penetapan kadar tablet amoksilin dengan
KELOMPOK 10
1. IMAM RAHMANTO
2. NUR LAELI BUDI
HASTUTI
PENETAPAN KADAR AMOKSISILIN
DALAM TABLET SEDIAAN
FARMASI
DENGAN METODE
HIGH PERFORMANCE LIQUID
CHROMATOGRAPHY
(HPLC)
ALAT DAN BAHAN
ALAT :
BAHAN:
1.MORTIR + STAMPER 1.TABLET AMOKSISILIN
2.BEAKER GLASS
2.KALIUMDIHIDROFOSFAT(KH2PO4)
3.BATANG PENGADUK 3.AQUADEST
4.LABU UKUR
4.NAOH
5.GELAS UKUR
5.ASETONITRIL P
6.PIPET TETES
6.STANDAR AMOKSISILIN
7.ALAT HPLC
7.METANOL
8.TMBANGAN
8.WATER FORIRRIGATION(WFI)
9.SYRINGE
10.ULTRASONIK
11.PH METER
12.KOLOM C18 OKTA DESIL SILANON
PROSEDUR KERJA
PEMBUATAN LARUTAN BUFFER FOSFAT 0,02M
PH 4,8LARUTAN BUFFER FOSFAT YANG
DIBUAT SEJUMLAH 500ML.
CARA KERJA :
1.DITIMBANG 1,3609 G KALIUM
DIHIRDOFOSFAT, KEMUDIAN DILARUTKAN
DALAM 500ML
WATER FOR IRRIGATION.
2.DIATUR PH LARUTAN DENGAN KALIUM
HIRDOKSIDA DALAM PH METER HINGGA
KONDISI PHLARUTAN BERADA PADA 4,8 ±
0,1.
FASE GERAK YANG AKAN DIGUNAKAN ADALAH :
I. METANOL (SEBAGAI FASE GERAK PENCUCI KOLOM)
CARA KERJA :
-DIPIPET 100 ML ETANOL, DIMASUKKAN KE DALAM
BOTOL/WADAH FASE GERAK.
II.WFI : ASETONITRIL (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH 100ML.
(SEBAGAI FASE GERAK PENCUCI KOLOM)
CARA KERJA :
1.DIPIPET 95 ML WFI DIMASUKKAN KE DALAM LABU UKUR 100
ML.
2.DITAMBAHKAN ASETONITRIL P HINGGA TANDA BATAS (AD
100 ML)
3.DIGOJOG HINGGA HOMOGEN.III.
DAPAR FOSFAT : ASETONITRIL P (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH
300ML.(FASE GERAK UNTUK ELUSI)
CARA KERJA :
1.DIPIPET 285 ML DAPAR FOSFAT DIMASUKKAN KE DALAM
BEAKER GLASS.
2.DITAMBAHKAN 15 ML ASETONITRIL P, DIADUK HINGGA
HOMOGEN.
PEMBUATAN NAOH 0,2M
1.DITIMBANG 200 MG NAOH DIMASUKKAN DALAM LABU
UKUR 25ML.
2.DITAMBAHKAN WFI HINGGA TANDA BATAS.
PENYIAPAN SAMPEL
1.SEJUMLAH 3 TABLET AMOKSISILIN DITIMBANG DAN
DIHITUNG BOBOT RATA-RATANYA.
2.TABLET DIGERUS HINGGA HOMOGEN, LALU DITIMBANG
HINGGA DIPEROLEH 100 MGAMOKSISILIN.
3.SERBUK DI MASUKKAN KE DALAM LABU UKUR 100 ML,
TAMBAHKAN WFI, GOJOG HINGGA HOMOGEN (LARUTAN 1)
4.LAKUKAN PENGENCERAN TERHADAP LARUTAN 1
DENGAN FACTOR PENGENCERAN 100X DENGAN
PELARUT FASE GERAK HINGGA KONSENTRASINYA 5
ΜG/ML (LARUTAN 2)
5.SAMPEL YANG SUDAH DIIENCERKAN (LARUTAN 2)
DISARING, DIULTRASONIK DAN SAMPEL SIAP DIANALISIS.
KOSENTRASI 2 ΜL/ML, 4 ΜL/ML, 6ΜL/ML, 8 ΜL/ML,
MASING-MASING KE DALALAM HPLC DENGAN
MENGGUNAKAN SYRINGE.
2.DILIHAT WAKTU RETENSI, MAU, LUAS PUNCAK
KROMATOGRAM YANG TERBENTUK DALAMSPEKTUM
PADA MASING-MASING KOSENTRASI SENYAWA
STANDAR AMOKSISILIN, KEMUDIANDICATAT
SPEKTUMNYA.
3.DIBUAT PERSAMAAN REGRESI LINIER ANTARA
KONSENTRASI SENYAWA STANDAR TERHADAPLUAS
PUNCAK KROMATOGRAM.
4.DIINJEKSIKAN 20 ΜL SAMPEL, KE DALALAM HPLC
DENGAN MENGGUNAKANSYRINGE.
5.DICATAT SPEKTRUM YANG TERBENTUK, KEMUDIAN DI
TENTUKAN KADAR SENYAWAAMOKSISILIN DALAM
SAMPEL DENGAN MEMASUKKAN NILAI LUAS PUNCAK
KROMATOGRAM KEDALAM PERSAMAAN REGRESI
LINIER.
