Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Binara Dan Ekstrak Etanol Daun Ulam-Ulam Terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus Dan Escherichia Coli
Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan
47
Lampiran 2. Gambar tumbuhan dan daun binara (Artemisia vulgaris L.)
Tumbuhan binara
Daun segar tampak depan
Daun segar tampak belakang
48
Lampiran 3. Gambar tumbuhan dan daun ulam-ulam (Erechtites valerianifolia
(Link ex Wolf) Less. ex DC.
Tumbuhan ulam-ulam
Daun segar tampak depan
Daun segar tampak belakang
49
Lampiran 4. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun binara
Simplisia daun binara
Serbuk simplisia daun binara
50
Lampiran 5. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun ulam-ulam
Simplisia daun ulam-ulam
Serbuk simplisia daun ulam-ulam
51
Lampiran 6. Gambar mikroskopik penampang melintang daun segar binara
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Keterangan :
1.
2.
3.
4.
5.
Rambut penutup
Kutikula
Epidermis atas
Jaringan palisade
Jaringan bunga karang
6. Stomata
7. Floem
8. Xilem
9. Kolenkim
10. Epidermis bawah
52
Lampiran 7. Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun binara
Keterangan:
1. Rambut penutup
2. Stomata tipe anisositik
3. Berkas pembuluh bentuk tangga
4. Parenkim tangkai daun
5. Epidermis atas
6. Jaringan palisade
53
Lampiran 8. Gambar mikroskopik penampang melintang daun segar ulam-ulam
Keterangan:
7. Ca oksalat bentuk druse
8. Floem
9. Xilem
10. Kolenkim
11. Epidermis bawah
1. Rambut penutup
2. Kutikula
3. Epidermis atas
4. Jaringan palisade
5. Jaringan bunga karang
6. Stomata
54
Lampiran 9. Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun ulam-ulam
Keterangan :
1. Jaringan palisade
2. Rambut penutup
3. Stomata tipe anomositik
4. Ca oksalat bentuk druse
5. Berkas pembuluh bentuk spiral
55
Lampiran 10. Bagan penelitian
Masing-masing
daun binara dan daun
ulam-ulam
Dipisahkan dari pengotor
Dicuci, ditiriskan dan ditimbang berat
basah
Mikroskopik daun segar
Dikeringkan dalam lemari pengering pada
suhu ± 40 - 500C
Simplisia
Dihaluskan (blender)
Serbuk simplisia
Karakteristik
simplisia
Makroskopik
Mikroskopik
Pk air
Pk sari larut air
Pk sari larut etanol
Pk abu total
Pk abu tidak larut
Skrining fitokimia
serbuk simplisia
Steroida/triterpenoida
Alkaloida
Flavonoida
Glikosida
Saponin
Tanin
Masing-masing
serbuk simplisia
200 gram
Perkolasi
Direndam dengan
etanol 70%
selama 3 jam
Dipindahkan
kedalam perkolator
Didiamkan selama
24 jam
Dibuka kran dan
dibiarkan perkolat
menetes
Perkolat
Ekstrak kental
Uji aktivitas
antibakteri
56
Lampiran 11. Bagan pembuatan ekstrak etanol
200 gram serbuk simplisia daun
binara dan 200 gram serbuk
simplisia daun ulam-ulam
Dimasukkan kedalam wadah
tertutup
Serbuk simplisia direndam dalam
bejana tertutup dengan etanol
70% selama 3 jam
Dimasukkan ke dalam alat
perkolator
Hasil perkolasi
Dituang cairan penyari etanol
70% secukupnya sampai semua
terendam dan terdapat selapis
cairan penyari di atasnya
Ditutup mulut tabung perkolator
dengan alumunium foil
Dibiarkan selama 24 jam
Dibuka kran, perkolat ditampung
dan ditambah pelarut terus
menerus hingga tetesan perkolat
Perkolat
Ampas
Diuapkan dengan rotary
evaporator dan dikeringkan
diatas penangas air
Ekstrak kental binara 63,35 gram dan
Ekstrak kental ulam-ulam 73,25 gram
57
Lampiran 12. Bagan uji aktivitas antibakteri dari larutan uji
Biakan murni bakteri
Diambil dengan jarum ose steril
Ditanam biakan pada media NA
ii
Diinkubasikan
pada suhu 37 0C
selama 18 - 24 jam
Stok kultur bakteri
Diambil dengan jarum ose steril
Disuspensikan dalam 10 ml NB
steril dan inkubasi selama ± 2 jam
Divorteks hingga diperoleh
kekeruhan yang sama dengan
standar Mc. Farland 108 CFU/ml
Suspensi bakteri 108
Dipipet 0,1 ml ke dalam tabung reaksi
Ditambahkan 9,9 ml NB steril dan
