Isolasi Senyawa Fukoidan Dari Talus Rumput Laut Coklat (Sargassum ilicifolium (Turner) C. Agard) Serta Uji Sitotoksik Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test
Lampiran 1. Surat hasil identifikasi tumbuhan
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Bagan kerja penelitian
Rumput laut coklat segar
Disortasi Basah
Dicuci
Dikeringkan di lemari pengering
suhu ±40ºC
Disortasi kering
Ditimbang
Simplisia
Diuji makroskopik
Dihaluskan
Serbuk simplisia
Diisolasi senyawa fukoidan
Senyawa fukoidan
Identifikasi senyawa
fukoidan
Susut pengeringan
Uji sitotoksik
Spektrofotometer UV
Spektrofotometer FTIR
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Bagan kerja isolasi senyawa fukoidan
50 g serbuk simplisia
Dimasukkan ke gelas beker 1000 ml
Ditambah 500 ml HCl 0,1 N
Diesktraksi selama 100ºC selama 4
jam sambil sesekali diaduk
Disaring dan diperas dengan kain
flannel
Ampas
Filtrat
Disentrifugasi dengan kecepatan
3000 rpm selama 10 menit
Endapan
Filtrat
Ditambah etanol 96 % sama banyak
dengan filtrat
Disentrifugasi dengan kecepatan
3000 rpm selama 10 menit
Filtrat
Residu
Dikeringkan dalam oven suhu 50ºC
Digerus
Dimasukkan kedalam botol
Isolat fukoidan
2,27 g
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Bagan kerja uji sitotoksik
50 g fukoidan
Dilarutkan dengan pelarut yang sesuai
sampai 5 ml
Dipipet 0,5 ml
Dipipet 0,5 ml
Dipipet 0,5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Larutan konsentrasi
103 µg/ml
Larutan konsentrasi
103 µg/ml
Larutan konsentrasi
103 µg/ml
Dipipet 0,5 ml
Dipipet 0,5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Larutan konsentrasi
102 µg/ml
Larutan konsentrasi
102 µg/ml
Dipipet 0,5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Larutan konsentrasi
10 µg/ml
Dimasukkan 10 ekor larva
Artemia salina Leach
Ditambah air laut buatan sampai 5 ml
Dibiarkan dibawah sinar lampu 14 watt
selama 24 jam
Dihitung jumlah larva Artemia salina
Leach yang mati
% kematian larva
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Gambar makroskopik tumbuhan segar rumput laut coklat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Gambar makroskopik simplisia rumput laut coklat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Gambar makroskopik serbuk simplisia rumput laut coklat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Gambar isolat fukoidan rumput laut coklat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Gambar alat spektrofotometer UV-Visibel
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Gambar alat spektrofotometer FTIR
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Perhitungan karakteristik isolat fukoidan rumput laut coklat
1. Perhitungan persen rendemen senyawa fukoidan
% rendemen fukoidan =
W1
x100%
W0
W 0 = Berat sampel sebelum diisolasi
W 1 = Berat hasil isolasi
W 0 = 550 g
W 1 = 19,8592 g
% rendemen fukoidan = =
19,8592g
x100% = 3,61%
550g
2. Perhitungan susut pengeringan
% susut pengeringan =
W1 - W2
x100%
W1
W 1 = botol timbang dan sampel sebelum pengeringan dikurang botol timbang
W 2 = botol timbang dan sampel setelah pengeringan dikurang botol timbang
