tugas Kimia Bahan Pangan
7Senyawa isorhoifolin (Apigenin-7-O-rutinoside)
Apigenin-7-O-rutinoside merupakan turunan senyawa Flavonoid, yaitu senyawa metabolit
sekunder yang penting dalam tumbuhan, memiliki kapasitas untuk menghambat kerusakan
DNA dan peroksidasi lipid, dan radikal bebas, serta memiliki sifat anti kanker dan
antiproliferatif.
Identifikasi fitokimia skrining awal
Metode Balbaa, et al, (1981) digunakan untuk pengujian minyak atsiri, metode destilasi uap
untuk steroid, kumarin, flavonoid, senyawa fenolat, alkaloid, sedangkan dengan
menggunakan Dragend-orrf, Mayer dan Reagen Wagner, glycosids untuk menguji
karbohidrat, resin dan saponin.
Identifikasi flavonoid
Persiapan ekstrak flavonoid
Serbuk tanaman kering daun buas-buas diekstraksi dengan etanol 70% dan air beberapa kali.
Ekstrak alkohol diuapkan sampai didapat volume yang sangat kecil di bawah tekanan rendah,
ditambahkan etanol berlebih, lalu disaring untuk menghilangkan garam anorganik dan
senyawa nonphenolik kemudian terkonsentrasi. Lapisan berair diaduk dengan kloroform
dalam corong pisah, di mana klorofil dipindahkan ke lapisan kloroform dan senyawa fenolik
tetap di lapisan berair. Senyawa fenolik dipisahkan dan diuapkan pada tekanan rendah agar
didapat volume yang sangat kecil.
Kromatografi kertas dua dimensi dilakukan pada whatmann No.1, kromatografi kertas
menggunakan sistem pelarut, butanol: asam asetat: air (04:01:05 v / v / v) (pelarut 1) diikuti
oleh sistem pelarut, asam asetat: air (15: 85 v / v) (pelarut 2). Kertas kromatogram diperiksa
di bawah sinar ultraviolet dan terlihat, kemudian terkena selama 2-3 menit untuk uap amonia
dan segera kembali diperiksa untuk mengamati muncul perubahan warna fluoresensi. Ekstrak
etanol dari tanaman ini dicampur dengan poliamida, dan kemudian diuapkan dengan
pengurangan tekanan sampai kering.
Elusi dimulai dengan air suling diikuti dengan air yang mengandung bertahap peningkatan
etanol 5%, 10%, 15% sampai akhirnya etanol 96%. kromatogram dipisahkan dan diamati di
bawah cahaya ultraviolet. Fraksi dielusi diterima diuapkan dan terkonsentrasi, di mana satu
kromatografi kertas dimensi dari fraksi yang berbeda dilakukan dengan menggunakan sistem
pelarut 1 dan 2. Fraksi serupa dikumpulkan bersama-sama, dan diuapkan untuk pengurangan
tekanan. Kromatografi kertas preparatif dari fraksi flavonoid alam diaplikasikan pada
kromatografi whatmann No 3 MM kertas menggunakan BAW sebagai sistem eluen selama
48 jam. Senyawa flavonoid dipisahkan dimurnikan menggunakan Sephadex LH-20 kolom.
Senyawa flavonoid murni diidentifikasi dengan Metode kimia dan dikonfirmasi dengan
metode fisik.
Tes Fisik
Analisis spektrofotometri
spektrofotometer.
ultraviolet
(UV :)
Menggunakan
Schimadzu
UV 240
Reagen untuk analisis spektroskopi UV flavonoid
Aluminium klorida, asam borat, asam klorida, larutan natrium metoksida dan natrium asetat.
1 H-dan 13 C-Nuklir Analisis Magnetic Resonance (NMR). Pengukuran NMR dilakukan
pada A JEOL EX-270 NMR aparatus (270 MHz untuk 1H-NMR dan 67,5 MHz untuk 13CNMR).
Analisis spektra pada spektrometri massa (MS) dilakukan dengan menggunakan spektrometer
massa Varian Mat 711, Finnigan SSQ 7000 dan MM 7070 E.
Reaksi Kimia
Controlled (Mild) Hidrolisis Asam menggunakan HCl 0,1 N berair pada 100 º C selama 15
menit.
Hidrolisis Asam Lengkap (Normal) menggunakan 2N HCl pada 100 º C selama 2 jam atau
2N HCl dalam MeOH berair (1:1) di vaccuo.
Enzimatik hidrolisis
Menggunakan enzim yang sesuai dalam buffer asetat (PH= 5) dan Campuran bekerja sampai
selama 24 jam pada 37-40 ° C.
