Ekspresi Lanjutan Glycation End Produk

Ekspresi Lanjutan Glycation EndProduk di Sun terkena
dan Tempat Cutaneous terpajan
selama
Proses Penuaan pada Manusia
pengantar
Canggih akhir glikasi produk (AGEs) yang dikembangkan selama
reaksi Maillard dengan glycation dan oksidasi yang berbeda
protein struktural [1] dan memainkan peran penting dalam tergantung usia
perubahan [2]. Glikasi melibatkan reaksi non-enzimatik
antara gula dan gugus amina bebas dari Lys dan Arg
asam amino dalam protein. Fructoselysine (FL) adalah produk utama
yang dihasilkan dari protein jaringan. Perpanjangan glikasi yang
Proses dan akumulasinya tergantung pada konsentrasi glukosa
dan relatif konstan dengan usia [3]. Sebuah akumulasi bertahap dari
produk glycation lainnya terjadi pada protein jaringan, seperti: N(Karboksimetil) lysine (CML) dan N- (karboksimetil) hidroksilisin
(CML) yang dibentuk oleh pembelahan oksidatif dari FL dan
pentosidine. Sejak CML dan CMhL melibatkan glikasi dan bebas
oksidasi radikal, produk ini diberi nama '' glycoxidation ''
produk. Satu-satunya produk yang menumpuk dengan usia, CML,
CMhl dan pentosidine adalah hasil dari glikasi dan oksidatif
Reaksi [4,5]. Protein glycation digambarkan di kulit tingkat [6] tetapi juga di organ

seperti ginjal, pembuluh darah, dan
lensa. Proses glycation terlibat dalam kedua intrinsik (individu,
genetik) dan ekstrinsik (sinar UV, polusi dan gaya hidup) penuaan

proses, dan dapat diukur pada epidermis atau kulit tingkat dengan
histologis, imunohistokimia, pencitraan atau metode fluorometric
[7,8].
Pada tingkat kulit, glycation dikaitkan dengan penuaan
Proses dan mempengaruhi sel-sel (sel endotel, fibroblas) dan
protein struktural seperti kolagen, elastin, glikoprotein,
glikosaminoglikan. The dermal matriks ekstraselular (ECM),
dimodifikasi oleh glikasi, lanjut mempengaruhi pertumbuhan, diferensiasi,
motilitas dari fibroblas, respon sitokin, aktivitas enzimatik
(Metalloproteinase) dan pembuluh darah hemostasis [7]. Kedua, reaktif
intermediet oksigen dan molekul AGE dapat menginduksi vaskular
faktor pertumbuhan endotel (VEGF) ekspresi, tetapi hanya AGEs yang
faktor angiogenik [9]. CML merupakan penanda umum
oksidatif stres dan jaringan perubahan melalui perubahan protein, dan
memainkan peran penting dalam inflamasi akut dan kronis
Proses [10]. Selain itu, dalam mata pelajaran tua, accumuAGEs memodifikasi sifat

mekanik kulit manusia melalui
hilangnya elastisitas dan meningkatkan kaku [7]. ECM dapat
diubah oleh ultraviolet (UVA). fibroblast dermal manusia terkena
UVA di hadapan AGEs acara penurunan viabilitas sel [11]. UVA
menghasilkan spesies oksigen reaktif (ROS) di tingkat kulit yang
dapat mempercepat pembentukan CML dan memperkuat lokal
fenomena degeneratif yang berhubungan dengan proses penuaan.
Selain itu, akumulasi AGEs setelah iradiasi UVA adalah
terlihat di vitro di tengah dermis the-epidermis (DEC) [12].
Studi kami difokuskan pada histologis dan immunohistological
perbandingan daerah terlindungi dari sinar matahari terhadap daerah yang terkena
sinar matahari
dari kelompok usia yang berbeda.
Grading semikuantitatif dari CML immunoreaktivitas