= 25,7959 - 24,7788
= 1,0171
W2 = 25,6023 - 24,7788
= 0,8235
1. W1
%=
1,0171 − 0,8235
W1 - W2
x100% = 19,32%
x 100% =
1,0171
W1
2. W1 = 24,6878 - 23,6667 = 1,0211
W2 = 24,4877 - 23,6667 = 0,8210
%=
1,0211 − 0,8210
W1 - W2
x 100% = 19 ,59%
x100% =
1,0211
W1
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. (Lanjutan)
3.) W1
= 25,242 - 24,2229
= 1,0191
W2
= 25, 0451 - 24,2229 = 0,8222
%
=
1,0191 - 0,8222
W1 - W2
x100% = 19,32%
x100% =
1,0191
W1
% Rata-rata susut pengeringan
=
19,03% + 19,59% + 19,32%
= 19,32%
3
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Tabel probit Finney
%
0
1
2
0
-
2.67 2.95
10
3.72
20
5
6
7
8
9
3.12 3.25
3.36
3.45
3.52
3.59
3.66
3.77 3.82
3.87 3.92
3.96
4.01
4.05
4.08
4.12
4.16
4.19 4.23
4.26 4.29
4.33
4.36
4.39
4.42
4.45
30
4.48
4.50 4.53
4.56 4.59
4.61
4.64
4.67
4.69
4.72
40
4.76
4.77 4.80
4.82 4.85
4.87
4.90
4.92
4.95
4.97
50
5.00
5.03 5.05
5.08 5.10
5.13
5.15
5.18
5.20
5.23
60
5.25
5.28 5.31
5.33 5.36
5.39
5.41
5.44
5.47
5.50
70
5.52
5.55 5.58
5.61 5.64
5.67
5.71
5.74
5.77
5.81
80
5.84
5.88 5.92
5.95 5.99
6.04
6.08
6.13
6.18
6.23
90
6.28
6.34 6.41
6.48 6.55
6.64
6.75
6.88
7.05
7.33
-
0.0
0.1
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
99
7.33
7.37 7.41
7.46 7.51
7.58
7.65
7.75
7.88
8.09
0.2
3
4
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Perhitungan persentase kematian larva
Isolat fukoidan
Konsentrasi (µg/ml)
10
100
1000
Kontrol negatif (air laut)
Mortalitas larva Artemia salina Leach
P1
P2
P3
% Kematian
1
1
2
13,33
3
2
3
26,67
3
2
5
33,33
0
0
0
0
% Kematian larva =
Jumlah larva mati
x100%
jumlah larva uji
Perhitungan persentase kematian larva yang diberi senyawa isolat fukoidan
rumput laut coklat Sargassum ilicifolium (Turner) C. Agard
1.
Konsentrasi 10 µg/ml
P1 =
1- 0
x100% = 10%
10
P2 =
1- 0
x100% = 10%
10
P3 =
2-0
x100% = 20%
10
% kematian rata - rata =
2.
10% + 10% + 20%
= 13,33%
3
Konsentrasi 100 µg/ml
P1 =
3-0
x100% = 30%
10
P2 =
2-0
x100% = 20%
10
P3 =
3-0
x100% = 30%
10
% kematian rata - rata =
30% + 20% + 30%
= 26,67%
3
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
3.
Konsentrasi 1000 µg/ml
P1 =
3-0
x100% = 30%
10
P2 =
2-0
x100% = 20%
10
P3 =
5-0
x100% = 50%
10
% kematian rata - rata =
30% + 20% + 50%
= 33,33%
10
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Perhitungan LC 50
Konsentrasi
Log
(µg/ml)
konsentrasi
(x)
10
1
100
2
1000
3
Jumlah
6
%
kematian
Nilai
probit (y)
x2
y2
xy
13,33
26,67
33,33
3,87
4,36
4,56
12,79
1
4
9
14
14,9769
19,0096
20,7936
54,7801
3,87
8,72
13,68
26,27
Persamaan garis regresi linier y = a + bx
Keterangan :
y = Nilai probit
x = log konsentrasi
a = Intercept (garis potong)
b = Slope (kemiringan dari garis regresi linier)
b =
=
=
=
∑ (x ) × ∑ (y ) − n ∑ (xy )
[∑ (x )] − n ∑ (x )
2
2
(6 × 12,79) − [3(26,27 )]
62 − 3(14)
76,74 - 78,81
36 - 42
- 2,07
-6
= 0,345
[∑ (x )∑ (xy)] − [∑ (x )∑ (y)]
=
[∑ (x )] − n ∑ (x )
2
a
2
=
=
2
(6 × 26,27 ) − (14 × 12,79)
(6 2 ) − 3(14)
157,62 - 179,06
36 - 42
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. (Lanjutan)
=
- 21,44
-6
= 3,5733
y