divorteks hingga homogen
Suspensi bakteri 106
Dipipet 0,1 ml ke dalam cawan petri
Dituang 10 ml NB steril cair (45 - 500C),
dibiarkan memadat
Dibuat lubang dengan punch hole
pada permukaan media, diteteskan
0,1 ml larutan uji yang berbeda
Dipra-inkubasikan selama 15
Diinkubasikan pada suhu 370C
selama 18 - 24 jam
Hasil inkubasi
Diukur diameter zona hambat di
sekitar larutan penguji
Diameter hambat
58
Lampiran 13. Perhitungan data
1. Perhitungan penetapan kadar air
Kadar air simplisia =
Volume air (ml)
x 100 %
Berat sampel (g )
a. Serbuk simplisia daun binara
Penjenuhan dengan 2 ml aquadest
Volume penjenuhan = 1,8 ml
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0000
5,0020
5,0035
Volume air (mL)
0,2
0,2
0,3
Berat sampel I
= 5,0000
Volume air
= 2,0 – 1,8 = 0,2
Kadar air
0,2
= 5,000 ×100% = 4%
Berat sampel II
= 5,0020
Volume air
= 2,2 – 2,0 = 0,2
Kadar air
0,2
= 5,002 ×100% = 3,9%
Berat sampel III
= 5,0035
Volume air
= 2,5 – 2,2 = 0,3
Kadar air
0,3
= 5,0035 ×100% = 5,9%
Kadar air rata-rata
=
4% + 3,9% + 5,9%
3
59
= 4,6 %
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Penjenuhan dengan 2 ml aquadest
Volume penjenuhan = 1,8 ml
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,004
5,006
5,006
Volume air (ml)
0,4
0,4
0,4
Berat sampel I
= 5,0600
Volume air
= 2,2 – 1,8 = 0,4
Kadar air
=
Berat sampel II
= 5,0050
Volume air
= 2,5 – 2,2 = 0,3
Kadar air
=
Berat sampel III
= 5,0060
Volume air
= 2,9 – 2,5 = 0,4
Kadar air
=
Kadar air rata-rata
=
0,4
5,060
×100%= 7,9%
0,3
5,005
0,4
5,006
×100%= 5,9%
×100%= 7,9%
7,9% + 5,9% + 7,9%
3
60
= 7,3 %
Lampiran 13 : (Lanjutan)
1. Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam air
Kadar sari yang larut dalam air =
Berat sari (g )
100
x 100 %
x
20
Berat sampel (g )
a. Serbuk simplisia daun binara
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0000
5,0020
5,0010
Berat sari air (g)
0,1370
0,1365
0,1325
Berat sampel I
= 5,0000
Berat sari
= 0,1370
Kadar sari larut dalam air
0,1370 100
= 5,0000 × 20 ×100% = 13,7%
Berat sampel II
= 5,0020
Berat sari
= 0,1365
Kadar sari larut dalam air
0,1365 100
= 5,0020 × 20 ×100% = 13,6%
Berat sampel III
= 5,0010
Berat sari
= 0,1325
Kadar sari larut dalam air
0,1325 100
= 5,0010 × 20 ×100% = 13,2%
Kadar sari rata-rata
=
13,7% + 13,6% + 13,2%
3
61
= 13,5 %
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0030
5,0050
5,0020
Berat sari air (g)
0,1385
0,1384
0,1372
Berat sampel I
= 5,0030
Berat sari
= 0,1385
Kadar sari larut dalam air
=
Berat sampel II
= 5,0050
Berat sari
= 0,1384
Kadar sari larut dalam air
0,1384 100
= 5,0050 × 20 ×100% = 13,8%
Berat sampel III
= 5,0020
Berat sari
= 0,1372
Kadar sari larut dalam air
0,1372 100
= 5,0020 × 20 ×100%= 13,7%
Kadar sari rata-rata
=
0,1385
5,0030
×
100
20
×100% = 13,8%
13,8% + 13,8% + 13,7%
3
62
= 13,7 %
Lampiran 13. (Lanjutan)
3. Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
Kadar sari yang larut dalam etanol =
Berat sari (g )
100
x 100 %
x
20
Berat sampel (g )
a. Serbuk simplisia daun binara
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0000
5,0020
5,0040
Berat sari etanol (g)
0,1390
0,1360
0,1310
Berat sampel I
= 5,0000
Berat sari
= 0,1390
0,1390 100
Kadar sari larut dalam etanol = 5,0000 × 20 ×100% = 13,9%
Berat sampel II
= 5,0020
Berat sari
= 0,1360
0,1360 100
Kadar sari larut dalam etanol = 5,0020 × 20 ×100% = 13,5%
Berat sampel III
= 5,0040
Berat sari
= 0,1310
Kadar sari larut dalam etanol =
Kadar sari rata-rata
=
0,1310
5,0040
×
100
20
×100% = 13%
13,9% + 13,5% + 13%
3
63
= 13,4%
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0030
5,0015
5,0010
Berat sari etanol (g)
0,1315
0,1380
0,1330
Berat sampel I
= 5,0030
Berat sari
= 0,1315
Kadar sari larut dalam etanol =
0,11315
5,0030
Berat sampel II
= 5,0015
Berat sari
= 0,1380
Kadar sari larut dalam etanol =
0,1380
5,0015
×