SKEMA KERJA
1.PEMBUATAN LARUTAN BUFFER FOSFAT 0,02M PH 4,8
DITIMBANG 1,3609 G KALIUM DIHIDROFOSFAT, KEMUDIAN DILARUTKAN DALAM 500
ML WFI15DIATUR PH LARUTAN DENGAN NATRIUM HIRDOKSIDA DALAM PH METER
HINGGA KONDISI PH
LARUTAN BERADA PADA 4,8 ± 0,1.
2.PEMBUATAN FASE GERAK
DIPIPET 285 ML BUFFER FOSFAT DIMASUKKAN KE DALAM BEAKER GLASS
DITAMBAHKAN 15 ML ASETONITRIL P, DIADUK HINGGA HOMOGEN.
3.PEMBUATAN NAOH 0,2M
DITIMBANG 200MG NAOH DIMASUKKAN DALAM LABU UKUR 25ML.
DITAMBAHKAN WFI HINGGA TANDA BATAS.
4.PREPARASI SAMPEL
SEJUMLAH 3 TABLET AMOKSISILIN DITIMBANG DAN DIHITUNG BOBOT RATA-RATANYA
TABLET DIGERUS HINGGA HOMOGEN, LALU DITIMBANG HINGGA DIPEROLEH 100
MG
AMOKSISILIN.SERBUK DI MASUKKAN KE DALAM LABU UKUR 100ML, TAMBAHKAN
WFI, GOJOG HINGGA
HOMOGEN. (LARUTAN 1)LAKUKAN PENGENCERAN TERHADAP LARUTAN 1 DENGAN
FACTOR PENGENCERAN 100X DENGANPELARUT FASE GERAK HINGGA
KONSENTRASINYA 5ΜG/ML. (LARUTAN 2)SAMPEL YANG SUDAH DIIENCERKAN
(LARUTAN 2) DISARING, DIULTRASONIK DAN SAMPEL SIAP
DIANALISIS.
5.PEMBUATAN KURVA KALIBRASI
DIPIPET 10ΜL STANDAR AMOKSISILIN, DENGAN KOSENTRASI 2 ΜL/ML,
4 ΜL/ML, 6 ΜL/ML,
8 ΜL/ML, 10 ΜL/ML KEMUDIAN MASING-MASING DIIJEKSIKAN KE
DALALAM HPL DENGAN MENGGUNAKANSYRINGE.
DILIHAT NILAI LUAS PUNCAK KROMATOGRAM YANG TERBENTUK
DALAM SPEKTUM PADA MASINGMASING KOSENTRASI SENYAWA STANDAR AMOKSISILIN, KEMUDIAN
DICATAT SPEKTUMNYA.
DARI DATA YANG DIPEROLEH, KEMUDIAN DIBUAT KURVA BAKU ATAU
KURVA KALIBRASINYA.
DIBUAT PERSAMAAN REGRESI LINIER ANTARA KONSENTRASI
SENYAWA STANDAR TERHADAP LUAS
PUNCAK KROMATOGRAM.
6.PENETAPAN KADAR AMOKSISILIN DALAM TABLET
DIINJEKSIKAN 10ΜL SAMPEL, KE DALALAM HPLC DENGAN
MENGGUNAKAN SYRINGE.
DICATAT SPEKTRUM YANG TERBENTUK, KEMUDIAN DI TENTUKAN
KADAR SENYAWA AMOKSISILIN
DALAM SAMPEL DENGAN MEMASUKKAN NILAI LUAS PUNCAK
KROMATOGRAM KE DALAM PERSAMAAN REGRESI LINIER.
PERHITUNGAN
PEMBUATAN LARUTAN BUFFER FOSFAT 0,02M PH 4,8LARUTAN BUFFER
FOSFAT YANG DIBUAT SEJUMLAH 500ML. JADI, PERHITUNGANNYA
ADALAH
SEBAGAI BERIKUT :
BM KH2PO4= 136,09 G/MOL
MASA KALIUM DIHIRDOFOSPAT YANG DITIMBANG = 0,02M X 136,09
G/MOL X 0,5 L= 1,3609 G
PEMBUATAN FASE GERAK
A.WFI : ASETONITRIL (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH 100ML.(SEBAGAI
FASE GERAK PENCUCI KOLOM)
PERHITUNGANNYA ADALAH SEBAGAI BERIKUT :
WFI YANG DIAMBIL
= 95:100 X 100 = 95 ML
ASETONITRIL P YANG DIAMBIL = 5:100 X 100 = 5 ML
B.BUFER FOSFAT : ASETONITRIL P (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH 300ML.
(FASE GERAK UNTUK ELUSI)
PERHITUNGANNYA ADALAH SEBAGAI BERIKUT :
BUFFER FOSFAT YANG DIAMBIL= 95:100 X 300= 285 ML
ASETONITRIL P YANG DIAMBIL= 5:100 X 300= 15 ML
PEMBUATAN NAOH 0,2M
NAOH YANG DIBUAT SEJUMLAH 25ML. JADI PERHITUNGANNYA
ADALAH SEBAGAI BERIKUT :
MASSA NAOH YANG DITIMBANG = M X BM X VOLUME
MASAA = 0,2M X 40G/MOL X 25 ML
MASSA = 200MG
PEMBUATAN LARUTAN STANDAR
A.INGIN DIBUAT LARUTAN STANDAR PRIMER DENGAN KONSENTRASI =
1MG/ML SEJUMLAH 25ML.