Immunopositivity untuk AGE-CML dicetak secara terpisah untuk kedua
sel endotel dan fibroblas. Kedua jenis sel yang
dibedakan berdasarkan morfologi mereka. Hanya endotel kapiler
sel dinilai. Pengukuran dilakukan pada
lima bidang daya tinggi di bagian perwakilan. Itu

persentase baik fibroblas immunostained dan endotel
sel dari jumlah fibroblas dan sel endotel di
setiap bagian dinilai baik papiler dan dermis reticular.
Selain itu, intensitas pewarnaan dari CML antibodi monoklonal
dievaluasi menggunakan sistem empat langkah-bijaksana (0, tidak aktif; +, lemah
positif; ++, Cukup positif; dan +++, sangat positif) di
Sesuai dengan penelitian sebelumnya [14].
Slide dievaluasi menggunakan mikroskop Olympus BX51
dengan Olympus SP kamera 350 digital (Olympus, Tokyo, Jepang).
'' Sel B '' software pencitraan dasar (Olympus, Tokio, Jepang) digunakan
untuk menghitung semi-otomatis sel immunoreactive.
Bahan dan metode
Pasien dan Studi Desain
Sejumlah 32 subjek direkrut dari Dermatology yang
Klinik di Cluj-Napoca (Rumania). Sesuai dengan usia mereka,
pasien dibagi menjadi empat kelompok eksperimen (n = 8):
(Berusia di bawah 20 tahun) kelompok I, kelompok II (20 sampai 40 tahun), kelompok
III (40 sampai 60 tahun), dan kelompok IV (berusia lebih dari 60 tahun). Untuk semua
subjek yang sampel kulit diambil dari UV non-dilindungi dan UV
daerah yang dilindungi. Semua mata pelajaran milik phototype kulit III.

Setelah anestesi lokal menggunakan Xylocaine 1%, biopsi pukulan kulit
dengan diameter 4-5 mm diambil dari matahari yang dilindungi (kiri
daerah panggul) dan daerah yang terpapar sinar matahari (antero-lateral lengan kiri).
Pasien tidak memiliki riwayat diabetes atau inflamasi kronis lainnya

penyakit.
Analisis statistik
Pengumpulan data di lembar kerja Excel dan diekspor ke
SPSS perangkat lunak statistik (IBM Corporation, New York, Amerika
Serikat) untuk analisis. Korelasi dinilai dengan Pearson
koefisien korelasi dan antar-kelompok rata-rata variasi diuji
dengan uji ANOVA.
Pernyataan etika
Studi ini disetujui oleh Komite Etik dari
Universitas Kedokteran dan Farmasi '' Iuliu Hatieganu '', Cluj Napoca
(Rumania) dan persetujuan tertulis diinformasikan diperoleh
dari masing-masing pasien sebelum mendaftarkan mereka dalam studi.
hasil
Histologis dan imunohistokimia Perbandingan
Sun-dilindungi Versus Sun- terkena kulit di Berbagai Usia

Grup
Pada kelompok I (, 20 tahun), pemeriksaan mikroskop mengungkapkan
edema dari keratinosit, yang mempengaruhi kedua lapisan basal dan spinosus,
edema perivaskular dan sel-sel inflamasi yang tersebar diwakili
oleh sel mononuklear ke dalam dermis dari situs terkena sinar matahari
(Gambar. 1A). Tidak ada lesi di situs yang dilindungi dari kelompok pertama yang
diamati. Pada kelompok II (20-40 tahun), histologis analisis dari
daerah yang terpapar sinar matahari menunjukkan edema intra dan antar dari
epidermis, edema perivaskular, kehadiran mononuklear minimal
sel-sel inflamasi di daerah perivaskular (Gambar. 1B) dan
dermal fibrosis (Gambar. 1C). Pada tingkat situs terlindungi dari sinar matahari, hanya
edema intrasel di tingkat epidermis diidentifikasi. Dalam kelompok III
(40-60 tahun), beberapa fokus dari epidermal nekrosis (Gbr. 1E),
edema intraseluler, beberapa sel apoptosis, dermal seragam

fibrosis dengan mineralisasi serat kolagen (Gbr. 1D) dan kulit
kehilangan anggota badan terlihat di daerah terkena sinar matahari. Dalam
sunprotected
sisi lesi yang moderat dan ditandai dengan
intraseluler dan edema perivaskular, dan mononuklear sel