Berat sampel III
= 5,0010
Berat sari
= 0,1330
Kadar sari larut dalam etanol =
Kadar sari rata-rata
=
×
100
20
100
20
×100% = 13,7%
×100% = 13,7%
0,1330 100
x
x 100 % = 13,2 %
20
5,0010
13,1% + 13,7% + 13,2%
3
64
= 13,3 %
Lampiran 13. (Lanjutan)
4. Perhitungan penetapan kadar abu total
Kadar abu total =
Berat abu (g)
×100%
Berat sampel (g)
a. Serbuk simplisia daun binara
Sampel
I
II
III
Berat simplisia (g)
2,0000
2,0001
2,0001
Berat abu (g)
0,0736
0,0730
0,0735
Berat sampel I
= 2,0000
Berat abu
= 0,0736
Kadar abu total
=
Berat sampel II
= 2,0001
Berat abu
= 0,0730
Kadar abu total
=
Berat sampel III
= 2,0001
Berat abu
= 0,0735
Kadar abu total
=
Kadar abu total rata-rata
=
0,0736
2,0000
×100% = 3,6%
0,0730
2,0001
0,0735
2,0001
×100% = 3,6%
×100% = 3,6%
3,68% + 3,64% + 3,68%
3
65
= 3,6 %
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Sampel
I
II
III
Berat simplisia (g)
2,0000
2,0001
2,0001
Berat abu (g)
0,0725
0,0730
0,0721
Berat sampel I
= 2,0000
Berat abu
= 0,0725
Kadar abu total
=
Berat sampel II
= 2,0001
Berat abu
= 0,0730
Kadar abu total
=
Berat sampel III
= 2,0001
Berat abu
= 0,0721
Kadar abu total
=
Kadar abu total rata-rata
=
0,0725
2,0000
0,0730
2,0000
×100%= 3,6%
×100%= 3,6%
0,0721
2,0001
×100%= 3,6%
3,6% + 3,6% + 3,6%
3
66
= 3,6%
Lampiran 13. (Lanjutan)
5. Perhitungan penetapan kadar abu yang tidak larut asam
Kadar abu tidak larut asam =
Berat abu (g )
x 100 %
Berat sampel (g )
a. Serbuk simplisia daun binara
Sampel
I
II
III
Berat simplisia (g)
2,0000
2,0001
2,0001
Berat abu (g)
0,0286
0,0276
0,0291
Berat sampel I
= 2,0000
Berat abu
= 0,0286
Kadar abu tidak larut asam
=
Berat sampel II
= 2,0001
Berat abu
= 0,0276
Kadar abu tidak larut asam
=
Berat sampel III
= 2,0001
Berat abu
= 0,0291
Kadar abu tidak larut asam
=
Kadar abu tidak larut asam rata-rata =
0,0286
×100%= 1,4%
2,0000
0,0276
2,0001
0,0291
2,0001
×100%= 1,3%
×100%= 1,4%
1,4% + 1,3% + 1,4%
3
67
= 1,4%
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Sampel
I
II
III
Berat simplisia (g)
2,0000
2,0001
2,0001
Berat abu (g)
0,0289
0,0293
0,0279
Berat sampel I
= 2,0000
Berat abu
= 0,0289
Kadar abu tidak larut asam
=
Berat sampel II
= 2,0001
Berat abu
= 0,0293
Kadar abu tidak larut asam
=
Berat sampel III
= 2,0001
Berat abu
= 0,0279
Kadar abu tidak larut asam
=
Kadar abu tidak larut asam rata-rata =
0,0289
2,0000
×100%= 1,4%
0,0293
2,0001
0,0279
2,0001
×100%= 1,4%
×100%= 1,3%
1,4% + 1,4% + 1,3%
3
68
= 1,4%
Lampiran 14. Hasil pengukuran daerah hambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak
etanol daun binara.
Konsentrasi
ekstrak
etanol daun
binara
(mg/ml)
500
400
300
200
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
Blanko
Diameter daerah hambat pertumbuhan bakteri (mm)
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
DI
DII
DIII
D*
DI
DII
DIII
D*
19,9
19,8
19,6
19,4
19,1
19,0
18,6
18,3
17,9
17,2
16,8
16,2
15,4
14,1
12,5
10,2
9,5
8,3
8,0
-
19,8
19,6
19,5
19,1
19,0
18,9
18,7
18,5
18,0
17,5
16,9
16,7
16,0
15,6
12,8
10,6
9,2
8,7
7,5
-
19,8
19,7
19,5
19,3
19,1
19,0
18,7
18,0
17,8
17,3
17,2
16,3
15,1
14,0
12,0
9,7
9,0
8,0
7,1
-
19,8
19,7
19,5
19,2
19,0
18,9
18,6
18,2
17,6
17,3
16,9
16,4
15,5
14,5
12,4
10,1
9,2
8,3
7,5
-
18,8
17,5
16,4
15,4
14,9
14,5
13,9
13,5
13,1
12,8
11,9
11,5
10,4
10,0
8,7
7,5
-
18,5
17,2
16,2
15,0
14,7
14,3
13,7
13,2
12,9
12,5
11,7
11,4
10,8
10,3
8,5
7,2
-
17,9
17,0
16,7
15,8
14,2
13,9
13,5
13,3
13,0
12,7
12,5
11,8
10,6
10,1
8,2
7,6
-
18,4
17,2
16,4
15,4
14,6
14,2
13,7
13,3
13,0
12,6
12,0
11,5
10,6
10,1
8,4
7,4
-
Keterangan:
D
: Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri
*
D
: Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri rata-rata
: Tidak terdapat daerah hambatan pertumbuhan bakteri
69
Lampiran 15. Hasil pengukuran daerah hambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak
etanol daun ulam-ulam.