SEHINGGA JUMLAH AMOKSISILIN YANG DITIMBANG ADALAH 25 MG.
KARENA STANDAR YANG TERSEDIA DI LAB ADALAH AMOKSISILIN
TRIHIDRAT MAKA BOBOT
AMOKSISILIN SEBENARNYA DIKONVERSIKAN KE JUMAH AMOKSISILIN
TRIHIDRAT.
JADI PERHITUNGANNYA ADALAH :
MASSA AMOKSISILIN TRIHIDRAT = BM TRIHIDRAT : BM ANHIDRAT X
MASSA AMOKSISILIN ANHIDRAT
MASSA AMOKSISILIN TRIHIDRAT YANG DITIMBANG = 419,45 : 365,9 X
25MG= 28,66 MG
JADI UNTUK MEMBUAT LARUTAN STANDAR DENGAN KONSENTRASI
1MG/ML DILARUTKAN 28,66 MG
AMOKSISILIN TRIHIDRAT DALAM 25ML PELARUT.
B. UNTUK MEMUDAHKAN PEMBUATAN LARUTAN
STANDAR, MAKA DIBUAT LARUTAN STANDAR
SEKUNDER DENGAN KONSENTRASI 0,1MG/ML
DENGAN MENGENCERKAN LARUTAN STANDAR
PRIMER.
M1 X V1 = M2 X V2
1MG/ML X V1 = 0,1MG/ML X 10ML
V1
= 1 ML
C.DARI LARUTAN STANDAR SEKUNDER DIBUAT
LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 2 ΜG/ML, 4ΜG/ML,
6 ΜG/ML, DAN 8 ΜG/ML
I. STANDAR 2 ΜG/ML
M1 X V1
= M2 X V2
0,1MG/ML X V1 = 2 X 10-3MG/ML X 10ML
V1
= 0,2 ML
PENETAPAN KADAR AMPISILIN
DALAM TABLET DENGAN
NAMA GENERIK DAN DAGANG
MENGGUNAKAN
KROMATOGRAFI CAIR KINERJA
TINGGI (KCKT)
ALAT
ALAT YANG DIGUNAKAN DALAM PENELITIAN INI ADALAH SATU UNIT ALAT KCKT
(PERKIN-ELMER) YANG TERDIRI DARI
VACUUM DEGASSER, POMPA, UV/VIS DETECTOR, INTEGRATOR, PRINTER
(OKIDATA), KOLOM SELECTOSPHERE CL8 (4,6 X 250 MM).
BAHAN
BAHAN KIMIA YANG TIDAK DISEBUTKAN ASALNYA SEMUA DARI (E.MERCK
DENGAN DERAJAT P.A., ATAU PHARMACEUTICAL GRADE), LAKTOSA, AMYLUM
MANIHOT, TALKUM, MG STEARAT, AQUADES, AMPISILIN BPFI (PPOM JAKARTA),
AMPISILIN BAKU (PHAPROS), KAPLET AMPICILLIN (KIMIA FARMA), KAPLET
AMPICILLIN (INDOFARMA), KAPLET AMPICILLIN (PHAPROS), KAPLET BINOTAL
(BAYER), KAPLET KALPICILLIN (KALBE FARMA), KAPLET PARPICILLIN (PRAFA),
KAPLET CETACILLIN (SOHO).
PEMBUATAN LARUTAN KH2PO4 1 M (DILARUTKAN SEBANYAK 136,09 GRAM
KH2PO4 DALAM AIR BEBAS CO2, SAMPAI 1000,0 ML), ASAM ASETAT 1 N
DIBUAT DARI 60 ML ASAM ASETAT GLASSIAL DIENCERKAN DENGAN AIR BEBAS
OKSIGEN SAMPAI 1000,0 ML. PEMBUATAN PENGENCER DIGUNAKAN UNTUK
MELARUTKAN YANG DIBUAT DARI 10 ML KH2PO4 1 M DICAMPUR DENGAN 1 ML
ASAM ASETAT 1 N, KEMUDIAN DIENCERKAN DENGAN AIR SAMPAI 1000,0 ML.
PEMBUATAN FASE GERAK
DICAMPURKAN SEBANYAK 909 ML AIR, 80 ML ASETONITRIL, 10 ML KH2PO4 1
M, DAN 1 ML ASAM ASETAT 1M, DIMASUKKAN DALAM BOTOL KACA, DISARING
MENGGUNAKAN MILLIPORE 0,45 M, KEMUDIAN DIAWAUDARAKAN SELAMA 15
MENIT. KOMPOSISI FASE GERAK (AIR : ASETONITRIL : KH2PO4 1 M : ASAM
ASETAT 1 M = 909 : 80 : 10 : 1) V/V
PENENTUAN KUALITATIF
AMPISILIN BPFI, AMPISILIN BAKU (PHAPROS), KAPLET
AMPICILLIN (KIMIA FARMA), KAPLET AMPICILLIN
(INDOFARMA), KAPLET AMPICILLIN (PHAPROS), KAPLET
BINOTAL (BAYER), KAPLET KALPICILLIN (KALBE FARMA),
KAPLET PARPICILLIN (PRAFA), DAN KAPLET CETACILLIN
(SOHO), DENGAN KONSENTRASI 500 G/ML MASINGMASING DISUNTIKKAN KE SISTEM KCKT DENGAN VOLUME
PENYUNTIKAN 20 L. PUNCAK YANG DITUNJUKKAN
DIPERHATIKAN DAN DICATAT WAKTU TAMBATNYA.
