invasif dengan 1 pasien berjenis karsinoma lobular invasif adalah. Pasien kanker payudara telah direklasifikasi sesuai dengan kelas histologis ke kelas I (5 pasien), kelas II (4 pasien) dan kelas III (13 pasien). Semua individu dalam studi ini menjadi sasaran deteksi MAG m-RNA dalam sirkulasi sel tumor dalam darah perifer menggunakan tehnik RT-PCR. Hasil positif untuk mammaglobin dalam sampel darah terlihat pada 38%(5/13) pasien dengan metastasis tetapi tidak pada pasien non metatstatik. Ekspresi m-RNA mammaglobin berkorelasi dengan tumor metastatik (P = 0,011).MAG berlebih pada jaringan payudara secara signifikan positif pada tumor grade rendah (I dan II) dibandingkan yang grade tinggi (III). Mammaglobin adalah penanda tumor spesifik kanker payudara yang dapat memprediksi prognosis kanker payudara dan hasil penelitian kami menunjukkan bahwa penanda bisa sebagai pemeriksaan yang kurang-invasif dalam mendeteksi kanker payudara metastase.

  Kata kunci: kanker payudara, mRNA mammaglobin, darah perifer, RT-PCR

  

ABSTRACT

Breast cancer is a major problem among females all over the world. Despite

apparent curative resection, subsequent development of metastatic spread presents a major clinical problem in about 30% of all breast cancer patients.

The aim of this study was to investigate the clinical reliability of mammaglobin

m-RNA (MAG m-RNA) as a marker of circulating cancer cells in breast cancer

patients and to study the relevance of its expression in blood. To define better the

potential and limits of the marker for diagnostic purposes, blood positivity was

analyzed in relation to clinical and pathological characteristics.

This study was conducted on 29 breast cancer patients divided into two groups,

13 breast cancer patients with metastase and 16 patients with non metastase. Most of

the breast cancer patients were of the invasive ductal carcinoma type and 28 of them

had associated areas of intraductal carcinoma with 1 was invasive lobular carcinoma

type. Breast cancer patients were reclassified according to the histologic grade into

grade I (5 patients),grade II (4 patients) and grade III (13 patients). All individuals

included in this study were subjected to detection of MAG m-RNA in circulating

tumor cells in peripheral blood using RT-PCR technique.

Positivity for mammaglobin in blood samples was observed in 38% of patients

with metastatic but not in the non metatstatic patients. The presence of mammaglobin

was correlated with metastatic tumor (P = 0.011). MAG overexpression in breast tissue was significantly positive in low grade tumors (I and II) than in high grade ones (III).

MAG is a promising specific tumor marker of breast cancer that could predict the

prognosis of breast cancer and Our results indicate that the marker could represent a potentially useful noninvasive tool to detect metatstatic breast cancer.

  Key words: breast cancer, mRNA mammaglobin , peripheral blood, RT-PCR

UCAPAN TERIMA KASIH

  Puji dan syukur saya panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala rahmat dan kasih karuniaNya sehingga tesis ini dapat diselesaikan.

  Dengan selesainya tesis ini, perkenankanlah saya mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada: Rektor Universitas Sumatera Utara, Prof. Dr. dr. Syahril Pasaribu, DTM&H, M.Sc(CTM), Sp.A(K). serta seluruh jajaran terkait, atas kesempatan dan fasilitas di Universitas Sumatera Utara yang diberikan untuk mengikuti dan menyelesaikan pendidikan program magister Biomedik di Universitas Sumatera Utara, Medan.

  Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara, Prof. dr. Gontar A. Siregar, Sp.PD, KGEH, dan Ketua Program Studi Biomedik, dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D, atas kesempatan dan fasilitas yang diberikan untuk mengikuti dan menyelesaikan pendidikan program Magister Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara. Terima kasih yang tak terhingga dan penghargaan yang setinggi-tingginya saya sampaikan kepada dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D, selaku pembimbing utama yang dengan penuh perhatian telah memberikan dorongan, bimbingan dan semangat dan saran-saran yang sangat bermanfaat mulai dari persiapan penelitian hingga penulisan tesis ini.

  Penulis mengucapkan terima kasih yang tak terhingga kepada dr. Emir T. Pasaribu Sp.B Onk(K), selaku anggota komisi pembimbing, atas bimbingan, masukan, dan saran-sarannya yang sangat berharga dalam penelitian dan penulisan tesis ini.