Konsentrasi
ekstrak
etanol daun
ulam-ulam
(mg/ml)
500
400
300
200
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
Blanko
Diameter daerah hambat pertumbuhan bakteri (mm)
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
DI
DII
DIII
D*
DI
DII
DIII
D*
18,9
17,8
16,8
16,4
16,0
15,9
15,7
15,4
15,1
14,8
14,6
14,4
14,2
13,7
12,8
11,4
10,5
9,4
8,6
7,5
-
18,7
17,9
16,5
16,3
16,2
15,8
15,5
15,2
15,2
14,7
14,6
14,4
14,0
13,4
12,4
11,3
10,5
8,7
8,0
7,5
-
18,5
17,7
16,7
16,2
16,1
15,8
15,7
15,3
15,0
14,9
14,5
14,3
14,0
13,5
12,3
11,6
10,2
9,2
8,4
7,8
-
18,7
17,8
16,6
16,3
16,1
15,8
15,6
15,3
15,1
14,8
14,5
14,3
14,0
13,5
12,5
11,4
10,4
9,1
8,3
7,6
-
17,8
17,2
16,6
16,2
15,4
14,5
13,3
12,3
10,6
9,5
8,7
7,7
7,5
-
17,5
16,8
16,4
16,1
15,1
14,3
13,0
11,4
10,8
9,0
8,5
7,4
7,2
-
17,6
16,3
16,3
16,1
14,8
14,0
12,9
11,2
10,4
9,2
8,4
7,1
7,0
-
17,6
16,7
16,4
16,1
15,1
14,2
13,4
11,3
10,6
9,2
8,5
7,4
7,2
-
Keterangan:
D
: Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri
D*
: Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri rata-rata
: Tidak terdapat daerah hambatan pertumbuhan bakteri
70
Lampiran 16. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun binara
bakteri Staphylococcus aureus
A
B
C
Keterangan: A: konsentrasi 500, 400, 300 dan 200 mg/ml; B: konsentrasi 100, 90,
80 dan 70 mg/ml; C: konsentrasi 60, 50, 40, 30 dan 20 mg/ml
71
Lampiran 16. (Lanjutan)
C
D
Keterangan: C: konsentrasi 10, 9, 8, 7 dan 6 mg/ml; D: konsentrasi 5, 4, 3, 2 dan
1 mg/ml
72
Lampiran 17. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun ulamulam bakteri Staphylococcus aureus
A
B
C
Keterangan: A: konsentrasi 500, 400, 300 dan 200 mg/ml; B: konsentrasi 100, 90,
80,70 dan 60 mg/ml; C: konsentrasi 50, 40, 30, 20 dan 10 mg/ml
73
Lampiran 17. (Lanjutan)
C
D
Keterangan: C: konsentrasi 9, 8, 7 dan 6 mg/ml; D: konsentrasi 5, 4, 3, 2 dan 1
mg/ml
74
Lampiran 18. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun binara
terhadap bakteri Escherichia coli
A
B
C
Keterangan: A: konsentrasi 500, 400, 300, 200 dan 100 mg/ml; B: konsentrasi 90,
80, 70 dan 60 mg/ml; C: konsentrasi 50, 40, 30, 20 dan 10 mg/ml
75
Lampiran 18. (Lanjutan)
C
D
Keterangan: C: konsentrasi 9, 8, 7, 6 dan 5 mg/ml; D: konsentrasi 4, 3, 2 dan 1
mg/ml
76
Lampiran 19. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun ulamulam terhadap bakteri Escherichia coli
A
B
C
Keterangan: A: konsentrasi 500, 400, 300 dan 200 mg/ml; B: konsentrasi 100, 90,
80, 70 dan 60 mg/ml; C: konsentrasi 50, 40, 30, 20 dan 10 mg/ml
77
Lampiran 19. ( Lanjutan)
C
D
Keterangan: C: konsentrasi 9, 8, 7, 6 dan 5 mg/ml; D: konsentrasi 4, 3, 2 dan 1
mg/ml
78
Lampiran 20. Gambar hasil uji aktivitas blanko (etanol 96%) terhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan bakteri Escherichia coli
A
B
Keterangan: A: blanko (etanol 96%) terhadap bakteri Staphylococcus aureus;
B: blanko (etanol 96%) terhadap bakteri Escherichia coli
79
Lampiran 21. Gambar hasil pewarnaan Gram positif bakteri Staphylococcus
aureus dan Gram negatif bakteri Escherichia coli
A
B
Keterangan: A: pewarnaan Gram positif bakteri Staphylococcus aureus;
B: pewarnaan Gram negatif bakteri Escherichia coli
80
47
Lampiran 2. Gambar tumbuhan dan daun binara (Artemisia vulgaris L.)