PENENTUAN KUANTITATIF
PEMBUATAN LARUTAN INDUK AMPISILIN BPFI (LIB)
DITIMBANG SEKSAMA SEJUMLAH 25,0 MG AMPISILIN BPFI
LALU DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 25 ML,
DILARUTKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI GARIS
TANDA HINGGA DIPEROLEH LARUTAN DENGAN
KONSENTRASI 1000 G/ML, DISARING, FILTRATNYA
DIGUNAKAN SEBAGAI LARUTAN INDUK.
DARI LIB DIPIPET SEBANYAK 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 ML DAN
MASING-MASING DIMASUKKAN KE DALAM LABU TENTUKUR 10 ML
LALU DICUKUPKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA
SEHINGGA DIPEROLEH KONSENTRASI 200, 300, 400, 500, 600, DAN
700 G/ML. KEMUDIAN MASING-MASING KONSENTRASI DIINJEKSIKAN
SEBANYAK 6 KALI KE SISTEM KCKT PADA PANJANG GELOMBANG 254
NM DENGAN LAJU ALIR FASE GERAK 2,5 ML/MENIT, LALU DICATAT
LUAS PUNCAKNYA YANG DITUNJUKKAN PADA KROMATOGRAM DAN
DIBUAT KURVA KALIBRASI SERTA PERSAMAAN REGRESINYA.
UJI PEROLEHAN KEMBALI
DITIMBANG SEBANYAK 10 GRAM AMPISILIN BAKU (PHAPROS), 600 MG
AMYLUM MANIHOT, 120 MG TALKUM 120 MG MG STEARAT, DAN 1,16
GRAM LAKTOSA, DICAMPURKAN LALU DIGERUS HOMOGEN.
KEMUDIAN DITIMBANG SEKSAMA SEJUMLAH 120 MG SERBUK
CAMPURAN, DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 100 ML DAN
DILARUTKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI LARUT SEMPURNA. LALU
DITAMBAHKAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA SEHINGGA
DIPEROLEH LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 1000 G/ML, KEMUDIAN
DISARING, FILTRATNYA YANG JERNIH DIGUNAKAN SEBAGAI LARUTAN
UJI. DARI LARUTAN INI DIAAMBIL 5,0 ML, DIMASUKKAN DALAM LABU
TENTUKUR 10 ML, DITAMBAHKAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA
SEHINGGA DIPEROLEH LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 500 G/ML.
LARUTAN INI DIINJEKSIKAN KE SISTEM KCKT SEBANYAK 6 KALI PADA
PANJANG GELOMBANG 254 NM DAN LAJU ALIRAN 2,5 ML/MENIT LALU
DIHITUNG KADARNYA.
PENETAPAN KADAR KAPLET AMPISILLIN
DITIMBANG 20 KAPLET AMPISILIN, KEMUDIAN DIGERUS,
DITIMBANG SEKSAMA SEJUMLAH SERBUK AMPISILIN SETARA
DENGAN 100 MG AMPISILIN ANHIDRAT, DIMASUKKAN DALAM
LABU TENTUKUR 100 ML, DILARUTKAN DENGAN PENGENCER
SAMPAI LARUT SEMPURNA, DAN DITAMBAHKAN PENGENCER
SAMPAI GARIS TANDA SEHINGGA DIPEROLEH LARUTAN DENGAN
KONSENTRASI 1000 G/ML, DISARING, FILTRATNYA DIGUNAKAN
SEBAGAI LARUTAN UJI. KEMUDIAN DARI LARUTAN INI DIPIPET 5,0
ML, DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 10 ML DAN
DITAMBAHKAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA SEHINGGA
DIPEROLEH LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 500 G/ML.
LARUTAN INI DIINJEKSIKAN SEBANYAK 6 KALI KE SISTEM KCKT
PADA PANJANG GELOMBANG 254 NM DENGAN LAJU ALIR 2,5
ML/MENIT. PROSEDUR INI DILAKUKAN UNTUK KAPLET AMPICILLIN
(KIMIA FARMA, INDOFARMA, PHAPROS), KAPLET BINOTAL (BAYER),
KAPLET KALPICILLIN (KALBE FARMA), KAPLET PARPICILLIN (PRAFA),
DAN KAPLET CETACILLIN (SOHO).
ANALISA DATA SECARA STATISTIK
UNTUK MENGHITUNG KADAR SEBENARNYA DARI
HASIL PERCOBAAN DAPAT DIGUNAKAN RUMUS :
SD = 1 ) ( N X X
KETERANGAN :
SD = STANDAR DEVIASI; X = KADAR SAMPEL; X =
KADAR RATA-RATA SAMPEL; N = JUMLAH PERLAKUAN.