Estimasi Konten flavonoid: Dengan metode Karawya dan Aboutable, 1982
Investigasi flavonoid
Identifikasi senyawa (apigenin-7-O-rutinoside):
Senyawa dimurnikan muncul di atas kertas kromatografi sebagai tempat ungu berubah
menjadi kuning-hijau, dengan amonia. Nilai Rf masing-masing dalam sistem pelarut 1 dan
Pelarut 2 adalah 0.53 dan 0,43. Hidrolisis asam lengkap memberikan aglikon apigenin dan
dua residu gula diidentifikasi sebagai glukosa dan rhamnose (Kromatografi kertas komparatif
menggunakan spidol otentik). Hidrolisis enzimatik menggunakan β-glucosidase memberikan
hasil negatif (tidak ada intermediet) yang menegaskan bahwa bagian glukosa secara langsung
terkait dengan inti flavonoid dan rhamnose yang tersembuhkan terletak di kompleks (1),
dimana data spektral UV senyawa ini tercatat dimana data spektral UV dengan metanol
memberikan pita I pada 335, 333 dan band-II pada 265 membuktikan bahwa itu adalah
flavon, sedangkan pada penambahan NaOAc menunjukkan pendudukan 7 - posisi.
Penambahan H3BO3 mengindikasikan adanya catecholic gugus hidroksil. Penambahan
AlCl3 menunjukkan adanya OH bebas pada C-5. 1H-NMR spektral data: aglikon bagian: δ
(ppm) 7.95 (d, J = 7.5Hz untuk H-2, H-6), 6.95 (d, J = 7,5 Hz untuk H-3, H-5), 6,8 (d, J = 2,5
Hz untuk H-8), 6,75 (S, H-3) dan 6,45 (D, J = 2,5 Hz untuk H-6). Gula gugus: δ (ppm) 5.05
(d, J = 7,5 Hz untuk H-1 glukosa), 4,55 (d, J = 2,5 Hz untuk H-1 rhamnose pada 7 - posisi)
3,1-3,9 (m) untuk sisa dua proton gula dan 0,95 (d, J = 6 Hz untuk rhamnosyl CH3). Dengan
membandingkan data yang diperoleh dengan senyawa sastra ini diidentifikasi sebagai
apigenin-7-O-rutinoside.
Biosintesis senyawa Apigenin-7-O-rutinosida
OH
3 AcCoA
HO
CoAS
O
fenil propanoid
p-CoumaroylCoA
OH
OH
H
HO
O
HO
H
OH
O
Narigenin Calkon
[-H]
OH
OH
HO
O
O
O
+
OH
OH
O
HO
OH
O
HO
OH
H+
OH
OH
Flavanon
Rutinosa
OH
HO
OH
OH
OH
HO
HO
O
O
HO
+
OH
OH
O
-H2O
OH
O
OH
HO
O
HO
OH
OH
O
O
O
O
OH
HO
O
OH
OH
apigenin-7-O-Rutinoside
Apigenin-7-O-rutinoside merupakan turunan senyawa Flavonoid, yaitu senyawa metabolit
sekunder yang penting dalam tumbuhan, memiliki kapasitas untuk menghambat kerusakan
DNA dan peroksidasi lipid, dan radikal bebas, serta memiliki sifat anti kanker dan
antiproliferatif.
Identifikasi fitokimia skrining awal
Metode Balbaa, et al, (1981) digunakan untuk pengujian minyak atsiri, metode destilasi uap
untuk steroid, kumarin, flavonoid, senyawa fenolat, alkaloid, sedangkan dengan
menggunakan Dragend-orrf, Mayer dan Reagen Wagner, glycosids untuk menguji
karbohidrat, resin dan saponin.
Identifikasi flavonoid
Persiapan ekstrak flavonoid
Serbuk tanaman kering daun buas-buas diekstraksi dengan etanol 70% dan air beberapa kali.
Ekstrak alkohol diuapkan sampai didapat volume yang sangat kecil di bawah tekanan rendah,
ditambahkan etanol berlebih, lalu disaring untuk menghilangkan garam anorganik dan
senyawa nonphenolik kemudian terkonsentrasi. Lapisan berair diaduk dengan kloroform
dalam corong pisah, di mana klorofil dipindahkan ke lapisan kloroform dan senyawa fenolik
tetap di lapisan berair. Senyawa fenolik dipisahkan dan diuapkan pada tekanan rendah agar
didapat volume yang sangat kecil.
Kromatografi kertas dua dimensi dilakukan pada whatmann No.1, kromatografi kertas
menggunakan sistem pelarut, butanol: asam asetat: air (04:01:05 v / v / v) (pelarut 1) diikuti
oleh sistem pelarut, asam asetat: air (15: 85 v / v) (pelarut 2). Kertas kromatogram diperiksa
di bawah sinar ultraviolet dan terlihat, kemudian terkena selama 2-3 menit untuk uap amonia
dan segera kembali diperiksa untuk mengamati muncul perubahan warna fluoresensi. Ekstrak
etanol dari tanaman ini dicampur dengan poliamida, dan kemudian diuapkan dengan
pengurangan tekanan sampai kering.