Tumbuhan binara
Daun segar tampak depan
Daun segar tampak belakang
48
Lampiran 3. Gambar tumbuhan dan daun ulam-ulam (Erechtites valerianifolia
(Link ex Wolf) Less. ex DC.
Tumbuhan ulam-ulam
Daun segar tampak depan
Daun segar tampak belakang
49
Lampiran 4. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun binara
Simplisia daun binara
Serbuk simplisia daun binara
50
Lampiran 5. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun ulam-ulam
Simplisia daun ulam-ulam
Serbuk simplisia daun ulam-ulam
51
Lampiran 6. Gambar mikroskopik penampang melintang daun segar binara
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Keterangan :
1.
2.
3.
4.
5.
Rambut penutup
Kutikula
Epidermis atas
Jaringan palisade
Jaringan bunga karang
6. Stomata
7. Floem
8. Xilem
9. Kolenkim
10. Epidermis bawah
52
Lampiran 7. Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun binara
Keterangan:
1. Rambut penutup
2. Stomata tipe anisositik
3. Berkas pembuluh bentuk tangga
4. Parenkim tangkai daun
5. Epidermis atas
6. Jaringan palisade
53
Lampiran 8. Gambar mikroskopik penampang melintang daun segar ulam-ulam
Keterangan:
7. Ca oksalat bentuk druse
8. Floem
9. Xilem
10. Kolenkim
11. Epidermis bawah
1. Rambut penutup
2. Kutikula
3. Epidermis atas
4. Jaringan palisade
5. Jaringan bunga karang
6. Stomata
54
Lampiran 9. Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun ulam-ulam
Keterangan :
1. Jaringan palisade
2. Rambut penutup
3. Stomata tipe anomositik
4. Ca oksalat bentuk druse
5. Berkas pembuluh bentuk spiral
55
Lampiran 10. Bagan penelitian
Masing-masing
daun binara dan daun
ulam-ulam
Dipisahkan dari pengotor
Dicuci, ditiriskan dan ditimbang berat
basah
Mikroskopik daun segar
Dikeringkan dalam lemari pengering pada
suhu ± 40 - 500C
Simplisia
Dihaluskan (blender)
Serbuk simplisia
Karakteristik
simplisia
Makroskopik
Mikroskopik
Pk air
Pk sari larut air
Pk sari larut etanol
Pk abu total
Pk abu tidak larut
Skrining fitokimia
serbuk simplisia
Steroida/triterpenoida
Alkaloida
Flavonoida
Glikosida
Saponin
Tanin
Masing-masing
serbuk simplisia
200 gram
Perkolasi
Direndam dengan
etanol 70%
selama 3 jam
Dipindahkan
kedalam perkolator
Didiamkan selama
24 jam
Dibuka kran dan
dibiarkan perkolat
menetes
Perkolat
Ekstrak kental
Uji aktivitas
antibakteri
56
Lampiran 11. Bagan pembuatan ekstrak etanol
200 gram serbuk simplisia daun
binara dan 200 gram serbuk
simplisia daun ulam-ulam
Dimasukkan kedalam wadah
tertutup
Serbuk simplisia direndam dalam
bejana tertutup dengan etanol
70% selama 3 jam
Dimasukkan ke dalam alat
perkolator
Hasil perkolasi
Dituang cairan penyari etanol
70% secukupnya sampai semua
terendam dan terdapat selapis
cairan penyari di atasnya
Ditutup mulut tabung perkolator
dengan alumunium foil
Dibiarkan selama 24 jam
Dibuka kran, perkolat ditampung
dan ditambah pelarut terus
menerus hingga tetesan perkolat
Perkolat
Ampas
Diuapkan dengan rotary
evaporator dan dikeringkan
diatas penangas air
Ekstrak kental binara 63,35 gram dan
Ekstrak kental ulam-ulam 73,25 gram
57
Lampiran 12. Bagan uji aktivitas antibakteri dari larutan uji
Biakan murni bakteri
Diambil dengan jarum ose steril
Ditanam biakan pada media NA
ii
Diinkubasikan
pada suhu 37 0C
selama 18 - 24 jam
Stok kultur bakteri
Diambil dengan jarum ose steril
Disuspensikan dalam 10 ml NB
steril dan inkubasi selama ± 2 jam
Divorteks hingga diperoleh
kekeruhan yang sama dengan
standar Mc. Farland 108 CFU/ml
Suspensi bakteri 108
Dipipet 0,1 ml ke dalam tabung reaksi
Ditambahkan 9,9 ml NB steril dan
divorteks hingga homogen
Suspensi bakteri 106
Dipipet 0,1 ml ke dalam cawan petri
Dituang 10 ml NB steril cair (45 - 500C),
dibiarkan memadat
Dibuat lubang dengan punch hole
pada permukaan media, diteteskan