DENGAN DASAR PENOLAKAN DATA ADALAH (X - X) >
2,58 SD
UNTUK MENCARI KADAR SEBENARNYA DENGAN =
0,01, DK = N-1, DAPAT DIGUNAKAN RUMUS :
= X T (1-1/2),DK X
“SELESAI”
1. IMAM RAHMANTO
2. NUR LAELI BUDI
HASTUTI
PENETAPAN KADAR AMOKSISILIN
DALAM TABLET SEDIAAN
FARMASI
DENGAN METODE
HIGH PERFORMANCE LIQUID
CHROMATOGRAPHY
(HPLC)
ALAT DAN BAHAN
ALAT :
BAHAN:
1.MORTIR + STAMPER 1.TABLET AMOKSISILIN
2.BEAKER GLASS
2.KALIUMDIHIDROFOSFAT(KH2PO4)
3.BATANG PENGADUK 3.AQUADEST
4.LABU UKUR
4.NAOH
5.GELAS UKUR
5.ASETONITRIL P
6.PIPET TETES
6.STANDAR AMOKSISILIN
7.ALAT HPLC
7.METANOL
8.TMBANGAN
8.WATER FORIRRIGATION(WFI)
9.SYRINGE
10.ULTRASONIK
11.PH METER
12.KOLOM C18 OKTA DESIL SILANON
PROSEDUR KERJA
PEMBUATAN LARUTAN BUFFER FOSFAT 0,02M
PH 4,8LARUTAN BUFFER FOSFAT YANG
DIBUAT SEJUMLAH 500ML.
CARA KERJA :
1.DITIMBANG 1,3609 G KALIUM
DIHIRDOFOSFAT, KEMUDIAN DILARUTKAN
DALAM 500ML
WATER FOR IRRIGATION.
2.DIATUR PH LARUTAN DENGAN KALIUM
HIRDOKSIDA DALAM PH METER HINGGA
KONDISI PHLARUTAN BERADA PADA 4,8 ±
0,1.
FASE GERAK YANG AKAN DIGUNAKAN ADALAH :
I. METANOL (SEBAGAI FASE GERAK PENCUCI KOLOM)
CARA KERJA :
-DIPIPET 100 ML ETANOL, DIMASUKKAN KE DALAM
BOTOL/WADAH FASE GERAK.
II.WFI : ASETONITRIL (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH 100ML.
(SEBAGAI FASE GERAK PENCUCI KOLOM)
CARA KERJA :
1.DIPIPET 95 ML WFI DIMASUKKAN KE DALAM LABU UKUR 100
ML.
2.DITAMBAHKAN ASETONITRIL P HINGGA TANDA BATAS (AD
100 ML)
3.DIGOJOG HINGGA HOMOGEN.III.
DAPAR FOSFAT : ASETONITRIL P (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH
300ML.(FASE GERAK UNTUK ELUSI)
CARA KERJA :
1.DIPIPET 285 ML DAPAR FOSFAT DIMASUKKAN KE DALAM
BEAKER GLASS.
2.DITAMBAHKAN 15 ML ASETONITRIL P, DIADUK HINGGA
HOMOGEN.
PEMBUATAN NAOH 0,2M
1.DITIMBANG 200 MG NAOH DIMASUKKAN DALAM LABU
UKUR 25ML.
2.DITAMBAHKAN WFI HINGGA TANDA BATAS.
PENYIAPAN SAMPEL
1.SEJUMLAH 3 TABLET AMOKSISILIN DITIMBANG DAN
DIHITUNG BOBOT RATA-RATANYA.
2.TABLET DIGERUS HINGGA HOMOGEN, LALU DITIMBANG
HINGGA DIPEROLEH 100 MGAMOKSISILIN.
3.SERBUK DI MASUKKAN KE DALAM LABU UKUR 100 ML,
TAMBAHKAN WFI, GOJOG HINGGA HOMOGEN (LARUTAN 1)
4.LAKUKAN PENGENCERAN TERHADAP LARUTAN 1
DENGAN FACTOR PENGENCERAN 100X DENGAN
PELARUT FASE GERAK HINGGA KONSENTRASINYA 5
ΜG/ML (LARUTAN 2)
5.SAMPEL YANG SUDAH DIIENCERKAN (LARUTAN 2)
DISARING, DIULTRASONIK DAN SAMPEL SIAP DIANALISIS.
KOSENTRASI 2 ΜL/ML, 4 ΜL/ML, 6ΜL/ML, 8 ΜL/ML,
MASING-MASING KE DALALAM HPLC DENGAN
MENGGUNAKAN SYRINGE.
2.DILIHAT WAKTU RETENSI, MAU, LUAS PUNCAK
KROMATOGRAM YANG TERBENTUK DALAMSPEKTUM
PADA MASING-MASING KOSENTRASI SENYAWA
STANDAR AMOKSISILIN, KEMUDIANDICATAT
SPEKTUMNYA.
3.DIBUAT PERSAMAAN REGRESI LINIER ANTARA
KONSENTRASI SENYAWA STANDAR TERHADAPLUAS
PUNCAK KROMATOGRAM.
4.DIINJEKSIKAN 20 ΜL SAMPEL, KE DALALAM HPLC
DENGAN MENGGUNAKANSYRINGE.
5.DICATAT SPEKTRUM YANG TERBENTUK, KEMUDIAN DI
TENTUKAN KADAR SENYAWAAMOKSISILIN DALAM
SAMPEL DENGAN MEMASUKKAN NILAI LUAS PUNCAK
KROMATOGRAM KEDALAM PERSAMAAN REGRESI
LINIER.