  Terima kasih juga saya ucapkan kepada dr. Arlinda Sari Wahyuni, Mkes, yang telah memberikan bimbingan statistik dalam menyelesaikan tesis ini. Juga kepada para dosen di program magister Biomedik yang telah membimbing saya selama mengikuti program S2.

  Kepada Dr. Gino Tann, Ph.D, saya mengucapkan terima kasih yang tak terhingga atas dorongan, semangat dan bimbingan yang sangat bermanfaat sehingga memberikan inspirasi untuk menggali lebih dalam tentang semua aspek yang berkaitan dengan penelitian ini.

  Saya juga mengucapkan terima kasih yang tak terhingga dan rasa hormat yang sebesar-besarnya kepada Ayah dan Ibu tercinta, Bapak Muralim Rimbun dan Ibu Holly Martok, yang senantiasa memberikan dukungan, semangat dan dorongan selama saya menjalani pendidikan di Program Magister S2 Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara Medan. Kepada istri tercinta, dr. Rita Kusuma, penulis menyampaikan terima kasih yang tak terhingga atas segala pengertian dan pengorbanannya dalam penulisan tesis ini hingga selesai. Terima kasih juga kepada anak-anakku tercinta Tania, Dimitri, untuk segala pengertian dan pengorbanannya dalam mendukung cita-cita penulis.

  Akhir kata, saya mengucapkan terima kasih kepada segenap staf Laboratorium Klinik Terpadu FK USU Medan, dan semua pihak lainnya yang tidak disebutkan satu persatu di sini, yang telah banyak membantu serta mendukung penelitian dan penulisan tesis ini hingga selesai. Semoga Tuhan Yang Maha Esa membalas semua budi baik yang telah diberikan.

  Medan, Maret 2013 Penulis Surjadi Rimbun

RIWAYAT HIDUP

  Penulis dilahirkan pada tanggal 16 April 1966 di Medan. Menikah dengan dr. Rita Kusuma, dan mempunyai anak: Tania dan Dimitri. Menyelesaikan pendidikan kedokteran di Universitas Methodist Indonesia pada tahun 1992 dan lulus Ujian Negara di Universitas Sumatera Utara, Medan pada tahun 1993. Menjalankan masa bakti sebagai dokter Pegawai Tidak Tetap di Kabupaten Deli Serdang pada tahun 1994 – 1997. Menjalankan praktek pribadi sejak tahun 1997 – hingga sekarang.

  DAFTAR ISI ABSTRAK ........................................................................................................... i ABSTRACT ......................................................................................................... ii UCAPAN TERIMA KASIH ............................................................................. iii RIWAYAT HIDUP ........................................................................................... vi DAFTAR ISI .................................................................................................... vii DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... x DAFTAR TABEL ............................................................................................. xi DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xii DAFTAR SINGKATAN ................................................................................. xiii

  BAB I PENDAHULUAN

  1.1. Latar Belakang ........................................................................................ 1

  1.2. Perumusan Masalah ................................................................................. 3

  1.3. Tujuan Penelitian ..................................................................................... 3

  1.3.1. Tujuan umum ...................................................................................... 3

  1.3.2. Tujuan khusus ..................................................................................... 4

  1.4. Manfaat Penelitian ................................................................................... 4

  BAB II TINJAUAN KEPUSTAKAAN

  2.1. Gambaran umum Kanker Payudara ......................................................... 5

  2.1.1. Epidemiologi Kanker Payudara ............................................................... 5

  2.1.2. Faktor-faktor resiko Kanker Payudara ..................................................... 7 2.1.2. a Riwayat keluarga ................................................................................. 8 b Kanker pada payudara lain ................................................................... 8 c. Penyakit yang sebelumnya jinak .......................................................... 9

  d. Umur ................................................................................................... 9

  e. Riwayat menstruasi dan status menopausa ........................................... 9

  f. Riwayat reproduksi dan menyusui ..................................................... 10

  g. Hormon Eksogen ............................................................................... 10

  h. Faktor resiko akibat gaya hidup ......................................................... 11 i. Paparan radiasi pengion ..................................................................... 12

  2.1.3. Dasar genetika kejadian kanker payudara .............................................. 13 2.1.3.a. Mutasi gen pada kanker payudara familial ........................................ 13 a.1. BRCA1 dan BRCA2 ......................................................................... 13 a.2. Gen p53 ............................................................................................ 14 a.3. ATM ................................................................................................. 17

  a.4. Gen PTEN ........................................................................................ 17

  2.1.4. Klasifikasi kanker payudara ................................................................. 17 2.1.4.a. Histopatologi jenis kanker payudara .................................................. 17 2.1.4.b. Klasifikasi TNM ............................................................................... 18