0,1 ml larutan uji yang berbeda
Dipra-inkubasikan selama 15
Diinkubasikan pada suhu 370C
selama 18 - 24 jam
Hasil inkubasi
Diukur diameter zona hambat di
sekitar larutan penguji
Diameter hambat
58
Lampiran 13. Perhitungan data
1. Perhitungan penetapan kadar air
Kadar air simplisia =
Volume air (ml)
x 100 %
Berat sampel (g )
a. Serbuk simplisia daun binara
Penjenuhan dengan 2 ml aquadest
Volume penjenuhan = 1,8 ml
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0000
5,0020
5,0035
Volume air (mL)
0,2
0,2
0,3
Berat sampel I
= 5,0000
Volume air
= 2,0 – 1,8 = 0,2
Kadar air
0,2
= 5,000 ×100% = 4%
Berat sampel II
= 5,0020
Volume air
= 2,2 – 2,0 = 0,2
Kadar air
0,2
= 5,002 ×100% = 3,9%
Berat sampel III
= 5,0035
Volume air
= 2,5 – 2,2 = 0,3
Kadar air
0,3
= 5,0035 ×100% = 5,9%
Kadar air rata-rata
=
4% + 3,9% + 5,9%
3
59
= 4,6 %
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Penjenuhan dengan 2 ml aquadest
Volume penjenuhan = 1,8 ml
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,004
5,006
5,006
Volume air (ml)
0,4
0,4
0,4
Berat sampel I
= 5,0600
Volume air
= 2,2 – 1,8 = 0,4
Kadar air
=
Berat sampel II
= 5,0050
Volume air
= 2,5 – 2,2 = 0,3
Kadar air
=
Berat sampel III
= 5,0060
Volume air
= 2,9 – 2,5 = 0,4
Kadar air
=
Kadar air rata-rata
=
0,4
5,060
×100%= 7,9%
0,3
5,005
0,4
5,006
×100%= 5,9%
×100%= 7,9%
7,9% + 5,9% + 7,9%
3
60
= 7,3 %
Lampiran 13 : (Lanjutan)
1. Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam air
Kadar sari yang larut dalam air =
Berat sari (g )
100
x 100 %
x
20
Berat sampel (g )
a. Serbuk simplisia daun binara
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0000
5,0020
5,0010
Berat sari air (g)
0,1370
0,1365
0,1325
Berat sampel I
= 5,0000
Berat sari
= 0,1370
Kadar sari larut dalam air
0,1370 100
= 5,0000 × 20 ×100% = 13,7%
Berat sampel II
= 5,0020
Berat sari
= 0,1365
Kadar sari larut dalam air
0,1365 100
= 5,0020 × 20 ×100% = 13,6%
Berat sampel III
= 5,0010
Berat sari
= 0,1325
Kadar sari larut dalam air
0,1325 100
= 5,0010 × 20 ×100% = 13,2%
Kadar sari rata-rata
=
13,7% + 13,6% + 13,2%
3
61
= 13,5 %
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0030
5,0050
5,0020
Berat sari air (g)
0,1385
0,1384
0,1372
Berat sampel I
= 5,0030
Berat sari
= 0,1385
Kadar sari larut dalam air
=
Berat sampel II
= 5,0050
Berat sari
= 0,1384
Kadar sari larut dalam air
0,1384 100
= 5,0050 × 20 ×100% = 13,8%
Berat sampel III
= 5,0020
Berat sari
= 0,1372
Kadar sari larut dalam air
0,1372 100
= 5,0020 × 20 ×100%= 13,7%
Kadar sari rata-rata
=
0,1385
5,0030
×
100
20
×100% = 13,8%
13,8% + 13,8% + 13,7%
3
62
= 13,7 %
Lampiran 13. (Lanjutan)
3. Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
Kadar sari yang larut dalam etanol =
Berat sari (g )
100
x 100 %
x
20
Berat sampel (g )
a. Serbuk simplisia daun binara
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0000
5,0020
5,0040
Berat sari etanol (g)
0,1390
0,1360
0,1310
Berat sampel I
= 5,0000
Berat sari
= 0,1390
0,1390 100
Kadar sari larut dalam etanol = 5,0000 × 20 ×100% = 13,9%
Berat sampel II
= 5,0020
Berat sari
= 0,1360
0,1360 100
Kadar sari larut dalam etanol = 5,0020 × 20 ×100% = 13,5%
Berat sampel III
= 5,0040
Berat sari
= 0,1310
Kadar sari larut dalam etanol =
Kadar sari rata-rata
=
0,1310
5,0040
×
100
20
×100% = 13%
13,9% + 13,5% + 13%
3
63
= 13,4%
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Sampel
I
II
III
Berat sampel (g)
5,0030
5,0015
5,0010
Berat sari etanol (g)
0,1315
0,1380
0,1330
Berat sampel I
= 5,0030
Berat sari
= 0,1315
Kadar sari larut dalam etanol =
0,11315
5,0030
Berat sampel II
= 5,0015
Berat sari
= 0,1380
Kadar sari larut dalam etanol =
0,1380
5,0015
×
Berat sampel III
= 5,0010
Berat sari
= 0,1330
Kadar sari larut dalam etanol =