SKEMA KERJA
1.PEMBUATAN LARUTAN BUFFER FOSFAT 0,02M PH 4,8
DITIMBANG 1,3609 G KALIUM DIHIDROFOSFAT, KEMUDIAN DILARUTKAN DALAM 500
ML WFI15DIATUR PH LARUTAN DENGAN NATRIUM HIRDOKSIDA DALAM PH METER
HINGGA KONDISI PH
LARUTAN BERADA PADA 4,8 ± 0,1.
2.PEMBUATAN FASE GERAK
DIPIPET 285 ML BUFFER FOSFAT DIMASUKKAN KE DALAM BEAKER GLASS
DITAMBAHKAN 15 ML ASETONITRIL P, DIADUK HINGGA HOMOGEN.
3.PEMBUATAN NAOH 0,2M
DITIMBANG 200MG NAOH DIMASUKKAN DALAM LABU UKUR 25ML.
DITAMBAHKAN WFI HINGGA TANDA BATAS.
4.PREPARASI SAMPEL
SEJUMLAH 3 TABLET AMOKSISILIN DITIMBANG DAN DIHITUNG BOBOT RATA-RATANYA
TABLET DIGERUS HINGGA HOMOGEN, LALU DITIMBANG HINGGA DIPEROLEH 100
MG
AMOKSISILIN.SERBUK DI MASUKKAN KE DALAM LABU UKUR 100ML, TAMBAHKAN
WFI, GOJOG HINGGA
HOMOGEN. (LARUTAN 1)LAKUKAN PENGENCERAN TERHADAP LARUTAN 1 DENGAN
FACTOR PENGENCERAN 100X DENGANPELARUT FASE GERAK HINGGA
KONSENTRASINYA 5ΜG/ML. (LARUTAN 2)SAMPEL YANG SUDAH DIIENCERKAN
(LARUTAN 2) DISARING, DIULTRASONIK DAN SAMPEL SIAP
DIANALISIS.
5.PEMBUATAN KURVA KALIBRASI
DIPIPET 10ΜL STANDAR AMOKSISILIN, DENGAN KOSENTRASI 2 ΜL/ML,
4 ΜL/ML, 6 ΜL/ML,
8 ΜL/ML, 10 ΜL/ML KEMUDIAN MASING-MASING DIIJEKSIKAN KE
DALALAM HPL DENGAN MENGGUNAKANSYRINGE.
DILIHAT NILAI LUAS PUNCAK KROMATOGRAM YANG TERBENTUK
DALAM SPEKTUM PADA MASINGMASING KOSENTRASI SENYAWA STANDAR AMOKSISILIN, KEMUDIAN
DICATAT SPEKTUMNYA.
DARI DATA YANG DIPEROLEH, KEMUDIAN DIBUAT KURVA BAKU ATAU
KURVA KALIBRASINYA.
DIBUAT PERSAMAAN REGRESI LINIER ANTARA KONSENTRASI
SENYAWA STANDAR TERHADAP LUAS
PUNCAK KROMATOGRAM.
6.PENETAPAN KADAR AMOKSISILIN DALAM TABLET
DIINJEKSIKAN 10ΜL SAMPEL, KE DALALAM HPLC DENGAN
MENGGUNAKAN SYRINGE.
DICATAT SPEKTRUM YANG TERBENTUK, KEMUDIAN DI TENTUKAN
KADAR SENYAWA AMOKSISILIN
DALAM SAMPEL DENGAN MEMASUKKAN NILAI LUAS PUNCAK
KROMATOGRAM KE DALAM PERSAMAAN REGRESI LINIER.
PERHITUNGAN
PEMBUATAN LARUTAN BUFFER FOSFAT 0,02M PH 4,8LARUTAN BUFFER
FOSFAT YANG DIBUAT SEJUMLAH 500ML. JADI, PERHITUNGANNYA
ADALAH
SEBAGAI BERIKUT :
BM KH2PO4= 136,09 G/MOL
MASA KALIUM DIHIRDOFOSPAT YANG DITIMBANG = 0,02M X 136,09
G/MOL X 0,5 L= 1,3609 G
PEMBUATAN FASE GERAK
A.WFI : ASETONITRIL (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH 100ML.(SEBAGAI
FASE GERAK PENCUCI KOLOM)
PERHITUNGANNYA ADALAH SEBAGAI BERIKUT :
WFI YANG DIAMBIL
= 95:100 X 100 = 95 ML
ASETONITRIL P YANG DIAMBIL = 5:100 X 100 = 5 ML
B.BUFER FOSFAT : ASETONITRIL P (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH 300ML.
(FASE GERAK UNTUK ELUSI)
PERHITUNGANNYA ADALAH SEBAGAI BERIKUT :
BUFFER FOSFAT YANG DIAMBIL= 95:100 X 300= 285 ML
ASETONITRIL P YANG DIAMBIL= 5:100 X 300= 15 ML
PEMBUATAN NAOH 0,2M
NAOH YANG DIBUAT SEJUMLAH 25ML. JADI PERHITUNGANNYA
ADALAH SEBAGAI BERIKUT :
MASSA NAOH YANG DITIMBANG = M X BM X VOLUME
MASAA = 0,2M X 40G/MOL X 25 ML
MASSA = 200MG
PEMBUATAN LARUTAN STANDAR
A.INGIN DIBUAT LARUTAN STANDAR PRIMER DENGAN KONSENTRASI =
1MG/ML SEJUMLAH 25ML.