Elusi dimulai dengan air suling diikuti dengan air yang mengandung bertahap peningkatan
etanol 5%, 10%, 15% sampai akhirnya etanol 96%. kromatogram dipisahkan dan diamati di
bawah cahaya ultraviolet. Fraksi dielusi diterima diuapkan dan terkonsentrasi, di mana satu
kromatografi kertas dimensi dari fraksi yang berbeda dilakukan dengan menggunakan sistem
pelarut 1 dan 2. Fraksi serupa dikumpulkan bersama-sama, dan diuapkan untuk pengurangan
tekanan. Kromatografi kertas preparatif dari fraksi flavonoid alam diaplikasikan pada
kromatografi whatmann No 3 MM kertas menggunakan BAW sebagai sistem eluen selama
48 jam. Senyawa flavonoid dipisahkan dimurnikan menggunakan Sephadex LH-20 kolom.
Senyawa flavonoid murni diidentifikasi dengan Metode kimia dan dikonfirmasi dengan
metode fisik.
Tes Fisik
Analisis spektrofotometri
spektrofotometer.
ultraviolet
(UV :)
Menggunakan
Schimadzu
UV 240
Reagen untuk analisis spektroskopi UV flavonoid
Aluminium klorida, asam borat, asam klorida, larutan natrium metoksida dan natrium asetat.
1 H-dan 13 C-Nuklir Analisis Magnetic Resonance (NMR). Pengukuran NMR dilakukan
pada A JEOL EX-270 NMR aparatus (270 MHz untuk 1H-NMR dan 67,5 MHz untuk 13CNMR).
Analisis spektra pada spektrometri massa (MS) dilakukan dengan menggunakan spektrometer
massa Varian Mat 711, Finnigan SSQ 7000 dan MM 7070 E.
Reaksi Kimia
Controlled (Mild) Hidrolisis Asam menggunakan HCl 0,1 N berair pada 100 º C selama 15
menit.
Hidrolisis Asam Lengkap (Normal) menggunakan 2N HCl pada 100 º C selama 2 jam atau
2N HCl dalam MeOH berair (1:1) di vaccuo.
Enzimatik hidrolisis
Menggunakan enzim yang sesuai dalam buffer asetat (PH= 5) dan Campuran bekerja sampai
selama 24 jam pada 37-40 ° C.
Estimasi Konten flavonoid: Dengan metode Karawya dan Aboutable, 1982
Investigasi flavonoid
Identifikasi senyawa (apigenin-7-O-rutinoside):
Senyawa dimurnikan muncul di atas kertas kromatografi sebagai tempat ungu berubah
menjadi kuning-hijau, dengan amonia. Nilai Rf masing-masing dalam sistem pelarut 1 dan
Pelarut 2 adalah 0.53 dan 0,43. Hidrolisis asam lengkap memberikan aglikon apigenin dan
dua residu gula diidentifikasi sebagai glukosa dan rhamnose (Kromatografi kertas komparatif
menggunakan spidol otentik). Hidrolisis enzimatik menggunakan β-glucosidase memberikan
hasil negatif (tidak ada intermediet) yang menegaskan bahwa bagian glukosa secara langsung
terkait dengan inti flavonoid dan rhamnose yang tersembuhkan terletak di kompleks (1),
dimana data spektral UV senyawa ini tercatat dimana data spektral UV dengan metanol
memberikan pita I pada 335, 333 dan band-II pada 265 membuktikan bahwa itu adalah
flavon, sedangkan pada penambahan NaOAc menunjukkan pendudukan 7 - posisi.
Penambahan H3BO3 mengindikasikan adanya catecholic gugus hidroksil. Penambahan
AlCl3 menunjukkan adanya OH bebas pada C-5. 1H-NMR spektral data: aglikon bagian: δ
(ppm) 7.95 (d, J = 7.5Hz untuk H-2, H-6), 6.95 (d, J = 7,5 Hz untuk H-3, H-5), 6,8 (d, J = 2,5
Hz untuk H-8), 6,75 (S, H-3) dan 6,45 (D, J = 2,5 Hz untuk H-6). Gula gugus: δ (ppm) 5.05
(d, J = 7,5 Hz untuk H-1 glukosa), 4,55 (d, J = 2,5 Hz untuk H-1 rhamnose pada 7 - posisi)
3,1-3,9 (m) untuk sisa dua proton gula dan 0,95 (d, J = 6 Hz untuk rhamnosyl CH3). Dengan
membandingkan data yang diperoleh dengan senyawa sastra ini diidentifikasi sebagai
apigenin-7-O-rutinoside.
Biosintesis senyawa Apigenin-7-O-rutinosida
OH
3 AcCoA
HO
CoAS
O
fenil propanoid
p-CoumaroylCoA
OH
OH
H
HO
O
HO
H
OH
O
Narigenin Calkon
[-H]
OH
OH
HO
O
O
O
+
OH
OH
O
HO
OH
O
HO
OH
H+
OH
OH
Flavanon
Rutinosa
OH
HO
OH
OH
OH
HO
HO
O
O
HO
+
OH
OH
O
-H2O
OH
O
OH
HO
O
HO
OH
OH
O
O
O
O
OH
HO
O
OH
OH
apigenin-7-O-Rutinoside