  2.1.5. Staging Kanker payudara ...................................................................... 19

  2.1.6. Diagnosa kanker payudara .................................................................... 20 2.1.6.a. Diagnosa klinis ................................................................................ 21 a.1. Riwayat medis ................................................................................. 21 a.2. Pemeriksaan fisik ............................................................................. 22 2.1.6.b. Diagnosa secara radiologis ............................................................... 23 2.1.6.c. Aspirasi Jarum halus ........................................................................ 24 2.1.6.d. Biopsi .............................................................................................. 24 2.1.6.e. Diagnosa Laboratorium .................................................................... 24

  2.1.7. Program penapisan (Skrining).............................................................. 26

  2.2. Penanda Tumor pada Kanker Payudara ................................................ 26

  2.2.1. Definisi ............................................................................................... 26

  2.2.2. Kepentingan klinis ............................................................................... 26

  2.2.3. Klasifikasi ........................................................................................... 27 2.2.3.a. Penanda konvensional ...................................................................... 27 a.1. CEA................................................................................................. 28 a.2. CA 15-3 ........................................................................................... 28 2.2.3.b. Penanda diagnostik .......................................................................... 29 2.2.3.c. Penanda prognosis ........................................................................... 29 2.2.3.d. Penanda prediktif ............................................................................. 30 d.1. Penanda predisposisi ........................................................................ 31 d.2. Prediksi respons ............................................................................... 31

  2.3. Mammaglobin .................................................................................... 32

  2.3.1. Gen mammaglobin ............................................................................. 33

  2.3.2. Kimia protein mammaglobin .............................................................. 33

  2.3.3. Kegunaan klinis .................................................................................. 34 2.3.3.a. Marker kanker payudara.................................................................. 34 a.1. Spesifitas mammaglobin ................................................................. 35 a.2. Sensitivitas mammaglobin .............................................................. 37

  2.3.4. Mammaglobin dengan marker payudara lain ....................................... 41

  2.3.5. Metode Assay ..................................................................................... 42 2.3.5.a. Pewarnaan IHC ................................................................................... 42 2.3.5.b. RT-PCR ............................................................................................. 42

  BAB III METODOLOGI PENELITIAN

  3.1. Jenis Penelitian .................................................................................... 45

  3.2. Tempat Penelitian ................................................................................ 45

  3.3. Waktu Penelitian ................................................................................. 45

  3.4. Populasi Penelitian .............................................................................. 46

  3.5. Sampel Penelitian ................................................................................ 46

  3.6. Variabel Penelitian .............................................................................. 47

  3.7. Kerangka konsep ................................................................................. 48

  3.8. Definisi Operasional ............................................................................ 49

  3.9. Rancangan Penelitian .......................................................................... 50

  3.10. Pelaksanaan Penelitian ........................................................................ 51

  BAB IV HASIL PENELITIAN

  4.1 Hasil Penelitian ................................................................................... 57

  4.2 Analisa Hasil Penelitian ....................................................................... 61

  BAB V PEMBAHASAN ................................................................................. 64 BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN

  6.1 Kesimpulan ........................................................................................ 67

  6.2 Saran .................................................................................................. 67

  DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 69

  DAFTAR GAMBAR

  Nomor Judul Halaman

  1. Gambar anatomi payudara................................................................................ 5

  2. Gambar kanker payudara ................................................................................. 7

  3. Gambar kerangka Apoptosis .......................................................................... 16

  4. Gambar gen Mammaglobin ............................................................................ 32

  5. Gambar mesin PCR ....................................................................................... 44

  6. Gambar kerangka konsep ............................................................................... 48

  DAFTAR TABEL

  Nomor Judul Halaman

  1. Tabel gen yang terlibat pada kanker payudara ......................................... 8

  2. Tabel sistem TNM pada staging Kanker ............................................... 20

  3. Tabel daftar Tumor Marker .................................................................. 25

  4. Tabel bahan dan alat isolasi m-RNA ..................................................... 51

  5. Tabel komposis sintesis cDNA ............................................................. 53

  6. Tabel bahan dan alat isolasi gen cDNA ................................................. 54

  7. Tabel komposisi dan reaksi cDNA ........................................................ 54

  8. Tabel karakteristik subjek penelitian ..................................................... 58

  9. Tabel gambaran hasil rontgen dan USG ................................................ 58

  10. Tabel Histopatologi sampel .................................................................. 59

  11. Tabel Uji Chi Square ............................................................................ 60

  12. Tabel Hasil uji Fisher ........................................................................... 60