= a + bx
5
= 3,5733 + 0,3450x
0,3450x = 5 – 3,5733
1,426
x
=
0,3450
x
= 4,1354
antilog x = 13658,4 µg/ml
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Bagan kerja penelitian
Rumput laut coklat segar
Disortasi Basah
Dicuci
Dikeringkan di lemari pengering
suhu ±40ºC
Disortasi kering
Ditimbang
Simplisia
Diuji makroskopik
Dihaluskan
Serbuk simplisia
Diisolasi senyawa fukoidan
Senyawa fukoidan
Identifikasi senyawa
fukoidan
Susut pengeringan
Uji sitotoksik
Spektrofotometer UV
Spektrofotometer FTIR
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Bagan kerja isolasi senyawa fukoidan
50 g serbuk simplisia
Dimasukkan ke gelas beker 1000 ml
Ditambah 500 ml HCl 0,1 N
Diesktraksi selama 100ºC selama 4
jam sambil sesekali diaduk
Disaring dan diperas dengan kain
flannel
Ampas
Filtrat
Disentrifugasi dengan kecepatan
3000 rpm selama 10 menit
Endapan
Filtrat
Ditambah etanol 96 % sama banyak
dengan filtrat
Disentrifugasi dengan kecepatan
3000 rpm selama 10 menit
Filtrat
Residu
Dikeringkan dalam oven suhu 50ºC
Digerus
Dimasukkan kedalam botol
Isolat fukoidan
2,27 g
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Bagan kerja uji sitotoksik
50 g fukoidan
Dilarutkan dengan pelarut yang sesuai
sampai 5 ml
Dipipet 0,5 ml
Dipipet 0,5 ml
Dipipet 0,5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Larutan konsentrasi
103 µg/ml
Larutan konsentrasi
103 µg/ml
Larutan konsentrasi
103 µg/ml
Dipipet 0,5 ml
Dipipet 0,5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Larutan konsentrasi
102 µg/ml
Larutan konsentrasi
102 µg/ml
Dipipet 0,5 ml
Dicukupkan
sampai 5 ml
Larutan konsentrasi
10 µg/ml
Dimasukkan 10 ekor larva
Artemia salina Leach
Ditambah air laut buatan sampai 5 ml
Dibiarkan dibawah sinar lampu 14 watt
selama 24 jam
Dihitung jumlah larva Artemia salina
Leach yang mati
% kematian larva
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Gambar makroskopik tumbuhan segar rumput laut coklat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Gambar makroskopik simplisia rumput laut coklat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Gambar makroskopik serbuk simplisia rumput laut coklat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Gambar isolat fukoidan rumput laut coklat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Gambar alat spektrofotometer UV-Visibel
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Gambar alat spektrofotometer FTIR
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Perhitungan karakteristik isolat fukoidan rumput laut coklat
1. Perhitungan persen rendemen senyawa fukoidan
% rendemen fukoidan =
W1
x100%
W0
W 0 = Berat sampel sebelum diisolasi
W 1 = Berat hasil isolasi
W 0 = 550 g
W 1 = 19,8592 g
% rendemen fukoidan = =
19,8592g
x100% = 3,61%
550g
2. Perhitungan susut pengeringan
% susut pengeringan =
W1 - W2
x100%
W1
W 1 = botol timbang dan sampel sebelum pengeringan dikurang botol timbang
W 2 = botol timbang dan sampel setelah pengeringan dikurang botol timbang
= 25,7959 - 24,7788
= 1,0171
W2 = 25,6023 - 24,7788
= 0,8235
1. W1
%=
1,0171 − 0,8235
W1 - W2
x100% = 19,32%