menyusup. Pada kelompok IV (0,60 tahun), ujian histologis dari
situs yang terpapar sinar matahari menunjukkan lesi canggih seperti difus
epidermal edema dan beberapa sel apoptosis (Gambar. 1F). Dalam
dermis, elastosis surya, pelebaran pembuluh dan mikrovaskuler
membran basement penebalan, fibroblas yang tersebar dan kecil
agregat sel limfoid di daerah perivaskular (Gambar. 1G) yang
diamati. Berbeda dengan daerah terkena sinar matahari, pada kulit dilindungi
daerah, epidermal atrofi (Gambar. 1H) dan hiposelularitas dari
sel pembuluh darah, limfosit dan fibroblas, terutama di atas
dermis, padat seragam dermal fibrosis dan adneksa kerugian yang
menyajikan. Skor lesi kulit yang semiquantified dan
diringkas dalam Tabel 1.
Pengolahan Spesimen Tissue
Sampel kulit yang tetap segera setelah eksisi di 10%
formalin buffer netral selama 24 jam dan tertanam dalam parafin
lilin. Serial bagian dipotong di 4 mm dari setiap blok dan bernoda
dengan hematoxylin dan eosin (H & E). Penampilan histologis dari
kulit diklasifikasikan sebagai: Grade 0 (G0), kulit normal atau minimal
edema perivaskular dan / atau inkontinensia pigmen; Tingkat 1
(G1), penampilan normal matriks dermal tetapi dengan ditandai

edema perivaskular, agregasi sel perivaskular mononuklear
dan / atau mikrovaskuler basement membran penebalan; kelas 2
(G2), deposisi matriks protein abnormal (fibrosis dengan
perambahan kolagen dalam lampiran dan / atau lemak subkutan,

elastosis dan / atau kehilangan definisi antara reticular dan
dermis papiler); dan kelas 3 (G3), dermal seragam padat
fibrosis, epidermal atrofi dan lampiran rugi [13].
MAb Terhadap AGE-CML dan Imunohistokimia
Serial bagian diinkubasi dengan monoklonal mouse utama
(NF-1G) anti karboksimetil Lysine (ab 30.917; Abcam, Cambridge,
UK) diencerkan dalam 1% PBS-BSA (bovine serum albumin) di
1/125 pada 4uC semalam. Keesokan harinya, antibodi sekunder
(Berlabel streptavidin biotin) diterapkan, diikuti dengan inkubasi
dengan diaminobenzidin, LSAB Sistem-HRP kit (Kode K0679,
Dako, Denmark). Setelah mencuci dengan air suling, slide
yang counterstained dengan Mayer hematoksilin selama 5 menit. Negatif
kontrol untuk masing-masing sampel disiapkan dengan mengganti
antibodi primer dengan mouse IgG1 Kontrol Negatif (Kode
X0931, Dako, Denmark).

Analisis Kuantitatif semi Pewarnaan untuk AGE-CML
produk Immunostained diidentifikasi pada semua kelompok pasien.
Di kedua daerah kulit terlindungi dari sinar matahari dan terkena sinar matahari, CML
Diskusi
integumen merupakan model penting untuk studi
proses penuaan, seperti yang disampaikan kepada kedua intrinsik dan ekstrinsik
faktor. Berbagai mekanisme, seperti akumulasi
mutasi genom, kekurangan hormon, akumulasi beracun
metabolit, kerusakan oksidatif dan glikasi, beroperasi secara bersamaan
di tingkat kulit, merangsang struktural, fungsional dan klinis
perubahan.
Beberapa penelitian telah membuktikan bahwa reseptor glikasi hadir
di kulit yang sehat [15]. Hal ini juga diketahui bahwa AGE terakumulasi selama
penuaan alami, tetapi lebih menonjol dalam kondisi oksidatif

stres (paparan UV, aterosklerosis, penyakit neurodegenerative,
diabetes mellitus) [10].
dermis yang struktur utama dipengaruhi oleh glikasi, yang
menginduksi aktivasi fibroblast, peningkatan molekul matriks yang berbeda
(Kolagen, elastin), peningkatan produksi metalloproteinase (MMP