Kadar sari rata-rata
=
×
100
20
100
20
×100% = 13,7%
×100% = 13,7%
0,1330 100
x
x 100 % = 13,2 %
20
5,0010
13,1% + 13,7% + 13,2%
3
64
= 13,3 %
Lampiran 13. (Lanjutan)
4. Perhitungan penetapan kadar abu total
Kadar abu total =
Berat abu (g)
×100%
Berat sampel (g)
a. Serbuk simplisia daun binara
Sampel
I
II
III
Berat simplisia (g)
2,0000
2,0001
2,0001
Berat abu (g)
0,0736
0,0730
0,0735
Berat sampel I
= 2,0000
Berat abu
= 0,0736
Kadar abu total
=
Berat sampel II
= 2,0001
Berat abu
= 0,0730
Kadar abu total
=
Berat sampel III
= 2,0001
Berat abu
= 0,0735
Kadar abu total
=
Kadar abu total rata-rata
=
0,0736
2,0000
×100% = 3,6%
0,0730
2,0001
0,0735
2,0001
×100% = 3,6%
×100% = 3,6%
3,68% + 3,64% + 3,68%
3
65
= 3,6 %
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Sampel
I
II
III
Berat simplisia (g)
2,0000
2,0001
2,0001
Berat abu (g)
0,0725
0,0730
0,0721
Berat sampel I
= 2,0000
Berat abu
= 0,0725
Kadar abu total
=
Berat sampel II
= 2,0001
Berat abu
= 0,0730
Kadar abu total
=
Berat sampel III
= 2,0001
Berat abu
= 0,0721
Kadar abu total
=
Kadar abu total rata-rata
=
0,0725
2,0000
0,0730
2,0000
×100%= 3,6%
×100%= 3,6%
0,0721
2,0001
×100%= 3,6%
3,6% + 3,6% + 3,6%
3
66
= 3,6%
Lampiran 13. (Lanjutan)
5. Perhitungan penetapan kadar abu yang tidak larut asam
Kadar abu tidak larut asam =
Berat abu (g )
x 100 %
Berat sampel (g )
a. Serbuk simplisia daun binara
Sampel
I
II
III
Berat simplisia (g)
2,0000
2,0001
2,0001
Berat abu (g)
0,0286
0,0276
0,0291
Berat sampel I
= 2,0000
Berat abu
= 0,0286
Kadar abu tidak larut asam
=
Berat sampel II
= 2,0001
Berat abu
= 0,0276
Kadar abu tidak larut asam
=
Berat sampel III
= 2,0001
Berat abu
= 0,0291
Kadar abu tidak larut asam
=
Kadar abu tidak larut asam rata-rata =
0,0286
×100%= 1,4%
2,0000
0,0276
2,0001
0,0291
2,0001
×100%= 1,3%
×100%= 1,4%
1,4% + 1,3% + 1,4%
3
67
= 1,4%
b. Serbuk simplisia daun ulam-ulam
Sampel
I
II
III
Berat simplisia (g)
2,0000
2,0001
2,0001
Berat abu (g)
0,0289
0,0293
0,0279
Berat sampel I
= 2,0000
Berat abu
= 0,0289
Kadar abu tidak larut asam
=
Berat sampel II
= 2,0001
Berat abu
= 0,0293
Kadar abu tidak larut asam
=
Berat sampel III
= 2,0001
Berat abu
= 0,0279
Kadar abu tidak larut asam
=
Kadar abu tidak larut asam rata-rata =
0,0289
2,0000
×100%= 1,4%
0,0293
2,0001
0,0279
2,0001
×100%= 1,4%
×100%= 1,3%
1,4% + 1,4% + 1,3%
3
68
= 1,4%
Lampiran 14. Hasil pengukuran daerah hambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak
etanol daun binara.
Konsentrasi
ekstrak
etanol daun
binara
(mg/ml)
500
400
300
200
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
Blanko
Diameter daerah hambat pertumbuhan bakteri (mm)
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
DI
DII
DIII
D*
DI
DII
DIII
D*
19,9
19,8
19,6
19,4
19,1
19,0
18,6
18,3
17,9
17,2
16,8
16,2
15,4
14,1
12,5
10,2
9,5
8,3
8,0
-
19,8
19,6
19,5
19,1
19,0
18,9
18,7
18,5
18,0
17,5
16,9
16,7
16,0
15,6
12,8
10,6
9,2
8,7
7,5
-
19,8
19,7
19,5
19,3
19,1
19,0
18,7
18,0
17,8
17,3
17,2
16,3
15,1
14,0
12,0
9,7
9,0
8,0
7,1
-
19,8
19,7
19,5
19,2
19,0
18,9
18,6
18,2
17,6
17,3
16,9
16,4
15,5
14,5
12,4
10,1
9,2
8,3
7,5
-
18,8
17,5
16,4
15,4
14,9
14,5
13,9
13,5
13,1
12,8
11,9
11,5
10,4
10,0
8,7
7,5
-
18,5
17,2
16,2
15,0
14,7
14,3
13,7
13,2
12,9
12,5
11,7
11,4
10,8
10,3
8,5
7,2
-
17,9
17,0
16,7
15,8
14,2
13,9
13,5
13,3
13,0
12,7
12,5
11,8
10,6
10,1
8,2
7,6
-
18,4
17,2
16,4
15,4
14,6
14,2
13,7
13,3
13,0
12,6
12,0
11,5
10,6
10,1
8,4
7,4
-
Keterangan:
D
: Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri
*
D
: Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri rata-rata
: Tidak terdapat daerah hambatan pertumbuhan bakteri
69
Lampiran 15. Hasil pengukuran daerah hambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak
etanol daun ulam-ulam.