x 100% =
1,0171
W1
2. W1 = 24,6878 - 23,6667 = 1,0211
W2 = 24,4877 - 23,6667 = 0,8210
%=
1,0211 − 0,8210
W1 - W2
x 100% = 19 ,59%
x100% =
1,0211
W1
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. (Lanjutan)
3.) W1
= 25,242 - 24,2229
= 1,0191
W2
= 25, 0451 - 24,2229 = 0,8222
%
=
1,0191 - 0,8222
W1 - W2
x100% = 19,32%
x100% =
1,0191
W1
% Rata-rata susut pengeringan
=
19,03% + 19,59% + 19,32%
= 19,32%
3
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Tabel probit Finney
%
0
1
2
0
-
2.67 2.95
10
3.72
20
5
6
7
8
9
3.12 3.25
3.36
3.45
3.52
3.59
3.66
3.77 3.82
3.87 3.92
3.96
4.01
4.05
4.08
4.12
4.16
4.19 4.23
4.26 4.29
4.33
4.36
4.39
4.42
4.45
30
4.48
4.50 4.53
4.56 4.59
4.61
4.64
4.67
4.69
4.72
40
4.76
4.77 4.80
4.82 4.85
4.87
4.90
4.92
4.95
4.97
50
5.00
5.03 5.05
5.08 5.10
5.13
5.15
5.18
5.20
5.23
60
5.25
5.28 5.31
5.33 5.36
5.39
5.41
5.44
5.47
5.50
70
5.52
5.55 5.58
5.61 5.64
5.67
5.71
5.74
5.77
5.81
80
5.84
5.88 5.92
5.95 5.99
6.04
6.08
6.13
6.18
6.23
90
6.28
6.34 6.41
6.48 6.55
6.64
6.75
6.88
7.05
7.33
-
0.0
0.1
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
99
7.33
7.37 7.41
7.46 7.51
7.58
7.65
7.75
7.88
8.09
0.2
3
4
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Perhitungan persentase kematian larva
Isolat fukoidan
Konsentrasi (µg/ml)
10
100
1000
Kontrol negatif (air laut)
Mortalitas larva Artemia salina Leach
P1
P2
P3
% Kematian
1
1
2
13,33
3
2
3
26,67
3
2
5
33,33
0
0
0
0
% Kematian larva =
Jumlah larva mati
x100%
jumlah larva uji
Perhitungan persentase kematian larva yang diberi senyawa isolat fukoidan
rumput laut coklat Sargassum ilicifolium (Turner) C. Agard
1.
Konsentrasi 10 µg/ml
P1 =
1- 0
x100% = 10%
10
P2 =
1- 0
x100% = 10%
10
P3 =
2-0
x100% = 20%
10
% kematian rata - rata =
2.
10% + 10% + 20%
= 13,33%
3
Konsentrasi 100 µg/ml
P1 =
3-0
x100% = 30%
10
P2 =
2-0
x100% = 20%
10
P3 =
3-0
x100% = 30%
10
% kematian rata - rata =
30% + 20% + 30%
= 26,67%
3
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (Lanjutan)
3.
Konsentrasi 1000 µg/ml
P1 =
3-0
x100% = 30%
10
P2 =
2-0
x100% = 20%
10
P3 =
5-0
x100% = 50%
10
% kematian rata - rata =
30% + 20% + 50%
= 33,33%
10
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Perhitungan LC 50
Konsentrasi
Log
(µg/ml)
konsentrasi
(x)
10
1
100
2
1000
3
Jumlah
6
%
kematian
Nilai
probit (y)
x2
y2
xy
13,33
26,67
33,33
3,87
4,36
4,56
12,79
1
4
9
14
14,9769
19,0096
20,7936
54,7801
3,87
8,72
13,68
26,27
Persamaan garis regresi linier y = a + bx
Keterangan :
y = Nilai probit
x = log konsentrasi
a = Intercept (garis potong)
b = Slope (kemiringan dari garis regresi linier)
b =
=
=
=
∑ (x ) × ∑ (y ) − n ∑ (xy )
[∑ (x )] − n ∑ (x )
2
2
(6 × 12,79) − [3(26,27 )]
62 − 3(14)
76,74 - 78,81
36 - 42
- 2,07
-6
= 0,345
[∑ (x )∑ (xy)] − [∑ (x )∑ (y)]
=
[∑ (x )] − n ∑ (x )
2
a
2
=
=
2
(6 × 26,27 ) − (14 × 12,79)
(6 2 ) − 3(14)
157,62 - 179,06
36 - 42
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. (Lanjutan)
=
- 21,44
-6
= 3,5733
y
= a + bx
5
= 3,5733 + 0,3450x
0,3450x = 5 – 3,5733
1,426
x
=
0,3450
x
= 4,1354
antilog x = 13658,4 µg/ml
Universitas Sumatera Utara