1, 2 dan 9), penebalan membran basement, perubahan
alpha 6 dan beta 1 integrin pola di epidermis [16].
Dalam studi ini, kami telah menentukan pola distribusi
AGE-CML di biopsi kulit dari situs terbuka dan non-terpapar
yang dikumpulkan dari pasien milik usia yang berbeda
kelompok, dalam rangka membangun hubungan dengan histologi yang
skor. Kami juga conductd deskripsi histopatologi lengkap
untuk menilai perubahan inflamasi kronis sesuai dengan umur dan
protected / daerah yang tidak dilindungi di phototype kulit III individu.
histologi rutin mengungkapkan aspek yang berbeda yang berhubungan dengan
interval usia dan paparan sinar UV. Urutan histologis
Perubahan adalah hasil dari kedua perubahan struktural dan fungsional
sel dan dampaknya terhadap ECM. aspek histologis yang serupa
digambarkan oleh penulis lain juga [17,18]. fibrosis dan
proses elastosis yang menjadi terlihat lebih awal di daerah photoexposed
dan memperkuat dengan usia dan paparan sinar UV, dapat diidentifikasi bahkan oleh
menggunakan ultrasound frekuensi tinggi [8].
Data histologis kami sesuai dengan literatur, menunjukkan
yang penting struktural, biokimia, molekul, arsitektur
dan perubahan dermal fungsional (termasuk glikasi), mulai sebelum

usia 35, (Interval kritis), meningkat dengan cepat karena intrinsik
proses dan diperkuat oleh UV. Menurut pendapat kami, usia ini
threshold merupakan waktu terbaik untuk pemulai anti-penuaan
terapi, yang harus menggabungkan produk yang baik merangsang

sintesis protein dan menghambat proses glycation [8,12]. Kami
Temuan mengkonfirmasi bahwa CML-seperti bahan immunoreactive adalah
hadir di kedua fibroblas dan sel-sel endotel dari dermis,
dan meningkat pada pasien yang lebih tua dan di sisi terkena sinar matahari.
Laporan serupa menunjukkan bahwa AGEs mengikat fibroblas sel
membran reseptor dan berinteraksi dengan vimentin intraseluler
filamen, dengan DNA, berkontribusi terhadap perkembangan penuaan kulit
[19]. CML merupakan biomarker stres oksidatif, dan tidak ada
dalam jaringan individu muda. CML adalah terlibat dalam penuaan
proses, yang terakumulasi dalam kolagen kulit, serat elastis,
glycosaminoglycans dari orang normal [20], tetapi interaksi
AGEs dengan fibroblas dermal, terutama dalam konteks kulit
penuaan, tetap tidak jelas. reseptor AGE (RAGE) juga menyatakan
di sel endotel mikrovaskuler [21]. Sebuah laporan baru-baru ini mengungkapkan
ekspresi RAGE meningkat pada kulit yang terpapar sinar matahari dan

sel RAGE-positif terutama diwakili oleh keratinosit
Korelasi antara histologi Skor Kulit dan
AGE-CML Ekspresi
Immunopositivity untuk AGE-CML dicetak secara terpisah untuk kedua
sel endotel dan fibroblas. Pengukuran dilakukan
pada lima bidang daya tinggi di bagian perwakilan. Itu
persentase fibroblas immunostained dan endotel sel
disajikan pada Tabel 3. Tidak ada yang signifikan secara statistik
korelasi positif antara skor kulit histologis dan
AGE - CML ekspresi baik dalam fibroblas atau sel endotel
(Tabel 3).
Untuk menguji perbedaan antara dilindungi dan tidak dilindungi
daerah, dipasangkan t-tes untuk kedua sel endotel (Gambar. 3A)
dan fibroblast (Gambar. 3B) dilakukan. Ada yang signifikan