Konsentrasi
ekstrak
etanol daun
ulam-ulam
(mg/ml)
500
400
300
200
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
Blanko
Diameter daerah hambat pertumbuhan bakteri (mm)
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
DI
DII
DIII
D*
DI
DII
DIII
D*
18,9
17,8
16,8
16,4
16,0
15,9
15,7
15,4
15,1
14,8
14,6
14,4
14,2
13,7
12,8
11,4
10,5
9,4
8,6
7,5
-
18,7
17,9
16,5
16,3
16,2
15,8
15,5
15,2
15,2
14,7
14,6
14,4
14,0
13,4
12,4
11,3
10,5
8,7
8,0
7,5
-
18,5
17,7
16,7
16,2
16,1
15,8
15,7
15,3
15,0
14,9
14,5
14,3
14,0
13,5
12,3
11,6
10,2
9,2
8,4
7,8
-
18,7
17,8
16,6
16,3
16,1
15,8
15,6
15,3
15,1
14,8
14,5
14,3
14,0
13,5
12,5
11,4
10,4
9,1
8,3
7,6
-
17,8
17,2
16,6
16,2
15,4
14,5
13,3
12,3
10,6
9,5
8,7
7,7
7,5
-
17,5
16,8
16,4
16,1
15,1
14,3
13,0
11,4
10,8
9,0
8,5
7,4
7,2
-
17,6
16,3
16,3
16,1
14,8
14,0
12,9
11,2
10,4
9,2
8,4
7,1
7,0
-
17,6
16,7
16,4
16,1
15,1
14,2
13,4
11,3
10,6
9,2
8,5
7,4
7,2
-
Keterangan:
D
: Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri
D*
: Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri rata-rata
: Tidak terdapat daerah hambatan pertumbuhan bakteri
70
Lampiran 16. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun binara
bakteri Staphylococcus aureus
A
B
C
Keterangan: A: konsentrasi 500, 400, 300 dan 200 mg/ml; B: konsentrasi 100, 90,
80 dan 70 mg/ml; C: konsentrasi 60, 50, 40, 30 dan 20 mg/ml
71
Lampiran 16. (Lanjutan)
C
D
Keterangan: C: konsentrasi 10, 9, 8, 7 dan 6 mg/ml; D: konsentrasi 5, 4, 3, 2 dan
1 mg/ml
72
Lampiran 17. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun ulamulam bakteri Staphylococcus aureus
A
B
C
Keterangan: A: konsentrasi 500, 400, 300 dan 200 mg/ml; B: konsentrasi 100, 90,
80,70 dan 60 mg/ml; C: konsentrasi 50, 40, 30, 20 dan 10 mg/ml
73
Lampiran 17. (Lanjutan)
C
D
Keterangan: C: konsentrasi 9, 8, 7 dan 6 mg/ml; D: konsentrasi 5, 4, 3, 2 dan 1
mg/ml
74
Lampiran 18. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun binara
terhadap bakteri Escherichia coli
A
B
C
Keterangan: A: konsentrasi 500, 400, 300, 200 dan 100 mg/ml; B: konsentrasi 90,
80, 70 dan 60 mg/ml; C: konsentrasi 50, 40, 30, 20 dan 10 mg/ml
75
Lampiran 18. (Lanjutan)
C
D
Keterangan: C: konsentrasi 9, 8, 7, 6 dan 5 mg/ml; D: konsentrasi 4, 3, 2 dan 1
mg/ml
76
Lampiran 19. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun ulamulam terhadap bakteri Escherichia coli
A
B
C
Keterangan: A: konsentrasi 500, 400, 300 dan 200 mg/ml; B: konsentrasi 100, 90,
80, 70 dan 60 mg/ml; C: konsentrasi 50, 40, 30, 20 dan 10 mg/ml
77
Lampiran 19. ( Lanjutan)
C
D
Keterangan: C: konsentrasi 9, 8, 7, 6 dan 5 mg/ml; D: konsentrasi 4, 3, 2 dan 1
mg/ml
78
Lampiran 20. Gambar hasil uji aktivitas blanko (etanol 96%) terhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan bakteri Escherichia coli
A
B
Keterangan: A: blanko (etanol 96%) terhadap bakteri Staphylococcus aureus;
B: blanko (etanol 96%) terhadap bakteri Escherichia coli
79
Lampiran 21. Gambar hasil pewarnaan Gram positif bakteri Staphylococcus
aureus dan Gram negatif bakteri Escherichia coli
A
B
Keterangan: A: pewarnaan Gram positif bakteri Staphylococcus aureus;
B: pewarnaan Gram negatif bakteri Escherichia coli
80