SEHINGGA JUMLAH AMOKSISILIN YANG DITIMBANG ADALAH 25 MG.
KARENA STANDAR YANG TERSEDIA DI LAB ADALAH AMOKSISILIN
TRIHIDRAT MAKA BOBOT
AMOKSISILIN SEBENARNYA DIKONVERSIKAN KE JUMAH AMOKSISILIN
TRIHIDRAT.
JADI PERHITUNGANNYA ADALAH :
MASSA AMOKSISILIN TRIHIDRAT = BM TRIHIDRAT : BM ANHIDRAT X
MASSA AMOKSISILIN ANHIDRAT
MASSA AMOKSISILIN TRIHIDRAT YANG DITIMBANG = 419,45 : 365,9 X
25MG= 28,66 MG
JADI UNTUK MEMBUAT LARUTAN STANDAR DENGAN KONSENTRASI
1MG/ML DILARUTKAN 28,66 MG
AMOKSISILIN TRIHIDRAT DALAM 25ML PELARUT.
B. UNTUK MEMUDAHKAN PEMBUATAN LARUTAN
STANDAR, MAKA DIBUAT LARUTAN STANDAR
SEKUNDER DENGAN KONSENTRASI 0,1MG/ML
DENGAN MENGENCERKAN LARUTAN STANDAR
PRIMER.
M1 X V1 = M2 X V2
1MG/ML X V1 = 0,1MG/ML X 10ML
V1
= 1 ML
C.DARI LARUTAN STANDAR SEKUNDER DIBUAT
LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 2 ΜG/ML, 4ΜG/ML,
6 ΜG/ML, DAN 8 ΜG/ML
I. STANDAR 2 ΜG/ML
M1 X V1
= M2 X V2
0,1MG/ML X V1 = 2 X 10-3MG/ML X 10ML
V1
= 0,2 ML
PENETAPAN KADAR AMPISILIN
DALAM TABLET DENGAN
NAMA GENERIK DAN DAGANG
MENGGUNAKAN
KROMATOGRAFI CAIR KINERJA
TINGGI (KCKT)
ALAT
ALAT YANG DIGUNAKAN DALAM PENELITIAN INI ADALAH SATU UNIT ALAT KCKT
(PERKIN-ELMER) YANG TERDIRI DARI
VACUUM DEGASSER, POMPA, UV/VIS DETECTOR, INTEGRATOR, PRINTER
(OKIDATA), KOLOM SELECTOSPHERE CL8 (4,6 X 250 MM).
BAHAN
BAHAN KIMIA YANG TIDAK DISEBUTKAN ASALNYA SEMUA DARI (E.MERCK
DENGAN DERAJAT P.A., ATAU PHARMACEUTICAL GRADE), LAKTOSA, AMYLUM
MANIHOT, TALKUM, MG STEARAT, AQUADES, AMPISILIN BPFI (PPOM JAKARTA),
AMPISILIN BAKU (PHAPROS), KAPLET AMPICILLIN (KIMIA FARMA), KAPLET
AMPICILLIN (INDOFARMA), KAPLET AMPICILLIN (PHAPROS), KAPLET BINOTAL
(BAYER), KAPLET KALPICILLIN (KALBE FARMA), KAPLET PARPICILLIN (PRAFA),
KAPLET CETACILLIN (SOHO).
PEMBUATAN LARUTAN KH2PO4 1 M (DILARUTKAN SEBANYAK 136,09 GRAM
KH2PO4 DALAM AIR BEBAS CO2, SAMPAI 1000,0 ML), ASAM ASETAT 1 N
DIBUAT DARI 60 ML ASAM ASETAT GLASSIAL DIENCERKAN DENGAN AIR BEBAS
OKSIGEN SAMPAI 1000,0 ML. PEMBUATAN PENGENCER DIGUNAKAN UNTUK
MELARUTKAN YANG DIBUAT DARI 10 ML KH2PO4 1 M DICAMPUR DENGAN 1 ML
ASAM ASETAT 1 N, KEMUDIAN DIENCERKAN DENGAN AIR SAMPAI 1000,0 ML.
PEMBUATAN FASE GERAK
DICAMPURKAN SEBANYAK 909 ML AIR, 80 ML ASETONITRIL, 10 ML KH2PO4 1
M, DAN 1 ML ASAM ASETAT 1M, DIMASUKKAN DALAM BOTOL KACA, DISARING
MENGGUNAKAN MILLIPORE 0,45 M, KEMUDIAN DIAWAUDARAKAN SELAMA 15
MENIT. KOMPOSISI FASE GERAK (AIR : ASETONITRIL : KH2PO4 1 M : ASAM
ASETAT 1 M = 909 : 80 : 10 : 1) V/V
PENENTUAN KUALITATIF
AMPISILIN BPFI, AMPISILIN BAKU (PHAPROS), KAPLET
AMPICILLIN (KIMIA FARMA), KAPLET AMPICILLIN
(INDOFARMA), KAPLET AMPICILLIN (PHAPROS), KAPLET
BINOTAL (BAYER), KAPLET KALPICILLIN (KALBE FARMA),
KAPLET PARPICILLIN (PRAFA), DAN KAPLET CETACILLIN
(SOHO), DENGAN KONSENTRASI 500 G/ML MASINGMASING DISUNTIKKAN KE SISTEM KCKT DENGAN VOLUME
PENYUNTIKAN 20 L. PUNCAK YANG DITUNJUKKAN
DIPERHATIKAN DAN DICATAT WAKTU TAMBATNYA.