perbedaan statistik antara ekspresi AGE-CML di kedua
fibroblas dan sel endotel (p, 0,05) antara dilindungi dan
sampel non-dilindungi. Daerah yang terpapar sinar matahari memiliki lebih dari
skor AGE-CML 10% lebih tinggi dari kawasan lindung. Itu
persentase ekspresi AGE-CML dalam sel endotel dari
situs yang terpapar sinar matahari itu 45,92 dibandingkan dengan 40,91 dari endotel
Sel-sel dari kawasan lindung. Selain itu, rata-rata persentase
nilai-nilai dari ekspresi AGE-CML dalam fibroblas dari sunexposed
daerah itu 44,35 dibandingkan dengan 39,16 dari fibroblas dari
sisi dilindungi.
Probabilitas dari uji ANOVA untuk penilaian yang
variasi antara kelompok itu untuk semua variabel kurang dari 0,0001
menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik antara kelompok.
Berdasarkan hasil ini, analisis korelasi antara usia
pasien dan skor AGE-CML dilakukan. grafis
representasi dari hasil kami ditunjukkan pada Gambar 4 (A-D).
dari lapisan basal, fibroblas kulit, dendrocytes dermal, endotel
sel dan limfosit [15].
Studi kami menunjukkan distribusi CML di tingkat epidermis,
terutama di lapisan germinative, menunjukkan dampak
sitokin pada mekanisme glycation, dan secara implisit peran UV
dalam modulasi dan akumulasi produk glyco-oksidasi
di tingkat dermal. Keratinosit adalah sel kulit yang sangat aktif yang
rilis VEGF (faktor pertumbuhan endotel vaskular) dan FGF
(Faktor pertumbuhan fibroblast) yang mengarah ke endotel aktivasi sel dan
ditingkatkan angiogenesis, akhirnya mengarah ke penyembuhan luka
Tanggapan [22]. sel endotel juga mengungkapkan MMP yang mendegradasi
komponen ECM sehingga merekrut beredar makrofag dan
leukosit, lanjut mensekresi kolagenase yang berbeda yang bisa

menurunkan ECM [23].
distribusi CML dan ekspresi dimodifikasi di mikrovaskuler
sel endotel, tergantung pada usia dan paparan sinar UV [21]. Dalam
Penelitian ini matahari terkena biopsi kulit dari pasien yang lebih tua
mengungkapkan respon inflamasi meningkat dengan mononuklear
sel dibandingkan dengan daerah terlindungi dari sinar matahari dan pasien yang lebih
muda, tapi
bukti ini tidak berkorelasi dengan ekspresi CML.
Menurut data kami, pada tingkat kulit glikasi adalah
terlibat dalam proses penuaan dan mempengaruhi secara bersamaan, secara langsung
dan secara tidak langsung, sel kunci, sel-sel sebagian besar endotel yang lebih
sensitif terhadap sinar UV dibandingkan dengan fibroblas (lihat Gambar. 4 A-B). Tidak
statistik korelasi yang signifikan diamati antara
skor histologi dan ekspresi imunohistokimia
CML, yang membuktikan bahwa penuaan kulit, selain dari oksidasi glikol
produk, adalah hasil dari banyak mekanisme yang halus,
beberapa di antaranya masih tetap tidak jelas. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk
mengidentifikasi mekanisme yang terlibat dalam penuaan kulit dan pengaruhnya
terhadap
struktur kulit, mekanik, dan fungsi. Studi kami membuka baru
perspektif pendekatan terapi anti-penuaan.
Kami menyimpulkan bahwa dalam integumen sehat, akumulasi
produk glikasi akhir meningkat dengan usia dan diperkuat oleh
paparan ultraviolet. Proses glikasi mengganggu
fibroblas dan endotelium pembuluh darah, perubahan sebagian besar merangsang
di tingkat ECM. Tidak ada korelasi yang signifikan statistik diamati
antara skor histologi dan ekspresi imunohistokimia
CML. Disetujui (FDA) anti penuaan pilihan terapi
(Topikal dan sistemik) yang menargetkan molekul terglikasi ada, sehingga ini
Penelitian memiliki makna translasi memberikan pengetahuan baru

pada perbedaan AGE-CML antara kelompok usia dan dilindungi
dan daerah yang tidak dilindungi dari fenotip kulit III pelajaran, dan bahwa
endotelium dan daerah perivaskular yang paling terpengaruh, membenarkan
dikombinasikan terapi topikal dan sistemik