PENENTUAN KUANTITATIF
PEMBUATAN LARUTAN INDUK AMPISILIN BPFI (LIB)
DITIMBANG SEKSAMA SEJUMLAH 25,0 MG AMPISILIN BPFI
LALU DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 25 ML,
DILARUTKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI GARIS
TANDA HINGGA DIPEROLEH LARUTAN DENGAN
KONSENTRASI 1000 G/ML, DISARING, FILTRATNYA
DIGUNAKAN SEBAGAI LARUTAN INDUK.
DARI LIB DIPIPET SEBANYAK 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 ML DAN
MASING-MASING DIMASUKKAN KE DALAM LABU TENTUKUR 10 ML
LALU DICUKUPKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA
SEHINGGA DIPEROLEH KONSENTRASI 200, 300, 400, 500, 600, DAN
700 G/ML. KEMUDIAN MASING-MASING KONSENTRASI DIINJEKSIKAN
SEBANYAK 6 KALI KE SISTEM KCKT PADA PANJANG GELOMBANG 254
NM DENGAN LAJU ALIR FASE GERAK 2,5 ML/MENIT, LALU DICATAT
LUAS PUNCAKNYA YANG DITUNJUKKAN PADA KROMATOGRAM DAN
DIBUAT KURVA KALIBRASI SERTA PERSAMAAN REGRESINYA.
UJI PEROLEHAN KEMBALI
DITIMBANG SEBANYAK 10 GRAM AMPISILIN BAKU (PHAPROS), 600 MG
AMYLUM MANIHOT, 120 MG TALKUM 120 MG MG STEARAT, DAN 1,16
GRAM LAKTOSA, DICAMPURKAN LALU DIGERUS HOMOGEN.
KEMUDIAN DITIMBANG SEKSAMA SEJUMLAH 120 MG SERBUK
CAMPURAN, DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 100 ML DAN
DILARUTKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI LARUT SEMPURNA. LALU
DITAMBAHKAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA SEHINGGA
DIPEROLEH LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 1000 G/ML, KEMUDIAN
DISARING, FILTRATNYA YANG JERNIH DIGUNAKAN SEBAGAI LARUTAN
UJI. DARI LARUTAN INI DIAAMBIL 5,0 ML, DIMASUKKAN DALAM LABU
TENTUKUR 10 ML, DITAMBAHKAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA
SEHINGGA DIPEROLEH LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 500 G/ML.
LARUTAN INI DIINJEKSIKAN KE SISTEM KCKT SEBANYAK 6 KALI PADA
PANJANG GELOMBANG 254 NM DAN LAJU ALIRAN 2,5 ML/MENIT LALU
DIHITUNG KADARNYA.
PENETAPAN KADAR KAPLET AMPISILLIN
DITIMBANG 20 KAPLET AMPISILIN, KEMUDIAN DIGERUS,
DITIMBANG SEKSAMA SEJUMLAH SERBUK AMPISILIN SETARA
DENGAN 100 MG AMPISILIN ANHIDRAT, DIMASUKKAN DALAM
LABU TENTUKUR 100 ML, DILARUTKAN DENGAN PENGENCER
SAMPAI LARUT SEMPURNA, DAN DITAMBAHKAN PENGENCER
SAMPAI GARIS TANDA SEHINGGA DIPEROLEH LARUTAN DENGAN
KONSENTRASI 1000 G/ML, DISARING, FILTRATNYA DIGUNAKAN
SEBAGAI LARUTAN UJI. KEMUDIAN DARI LARUTAN INI DIPIPET 5,0
ML, DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 10 ML DAN
DITAMBAHKAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA SEHINGGA
DIPEROLEH LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 500 G/ML.
LARUTAN INI DIINJEKSIKAN SEBANYAK 6 KALI KE SISTEM KCKT
PADA PANJANG GELOMBANG 254 NM DENGAN LAJU ALIR 2,5
ML/MENIT. PROSEDUR INI DILAKUKAN UNTUK KAPLET AMPICILLIN
(KIMIA FARMA, INDOFARMA, PHAPROS), KAPLET BINOTAL (BAYER),
KAPLET KALPICILLIN (KALBE FARMA), KAPLET PARPICILLIN (PRAFA),
DAN KAPLET CETACILLIN (SOHO).
ANALISA DATA SECARA STATISTIK
UNTUK MENGHITUNG KADAR SEBENARNYA DARI
HASIL PERCOBAAN DAPAT DIGUNAKAN RUMUS :
SD = 1 ) ( N X X
KETERANGAN :
SD = STANDAR DEVIASI; X = KADAR SAMPEL; X =
KADAR RATA-RATA SAMPEL; N = JUMLAH PERLAKUAN.
DENGAN DASAR PENOLAKAN DATA ADALAH (X - X) >
2,58 SD
UNTUK MENCARI KADAR SEBENARNYA DENGAN =
0,01, DK = N-1, DAPAT DIGUNAKAN RUMUS :
= X T (1-1/2),DK X
“SELESAI”